POLIMORFISMOS DE ADN Y SUS APLICACIONES EN GM

secuencias variables o polimórficas son justamente las que nos

Introducción permiten diferenciar un individuo de otro y, al heredarse, también
permiten establecer relaciones de parentesco, por lo que se los
El ADN se encuentra sometido constantemente a la acción de conoce como marcadores moleculares. Estos son herramientas
agentes nocivos, como la radiación UV, el tabaco, la polución que permiten estudiar la variabilidad genética entre individuos y
ambiental, etc. que son capaces de producir alteraciones en su se clasifican según la técnica que se emplea para su estudio.
secuencia. Estas alteraciones también se pueden originar por Entre ellos podemos mencionar:
errores durante los mecanismos de recombinación en la división
celular. Una secuencia de ADN puede experimentar 3 tipos de - SNP (polimorfismos de un solo nucleótido).
alteraciones principales: sustituciones, inserciones y deleciones - RFLP (polimorfismos de longitud de los fragmentos de
(estas son alteraciones puntuales). Además existen otros tipos de restricción).
alteraciones que implican reordenamientos o rearreglos - VNTR (numero variable de repeticiones).
genómicos más grandes. - STR (cortas repeticiones en tándem)
Los cambios o mutaciones del ADN pueden incluir una pérdida
Los perfiles de ADN pueden obtenerse a partir de diferentes
total o parcial de la función de una proteína, o no tener efecto en
técnicas moleculares, exhibiendo distintos patrones. En el primer
la función de esta. Algunas de estas alteraciones están presentes
paso es necesaria la extracción de ADN. Este se encuentra en
en más del 1% de la población sin afectar a su salud. Incluso en
todas las células nucleadas, por lo que el perfilado se puede
ocasiones, estas variantes le confieren una ventaja adaptativa
realizar a partir de diversos materiales biológicos como: sangre
frente al individuo que no la porta. Estas variaciones en las
(leucocitos), semen, raíces de peli, células bucales presentes en
secuencias de ADN se denominan polimorfismos y son
saliva, etc. El protocolo de aislamiento de ADN a utilizar dependerá
responsables de la diversidad genética entre distintos individuos
del tipo de muestra departida. Luego, en pase al mar. Luego, en
y/o etnias entre diferentes poblaciones. El estudio de estos tiene
base al marcador molecular, se realiza el perfilado.
numerosas aplicaciones en medicina, investigación y procesos
jurídicos. También pueden ser útiles en el momento de explicar Perfilado de ADN usando enzimas de restricción: marcadores
movimientos migratorios y el origen de poblaciones, permitiendo RFLP
reconstruir parte de su historia evolutiva.
Los RFLPs son variaciones (polimorfismos) en los patrones de
fragmentos producidos cuando se cortan moléculas de ADN con la
Genética forense e identificación de personas misma enzima de restricción. Después del corte, es posible
analizar los fragmentos mediante electroforesis en gel, que
Se realiza el análisis de muestras biológicas como sangre, semen, separa los fragmentos de ADN según su tamaño. Las diferencias
saliva y pelos encontrados en un crimen. A partir de estas que produce el cambio de una sola base entre dos personas,
muestras biológicas, lo primero que se hace es una extracción de podría dar como resultado la presencia o ausencia de un sitio de
ADN, con el cual se realizara el perfilado y se obtendrá un perfil, corte. Si dos individuos tienen diferencias en sus secuencias de
del cual se estudiaran marcadores moleculares. ADN en sitios de restricción particulares, entonces las enzimas de
El método fingerprinting o “huella de ADN” (Alec Jeffreys-1985) restricción cortaran su ADN en fragmentos de diferentes
representa una herramienta importante para la medicina forense longitudes. También puede haber diferencias en el número de
y procesos jurídicos. Este método puede ser determinado a partir fragmentos observados entre 2 o más individuos.
de pequeñas muestras y luego ser comparado con el perfil
genético del individuo “sospechoso”. Este tipo de análisis también Los RFLPs son la primera técnica que se desarrolló para realizar
pueden ayudar en estudios de filiación para demostrar la perfiles genéticos, y su primer uso fue en la medicina forense.
paternidad. Pero por lo general esta técnica ya no se utiliza.

Dato: a partir de la técnica fingerprinting se pueden realizar Perfilado de ADN por la técnica de Southern Blot:
patrones de bandas generados por marcadores VNTR que exhibirá marcadores VNTR
cada persona y que será característico de cada una, pudiendo
Es una técnica basada en hibridación.
diferenciar a un individuo de otro
El ADN humano contiene algunas secuencias que están repetidas y
Las pruebas de ADN se realizan analizado variables del genoma, dispersas en el genoma. Esas regiones de denominan
secuencias que entre los individuos de una población pueden hipervariables, porque contienen un numero variable de
tener diferentes formas alternativas, denominadas alelos. Estas repeticiones en tándem o bien minisatelites de ADN. Posee una
longitud aprox. entre 10 a 50 pares de bases (pb) repetidos en
tándem. Están ubicadas en regiones centromericas y telomericas Perfilado de ADN mediante la reacción en cadena de la
de los cromosomas, y forman secuencias de entre 5 y 50 kb de polimerasa: marcadores STR
longitud. El polimorfismo de estas secuencias viene determinado
por el número de repeticiones, generando de este modo una gran Los marcadores STR (cortas repeticiones en tandem) mas
cantidad de alelos de diferente tamaño, lo que los convierte en conocidas como microsatelites, consisten en segmentos cortos de
marcadores altamente informativos en estudios de análisis de ADN de 2 a 6 pb de longitud, que se repiten en tandem un
ligamiento y pruebas de identificación. determinado numero de veces y de forma aleatoria en el genoma.
Son muy frecuentes en genomas eucariotas y altamente variables
Dato: Souther Blot es un método de laboratorio utilizado para (son los marcadores mas polimórficos que se conocen). Poseen
detectar secuencias específicas de ADN en una muestra. herencia mendeliana y su expresión es co-dominante por lo que
La técnica utilizada para estudios con VNTR se conoce como es posible diferenciar individuos homocigotos de heterocigotos y
Souther Blot. Los pasos de esta técnica son: distinguir los alelos presentes en los locus.

1) Extracción de ADN. Estas secuencias pueden evidenciarse a través de la aplicación de

2) Digestión del ADN con enzimas de restricción (endonucleasas la tecnica de PCR utilizando cebadores diseñados a partir de los
de restricción-generando fragmentos de restricción). STR.
3) Electroforesis en gel de agarosa (los fragmentos de ADN son Para estudiar estos marcadores se deben seguir una serie de
separados según su tamaño). pasos:
4) Desnaturalización el ADN.
5) Se transfiere a la membrana. 1) Extracción del ADN.
6) Hibridación con sonda radioactiva (se agrega una sonda 2) PCR multiplex (se diseñan cebadores y se amplifican los
radioactiva, que se hibrida únicamente con la secuencia de alelos microsatélites).
ADN complementario) 3) Electroforesis (los tamaños de los alelos amplificados son
7) Detección de los RFLPs mediante autorradiografia (se expone separados en geles de poliacramida o electroforesis capilar).
a una película de rayos x). 4) Interpretación de los resultados.
8) Reensayar el resultado del Southern con sondas adicionales Dato: los microsatélites están distribuidos al azar, con una leve
(la sonda marca fragmentos de restricción específicos). tendencia a presentar mayor densidad en la región telomerica.
Cuando el ADN genómico es cortado con enzimas de restricción Cuando ambos alelos tienen el mismo numero de repeticiones
que reconocen sitios que flanquean la región VNTR se obtienen estamos en presencia de un individuo homocigota para ese
fragmentos que contienen esos loci los cuales difieren en tamaño microsatelite, por el contrario, cuando los alelos son distintos
de un individuo a otro dependiendo del numero de repeticiones pueden ser diferenciados y se dice que el individuo es
que estén presentes. Los fragmentos de diferentes tamaños heterocigota para ese marcador.
pueden ser separados por electroforesis en gel.
Ejemplo: tenemos 3 individuos c/u con regiones micro satélites de
Durante la hibridación con las sondas radioactivas, dada la tamaños diferentes. A su vez cada individuo presenta dos alelos
enorme variabilidad en el número de repeticiones en tándem de diferentes.
un individuo a otro, el grupo de fragmentos que aparece en la
autorradiogradia de S-B es altamente personalizado. Por lo que Cada patrón de bandas será característico para cada individuo.
los patrones de fragmentos de restricción producidos a partir de
estos loci pueden usarse para identificar individuos de manera tan
segura como la huella digital. Por este método pueden
determinarse relaciones familiares, incriminar sospechosos, etc.
cuanto más estrecha sea la relación genética de 2 individuos, más
similares serán sus patrones de fragmentos de restricción. Solo
gemelos monocigoticos tendrán patrones idénticos.

Dato: en la autorradiografia, cada banda corresponde a un alelo. Y

cada individuo tendrá un patrón de bandas característico.
Con respecto a la cantidad de marcadores necesarios para la construcción de mapas genéticos. Los SNP se detectan mediante
prueba de ADN, se ha establecido el CODIS o sistema combinado secuenciación de productos de PCR de una región del genoma al
del índice de ADN, sugerido por el FBI junto a otros organismos, determinar las bases que difieren entre individuos.
conformado por 13 marcadores que se consideran suficientes para
resolver la mayoría de los casos de paternidad Análisis de filiación

La prueba de ADN permite establecer si dos muestras biológicas

proceden o no de la misma persona. Cuando se realiza una prueba
de paternidad o la identificación de un sospechoso, es necesario
tener en cuenta que cada individuo tiene por cada marcador dos
alelos, uno proveniente de la madre y otro del padre. Los patrones
generados por estos sistemas presentan como máximo dos
bandas (heterocigosis), cada una de ellas aportada por cada uno
de sus progenitores, de manera que individuos emparentados
compartirán alelos con los mismos.

Criterios de inclusión y de exclusión

Dato: cuando hablamos de ADN nuclear o genómico hablamos de Una vez que se han comparado los perfiles del hijo/a con los del
AFN de cromosomas autosómicos y de cromosomas sexuales. Pero supuesto padre y existen dos o más STR en los cuales no se
también existe el ADN mitocondrial, en el cual también se observan alelos que tengan el mismo número de repeticiones, se
reconocen regiones hipervariables y existen diversos marcadores excluye la paternidad, y no se requiere ningún calculo
mitocondriales que han sido de gran utilidad para estudiar probabilístico adicional. Por lo tanto, para la exclusión de
diferencias entre individuos. paternidad es necesario que se demuestren diferencias en al
menos 2 marcadores, aunque por lo general, es posible excluir la
Dato: cuando se realiza un perfil de ADN mediante los marcadores paternidad en base a más marcadores.
microsatélites existen de estos marcadores ya caracterizados y
estandarizados para este tipo de estudios. Por ej. Sabremos los Resumiendo… cuando en un análisis de filiación existe más de uno
nombres de los mismos, en que cromosoma se encuentran, el NO coincidencia, hablaremos de exclusión. El perfil del rastro es
rango de numero de repeticiones que pueden tener, el número de diferente al perfil del individuo, por lo tanto el perfil del rastro
alelos observados, etc. corresponde a un individuo diferente. La exclusión se estigma con
el 100% de certeza.
Mientras más polimórfico sea el marcador, de mayor utilidad será
para diferenciar individuos. Cuando el perfil del hijo presenta en todos los STR un alelo
heredado de la madre y el otro de su presunto padre, se habla de
Los alelos de os marcadores microsatélites se diferencian uno del inclusión, y se asigna paternidad. La certeza no es del 100%.
otro debido al número de repeticiones
En este caso, el perfil del rastro es igual al perfil del individuo
Diagnóstico de enfermedades a partir de marcadores pero es necesario hacer una valoración probabilística de los
moleculares SNP (polimorfismos de un solo nucleótido) resultados a través de estimadores como el LR (Likelihood ratio) o
índice de verosimilitud.
La sustitución de un nucleótido por otro puede tener gran impacto
en la funcionalidad de una proteína y ser responsable del origen Para estimar el grado de certeza de paternidad es necesario
de enfermedades genéticas que pueden heredarse o no. Algunos contrastar la probabilidad que los alelos presentes en el hijo
ejemplos de enfermedades causadas por SNP son: provengan del presunto padre vs la probabilidad de que los haya
recibido de cualquier otro individuo de la población. Para ello se
- Fibrosis quística.
realiza el cálculo de la razón entre ambas probabilidades,
- Beta talasemia.
denominada Índice de Paternidad (IP), que expresa cuantas veces
Los SNP generalmente son bialelicos, a pesar de que en una es as probable que el presunto padre sea el biológico a que lo sea
posición especifica de una secuencia podrían encontrarse cualquier otro sujeto de la población. Dado que los STR incluidos
cualquiera de las 4 bases nucleotidicas es más probable que en un estudio de paternidad se heredan de forma independiente,
ocurra el cabio de una sola por otra, la probabilidad de que dos es posible calcular la probabilidad para todos los STR en conjunto,
cambios de base ocurran en una misma posición es muy baja. multiplicando los IP obtenidos para cada STR (IP combinado).

Su alta tasa de frecuencia en el genoma y su baja tasa de A partir del IP combinado se calcula la probabilidad de paternidad
mutación, los posicionan como elementos deseables para la (PP) según la fórmula: PP= IP/IP+1 (si lo multiplicamos por 100 nos
dará valores en porcentaje). Por lo tanto, la PP se acercara a 100% se obtuvo una quimera completa del donante, en caso contrario, si
en la medida que el IP combinado sea más alto. Para ello es la implantación fue parcial, se habla de quimera mixta.
necesario conocer la frecuencia de los alelos en una determinada
El análisis de secuencias polimórficas de ADN permite distinguir
población. Las frecuencias adicionales para hacer esta
de forma cualitativa y cuantitativa la proporción de células del px
interpretación se obtienen de estudios en la población donde se
y del donante, dependiendo de cuál sea la técnica empleada.
realizan pruebas de ADN.
La técnica de preferencia para evaluar la reconstitución
hematopoyética en los TPH alogenicos para la detección de
Diagnóstico de enfermedades utilizando quimerismo, es mediante el análisis de STR por PCR. Esta técnica
marcadores moleculares presenta mayor sensibilidad, permitiendo detectar poblaciones
residuales neoplásicas que poseen una estrecha relación con la
El genoma humano no es una estructura pasiva. El ADN está recaída de la enfermedad.
expuesto a un sin número de alteraciones que pueden dar como
resultado la aparición de enfermedades. La presencia de
polimorfismos dentro de genes o en regiones del ADN adyacentes
a ellos, pueden ocasionar el origen de ciertas enfermedades
hereditarias, congénitas o adquiridas (cáncer). Por lo tanto, su
estudio es útil para el dx de patologías y pueden utilizarse como
marcadores de las mismas. Estos marcadores, en ocasiones, se
localizan en el gen o cerca del gen causante de la enfermedad y
pueden ser rastreados y localizados debido a que se heredan junto
con ella. Existen muchos marcadores STR asociados a diversas
enfermedades como por ejemplo: Ataxia de Friedreich STR: GAA
(autosómica recesiva); Sindrome del X frágil STR: CGG (herencia
ligada al X); Distrofia miotonica STR: CTG (autosómica dominante);
enfermedad de Huntington STR: CAG (autosómica dominante).

Además de los STR, ya mencionamos anteriormente, en el dx

molecular han sido de gran importancia los marcadores
moleculares SNP o polimorfismos de un solo nucleotido.

Detección de Quimerismo
En condiciones fisiológicas normales las células maduras del
sistema hematopoyético son renovadas a partir de células
indiferenciadas o células madre progenitoras hematopoyéticas
(CPH). Esta característica las hace adecuadas para su utilización
en transplantes de medula osea por ej.
Según la procedencia de las CPH infundidas, se pueden clasificar
los transplantes de progenitores hematopoyéticos (TPH) en 2
grupos:

- TPH autologos: células propias del paciente.

- TPH alogenicos: células (CPH) provenientes de un donante
genéticamente distinto.

Estos últimos, pueden llevar a la formación de individuos quimera,

ya que a partir de este procedimiento se infunden de manera
artificial poblaciones celulares genéticamente diferentes.

El éxito del transplante y la reconstitución hematopoyética

dependerá de diversos factores. Por ej. Si la erradicación de CH
del px es total y se implantan las células del donante, se dice que