Guía de Prácticas de Biología | PAGE 33

PRÁCTICA N°5
LAS ESTRUCTURAS BACTERIANAS
GRUPO #: 3
NOTA:

HORARIO: 12:50 - 2:30

INTRODUCCIÓN

Las bacterias son células procariotas, y se caracterizan por tener el material genético concentrado
de forma dispersa en un área denominada “nucleoide”. Son organismos
metabólicamente activos, se reproducen rápidamente por fisión binaria, poseen una pared
celular compuesta por peptidoglucano.
La forma de las bacterias está determinada por la rigidez de su pared celular. Las bacterias por ser
células muy pequeñas deben de observarse usando distintas coloraciones. Las acciones de los
colorantes se basan en la afinidad que estas presentan con las estructuras bacterianas, por
ejemplo, los colorantes catiónicos como cristal violeta y la safranina son atraídos por los
componentes de carga negativa, como los ácidos nucleicos y los polisacáridos.

Una de las coloraciones más utilizadas para observar bacterias es la coloración Gram. Christian
Gram en 1884 desarrolló la tinción que lleva su nombre, y las se pueden clasificar según la
respuesta a esta coloración en dos grupos: las bacterias Gram positivas, que se tiñen de color azul
violeta, y las Gram negativas, que adquieren un color rosa o rojo.

Fuente:
https://www.sciencesource.com/Doc/TR1_WATERMARKED/f/e/b/5/SS2755258.jpg?d63644354488

COLORACIÓN GRAM

Los principios de la tinción de Gram están basados en las características y estructura química de las
paredes celulares de las bacterias, la cual le confiere propiedades determinantes a cada
microorganismo. Esta tinción permite diferenciar las bacterias Gram positivas, que se visualizan de
color morado, de las Gram negativas, que se visualizan de color rosa o rojo.

Las bacterias Gram positivas, al contener mayor cantidad de peptidoglucano, retienen con más
fuerza el cristal violeta-yodo ante la acción deshidratante del alcohol/acetona. Por otro lado, en las
bacterias
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Gram negativas, al contener menor cantidad de peptidoglucano y poseer una membrana externa
cubierta de lípidos, el gran contenido de lípidos de la membrana externa es retirado por acción del
alcohol/acetona, dejando escapar así el cristal violeta-yodo. Obteniéndose una coloración rosa o
rojo por acción del colorante de contraste (Safranina).

Gram +: Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Streptococcus viridans, Streptococcus

pneumoniae, Bacillus subtilis, Clostridium tetani, Clostridium botulinum, etc.

Gram -: Neisseria gonorrheae, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhi, etc.
Cocos Gram positivos Bacilos Gram negativos

1000x 1000x

Fuente: Laboratorio de Biología. Universidad Científica del Sur

OBSERVACIÓN DE ESPORAS

Las esporas o endoesporas son estructuras de resistencia que algunas bacterias Gram positivas
presentan. En el ambiente, las esporas permiten la supervivencia de las bacterias en situaciones
vitales estresantes como la escasez de nutrientes, calor, desecación, radiación ultravioleta, ácidos y
desinfectantes. Debido a esta característica, las endoesporas son considerados agentes patógenos.

COLORACIÓN DE ESPORAS: MÉTODO DE WIRTZ-CONKLIN

Para la coloración de esporas o endoesporas se utiliza el

tinte en caliente (verde de malaquita), el cual tiñe a las
esporas de color verde, seguido de una etapa de contraste
para la coloración del soma bacteriano, el cual se consigue
con la safranina. Se debe observar a 1000x

esporas

Bacillus cereus 1000x

Fuente: higieneialiments
http://higieneialiments.blogspot.com/2011/03
/endoesporas-en-bacillus-y-clostridium.html
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OBSERVACIÓN DE CÁPSULA
La cápsula es una capa externa que cubre la pared celular en algunas bacterias, generalmente es de
naturaleza polisacárida, aunque pueden ser de origen peptídico.
La capsula brinda protección frente a la fagocitosis principal mecanismo de defensa del huésped, le
proporciona cierta resistencia frente a los antibióticos y desinfectantes, impide la fijación de los
bacteriófagos y le proporciona la capacidad de adherencia.

COLORACIÓN DE CÁPSULA: TINCIÓN DE BURRI

La presencia de cápsulas también se puede
demostrar por tinción negativa con tinta china.
La tinta china no penetra la cápsula, pero
delimita un contorno refringente alrededor del
cuerpo bacteriano de color rosado rodeado de
un halo sin color en un fondo oscuro. Las láminas
que usted observará fueron elaboradas con la
tinción de Burri (modificada por R. Rodriguez,
2017), que consiste en fijar un inóculo de
Streptococcus pneumoniae o Klebsiella sp. con Klebsiella sp. 1000x
tinta china, luego se extiende sobre la lámina y
Fuente: Laboratorio de Biología. Universidad Científica del Sur
se fija al calor, posteriormente se añade
safranina como colorante de contraste por unos
minutos, finalmente se lava y se observa al
microscopio a 1000x.

COMPETENCIAS

1. Realiza algunas coloraciones bacterianas más usadas en microbiología.

2. Reconoce algunas formas.
3. Manipula adecuadamente material microbiológico observando las normas de bioseguridad.
MATERIALES
Materiales del laboratorio

● Cultivo bacteriano de 24 horas ● Asas de siembra.

(Staphylococcus aureus, Klebsiella sp., y/o
Escherichia coli). ● Mecheros.

● Batería Gram: Cristal violeta, Lugol, ● Microscopio, aceite de inmersión, papel

alcohol- acetona, safranina o fucsina lente.
básica.
● Solución desinfectante.
● Láminas porta objeto limpias.
● Pinzas de madera.
● Aceite de inmersión.

Materiales del estudiante

● Plumón marcador

● Guantes, mascarilla, lentes protectores, cofia.

PROCEDIMIENTO
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1. Muestra bacteriana fijada

2. Cubrir con solución de Cristal violeta por 1 minuto
3. Lavar ligeramente con agua corriente.
4. Cubrir la preparación con Lugol por 1 minuto.
5. Lavar con agua corriente.
6. Diferenciar con alcohol-acetona
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7. Lavar con agua corriente.

8. Contrastar con el colorante Safranina por 1 minuto.
9. Lavar con agua corriente para evitar formación de precipitados.
10. Retirar el exceso de agua y secar al ambiente
11. Observar con objetivo de inmersión (100x) y aceite de inmersión.

RESULTADOS

1. Actividad 1: Observa la figura y completa la información

Fuente: http://biobasica.weebly.com/laboratorio-4.html

1 Función: Cubrir la muestra bacteriana con el reactivo

Reactivo: Cristal violeta
2
Función: Fija los cristales de la Gram negativa

Reactivo: Lugol o Yodo

3
Función: Se utiliza para reconocer sii hay presencia de almidón

Reactivo: Acetona
4
Función: Disolver sustancias

Reactivo: Safranina
5
Función: Tiñe las Gram Negativas

2. Observar y dibujar las muestras obtenidas al microscopio después de realizar la

coloración Gram

MUESTRA 1
Clasificación según su pared:

Gram negativas

Clasificación según su forma: Cocos

Aumento
MUESTRA 2
utilizado:1000 X

Clasificación según su

pared:

Gram positivas
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Clasificación según su forma: Bacilos

Aumento utilizado: 1000X

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3. Observar las muestras al microscopio de esporas y cápsula. Dibujar y completar la

información.

Coloración usada: Witz - Conklin Coloración usada: Tinción de Burri

Estructura observada: Basilius Cereus Estructura observada: Klebsiella

Función de la estructura: Resistencia Función de la estructura: Brinda protección

o supervivencia
Aumento: 1000X Aumento: 1000X

DISCUSIÓN DE RESULTADOS

¿ Cómo observo las estructuras bacterianas?

Primero colocamos una muestra de célula bacteriana en una lámina portaobjetos, luego colocamos una gota
de cristal violeta para luego colocarle una lámina cubreobjetos, para de esa forma fijar los cristales de la gram
positiva, luego le colocamos una gota de lugol, observamos en el microscopio para reconocer si hay una
muestra de almidón, lavamos el vidrio y le colocamos una gota de acetona, logramos observar gracias al
microscopio que se disuelven las sustancias, lavamos y colocamos una gota de safranina, para lograr ver que
finalmente se tiñen las gram negativas.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

● Audesirk T., Audesirk G. & Byers B. (2008) Biología: La vida en la tierra. 8va. Edición México:
Pearson. Prentice-Hall Hispanoamericana S.A.
● Solomon E, Berg L. & Martin D. (2013). Biología. 9na. Edición. México: Cengage Learning
Editores S.A.
● López L.E, Hernandez M., Colin C., Ortega S., Cerón G. & Cendejas R. (2013). Las tinciones
básicas en el laboratorio de microbiología. Investigacion en discapacidad 3(1) 10-18.
Recuperado de en http://www.medigraphic.com/rid
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RÚBRICA DE CALIFICACIÓN: LAS ESTRUCTURAS BACTERIANAS

PCC1: Identifica la información proporcionada
Pensamiento crítico analizando
COMPETENCIAS y científico críticamente y categorizando ésta para el correcto
entendimiento y planteamiento de conclusiones.
ASPECTOS A EVALUAR LOGRO DESTACADO LOGRADO NO LOGRADO
Reconoce parcialmente el
Reconoce el uso de uso de colorantes y No reconoce el uso de
Actividad 1: colorantes colorantes
completa la información
procedimien completando las líneas solicitada de forma completando las
to de con la información incompleta y/o de forma líneas con la
coloración solicitada incorrecta información incorrecta
Gram 2 1 0.5

Identifica los resultados Identifica parcialmente los

de la coloración Gram resultados de la coloración No identifica los
a través de dibujos, los de Gram a través de resultados de la
Gráfica Gram colorea, mantiene la dibujos, no colorea y no coloración de Gram,
positivas y proporción entre el mantiene proporción entre no realiza los dibujos o
Gram dibujo y el aumento y el dibujo y el aumento utiliza lapicero y no
negativas Coloca toda la utilizado y coloca la completa la
Resultado información solicitada información incompleta y/o información solicitada
s de forma correcta. con errores.
5 4 1

Identifica parcialmente
Identifica cápsulas y capsulas y esporas
esporas realizando Realizando los dibujos con No identifica
todos los dibujos, los lápiz, no colorea, no cápsulas y esporas,
Muestras de colorea, mantiene la mantiene la proporción no realiza los
cápsula y proporción entre el entre el dibujo y el dibujos o realiza
esporas dibujo y el aumento, aumento, Coloca la dibujos con lapicero.
coloca la información información solicitada de No completa la
completa y correcta. forma incompleta y/o con información
errores. solicitada
5 3 1.5

Explica la respuesta a Explica parcialmente y Explica la respuesta

Discusión de resultados la pregunta planteada con coherencia la a la pregunta
Calidad de la información con coherencia respuesta a la pregunta planteada sin
relacionándola con el planteada relacionar su
desarrollo de la relacionándola con el respuesta con el
práctica desarrollo de la práctica desarrollo de la
práctica
6 4 2
Presenta sus
Presenta sus
Presenta sus resultados resultados con 4 a
resultados sin
con 3 o menos borrones o más borrones o
borrones, ni manchas,
manchas, con lapicero y manchas, usa lápiz y
Presentación del informe con lapicero y
desengrapado. No indican desengrapado. No
engrapado. Indican el
el horario en la indican el horario en
horario en la
presentación la presentación y no
presentación. imprimen la rúbrica.
Imprimen la rúbrica de
calificación.
2 1 0
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PARTICIPACIÓN
INTEGRANTES
INDIVIDUAL
Ruiz Sangama, Sofía Raquel 100%

Núñez Flores , Artemio 100%

Sedano Apeña, Tiffany 100%

Sandoval Escalante, Jamir Antonio 100%

Olano Panchano, Omar 100%

NIVEL DE PARTICIPACIÓN INDIVIDUAL

En la tabla, especificar el nivel de participación de cada estudiante; según el

cual se asignará un puntaje individual:

A: NIVEL ALTO DE PARTICIPACIÓN: PUNTAJE COMPLETO

B: NIVEL MEDIO DE PARTICIPACIÓN: MENOS 3 PUNTOS
C: NIVEL BAJO DE PARTICIPACIÓN: MENOS 6 PUNTOS.

Importante: el docente puede asignar el nivel de participación individual de

acuerdo a lo observado en clase.