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VIROLOGIA
DOCENTE VIVIANA SOLIZ PEREDO
INTRODUCCION
Los virus son los agentes infecciosos más pequeños
(su tamaño va de casi 20 a 300 nm de diámetro) y contienen un solo tipo de ácido nucleico (RNA o DNA) en su genoma. El ácido nucleico se encuentra rodeado por una cubierta proteínica; está envuelto por una membrana constituida por lípidos. La unidad infecciosa completa en conjunto se denomina virión. El espectro de los virus tiene una gran diversidad. Éstos varían en gran medida en cuanto a estructura, organización y expresión genómicas, así como en las estrategias de replicación y transmisión. Los virus muestran replicación sólo en células vivas, pues son inertes en el entorno extracelular. El ácido nucleico del virus contiene la información necesaria para hacer que las células infectadas del hospedador sinteticen macromoléculas con especificidad por los virus, necesarias para la generación de los descendientes de tales partículas. Durante este ciclo de replicación, se producen numerosas copias de ácidos nucleicos virales y de proteínas de las cubiertas. Estas últimas se ensamblan para formar una cápside, que rodea y estabiliza el ácido nucleico viral y lo protege del entorno extracelular y facilita la adhesión y la penetración del virus en cuanto establece contacto con una nueva célula susceptible. La infección viral puede tener poco o ningún efecto en la célula hospedadora o es posible que cause daño o la muerte. • Cápside: cubierta proteínica que rodea al ácido nucleico del genoma. • Capsómeros: unidades morfológicas que se observan por microscopia electrónica en la superficie de partículas virales. Los capsómeros se conforman por grupos de polipéptidos. • Virus defectuosos: una partícula viral que es deficiente desde el punto de vista funcional en algunos aspectos de la replicación. Carecen de los genes para completar la infección, necesitan de otros virus que les ayuden (virus adyacente) Envoltura (cubierta): una membrana con lípidos que rodea algunas partículas virales. Se adquiere durante la maduración viral por un proceso de gemación a través de la membrana celular. Las glucoproteínas codificadas por el virus se exponen en la superficie de la envoltura. Estas proyecciones se denominan peplómeros. • Nucleocápside: complejo de proteínas y ácido nucleico que representa la forma empacada del genoma viral. El término se utiliza a menudo en casos en los cuales la nucleocápside es una subestructura de una partícula viral más compleja. Virión: partícula viral completa. En algunos casos (p. ej., virus del papiloma, picornavirus), el virión es idéntico a la nucleocápside. En viriones más complejos (virus del herpes, ortomixovirus), incluye la nucleocápside además de la cubierta circundante. el virión, sirve para transferir ácido nucleico viral de una célula a otra. COMPOSICIÓN QUÍMICA DE LOS VIRUS Proteínas virales Las proteínas estructurales de los virus tienen varias funciones importantes. Su principal objetivo es facilitar la transferencia de ácidos nucleicos virales de una célula hospedadora a otra. Sirven para proteger el genoma viral contra la inactivación por las nucleasas, participan en la unión de la partícula viral a las células susceptibles y proporcionan la simetría estructural de la partícula viral. Las proteinas determinan las caracteristicas antigénicas del virus. Los mecanismos de respuesta inmunitaria protectora del hospedador se dirigen contra determinantes antigénicos de las proteinas o glucoproteinas expuestas en la superficie de la particula viral. Algunas proteinas de superficie pueden mostrar actividad especifica, por ejemplo, la hemaglutinina del virus de la gripe produce la aglutinacion de eritrocitos. ACIDO NUCLEICO VIRAL Los virus contienen un solo tipo de acido nucleico (ya sea DNA o RNA) que codifica la informacion genetica necesaria para la replicacion de los virus. El genoma puede ser monocatenario o bicatenario, circular o lineal, segmentado o no segmentado. El RNA viral aislado con genomas de sentido positivo (picornavirus, togavirus) es infeccioso y la molecula funciona como mRNA en la celula infectada. El RNA de sentido negativo, aislado de un RNA virus, como los rabdovirus y los ortomixovirus, no es infeccioso. Para estas familias virales, el virion porta la RNA polimerasa que en la celula produce la transcripcion de las moleculas de RNA genomico en moleculas de RNA complementario, cada una de las cuales actua como una plantilla de mRNA . • > Cadena positiva: el ARN vírico puede actuar como ARNm,(ser traducido en proteínas) inmediatamente después de haber entrado en una célula hospedadora. • > Cadena negativa: ARN vírico que entra en la célula hospedadora no se puede traducir directamente, es necesario que se sintetice un ARNm. Grupo I: Virus ADN bicatenario (Virus ADNbc o Virus dsDNA). • El ARNm se transcribe directamente a partir del genoma del virus. • Las proteínas reguladoras que controlan la replicación del genoma y las proteínas estructurales que forman el virión se traducen a partir de este ARNm. • La replicación del genoma del virus se realiza directamente mediante replicación de ADN. Síntesis de proteínas: ADNbc → ARNm → proteínas Replicación del genoma: ADNbc → ADNbc Grupo II: Virus ADN monocatenario (Virus ADNmc o Virus ssDNA). • El ADN viral monocatenario se convierte en bicatenario, probablemente usando la maquinaria de reparación del ADN del hospedero. • El resto de las etapas de replicación son similares a las del grupo I.
Síntesis de proteínas: ADNmc → ADNbc → ARNm → proteínas
Replicación del genoma: ADNmc → ADNbc → ADNmc Grupo III: Virus ARN bicatenario (Virus ARNbc o Virus dsRNA). • A partir del ARN bicatenario se obtiene la hebra de ARN monocatenario positivo que actúa como ARNm. • La traducción de este ARNm da lugar a las proteínas reguladores y estructurales. • La replicación del genoma del virus se realiza en dos pasos. Primero se realiza un ensamblado parcial de la hebra de ARN monocatenario positivo y de las proteínas virales en viriones inmaduros. • A continuación se realiza la replicación del ARN monocatenario positivo a ARN bicatenario dentro de los viriones.
Síntesis de proteínas: ARNbc → ARNm → proteínas
Replicación del genoma: ARNbc → ARNmc+ → ARNbc Grupo IV: Virus ARN monocatenario positivo (Virus ARNmc+ o Virus (+)ssRNA). • La replicación del virus comienza con la traducción genética de la cadena de ARN monocatenario positivo (que tiene la misma polaridad que el ARNm) en proteínas reguladoras. • En el grupo IVa este paso traduce también las proteínas estructurales, mientras que en el grupo IVb esto se realiza traduciendo un ARNm generado a partir de una cadena de ARN monocatenario positivo. • Las proteínas regulan la síntesis del ARN monocatenario positivo a partir del molde de ARN monocatenario negativo. Este último a su vez funciona como molde para la síntesis del ARN monocatenario positivo de los nuevos virus. Síntesis de proteínas: ARNmc+ (=ARNm) → proteínas Replicación del genoma: ARNmc+ → ARNmc- → ARNmc+ Grupo V: Virus ARN monocatenario negativo (Virus ARNmc- o Virus (-)ssRNA). • El ARN monocatenario negativo se convierte en ARNm (que es una cadena monocatenaria positiva) mediante una ARN polimerasa dependiente de ARN aportada por el virus. • El ARNm generado se traduce en proteínas reguladoras y estructurales. • Las proteínas regulan la replicación del ARN monocatenario negativo a través de una cadena de ARN monocatenario positivo que funciona a modo de molde. Estas cadenas se incluyen en los nuevos virus.
Síntesis de proteínas: ARNmc- → ARNm → proteínas
Replicación del ARNmc- → ARNmc+ → ARNmc- genoma: Grupo VI: Virus ARN monocatenario retrotranscrito (Virus ARNmcRT o Virus ssRNA-RT). • Este virus integra una transcriptasa inversa que a partir del genoma ARN viral produce una cadena de ADN, primero monocatenario y luego bicatenario, que se integra en el genoma del huésped. • El ADN ya integrado en el huésped es transcrito a ARNm, que a su vez se traduce en proteínas reguladoras y estructurales. • El ADN integrado en el huésped se transcribe en el ARN monocatenario de los nuevos virus.
Replicación del genoma: ARNmc+ → ARN/ADN → ADNbc → ARNmc+ Grupo VII: Virus ADN bicatenario retrotranscrito (Virus ADNbcRT o Virus dsDNA-RT). • El ADN viral entra en el núcleo de la célula, es reparado por la maquinaria de reparación del huésped y se integra en el genoma del huésped. • El resto de las etapas es similar a las del grupo VI.
Síntesis de proteínas: ADNbc → ARNm → proteínas
Replicación del genoma: ADNbc → ARNmc+ → ARN/ADN → ADNbc Los analisis de reaccion en cadena de polimerasa y las tecnicas de hibridacion molecular permiten el estudio de la transcripcion de genoma viral en celulas infectadas, asi como la comparacion de la relacion de diferentes virus. Cada genoma da origen a patrones caracteristicos de fragmentos de DNA despues del desdoblamiento con una enzima en particular. ENVOLTURAS LIPIDICAS DE LOS VIRUS Varios virus diferentes contienen envolturas lipidicas como parte de su estructura. Los lipidos se adquieren cuando la nucleocapside viral forma vesiculas a traves de la membrana celular en el trayecto de su maduracion. La gemacion ocurre solo en sitios donde se han insertado proteinas virales especificas en la membrana de la celula hospedadora. El proceso de gemacion varia de manera notable, segun sea la estrategia de replicacion del virus y de la estructura de la nucleocapside. GLUCOPROTEINAS VIRALES Las envolturas virales contienen glucoproteinas. A diferencia de los lípidos en las membranas virales, que se derivan de las células del hospedador, las envolturas de glucoproteinas son codificadas por el virus. Sin embargo, los carbohidratos añadidos a las glucoproteinas virales son reflejo de la célula hospedadora en la cual creció el virus. Las glucoproteinas de superficie de un virus con envoltura son las que unen a la particula viral con la celula hospedadora al interactuar con el receptor celular. A menudo participan en la fusion de la membrana como una etapa de la infeccion. Las glucoproteinas tambien son antigenos virales importantes. Como consecuencia de su posicion en la superficie externa del virion, con frecuencia participan en la interaccion de la particula viral con los anticuerpos neutralizantes. SISTEMA TAXONÓMICO UNIVERSAL DE VIRUS Se ha establecido un sistema en el que los virus se separan en grupos principales (denominados familias) con base en la morfología del virión, la estructura del genoma y las estrategias de replicación. REPLICACION VIRAL A. Período de eclipse Después de la unión inicial de un virus a la célula hospedera, la capacidad de ese virus para infectar otras células desaparece. Este es el período de eclipse y representa el tiempo transcurrido desde la entrada inicial y el desmontaje del virus parental hasta el ensamble del primer virión de la progenie. Durante este período, se está produciendo la síntesis activa de componentes del virus. El período de eclipse para la mayoría de los virus humanos se encuentra dentro de un rango de 1 a 20 h. B. CRECIMIENTO EXPONENCIAL
La cantidad de progenie del virus producida dentro de la célula infectada
aumenta exponencialmente durante un tiempo y luego alcanza una meseta después de la cual no se produce un aumento adicional en el rendimiento del virus. El rendimiento máximo por célula es característico de cada sistema de célula-virus y refleja el equilibrio entre la velocidad a la que los componentes del virus continúan sintetizándose y ensamblando viriones y la velocidad a la que la célula pierde su capacidad de síntesis y la integridad estructural necesaria para producir nuevas partículas víricas. Esto puede ocurrir en 8-72 h o más, con rendimientos de 100-10 000 viriones por célula. REPLICACION VIRAL • Los virus son parásitos intracelulares obligados; para su replicación precisan invadir y utilizar la maquinaria metabólica de una célula huésped. Este proceso tiene lugar en varias etapas o fases: 1. Adsorción: los virus se adhieren a la membrana de la célula. Cada tipo de virus reconoce receptores específicos, lo que explica el especial tropismo de los diferentes virus por distintas estructuras anatómicas. 2. Entrada en la célula. INGRESO CELULAR DE VIRUS CON ENVOLTURA Los paramixovirus (p. ej., sarampión), algunos retrovirus (p. ej., VIH-1) y los herpesvirus ingresan a través de un proceso denominado fusión directa El mecanismo de entrada para la mayoría de los virus animales con envoltura restantes, como los ortomixovirus (p. ej., virus de la influenza), togavirus (p. ej., virus de la rubéola), rhabdovirus (p. ej., rabia) y coronavirus. Después de la adsorción, las partículas virales se incorporan por medio de un mecanismo celular denominado endocitosis mediada por receptores, que normalmente es responsable de la internalización de los factores de crecimiento, hormonas y algunos nutrientes. Cuando se trata de los virus, el proceso se conoce como viropexis. ENDOCITOSIS FUSION DIRECTA 3. Decapsidación: se elimina la cápside del virus, liberándose así los ácidos nucleicos. En este proceso intervienen sobre todo enzimas de la célula huésped. 4. Fase de eclipse o replicación propiamente dicha: a partir del ácido nucleico viral y utilizando la maquinaria de síntesis de la célula parasitada se fabrican nuevos ácidos nucleicos y se sintetizan nuevas proteínas estructurales y enzimas propias del virus. El proceso es diferente según se trate de virus ARN o ADN, y dentro de los primeros según que el ARN vírico actúe como ARN mensajero directamente o no. La replicación está mediada básicamente por enzimas propias del virus (ADN polimerasas, ARN polimerasas, transcriptasa inversa, etc.). En esta fase no se observan viriones dentro de la célula. 5. Ensamblaje: los ácidos nucleicos y proteínas de la cápside sintetizados se reorganizan y ensamblan constituyendo núcleocápsides nuevas. 6. Liberación del virus: los nuevos viriones salen generalmente de la célula huésped por rotura de ésta en los virus desnudos, o por gemación en los virus envueltos. VIAS DE TRANSMISION DE VIRUS VIRUS ONCOGÉNICOS DIAGNÓSTICO DE LAS INFECCIONES VÍRICAS Existen tres procedimientos básicos: 1. Detección de las partículas víricas o alguno de sus componentes directamente en muestras clínicas, bien por visualización directa por microscopia electrónica, bien por detección de antígenos virales por reacciones serológicas (ELISA, látex, inmunofluorescencia, etc.) o por detección del genoma vírico por técnicas de genética molecular, fundamentalmente PCR. 2. Inoculación en animales de laboratorio, cultivos celulares o huevos embrionados. 3. Diagnóstico indirecto mediante la serología, que se fundamenta en el estudio de la respuesta del sistema inmune, por su capacidad de sintetizar anticuerpos específicos frente a antígenos virales, determinando dichos anticuerpos en los diferentes fluidos orgánicos como suero, orina o líquido cefalorraquídeo entre otros. Los procedimientos más utilizados en el diagnóstico habitual son las determinaciones de anticuerpos IgM específicos, que aumentan en general en la fase aguda de la enfermedad, y la cuantificación de anticuerpos de tipo IgG, que indica infección pasada por el virus y normalmente inmunidad. El incremento significativo del nivel de anticuerpos IgG desde el inicio del proceso hasta 2 o 3 semanas más tarde, conocido como seroconversión, es de gran utilidad diagnóstica cuando los niveles de IgM permanecen positivos por largo tiempo o bien son positivos debido a reacciones cruzadas por respuesta común a antígenos de diferentes virus con estructura parecida. PREVENCIÓN Y TRATAMIENTO DE LAS INFECCIONES VÍRICAS
1. Inmunización activa: mediante
«vacunas», se pueden utilizar virus vivos atenuados, viriones inactivados o antígenos específicos obtenidos por variados procedimientos. 2. Inmunización pasiva: utilizando gammaglobulinas frente al virus, obtenidas de sueros hiperinmunes humanos o animales o bien anticuerpos monoclonales específicos para cada virus. 3. Inmunomoduladores: son sustancias que, de modo inespecífico, actúan sobre el sistema inmune del huésped y lo hacen más resistente a la infección vírica; un ejemplo son los interferones. Son un tipo de citocinas, glucoproteínas producidas por cada especie animal, como parte de la defensa natural frente a la infección viral. Existen varias clases de interferones según el tipo de células productoras: el interferón alfa es producido por leucocitos, el interferón beta por los fibroblastos y el interferón gamma por linfocitos T. Los interferones alfa y beta se comportan como antivirales al interferir, entre otros mecanismos, en el ensamblaje de las partículas víricas. Su uso terapéutico más habitual es el tratamiento de hepatitis crónica activa B y C. 4. Antivirales: son aquellas moléculas con actividad frente a algunos virus que actúan directamente sobre alguna de las etapas del ciclo de replicación vírica impidiendo la multiplicación del virus. La acción antiviral se puede conseguir por diferentes vías como, por ejemplo, bloqueando la adherencia y penetración del virus, impidiendo su decapsidación, actuando competitivamente con los nucleósidos por similitud estructural o por bloqueo de la acción de enzimas propias del virus (transcriptasas, polimerasas, proteasas, etc.). TRATAMIENTO ANTIVIRAL RESISTENCIA ANTIVIRAL
Las alteraciones genéticas (es
decir, mutaciones o deleciones) son la base de la resistencia antiviral. La probabilidad de mutantes resistentes proviene de al menos tres funciones: 1. Tasa de replicación viral. Los herpesvirus, en especial el CMV y el VZV, no se replican con la misma rapidez que el VIH y las hepatitis B y C. Las mayores tasas de replicación se asocian con mayores tasas de mutación espontánea. 2. Tasa de mutaciones virales. Además de la replicación viral, la tasa de mutaciones difiere entre los virus distintos. En general, los virus RNA de hebra única (p. ej., VIH e influenza) tienen índices de mutación más veloces que los virus DNA de cadena doble (p. ej., VHS). 3. Tasa de mutaciones en distintos genes virales. Por ejemplo, dentro de los herpesvirus, los genes para la fosforilación de nucleósidos (p. ej., UL97) son más susceptibles a la mutación que la DNA polimerasa viral. La resistencia a los fármacos antivirales se puede detectar de diversas formas: • Fenotípica. Este es el método tradicional de reproducir virus en cultivos de tejido en medios que contienen concentraciones crecientes de un fármaco antiviral. • Genotípica. Cuando se conocen la mutación o deleción exactas responsables de la resistencia viral, es posible secuenciar el gen viral o detectarlo por medio de patrones de restricción enzimática. • Cuantificación viral en respuesta al tratamiento. Los diversos métodos de cuantificación viral (p. ej., cultivo, reacción en cadena de la polimerasa, análisis antigénico) proporcionan medios de evaluación de la disminución de los títulos virales en respuesta al tratamiento con un fármaco antiviral. MUCHAS GRACIAS POR SU ATENCION PREGUNTAS?