FACULTAD CIENCIAS E INGENIERÍA

CARRERA DE INGENIERIA EN BIOTECNOLOGIA

MODALIDAD PRESENCIAL

ASIGNATURA:

GENOMICA ESTRUCTURAL Y FUNCIONAL.

DOCENTE:

MGS. YESSENIA SARANGO.

ALUMNOS:

MAYDA PAREDES, RICHARD SANCHEZ, KEVIN VERA,

JONH CORDERO, ANTHONY FLORES.

TEMA:

MICROARRAYS

CURSO:

QUINTO SEMESTRE PARALELO C-1

PERIODO LECTIVO
2024-2025
 N° del
Reporte
Informe de Resultados de aplicación de la Guía de Prácticas Se deberá generar
de forma
secuencial
automática

Datos Generales
NOMBRE DE LA MICROARRAYS
PRÁCTICA
GENÓMICA
CIENCIA E
FACULTA CARRER BIOTECNOLOGÍ ASIGNATUR ESTRUCTURA
INGENIERÍ
D A A A LY
A
FUNCIONAL
PROFESOR DE MGS. YESSENIA SARANGO AMBIENTE O VIRTUAL
PRÁCTICA ORTEGA LABORATORIO
TIEMPO ASIGNADO Tipo APE
UNIDAD: TEMAS:
FECHA DE INICIO 09/05/2024 FECHA FIN 14-05-2024
Individu
TIPO DE PRÁCTICA al CANTIDAD DE
5
(Marque la opción) ESTUDIANTES
Grupal X

NOMBRE DEL O LOS ESTUDIANTES:

1. MAYDA PAREDES 2. RICHARD SANCHEZ

3. KEVIN VERA
4. JONH CORDERO

5. ANTHONY FLORES 6.

Desarrollo de la Práctica
OBJETIVO GENERAL:
Comprender sus posibilidades y limitaciones con el proceso de las aplicaciones
de microarray.
INTRODUCCIÓN:
Las tecnologías de microarray abren un gran abanico de posibilidades a la investigación
a nivel molecular, permitiendo un análisis simultáneo y eficiente de miles de genes. Las
aplicaciones que han tenido los microarray son muy variadas, pero ha existido un énfasis
muy importante en cuestiones médicas, biológicas, de alimentos, entre otras.
Particularmente se ha despertado el interés de uso en especies bacterianas variadas. Con
la ayuda de esta avanzada técnica se pueden obtener perfiles de expresión de distintos
microorganismos, mecanismos de resistencia, efectos de fármacos y otras más
aplicaciones. Los microarray están basados en la hibridación de ácidos nucleicos, es
decir, la unión de dos cadenas complementarias de ADN para formar una de doble
cadena. Permiten hacer análisis comparativos y simultáneos de cómo se van expresando
cientos de genes en un solo experimento. Sus aplicaciones son diversas, abarcando desde
estudios de expresión génica hasta la detección de mutaciones y genotipo en cáncer.
Estas herramientas presentan una serie de ventajas significativas, como una alta
sensibilidad y especificidad, así como un rendimiento excepcional y una versatilidad
notable. Una técnica muy importante es la de microarray, esta técnica nos permite
conocer como el conjunto de genes de una bacteria van cambiando o afectando a través
del tiempo y esto puede desencadenar en una respuesta que perjudica la salud de las
personas.
MATERIALES E INSUMOS:
 Vortice
 Escáner de microarrays y estación de trabajo
 Microcentrífuga
 Tubos de muestra
 Pipetas
 Puntas
 Columnas con perlas oligo-dt
 Bisturí
REACTIVOS:
 Solución buffer
 Solución solvente
 Mezcla de etiquetado verde y rojo
 Solución de lavado de microarrays
PROCEDIMIENTO
Recoger tejido: Utilizamos un bisturí y dos tubos de ensayo para recolectar muestras de
tejido sano y tejido canceroso.
Aislar ARN: Para extraer ARN, necesitamos disolver dos muestras de tejido en una
mezcla de sustancias disolventes orgánicos. Podemos separar ADN, proteínas y otros
componentes celulares, deje sólo el ARN en la solución.
Luego pipeteamos el disolvente en ambos tubos de muestra y mezclamos las muestras de
tejido. Cuando se gira la muestra, el tejido se disolverá y se liberará el ARN.
La muestra se coloca en una centrífuga y la centrífuga hará girar la muestra y separará el
ARN del resto del contenido celular. Usando una micro pipeta, transferimos el ARN a
otro tubo de ensayo limpio.
Aislar ARNm: Eliminamos el ARNt y el ARNr, lavaremos nuestras muestras de ARN
sobre columnas llenas de small beads que solo se unirán a hebras de ARN que tengan
una cola Poli-A, las otras moléculas desaparecerán, luego pipeteamos la muestra de
ARN saludable sobre la columna 1 y posteriormente el ARN de cáncer sobre la columna
2.
Copia de ADN etiquetada: Dado que nuestros tubos de ensayo ya no
contienen ARN sino ADNc que se pueden distinguir entre sí, usaremos moléculas de
ADNc de (células verdes sanas) (células cancerosas rojas) a nuestro microarray.
Aplicar ADN: Nuestro pegamento para microarrays son pequeñas pilas de moléculas de
ADN monocatenario. UNO un solo locus contiene muchas copias idénticas del mismo
gen y cada sitio en el microarray hay diferentes genes. Pipeteamos y agregamos hebras
individuales de ADN hechas de células sanas y cancerosas a nuestro microarray. Tener
en cuenta que la mayoría de las moléculas de ADNc se han hibridado con cadenas de
ADN complementarias en el microarray.
Escaneo microarrays: Colocamos el microarray en el escáner, examinaremos una
sección a la vez sección verde. Observaremos que muchos de los lugares serán verdes,
pero no todos. Veremos manchas oscuras que son genes que no fueron transcritos en las
células sanas. Escanearemos el microarray para ver dónde se unieron las moléculas rojas
de ADNc células cancerosas. Veremos muchas manchas al igual que vivimos con los
genes verdes con un patrón diferente. El escáner de microarray fusiona la imagen roja
con la imagen verde y muestra la imagen compuesta.
Analizar datos: Ahora podemos ver que los puntos rojo y verde se han fusionado. Cada
punto contiene los ADNc rojos y verdes aparecen en amarillo. Las manchas amarillas
contienen un gen que da ADNc verde y rojo, lo que significa que el gen está
presente en las células cancerosas y para las células sanas, estos genes
no serían interesantes ni relevantes para nosotros porque cuando las células se vuelven
cancerosas, la actividad no cambia. En cambio, puntos rojos y todos los puntos
verdes están bien.

ANEXOS: (Gráficos, Fotografías y/o Dibujos de la Práctica en Realización)

Ilustración 1 Recolección de muestras de células Ilustración 2 Extraer el ARN de ambas muestras
sanas y cancerosas con el uso de solventes.

Ilustración 1 Centrifugar las muestras para separar

el ARN del resto del contenido celular.
Ilustración 2 Mezclar ambas muestras en el
Vortex para disolver el tejido y liberar el ARN.

Ilustración 3 Lavaremos nuestras muestras de

ARN sobre columnas llenas de pequeñas cuentas
Ilustración 4 Extraer del precipitado la parte que solo se unirán a hebras de ARN
superior que es lo que contiene el ARN
 Ilustración 5 Lavaremos con una solución
Ilustración 6 agregaremos una mezcla de
tampón sobre las columnas para separar el
etiquetado a nuestras dos muestras de ARN
ARNm de las perlas.
usando una mezcla de etiquetado verde para
el ARN de células sanas y para el ARN de
células cancerosas, usaremos una mezcla de
etiquetado que contiene un tinte fluorescente
rojo.

Ilustración 7 Pipetee la muestra de

etiquetado rojo en el tubo

Ilustración 8 Se agrega ADNc que se preparó a

partir de las células sanas y cancerosas al
microarrays. (ambas muestras en el mismo chip).

Ilustración 9 Se eliminan los ADNc que no se hibridaron

sumergiéndose el chip en una solución de lavado.

Ilustración 10 Análisis de las muestras, unión de

ADNc de las muestras sanas y luego se realiza de
las muestras cancerosas.

Ilustración 11 El escáner fusiona ambas imágenes, los puntos

amarillos representan un gen que se hibridó con ADNc rojo y
verde. Los puntos rojos muestran genes que producen más
ARNm en las células cancerosas que en las sanas,
“aparecen” en el cáncer. Los puntos verdes muestran genes
cuya expresión esta “disminuida” en las células cancerosas.
Los puntos negros demuestran que varios genes no fueron
transcritos en las células sanas
 Ilustración 12 el gen 4263 aparece en
la célula cancerosa, produce producto
proteico que reduce la expresión de
varios genes.

Ilustración 13 El gen 6219 está activado

en células de la piel, en la muestra del
cáncer esta defectuoso, aunque aún
produce ARNm el defecto impide que se
traduzca a proteína. El gen 6219 está
representado por el color amarillo.

Resultados Obtenidos
Los resultados obtenidos revelaron diferencias importantes en la expresión de genes, lo
cual es crucial para entender los mecanismos moleculares del cáncer. La realización de
replicaciones biológicas y técnicas de amplia escala de los experimentos de microarrays
plantea desafíos debido a la gran cantidad y calidad de los datos obtenidos,
especialmente cuando se obtienen datos sin una hipótesis previa o genes sin función
asignada, así como la inclusión de controles de calidad, garantiza la robustez de los
resultados y mejora la fiabilidad de los datos obtenidos en los experimentos.

Conclusiones y Recomendaciones
Esta técnica debe ser aplicada no sólo en la mejora de la eficiencia diagnóstica sino
también en los procesos del propio laboratorio y los que trascienden al propio individuo,
sano o enfermo. Es crucial considerar todos los mecanismos de resistencia a un
antibiótico en el microarrays de ADN, incluyendo la determinación de la funcionalidad o
actividad de los genes en la bacteria. El continuo desarrollo tecnológico hará posible
próximamente la mejora de la técnica de microarrays de ADN, haciéndola mucho más
efectiva y pudiendo responder con más eficacia a cuestiones a escala genómica, o lo que
es lo mismo, del organismo completo. Continuar mejorando estas técnicas y validando
los resultados a través de métodos complementarios será crucial para avanzar en la
investigación oncológica y en la búsqueda de tratamientos más efectivos.

Referencias/Bibliografía.
 Video: https://learn.genetics.utah.edu/content/labs/microarray
 E. Medina and F. Espinosa, “Microarreglos: Tecnología con aplicaciones en el
campo de la salud humana”, Aler, Asma e Inmgía Pediás., vol. 18, pp. 52-59, 2009.
 https://www.elsevier.es/es-revista-medicina-clinica-2-articulo-uso-chips-adn-
microarrays-medicina-13057538
 J. Ramírez et al., “Microarreglos de DNA,” Mensaje Bioquímico, vol. 27, pp. 97-
120, 2003.