2016 Tesis Basso Valentina

Estudio químico y sistemático de
especies pertenecientes al género

Salpichroa (Solanaceae)
ANA VALENTINA BASSO
Tesis Doctoral
Departamento de Química Orgánica
Facultad de Ciencias Químicas
Universidad Nacional de Córdoba
2016
Documento maquetado con TEXiS v.1.0+.
El presente trabajo de Tesis Doctoral fue nanciado con becas de posgrado otorgadas por
FONCyT y CONICET y realizado en el Grupo de Productos Naturales del Departamente de
Química Orgánica de la Facultad de Ciencias Químicas, Universidad Nacional de Córdoba
y en el Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal (IMBIV-CONICET-UNC).
Tesis para optar por el título de

Doctor en Ciencias Químicas
Directora
Dra. Viviana Nicotra
Co-directora
Dra. Gloria Barboza
Comision de Tesis
Dra. Ana Santiago
Dr. Ariel Goldraij
Evaluador Externo
Dra. Marcela Kurina-Sanz
Departamento de Química Orgánica

Facultad de Ciencias Químicas
Universidad Nacional de Córdoba
2016
A mi compañero de viaje
Lucas Pench
ª
A mi querida familia
F
Resumen
Salpichroa Miers (Solanaceae) es un género pequeño de arbustos que crece en altura y
se distribuye en la región andina de Sudamérica. Desde el punto de vista taxonómico, este
género fue ubicado tradicionalmente junto a Nectouxia Kunth y Jaborosa Juss. en la Tribu
Jaboroseae, basado sobre todo en caracteres morfológicos. Un reciente estudio molecular,
sobre sólo una especie, contradice esta ubicación taxonómica y deja a Salpichroa en una
posición incierta.
El presente trabajo de Tesis forma parte de un proyecto interdisciplinario que tuvo por
objetivo resolver la ubicación de Salpichroa en la Familia Solanaceae. Para ello se abor-
dó esta investigación desde distintos enfoques, los cuales incluyen estudios sistemáticos y
químicos del género. Esto implicó principalmente, el estudio morfológico de las especies
(enfoque tradicional), el análisis del ADN (enfoque logenético) y el análisis de la com-
posición química (enfoque quimiotaxonómico), como herramientas para lograr resolver la
ubicación del género en el sistema clasicatorio de la familia.
El primer paso fué revisar las colecciones tipo y colecciones históricas y modernas de
Salpichroa, resolver problemas nomenclaturales y establecer el número real de especies que
integran este género. En conclusión, de 16 especies reconocidas al inicio de esta Tesis, se
aceptan ahora 22. El aumento en el número de especies surge de la rehabilitación de 5
taxones como especies válidas, la descripción de una especie nueva y la incorporación de
N. formosa.
El análisis de logenia molecular se basó en el estudio de secuencias de un marcador

nuclear y dos del cloroplasto. Se incluyeron las 22 especies reconocidas para el género y
dos muestras sin identicar. Se realizaron los análisis de Máxima Parsimonia e Inferencia
Bayesiana. Nuestros resultados indican que Salpichroa resulta un grupo monolético sólo
si incluye a Nectouxia formosa y que este género es distante de Jaborosa, quedando des-
membrada la Tribu Jaboroseae. Sobre las relaciones interespecícas, no se pudieron tomar
decisiones concluyentes, para ello se sugiere un estudio molecular más amplio.
El estudio quimiotaxonómico fue enfocado hacia la búsqueda de los metabolitos secun-

darios frecuentes en la familia, llamados withanólidos. Se estudiaron los extractos vegetales
de 14 especies de las 22. Sólo de dos especies se aislaron estos metabolitos, encontrándose
seis compuestos nuevos y cinco compuestos ya informados. Al comparar estos metabolitos
con los aislados de Jaborosa, géneros que tradicionalmente formaban parte de la misma
Tribu, se encontró que estructuralmente son muy diferentes. Estos resultados acompañan
la propuesta logenética que estén distantes.
ix
x Resumen
El estudio toquímico no solamente incluyó el estudio de los componentes naturales,

sino también la obtención de derivados a partir de los mayoritarios. La estrategia elegida
fue la biotransformación a través de hongos lamentosos. La biotransformación se logró de
manera reproducible y se obtuvieron doce productos, de los cuales cuatro han sido descrip-
tos y ocho son nuevos. La aplicación de biotransformación a través de hongos lamentosos
resultó una herramienta eciente para obtener diversidad estructural a partir de meta-
bolitos relativamente poco reactivos como los withanólidos. Los derivados obtenidos son
particularmente valiosos no sólo por su potencial biológico sino por el hecho que las funcio-
nalidades introducidas ofrecen la posibilidad de acceder a una mayor variedad de derivados.
Los resultados obtenidos del estudio de las tres disciplinas exploradas han permitido
contribuir a la ubicación taxonómica de Salpichroa en la familia Solanaceae y expandir la
colección de estructuras de withanólidos en el estudio de los productos naturales.
Abstract
Salpichroa Miers (Solanaceae) is a small genus of shrubs that grow in height and is
distributed in the Andean region of South America. From the taxonomic point of view,
this genus was traditionally located next to Nectouxia Kunth and Jaborosa Juss. in Tribe
Jaboroseae, based primarily on morphological characteristics. A recent molecular study, in
only one species, contradicts this taxonomic position and places Salpichroa in an uncertain
position.
This Thesis is part of an interdisciplinary project whose target was to resolve the lo-
cation of Salpichroa in the Solanaceae family. To perform this research it was necessary to
view it from dierent approaches, which include systematic and chemical studies of the
genus. This involved mainly the morphological study of the species (traditional approach),
DNA analysis (phylogenetic approach) and analysis of the chemical composition (chemo-
taxonomic approach) as tools to resolve the location of the genus in the family system.
The rst step was to review the type and the historical and modern collections of Sal-
pichroa, to solve nomenclatural problems and establish the actual number of species that
make up this genus. In conclusion, at the beginning of this Thesis 16 species were recog-
nized; now 22 species are accepted. The increase in the number of species arises from the
rehabilitation of 5 taxa as valid species, the description of a new species and the incorpo-
ration of another.
The molecular phylogenetic analysis is based on the study of nuclear marker sequences
and two cloroplastidiales. The 22 species recognized for their genus and two unidentied
samples were included. Maximum Parsimony analysis and Bayesian inference were per-
formed. Our results indicate that Salpichroa is a monophyletic group only if it includes
Nectouxia formosa. Also this genus is far from Jaborosa, Tribe Jaboroseae being dismembe-
red. As regards interspecic relationships, we could not make a nal decision; we suggests
a broader molecular study.
The chemotaxonomic study was focused on nding in the family frequent secondary
metabolites, called withanolides. The plant extracts of 14 species out of 22 were studied.
Only in two species these metabolites were isolated, six being new compounds and ve
being already reported. By comparing these metabolites isolated from Jaborosa, genera
that traditionally were part of the same tribe, they were found to be structurally very
dierent. These results add to the proposal that they are phylogenetically distant.
xi
xii Abstract
The phytochemical study includes the study not only of natural components, but also
of derivatization from the majority ones. The strategy chosen was the biotransformation by
lamentous fungi. The biotransformation was achieved reproducibly and twelve products
were obtained, four of which have already been described and eight are new. Applying bio-
transformation through lamentous fungi proved an ecient tool for structural diversity
in relatively unreactive metabolites as withanolides. The derivatives obtained are particu-
larly valuable not only for its biological potential but for the fact that the functionalities
introduced oer access to a greater variety of derivatives.
The results of the study of the three disciplines explored have allowed to contribute
to the taxonomic placement of Salpichroa in the Solanaceae family and to expand the
collection of withanolides structures in the study of natural products.
Índice
Resumen ix
Abstract xi
1. Introducción General 1
1.1. Introducción General . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3
1.2. Objetivo General . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4
2. Botánica 5
2.1. Introducción . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7
2.1.1. La Familia Solanaceae . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7
2.1.2. Descripción breve de la Familia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8
2.1.3. Fitoquímica de Solanáceas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8
2.1.4. Clasicación y taxonomía . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10
2.2. Antecedentes . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13
2.2.1. Historia Taxonómica de Salpichroa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13
2.2.2. Salpichroa Miers . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 14
2.3. Objetivos especícos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 15
2.4. Materiales y Métodos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 16
2.4.1. Herbarios consultados . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 16
2.4.2. Viajes a Campo y Material Vegetal . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 17
2.4.3. Caracteres Morfológicos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 20
2.4.4. Tratamiento Taxonómico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 22
2.5. Resultados y Discusión . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 23
2.5.1. Descripción del género . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 23
2.5.2. Especies que mantienen su nomenclatura original . . . . . . . . . . . 24
2.5.3. Cambios nomenclaturales . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 43
2.5.4. Especie nueva . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 59
2.5.5. Inclusión de Nectouxia formosa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 61
2.5.6. Clave diferencial de las especies . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 63
2.6. Conclusiones . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 68
3. Filogenia 71
3.1. Introducción . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 73
3.1.1. Historia Evolutiva . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 73
xiii
xiv Índice
3.1.2. Variación morfológica y variación molecular . . . . . . . . . . . . . . 74
3.1.3. Métodos Filogenéticos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 75
3.1.4. Contraste de hipótesis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 76
3.2. Antecedentes . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 77
3.4.1. Material estudiado . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 80
3.4.2. Extracción de ADN . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 81
3.4.3. Análisis molecular . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 81
3.4.4. Análisis logenético . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 82
3.5. Resultados . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 83
3.5.1. Maxima Parsimonia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 83
3.5.2. Inferencia Bayesiana . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 85
3.6. Discusión . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 87
3.7. Conclusiones . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 91
4. Fitoquímica 93
4.1. Introducción . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 95
4.1.1. Productos Naturales . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 95
4.1.2. Withanólidos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 95
4.1.3. Clasicación de los Withanólidos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 95
4.1.4. Withanólidos en el Reino Vegetal . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 99
4.1.5. Rol de los Metabolitos Secundarios como

Marcadores Quimiotaxonómicos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 101
4.2. Antecedentes . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 102
4.2.1. Withanólidos en Salpichroa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 102
4.4.1.
1
Espectroscopía de RMN- H de Salpichrólidos . . . . . . . . . . . . . 107
4.4.2. Especies Salpichroa con ausencia de withanólidos . . . . . . . . . . . 109
4.4.3. Salpichrólidos aislados de Salpichroa lehmannii . . . . . . . . . . . . 111
4.4.4. Salpichrólidos aislados de Salpichroa scandens argentina . . . . . . . 119
4.4.5. Salpichrólidos aislados de Salpichroa scandens boliviana . . . . . . . 124
4.5. Conclusiones . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 127
4.6. Parte Experimental . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 128
4.6.1. Materiales y Métodos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 128
4.6.2. Material Vegetal . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 130
4.6.3. Extracción y Puricación . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 130
4.6.4. Caracterización de los Compuestos Nuevos . . . . . . . . . . . . . . . 139
5. Biotransformaciones 153
5.1. Introducción . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 155
5.1.1. Los productos naturales y la búsqueda de nuevos fármacos . . . . . . 155
5.1.2. Estrategias para la producción de compuestos bioactivos . . . . . . . 156

Índice xv
5.1.3. Las Biotransformaciones . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 157
5.1.4. Sustratos propuestos: Salpichrólidos . . . . . . . . . . . . . . . . . . 158
5.2. Antecedentes . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 160
5.4.1. Los Sustratos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 169
5.4.2. Ensayos Previos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 169
5.4.3. Ensayos de Biotransformación . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 171
5.4.4. Biotransformación de Salpichrólido A por Rhizomucor miehei . . . . 173
5.4.5. Biotransformación de Salpichrólido C por Rhizomucor miehei . . . . 182
5.4.6. Biotransformación de Salpichrólido G por Rhizomucor miehei . . . . 187
5.4.7. Biotransformación de Salpichrólido A por Curvularia lunata . . . . . 192
5.4.8. Biotransformación de Salpichrólido A por Cunninghamella elegans . 193
5.4.9. Consideraciones Metabólicas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 202
5.5. Conclusiones . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 206
5.6. Parte Experimental . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 207
5.6.1. Materiales y Métodos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 207
5.6.2. Material vegetal . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 207
5.6.3. Extracción y Puricación de los Sustratos . . . . . . . . . . . . . . . 207
5.6.4. Selección de Cepas de Hongos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 207
5.6.5. Medio de cultivo, Fermentación e Inoculación . . . . . . . . . . . . . 208
5.6.6. Ensayos y Reacciones de Biotransformación . . . . . . . . . . . . . . 208
5.6.7. Extracción y Puricación de los Productos obtenidos de las Biotrans-

formaciones . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 209
5.6.8. Caracterización de los Productos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 215
6. Actividad Biológica 229

6.1. Introducción . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 231
6.1.1. Actividad Biológica de los Withanólidos . . . . . . . . . . . . . . . . 231
6.2. Antecedentes . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 234
6.2.1. Actividad Biológica de los Salpichrólidos . . . . . . . . . . . . . . . . 234
6.4.1. Resultados del Ensayo de Fitotoxicidad . . . . . . . . . . . . . . . . 238
6.4.2. Resultados del Ensayo de Citotoxicidad . . . . . . . . . . . . . . . . 240
6.5.1. Ensayo de Fitotoxicidad . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 244
6.5.2. Ensayo de Citotoxicidad . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 245
6.6. Conclusiones . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 247
7. Conclusiones Generales 249

7.1. Conclusiones Generales . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 251
7.2. Proyecciones . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 253
8. Producción Cientíca 255

xvi Índice
8.1. Artículos publicados en revistas y libros . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 257
8.2. Resúmenes Publicados en Eventos Cientícos . . . . . . . . . . . . . . . . . 257
A. Apéndice 259
A.1. Glosario de Nomenclatura Botánica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 260
A.2. Espectros de RMN de Compuestos Naturales . . . . . . . . . . . . . . . . . 261
A.3. Espectros de RMN de Derivados por Biotransformación . . . . . . . . . . . 268
Agradecimientos 279
Bibliografía 281
Lista de acrónimos 294

Índice de guras
2.1. Distribución de la Familia Solanaceae en el mundo . . . . . . . . . . . . . . 7
2.2. Especies representativas de la Familia Solanaceae. . . . . . . . . . . . . . . . 7
2.3. Corte longitudinal de or y fruto de un representante de Solanaceae (Sola-

num lycopersicum ). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8
2.4. Alcaloides de la Familia Solanaceae. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9
2.5. Planta de tabaco (Solanaceae). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9
2.6. Planta de Mandrágora (Solanaceae). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10
2.7. Clasicación de la Fam. Solanaceae propuesta por Hunziker (2001). . . . . . 11
2.8. Fragmento de la propuesta logenética de la Fam. Solanaceae según Olms-

tead y colegas (2008). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 12
2.9. Physalis peruviana. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13
2.10. Distribución de Salpichroa (rojo) y Solanaceas (verde). . . . . . . . . . . . . 14
2.11. Caracteres diagnósticos de la Hoja. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 20
2.12. Caracteres diagnósticos de la Flor. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21
2.13. Caracteres diagnósticos del Fruto. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21
2.14. Salpichroa dependens. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 25
2.15. Salpichroa didierana. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 26
2.16. Salpichroa diusa. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 28
2.17. Salpichroa gayi. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 29
2.18. Salpichroa hirsuta . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 30
2.19. Salpichroa leucantha. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 32
2.20. Salpichroa micrantha. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 33
2.21. Salpichroa microphylla . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 34
2.22. Salpichroa origanifolia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37
2.23. Salpichroa proboscidea . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 38
2.24. Salpichroa ramosissima . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 40
2.25. Salpichroa scandens . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 42
2.26. Salpichroa tristis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 45
2.27. Salpichroa lehmannii . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 47
2.28. Comparación entre S. tristis y S. lehmannii . . . . . . . . . . . . . . . . . . 48
2.29. Salpichroa amoena . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 50
2.30. Salpichroa glandulosa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 51
2.31. Salpichroa weddellii . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 52
2.32. Dientes interlobulares corolinos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 53
xvii
xviii Índice de figuras
2.33. Salpichroa incaica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 55
2.34. Salpichroa tenuiora . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 56
2.35. Comparación entre S. incaica y S. tenuiora . . . . . . . . . . . . . . . . . . 57
2.36. Salpichroa weberbaueri . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 58
2.37. Salpichroa salpoensis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 60
2.38. Nectouxia formosa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 62
3.1. La obra de Darwin El origen de las especies y su crítica . . . . . . . . . . 73
3.2. Fragmento de la propuesta logenética de Olmstead et al. (2008) de la Fa-

milia Solanaceae. Clado Salpichroina: Salpichroa (sólo una especie estu-
diada) y Nectouxia (monotípico); Clado Atropina: 3 especies de Jaborosa,
junto con géneros de otras Tribus. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 78
3.3. Filogenia de Salpichroa. Árbol de consenso estricto de los 14 árboles más par-
simoniosos de 892 pasos (CI: 0,624; RI: 0,785) obtenido a partir del conjunto
de datos combinados (marcadores del cloroplasto psbA-trnH y ndhF-rpl32
+ nuclear ITS). Valores de BS sobre las ramas (>40 %). . . . . . . . . . . . 84
3.4. Filogenia de Salpichroa. Filograma obtenido mediante Inferencia Bayesiana,

a partir del conjunto de datos combinados (marcadores del cloroplasto psbA-
trnH y ndhF-rpl32 + nuclear ITS). Los valores de PP se indican en cada
rama. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 86
3.5. Conictos taxonómicos en Salpichroa. Fragmento del árbol de consenso ex-

tricto basado en Máxima Parsimonia donde se identican los conictos ta-
xonómicos por color. Conicto en S. tristis (rosa), Conicto en S. glandulosa
(verde), Conicto en S. weberbaueri (celeste), posible especie nueva e inclu-
sión de N. formosa (amarillo), especies en cursiva. . . . . . . . . . . . . . . 90
4.1. Withanólidos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 96
4.2. Grupo A w. con cadena lateral γ -lactona o γ -lactol. R= O, H u OH . . . . 97
4.3. Grupo B w. con cadena lateral δ -lactona o δ -lactol. R= O, H u OH . . . . 98
4.4. Withanólidos aislados en varias especies de Jaborosa Juss. . . . . . . . . . . 101
4.5. Salpichroa origanifolia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 102
4.6. Salpichrólidos representativos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 102
4.7. Salpichrólidos con Anillo D aromático con cadenal lateral sin modicar. . . 103
4.8. Salpichrólidos con esqueleto normal. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 104
4.9. Salpichrólidos con Anillo D aromático con cadenal lateral modicada. . . . . 105
1
4.10. Espectro de RMN- H del Salpichrólido R, w. con esqueleto normal, en
CDCl3 a 400,13 MHz respecto a TMS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 108
1
4.11. Espectro de RMN- H del Salpichrólido A, w. con anillo D aromático, en
CDCl3 a 400,13 MHz respecto a TMS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 108
4.12. Especies Salpichroa que fueron estudiadas en esta Tesis con ausencia de w. . 110
4.13. Foto de Salpichroa lehmannii . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 111
4.14. Salpichrólidos nuevos aislados de Salpichroa lehmannii . . . . . . . . . . . . 111
4.15. Salpichrólidos conocidos aislados de Salpichroa lehmannii . . . . . . . . . . 112
4.16. RMN- H a 400,13 MHz del Salpichrólido S (1) respecto TMS (δ ). . . . . . . 113
1
1
4.17. HMBC del Salpichrólido S ( ) en CDCl3 con respecto a TMS, 400,13 MHz . 114
Índice de figuras xix
1 2
4.18. RMN- H a 400,13 MHz del 2-en-Salpichrólido S ( ) respecto TMS (δ ). . . . 115
1 3
4.19. RMN- H a 400,13 MHz del Salpichrólido T ( ) respecto TMS (δ ). . . . . . . 116
4.20. Espectro HMBC del compuesto 3 en CDCl3 con respecto a TMS, 400,13 MHz117
4.21. RMN- H a 400,13 MHz del Salpichrólido U (4) respecto TMS (δ ). . . . . . . 118
1
4.22. Salpichroa scandens argentina . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 119
5
4.23. Salpichrólido V ( ) aislado de Salpichroa scandens de Argentina . . . . . . . 119
4.24. Salpichrólidos conocidos aislados de Salpichroa scandens argentina . . . . . 120
4.25. RMN- H a 400,13 MHz del Salpichrólido V (5) respecto TMS (δ ). . . . . . . 121
1
4.26. Espectrometría de masa de Alta Resolución del Salpichrólido V ( ) A) Zona5

ampliada del ion molecular B) Zona ampliada correspondiente a la pérdida
de HCl. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 122
5
4.27. NOESY selectivo del Salpichrólido V ( ) respecto de TMS (δ ). . . . . . . . 123
5
4.28. Estereoquímica del Salpichrólido V ( ) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 123
4.29. Salpichroa scandens boliviana . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 124
4.30. Salpichrólido 6 aislado de Salpichroa scandens de Bolivia . . . . . . . . . . . 124

4.31. Salpichrólidos conocidos aislados de Salpichroa scandens boliviana . . . . . 125
1
4.32. RMN- H a 400,13 MHz del Salpichrólido 6 respecto TMS (δ ). . . . . . . . . 126
4.33. Diagrama de Extracción y Partición del Material Vegetal . . . . . . . . . . . 131
4.34. Salpichroa lehmannii . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 132
4.35. Diagrama de separación cromatográca de Salpichroa lehmannii . . . . . . . 134
4.36. Salpichroa scandens argentina . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 135
4.37. Diagrama de separación cromatográca de Salpichroa scandens argentina . . 137
4.38. Salpichroa scandens boliviana . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 138
4.39. Diagrama de separación cromatográca de Salpichroa scandens boliviana . . 140
5.1. Fuentes de nuevas drogas aprobadas 1981-2014, n = 1562. . . . . . . . . . . 156
5.2. Biotransformación de Withaferina A por Cunninghamella elegans . . . . . . 161
5.3. Biotransformación de Withaferina A por Cunninghamella elegans y Cun-

ninghamella echinulata . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 162
5.4. Biotransformación de Physalina H por Rhizopus stolonifer . . . . . . . . . . 163
5.5. Biotransformación de Physalina H por Cunninghamella elegans . . . . . . . 164
5.6. Biotransformación de Trechonólido A por Aspergillus niger . . . . . . . . . 165
5.7. Glucosidación enzimática de 3β y 27-hidroxi-withanólidos . . . . . . . . . . 166
5.8. Sustratos: Salpichrólidos A, C y G de Salpichroa origanifolia . . . . . . . . . 169
5.9. Incubación de los sustratos luego de una semana de crecimiento de los hongos172
5.10. Productos novedosos de biotransformación de Salpichrólido A por Rhizomu-

cor miehei . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 173
5.11. Salpichrólido T. Derivado del Salpichrólido A por Rhizomucor miehei . . . . 173
5.12. Biotransformación del Salpichrólido A por Rhizomucor miehei . . . . . . . 174

1
5.13. RMN- H a 400,13 MHz del Derivado 1 respecto de TMS (δ ). . . . . . . . . 175
1
1
5.16. RMN- H a 400,13 MHz del Derivado 4 respecto de TMS (δ ).

1 . . . . . . . . 178
5.17. Salpichrólido A . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 179

xx Índice de figuras
5.18. Productos de Biotransformación de Salpichrólido C por Rhizomucor miehei 182
5.19. Biotransformación del Salpichrólido C por Rhizomucor miehei . . . . . . . . 182

1
5.20. RMN- H a 400,13 MHz del Derivado 5b respecto de TMS (δ ). . . . . . . . . 183
5.21. Salpichrólido C . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 185
5.22. Biotransformación del Salpichrólido G por Rhizomucor miehei y posterior

acetilación. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 187
1
5.23. RMN- H a 400,13 MHz del Derivado 6a respecto de TMS (δ ). . . . . . . . . 188
1
5.24. RMN- H a 400,13 MHz del Derivado 6b respecto de TMS (δ ). . . . . . . . . 189
5.25. Salpichrólido G . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 190
5.26. Productos de la Biotransformación de Salpichrólido A por Curvularia lunata 192
5.27. Biotransformación del Salpichrólido A por Curvularia lunata . . . . . . . . . 192
5.28. Productos novedosos de la Biotransformación de Salpichrólido A por Cun-

ninghamella elegans y posterior acetilación . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 193
5.29. Productos conocidos de Biotransformación de Salpichrólido A por Cunning-
hamella elegans . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 193
5.30. Biotransformación del Salpichrólido A por Cunninghamella elegans . . . . . 194
1
5.32. RMN- H a 499,79 MHz del Derivado 8 respecto de TMS (δ ). .

1 . . . . . . . 196
5.33. RMN- H a 600,24 MHz del Derivado 8a respecto de TMS (δ ). .

1 . . . . . . . 197
5.34. NOESY selectivo del Derivado 8a respecto de TMS (δ ). . . . . . . . . . . . 198
5.35. Posibles dos orientaciones para OH-1 (α o β ) en el Derivado 8a . . . . . . . 198
5.36. Salpichrólido A . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 199
5.37. Posible vía para obtener los Derivados 1-4 y 7 a partir de Salpichrólido A . 203
5.38. Posible vía para obtener Derivados 5a, 6a, Salpichrólido C y M . . . . . . . 204
5.39. Posible vía para obtener el Derivado 8 y 2,3-dihidro Salpichrólido B a partir

del Salpichrólido A . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 205
5.40. Microorganismos utilizados para realizar las biotransformaciones. . . . . . . 207
5.41. Esquema de puricación de los productos de la biotransformación de Salpi-

chrólido A por Rhizomucor miehei . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 211

chrólido C por Rhizomucor miehei y posterior acetilación. . . . . . . . . . . 212

chrólido G por Rhizomucor miehei . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 213

chrólido A por Curvularia lunata . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 214

chrólido A por Cunninghamella elegans . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 216
6.1. Withaferina A . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 231
6.2. Salpichrólidos representativos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 234
6.3. Salpichrólido A. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 236
6.4. Sustratos de Salpichroa lehmannii estudiados en el Ensayo de Fitotoxicidad. 238
6.5. Sustratos de Salpichroa origanifolia estudiados en el Ensayo de Fitotoxicidad.239
6.6. Sustratos semisintéticos estudiados en el Ensayo de Citotoxicidad. . . . . . . 241
6.7. Sustratos naturales estudiados para el Ensayo de Citotoxicidad. . . . . . . . 242

Índice de figuras xxi
7.1. Fitoquímica y logenia en Salpichroa. Fragmento del árbol de consenso ex-

tricto basado en Máxima Parsimonia. En violeta se muestran las especies
con withanólidos. Con estrellas se señalan las especies que no se estudiaron
químicamente. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 252
A.1. Compuesto 1: RMN-1 H (400,13 MHz, CDCl3 :D2 O 95:05) . . . . . . . . . . . 261
A.2. Compuesto 1: RMN- C (100,63 MHz, CDCl3 ) . . . . . . . . . . . . .

13 . . . 261
A.3. Mezcla de los compuestos 1 y 2: RMN- H (400,13 MHz, CDCl3 ) . . .

1 . . . 262
A.4. Mezcla de los compuestos 1 y 2: HSQC (400,13 MHz, CDCl3 ) . . . . . . . . 262
A.5. Mezcla de los compuestos 1 y 2: HMBC (400,13 MHz, CDCl3 ) . . . . . . . 263
A.6. Compuesto 3: RMN- H (400,13 MHz, CDCl3 ) . . . . . . . . . . . . . .

1 . . . 264
A.7. Compuesto 3: RMN- C (100,63 MHz, CDCl3 ) . . . . . . . . . . . . .

13 . . . 264
A.8. Compuesto 4: RMN- H (400,13 MHz, CDCl3 ) . . . . . . . . . . . . . .

1 . . . 265
A.9. Compuesto 4: RMN- C (100.63 MHz, CDCl3 ) . . . . . . . . . . . . .

13 . . . 265
A.10.Compuesto 5: RMN- H (400,13 MHz, CDCl3 ) . . . . . . . . . . . . . .

1 . . . 266
A.11.Compuesto 5: RMN- C (100,63 MHz, CDCl3 ) . . . . . . . . . . . . .

13 . . . 266
A.12.Mezcla de los compuestos 5 y 6: RMN- H (400,13 MHz, CDCl3 ) . . .

1 . . . 267
A.13.Mezcla de los compuestos 5 y 6: HSQC (400,13 MHz, CDCl3 ) . . . . . . . . 267
A.14.Derivado 1: RMN- H a 400,13 MHz en CDCl3 respecto de TMS (δ ). .

1 . . . 268
A.15.Derivado 1: HSQC a 400,13 MHz en CDCl3 respecto de TMS (δ ). . . . . . . 268

1 . . . 269
A.17.Derivado 2: RMN- C a 100,6 MHz en CDCl3 respecto de TMS (δ ). .

13 . . . 269

1 . . . 270

13 . . . 270

1 . . . 271

13 . . . 271
A.22.Derivado 5b: RMN- H a 400,13 MHz en CDCl3 respecto de TMS (δ ).

1 . . . 272
A.23.Derivado 5b: RMN- C a 100,6 MHz en CDCl3 respecto de TMS (δ ). .

13 . . . 272
A.24.Derivado 6a: RMN- H a 400,13 MHz en CDCl3 respecto de TMS (δ ). .

1 . . . 273
A.25.Derivado 6a: RMN- C a 100,6 MHz en CDCl3 respecto de TMS (δ ). .

13 . . . 273
A.26.Derivado 6b: RMN- H a 400,13 MHz en CDCl3 respecto de TMS (δ ).

1 . . . 274
A.27.Derivado 6b: RMN- C a 100,6 MHz en CDCl3 respecto de TMS (δ ). .

13 . . . 274

1 . . . 275

13 . . . 275

1 . . . 276

13 . . . 276
A.32.Derivado 8a: RMN- H a 400,13 MHz en CDCl3 respecto de TMS (δ ). .

1 . . . 277
A.33.Derivado 8a: RMN- C a 100,6 MHz en CDCl3 respecto de TMS (δ ). .

13 . . . 277
Índice de Tablas
2.1. Material vegetal recolectado en el viaje a campo a Perú durante Enero 2012.
Dra. Gloria Barboza (GB), Mg. Segundo Leiva y Lic. Ana Basso. . . . . . . 18
2.2. Material vegetal recolectado en el viaje a campo a Bolivia y Norte Argentino

durante Febrero 2012. Dra. Gloria Barboza (GB), Dra. Teresa Cosa y Lic.
Ana Basso. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 19
2.3. Material vegetal recolectado en el viaje a campo a Perú y Ecuador durante

Enero 2013. Biol. Rocio Deanna (RD), Mg. Segundo Leiva y Lic. Ana Basso. 19
3.1. Materiales estudiados del género Salpichroa. Colectores: Gloria Barboza

(GB), Rocio Deanna (RD), Paul Gonzáles (PG), Andrea Cocucci (AC) y
Segundo Leiva (SL). Mayores datos de colección se indican en el Capítulo 2. 80
3.2. Regiones de ADN nuclear (ITS), del cloroplasto (psbA-trnH, ndhF-rpl32 ) y

las secuencias de los primers utilizados para la amplicación por PCR y su
posterior secuenciación. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 81
3.3. Materiales analizados del grupo externo. Detalles de las secuencias obtenidas
del GenBank . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 82
4.1. Géneros de la Subfam. Solanoideae (Solanaceae) que contienen w. . . . . . . 100
4.2. Resultados del estudio Fitoquímico de las especies pertenecientes al género

Salpichroa. Las Especies analizadas (14/22) fueron recolectadas e identica-
das por la Dra. Gloria Barboza (GB) y el Ing. Armando Hunziker (AH). . . 109
4.3. Especies del género Salpichroa. 14/22 analizadas para el estudio toquímico. 130
4.4.
1
Desplazamientos Químicos en RMN- H a 400,13 MHz de Salpichrólidos S
1 2
( ) y 2-en-Salpichrólido S ( ), aislados de S. lehmannii respecto de TMS
(δ ). Constante de acoplamiento J entre paréntesis en Hz. . . . . . . . . . . . 141
4.5. Desplazamientos Químicos en RMN-H

1 a 400,13 MHz de Salpichrólidos T
3 4
( ) y U ( ) aislados de S. lehmannii respecto de TMS (δ ). Constante de
acoplamiento J entre paréntesis en Hz. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 142
4.6. Desplazamientos Químicos en RMN-H

1 a 400,13 MHz de Salpichrólidos V
5 y Salpichrólido 6 aislados de S. scandens respecto de TMS (δ ). Constante

de acoplamiento J entre paréntesis en Hz. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 143
4.7. Desplazamientos Químicos en RMN-C

13 a 100,63 MHz de Salpichrólidos S
1 2 3 4 5 6
( ), 2-en-Salpichrólido S ( ), T ( ), U ( ), V ( ) y Salpichrólido ( ) respecto
de TMS (δ ). Constante de acoplamiento J entre paréntesis en Hz. . . . . . . 144
xxiii
xxiv Índice de tablas
5.1. Masa (mg) de la fase orgánica extraída por día en el Ensayo Previo. Sustrato,
Salpichrólido A, utilizado en todas las especies de hongo. . . . . . . . . . . . 170
5.2.
1
RMN- H a 400,13 MHz del Derivado 1 y Derivado 2, obtenidos de la bio-
transformación de Rhizomucor miehei comparados con el sustrato Salpi-
chrólido A ( SA) respecto de TMS (δ ). Constante de acoplamiento J entre
paréntesis en Hz. Resaltadas con color, las diferencias observadas. . . . . . . 179
5.3.
1
RMN- H a 400,13 MHz del Derivado 3 y Derivado 4, obtenidos de la bio-
transformación de Rhizomucor miehei comparados con el sustrato Salpi-
chrólido A ( SA) respecto de TMS (δ ). Constante de acoplamiento J entre
5.4. RMN-
13 C a 100,03 MHz del Derivados 1, 2, 3 y 4, obtenidos de la biotrans-
formación de Rhizomucor miehei comparados con el sustrato Salpichrólido
A (SA) respecto de TMS (δ ). Resaltadas con color, las diferencias observadas.181
5.5.
1
RMN- H a 400,13 MHz del Derivado 5b, obtenido de la biotransformación
de Rhizomucor miehei comparado con el sustrato Salpichrólido C (SC) res-
pecto de TMS (δ ). Constante de acoplamiento J entre paréntesis en Hz.
Resaltadas con color, las diferencias. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 185
5.6.
13
RMN- C a 100,03 MHz del Derivado 5b, obtenido de la biotransforma-
ción de Rhizomucor miehei comparado con el sustrato Salpichrólido C ( SC)
respecto de TMS (δ ). Resaltadas con color, las diferencias observadas. . . . 186
5.7.
1
RMN- H a 400,13 MHz del Derivado 6a y Derivado 6b, obtenidos de la
biotransformación de Rhizomucor miehei comparados con el sustrato Salpi-
chrólido G ( SG) respecto de TMS (δ ). Constante de acoplamiento J entre
5.8. RMN-
13 C a 100,03 MHz del Derivado 6a y Derivado 6b, obtenidos de la
biotransformación de Rhizomucor miehei comparados con el sustrato Salpi-
chrólido G ( SG) respecto de TMS (δ ). Resaltadas con color, las diferencias
observadas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 191
5.9.
1
RMN- H a 600,24 MHz del Derivado 7, obtenidos de la biotransformación de
Cunninghamella elegans comparados con el sustrato Salpichrólido A ( SA)
respecto de TMS (δ ). Constante de acoplamiento J entre paréntesis en Hz.
Resaltadas con color, las diferencias observadas. . . . . . . . . . . . . . . . . 199
1
5.10. RMN- H a 499,79 MHz del Derivado 8 y a 600,24 MHz del Derivado 8a,
obtenidos de la biotransformación de Cunninghamella elegans comparados
con el sustrato Salpichrólido A ( SA) respecto de TMS (δ ). Constante de
acoplamiento J entre paréntesis en Hz. Resaltadas con color, las diferencias
observadas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 200
13
5.11. RMN- C a 150,95 MHz del Derivado 7, 8a y 125,03 MHz del Derivado 8,
obtenidos de la biotransformación de Cunninghamella elegans comparados
con el sustrato Salpichrólido A ( SA) respecto de TMS (δ ). Resaltados con
color, las diferencias observadas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 201
6.1. Efecto de los Salpichrólidos sobre la longitud radicular de Lactuca sativa . . 240
6.2. Efecto de los Salpichrólidos sobre la longitud radicular de Avena sativa . . . 240
6.3. Actividad citotóxica de Salpichrólidos sobre líneas celulares de cáncer de

próstata dependientes (LNCaP) y no dependientes (PC3) de andrógeno. . . 243
Capítulo 1
Introducción General
Resumen: El presente trabajo de Tesis forma parte de un proyecto interdiscipli-

nario que tuvo por objetivo resolver la ubicación de Salpichroa Miers en la Familia
Solanaceae. Para ello se abordó el tema desde distintos enfoques, los cuales incluyen
principalmente estudios químicos y sistemáticos del género. En este Capítulo se explica
cómo están mostrados los resultados en este libro.
1
2 Capítulo 1. Introducción General
1.1. Introducción General 3
1.1. Introducción General

Salpichroa Miers es un grupo de plantas que se distribuye en la región andina de Su-
0
damérica. D Arcy y Hunziker ubicaron a Salpichroa y Nectouxia junto al género Jaborosa
dentro de la Tribu Jaboroseae basado en caracteres morfológicos y en la presencia de polen
0
trinucleado (D Arcy, 1991) (Hunziker, 2001).
Una clasicación logenética en base a caracteres moleculares (Olmstead et al., 2008),

propuesta más recientemente para Solanaceae, provee un marco diferente al sistema mor-
fológico con la inclusión de géneros tradicionalmente excluidos de esta familia y con una
mayor resolución en la ubicación de los géneros dentro de cada subfamilia. En este marco,
el estudio molecular del género Salpichroa, sólo una especie analizada (Olmstead et al.,
2008) y el estudio químico, sólo una especie investigada (Veleiro et al., 1992), (Veleiro et
al., 1994), (Tettamanzi et al., 1996), (Tettamanzi et al., 1998), (Tettamanzi et al., 2001),
(Nicotra et al., 2013) son bastante fragmentarios y además contradicen la ubicación taxo-
nómica propuesta por Hunziker (Hunziker, 2001).
El principal objetivo de este trabajo es resolver la ubicación de Salpichroa dentro de la

Familia Solanaceae. Para ello se ha abordado la investigación desde diferentes disciplinas
o enfoques. Los enfoques usados son: Botánica (Enfoque Taxonómico), Filogenia (Enfoque
Filogenético) y Fitoquímica (Enfoque Quimiotaxonómico). Esta Tesis está organizada de
forma tal que el lector puede encontrar en cada Capítulo, un enfoque desarrollado. Cada
Capítulo funciona como una unidad independiente, dentro del cual se expone una breve
Introducción, Objetivos, Metodología, Resultados y nalmente sus Conclusiones.
En el Capítulo Botánica se muestra el estudio morfológico tradicional y taxonómico

del género, el cual fue el primer paso para renovar la información sobre este grupo de plan-
tas. En el Capítulo Filogenia se muestra el estudio molecular que apunta a esclarecer la
monolia del género, la relación entre sus especies y la posición dentro del sistema clasi-
catorio de la Familia. En el Capítulo Fitoquímica se muestra el estudio toquímico que
está orientado hacia la búsqueda de metabolitos secundarios especícos de dicha familia,
los withanólidos. Estos compuestos presentan arreglos exclusivos a nivel genérico, este he-
cho apoya la propuesta de usarlos como marcadores quimiotaxonómicos.
Los Capítulos subsiguientes se centran en completar el estudio Fitoquímico. Esto es

la búsqueda de derivados bioactivos por vías verdes de reacción como lo es la biotransfor-
mación a través de hongos, Capítulo Biotransformación, y por último, la medición de
actividad totóxica selectiva sobre cultivos comerciales y la actividad citotóxica selectiva
sobre líneas celulares de cáncer, mostrados en el Capítulo Actividad Biológica.
Encarar un problema de investigación interdisciplinariamente tiene grandes ventajas:

la mirada holística al tema, el entrenamiento multifacético y el aprendizaje global, sólo
por nombrar algunas. Como un caleidoscopio imaginario, la gran incógnita de Salpichroa
fue virando de colores y de formas según la disciplina que lo hacía girar hasta llegar a una
propuesta nal, una gura multicolor.
4 Capítulo 1. Introducción General
1.2. Objetivo General

A partir de lo anteriormente expuesto se plantea como objetivo general
Resolver la ubicación de Salpichroa en la Familia Solanaceae, mediante el estudio

toquímico y molecular de las especies de Salpichroa.
Capítulo 2
Botánica
Resumen: Salpichroa Miers (Solanaceae) es un género pequeño, el cual se proponía

que estaba integrado por 16 especies. Son arbustos que crecen en altura, excepto S.
origanifolia (Lam.) Baillon que es cosmopolita, se distribuyen en la región andina
de Sudamérica. Desde el punto de vista taxonómico, fue ubicado tradicionalmente
junto a Nectouxia y Jaborosa en la Tribu Jaboroseae, basado sobre todo en caracteres
morfológicos. Un reciente estudio molecular contradice esta ubicación taxonómica y
deja a Salpichroa en una posición incierta. En este Capítulo se revisa la taxonomía
del género, proponiéndose algunas novedades, por lo que se incrementa el número a
22 especies (incluida N. formosa ) asignadas al género.
5
6 Capítulo 2. Botánica
2.1. Introducción 7
2.1. Introducción
2.1.1. La Familia Solanaceae
Las Solanáceas, también conocidas como la familia de las papas, es una de las familias
0
económicamente más importante dentro de las Plantas Vasculares (D Arcy, 1991); contiene
cerca de 94 géneros y ca. 2.500 especies con una distribución en todo el mundo en climas
templados y tropicales (Barboza et al., 2016), Figura 2.1. Sin embargo está mucho más
diversicada en la región andina y regiones amazónicas de América del Sur, en hábitats
que varían drásticamente.
Figura 2.1: Distribución de la Familia Solanaceae en el mundo
Entre sus especies más valiosas, se destacan algunos cultivos vegetales, como la pa-
pa (Solanum tuberosum L.), el tomate (Solanum lycopersicum L.), la berenjena (Solanum
melongena L.) y los ajíes o pimientos (Capsicum spp.), Figura 2.2. También especies or-
namentales como las petunias (Petunia spp.), oripondios (Brugmansia spp.), jazmín del
Paraguay (Brunfelsia spp.) y medicinales como la belladona (Atropa belladonna L.), el
beleño (Hyoscyamus niger L.), etc.
(a) S. lycopersicum (b) S. melongena
(c) C. annum (d) S. tuberosum
Figura 2.2: Especies representativas de la Familia Solanaceae.

2.1.2. Descripción breve de la Familia

Las Solanáceas son plantas herbáceas, subarbustos, arbustos, raro árboles o lianas. Pue-
den ser anuales, bienales o perennes, erguidas a decumbentes; a veces están provistas de
tubérculos subterráneos. Las hojas varían desde herbáceas a coriáceas, o por excepción,
pueden estar transformadas en espinas, son pecioladas o subsésiles, raramente sésiles, en
ocasiones, aromáticas o fétidas; la lámina puede ser simple o compuesta. Las inorescen-
cias son solitarias, cimosas, terminales o axilares. Las ores son, en general, hermafroditas,
de tamaño intermedio, fragantes (como en Nicotiana ), fétidas (Anthocercis ) o inodoras,
actinomorfas, levemente a marcadamente zigomorfas (Schizanthus ), pentámeras, raro te-
trámeras. El cáliz es gamosépalo, persistente y puede ser acrescente muy a menudo; los
lóbulos son en general más cortos que el tubo. La corola también gamopétala, puede ser
campanulada, rotada, infundibuliforme, estrellada o tubular. El androceo posee los estam-
bres unidos a la corola, a veces presenta estaminodios. El gineceo consta de dos carpelos,
ovario súpero y numerosos óvulos; en su base se desarrolla un disco hipógino (nectario).
Los frutos pueden ser cápsulas, bayas, drupas, diclesios o mericarpos; semillas discoidales
o prismáticas con embrión linear o curvo. Figura 2.3.
Pedúnculo
Sépalos Semillas
Ovarios
Óvulos Carpelos
Pétalos
Estilo
Estambres
Estigma
Flor Fruto
Figura 2.3: Corte longitudinal de or y fruto de un representante de Solanaceae (Solanum

lycopersicum ).
2.1.3. Fitoquímica de Solanáceas

El nombre de la familia tiene su origen en el género Solanum L. que según algunos au-
tores deriva de la palabra latina solari, que signica consuelo, alivio al miedo; aludiendo
a las propiedades calmantes atribuidas a algunas de las especies (González, 2015).
Además de su importancia económica y gastronómica, las Solanáceas desde tiempos

muy remotos, han sido utilizadas con nes terapéuticos, medicinales y de ritual. Actual-
mente estas propiedades se explican con la disponibilidad de información toquímica que
esta familia presenta. Los dos grupos de metabolitos secundarios encontrados predomi-
nantes en las Solanáceas son alcaloides y esteroides, y en menor grado se han aislado: ca-
psicinoides, glicósidos cardíacos, triterpenoides, sesquiterpenos, sapogeninas esteroidales,
glicoalcaloides, entre otros. Entre los alcaloides más importantes se encuentran aquéllos
denominados tropanos (atropina, hiosciamina, escopolamina) y alcaloides de núcleo piridí-
nico (nicotina), Figura 2.4. Estos metabolitos se desarrollan en la planta, probablemente,
como defensa química ya que reducen la tendencia de los animales a dañarlas.
(a) Nicotina (b) Atropina
Figura 2.4: Alcaloides de la Familia Solanaceae.
Un ejemplo de una especie americana es la planta del tabaco (Nicotiana tabacum L.),
la cual fue aprovechada por los nativos, desde hace muchos años, para estimular el sistema
nervioso central mediante la inhalación y el masticado de sus hojas. Los indígenas le atri-
buían propiedades medicinales y la usaban en sus ceremonias religiosas (Pego et al., 1995).
Con la conquista europea, el tabaco perdió su sentido cultural y ritual y pasó a tener un
uso más cotidiano. Actualmente, la nicotina, alcaloide presente en sus hojas, es considerada
una de las sustancias más adictivas que existe, ya que su tolerancia se desarrolla de manera
rápida, Figura 2.5.
(a) N. tabacum (b) Hojas de tabaco (c) Ritual del tabaco
Figura 2.5: Planta de tabaco (Solanaceae).
Por otro lado, en el continente europeo se destaca la mandrágora (Mandragora ocina-

rum L.), planta a la cual se le atribuyeron numerosas leyendas por poseer una raíz similar
a dos pequeñas piernas (en todas las ilustraciones de hierbas medievales las dibujaban con
cabezas y los cuerpos eran las raíces con las piernas cruzadas). Fue usada como alucinó-
geno, analgésico, afrodisíaco y droga para la fertilidad durante miles de años e incluso
como veneno mortal si la dosis era alta. Esto se debe a que la raíz fresca o seca contiene
alcaloides como la atropina, hiosciamina, etc. (Hanus et al., 2005), Figura 2.6.
(a) M. ocinarum (b) Raices de man- (c) Dibujo de man-

drágora drágora
Figura 2.6: Planta de Mandrágora (Solanaceae).
Podría decirse que las Solanáceas son un grupo diverso de plantas que alimentan,
envenenan, calman el dolor y hacen que los jardines se vean hermosos. Desde los brebajes de
las brujas en el medioevo y los rituales indígenas precolombinos hasta la medicina moderna,
ellas son una parte fundamental de nuestras vidas y aún siguen siendo mágicas.
2.1.4. Clasicación y taxonomía

Reino: Plantae, Clase: Equisetopsida C. Agardh, Orden: Solanales Juss. ex Bercht. &
J. Presl, Familia: Solanaceae Juss.
Una clasicación tradicional de la familia, (Hunziker, 2001), basada en evidencias mor-

fológicas, reconoce seis subfamilias; Cestroideae, Juanulloideae, Solanoideae, Salpiglossoi-
deae, Schizanthoideae y Anthocercidoideae, Figura 2.7. Sin embargo, una clasicación lo-
genética basada en un análisis genómico de regiones secuenciales de ADN, propuesta más
reciente, provee un sistema de clasicación sustancialmente diferente, con inclusión de gé-
neros tradicionalmente excluidos de la familia y con gran resolución respecto al linaje de la
subfamilia Solanoideae (Olmstead et al., 2008), (Särkinen et al., 2013), (Ng y Smith, 2016).
Entre los varios casos controversiales existentes en ambos sistemas de clasicación, se

encuentra la Tribu Jaboroseae (Subfam. Solanoideae). Esta Tribu, según Hunziker (Hun-
ziker, 2001), está integrada por Salpichroa, Nectouxia y Jaborosa, Tribu que aparece des-
membrada en la propuesta de Olmstead (Olmstead et al., 2008). En efecto, estos autores
proponen dos clados informales para los géneros tradicionales de Jaboroseae: uno, llama-
do Salpichroina, que incluye a Salpichroa (sólo una especie estudiada) y a Nectouxia
(monotípico); mientras que el otro, llamado Atropina, reúne a tres especies de Jaborosa
analizadas, Figura 2.8. Recientemente, Moré y colegas (Moré et al., 2015) concluyen, en
base a evidencia molecular, que Jaborosa pertenece efectivamente al clado Atropina siendo
su género hermano Atropa (Tribu Hyoscyameae). Por lo tanto, Salpichroa permanece aún
en una posición incierta.
2.1. Introducción
Familia
Solanaceae
6 Subfamilias
Anthocercidoideae Cestroideae Juanulloideae Salpiglossoideae Schizanthoideae Solanoideae
1 Tribu 8 Tribus 1 Tribu 1 Tribu 1 Tribu 9 Tribus

Tribu Cestreae Tribu Datureae
Tribu Anthocercideae Tribu Juanulloeae Tribu Salpiglossoideae Tribu Schizanthoideae
Tribu Metternichieae Tribu Solandreae
Tribu Latueae Tribu Lycieae
Tribu Nicotianeae Tribu Mandragoreae
Tribu Benthamielleae Tribu Nicandreae
Tribu Francisceae Tribu Solaneae
Tribu Browallieae Tribu Atropeae
Tribu Schwenckieae Tribu Hyoscyameae
Tribu Jaboroseae
Salpichroa Jaborosa Nectouxia

16 Especies 23 Especies 1 Especie
Figura 2.7: Clasicación de la Fam. Solanaceae propuesta por Hunziker (2001).

11
Fragmento
Figura 2.8: Fragmento de la propuesta logenética de la Fam. Solanaceae según Olmstead

y colegas (2008).
2.2. Antecedentes 13
2.2. Antecedentes
2.2.1. Historia Taxonómica de Salpichroa
Salpichroa (Fam. Solanaceae, Tribu Jaboroseae, de Hunziker, (Hunziker, 2001)) fue
descripto por J. Miers (1845), con la especie tipo: Salpichroa glandulosa (Hook.) Miers.
Posteriormente, Miers crea ilegítimamente Salpichroma (1848) para reemplazar y armoni-
zar Salpichroa con los dos nuevos géneros, Iochroma y Poicilochroma.
La primera especie conocida de Salpichroa fue descripta por Lamarck como Physalis
origanifolia (Lamarck, 1793). Lamarck confundió esta especie como integrante de Physalis,
género caracterizado por los frutos incluidos en el cáliz inado, Figura 2.9. Posteriormente,
Desfontaines (1829), en Cataloqus Plantarum Horti Regü Parisiensis (Desfontines, 1829),
la reconoce como una especie de Atropa (Atropa origanifolia (Lam.) Desf.). Entre 1829 y
1837, cuatro especies nuevas, fueron descriptas como Atropa : A. rhomboidea Hook. (1829),
A. glandulosa Hook. (1831), A. hirsuta Meyen (1834) y A. dependens Hook. (1837), que
fueron posteriormente transferidas a Salpichroa por Miers (1845). Unos años más tarde,
Dunal (1852) realiza la primera monografía de Salpichroa, donde reconoce 26 especies. La
monografía más reciente es la Tesis Doctoral A revision of the genus Salpichroa (Solana-
ceae) realizada por Keel (Keel, 1984), quien sostiene que el género consta de 15 especies;
esta autora recién legitimiza algunos nombres en su trabajo A new species and a new
combination in Salpichroa (Solanaceae), en 1993 (Keel, 1993). Posteriormente, Hunziker
(Hunziker, 2001), conrma que el género consta de 15 especies que crecen en los Andes de
Sudamérica. Por último, Pereyra Villanueva y colegas (Pereyra Villanueva et al., 2007),
describen una nueva especie para Los Andes peruanos, con lo que el género queda confor-
mado por 16 especies hasta la fecha.
(a) Planta (b) Flor (c) Fruto
Figura 2.9: Physalis peruviana.
A lo largo de los últimos años, se han realizado revisiones parciales orísticas. En Perú,
sobre la cuenca del río Chillón (Vilcapoma Segovia, 2007) se describen 4 especies Salpichroa
que allí crecen; en Argentina, en trabajos similares (Barboza y Hunziker, 1998), (Basso y
Barboza, 2013) y en Chile (Chiarini et al., 2007), se describen también especies que crecen
en dichos países. Además se listaron las especies en catálogos orísticos (Ecuador: 4 spp.,
(Jørgensen y León-Yánez, 1999); Bolivia: 6 spp., (Jørgensen et al., 2014); Colombia: 1 sp.
(Bernal et al., 2015), donde se evidencia que los autores dieren en la circunscripción de
algunas especies.
2.2.2. Salpichroa Miers

Como se mencionó anteriormente, Salpichroa fue revisado por última vez por Keel en
su Tesis doctoral (Keel, 1984). Excepto S. origanifolia (Lam.) Baillon, que es cosmopolita,
las restantes especies se distribuyen mayormente en la región andina de Sudamérica, entre
los 2400-4700 m de elevación, Figura 2.10.
Figura 2.10: Distribución de Salpichroa (rojo) y Solanaceas (verde).
Keel (Keel, 1984), propone dos agrupamientos distintos para las especies. El primero,
en base a la forma y la longitud de la corola, y el segundo atendiendo a relaciones de loge-
nia morfológica. Una de las características principales son sus hojas ovadas o cordiformes
y que sus corolas son tubulares o urceoladas.
En el primer caso, las especies de Salpichroa se pueden separar en tres grandes grupos:
Taxones con corolas tubulares largas (8 spp.): S. proboscidea, S. hirsuta, S. didierana,

S. glandulosa (con 2 subespecies; S. glandulosa ssp. weddellii y S. glandulosa spp.
glandulosa ), S. weberbaueri, S. scandens, S. dependens y S. microphylla.
Taxones con corolas tubulares cortas (5 spp.): S. tristis (con 2 variedades; S. tristis
var. tristis y S. tristis var. lehmannii ), S. microloba, S. gayi y S. micrantha.
Taxones con corolas urceoladas cortas (2 spp.): S. origanifolia y S. ramosissima.
Respecto a las relaciones logenéticas entre sus especies, utilizó el método de diver-
gencia Groundplan (Yeates, 1995). Así, las especies se separaron en dos grandes grupos
principalmente en base a caracteres corolinos y estaminales. Un pequeño grupo basal re-
sulta claramente denido, con corolas tubulares, sin constricción y estambres exertos. En
cambio, en el otro grupo, si bien se observa una tendencia general en determinados caracte-
res, aparecen varios paralelismos en otros rasgos (por ejemplo, el ensanchamiento conectival
en las anteras) que debilitan los agrupamientos propuestos por la autora.
Por lo tanto, en esta Tesis se propuso encarar el primer estudio de logenia molecular en
el género, que podrá ser contrastado con los resultados previos para proponer hipótesis más
robustas de relaciones entre las especies. Ello motivó la búsqueda de colecciones modernas
y de una actualización de su taxonomía, que es lo que se presenta en este Capítulo.
2.3. Objetivos especícos 15
2.3. Objetivos especícos

Revisar las colecciones tipo y colecciones históricas y modernas de Salpichroa.
Resolver problemas nomenclaturales
Establecer el número real de especies que integran este género.
Confeccionar una clave dicotómica para la identicación de los taxones.

2.4. Materiales y Métodos

2.4.1. Herbarios consultados
Se observaron y analizaron los caracteres morfológicos de las especies mediante el estu-
dio de las colecciones de los herbarios del país y del extranjero; se estudiaron los especímenes
tipo ya sea en calidad de préstamo, en el propio herbario donde se hayan depositados o
a través de las imágenes digitales provistas por JSTOR (http: www.jstor.org).
Se consultaron las descripciones originales de todos los nombres involucrados en el gru-

po de especies Salpichroa. Se revisaron las colecciones de los Herbarios de las siguientes
instituciones. Acrónimos según Holmgren y colegas (Holmgren et al., 1990).
University of Copenhagen, Denmark (C):

botanik.snm.ku.dk
Naturhistorisches Museum Wien, Austria (W):

www.nhm-wien.ac.at
Missouri Botanical Garden, Saint Luis, Missouri. U.S.A (MO):

www.tropicos.org
New York Botanical Garden, Bronx, New York. U.S.A. (NY):

www.nybg.org
Herbaria Harvard University, Cambridge, Massachusetts. U.S.A. (GH):

www.huh.harvard.edu
Herbarium Field Museum of Natural history. U.S.A. (F):

www.eldmuseum.org
Smithsonian Institution, Washington. U.S.A. (US):

www.botany.si.edu
Herbarium Department of Systematic Botany, Unisersität Göttingen (GOET):

www.sysbot.uni-goettingen.de
Swedish Museum of Natural History, Sweden (S):

www.herbarium-ume.se
Herbarium of the Botanische Staatssammlung München, Germany (M):

www.botanischestaatssammlung.de
Field Museum, USA (F):

www.eldmuseum.org
Royal Botanical Garden, Edinburgh, Scotland (E):

www.rbge.org.uk/science/herbarium
Geneva Herbaria Catalogue, Switzerland (G):

www.ville-ge.ch/musinfo
2.4. Materiales y Métodos 17
National Botanic Garden of Belgium, Belgium (BR):

www.botanicgarden.be
Herbarium Kew Botanic Garden, Kew, England (K):

www.kew.org
Herbarium of the Natural History Museum, London, England (BM):

www.nhm.ac.uk
Herbier National de Paris, Muséum National d'Histoire Naturelle, Paris, France (P):
colhelper.mnhn.fr
National Herbarium Netherland, Holanda (U):

www.nationaalherbarium.nl
Herbario Antenor Orrego, Perú (HAO):

www.mincetur.gob.pe
Herbarium Truxillense, Perú (HUT):

www.facbio.unitru.edu.pe
Herbarium Areqvipense, Perú (HUSA).
Weberbauer Herbarium, Perú (MOL).
Museo Botánico de Córdoba (CORD):

www.museobotanico.unc.edu.ar
Instituto de Botánica Darwinion, San Isidro, Buenos Aires (SI):

www.darwin.edu.ar
2.4.2. Viajes a Campo y Material Vegetal

Se realizaron viajes de recolección en las diversas áreas de distribución de los taxones
para considerar la plasticidad y variabilidad intra-especíca. Los viajes abarcan el período
2011-2013. El primer viaje fue al centro y sureste del Perú (Dptos. La Libertad, Lima,
Cuzco, Piura) en Enero 2012; el segundo se realizó al norte de Argentina (Prov. de Ca-
tamarca y Jujuy) y Bolivia (Dptos. La Paz, Cochabamba, Santa Cruz, Chuquisaca) en
Febrero 2012 y el tercero al centro de Perú (Dptos. La Libertad, Lima, Junín) y sur de
Ecuador (Provincias Azuay, Loja, Zamora-Chinchipe, Pichincha) durante Enero 2013. Se
efectuaron durante el período de oración de las plantas para realizar observaciones en
su habitat. Se realizaron gracias a convenios y proyectos en conjunto vigentes con el Mg.
Segundo Leiva (Universidad Privada A. Orrego, Trujillo. Perú) y el Biol. Paul Gonzáles
Arce (Estudiante de Maestría en la Universidad de San Marcos, Lima. Perú).
El material recolectado fue depositado en los herbarios CORD y HAO. Además, se jó
material en líquidos conservadores (FAA; alcohol etílico 96 %) para la disección de las ores
y posterior análisis de los caracteres reproductivos bajo lupa. En la Tabla 2.1, Tabla 2.2 y
Tabla 2.3 se muestran los ejemplares recolectados en los sucesivos viajes a campo.
Tabla 2.1: Material vegetal recolectado en el viaje a campo a Perú durante Enero 2012.
Dra. Gloria Barboza (GB), Mg. Segundo Leiva y Lic. Ana Basso.
Especie Legado Procedencia

1. S. amoena GB 3428 Cuzco, Perú
2. S. didierana GB 3417 Urubamba, Perú
3. S. gayi GB 3397 Cuzco, Perú
GB 3431 Chinchero, Perú
4. S. micrantha GB 3404 Pisaq, Perú
GB 3409 Pisaq, Perú
GB 3410 Paucartambo, Perú
GB 3414 Paucartambo, Perú
8. S. incaica GB 3415 Cuzco, Perú
5. S. proboscidea GB 3411 Paucartambo, Perú
6. S. ramosissima GB 3370 Matucana, Perú
GB 3373 Matucana, Perú
GB 3376 San Mateo, Perú
GB 3380 Chicla, Perú
GB 3386 Canta, Perú
7. S. weberbaueri GB 3387 Pirocancha, Perú
GB 3393 Pirocancha, Perú
GB 3395 Pirocancha, Perú
GB 3392 Canta, Perú
Tabla 2.2: Material vegetal recolectado en el viaje a campo a Bolivia y Norte Argentino
durante Febrero 2012. Dra. Gloria Barboza (GB), Dra. Teresa Cosa y Lic. Ana Basso.

8. S. lehmannii GB 1734 Jujuy, Argentina
9. S. origanifolia GB 3599 Córdoba, Argentina
CORD s/n Córdoba, Argentina
10. S. scandens GB 3042 Tucumán, Argentina
GB 3615 Cochabamba, Bolivia
GB 3605 Jujuy, Argentina
GB 3469 Catamarca, Argentina
CORD 27468 Catamarca, Argentina
GB 3008 Tarija, Bolivia
GB 3607 Potosí, Bolivia
GB 3610 Potosí, Bolivia
GB 3015 Tucumán, Argentina
GB 3493 Tucumán, Argentina
11. S. tristis GB 3621 Cochabamba, Bolivia
12. S. weddellii GB 3630 Oruro, Bolivia
Tabla 2.3: Material vegetal recolectado en el viaje a campo a Perú y Ecuador durante
Enero 2013. Biol. Rocio Deanna (RD), Mg. Segundo Leiva y Lic. Ana Basso.

13. S. dependens GB 3949 Junín, Perú
14. S. diusa RD 137 Pichincha, Ecuador
RD 126 Napo, Ecuador
15. S. gayi GB 3935 Cuzco, Perú
16. S. leucantha GB 3948 La Libertad, Perú
17. S. ramosissima RD 58 Junín, Perú
RD 55 Canta, Perú
18. S. tenuiora RD 135 Pichincha, Ecuador
2.4.3. Caracteres Morfológicos

Se analizaron cuali- y cuantitativamente los caracteres de los distintos órganos (tallos,
hojas, ores, frutos) en todos los ejemplares estudiados. En la Figura 2.11, Figura 2.12 y
Figura 2.13 se esquematizan los estados de los caracteres diagnósticos analizados.
Para medir los caracteres reproductivos de los ejemplares disecados, se hidrataron las
ores y se realizaron cuidadosas disecciones de los verticilos. La hidratación se hizo sumer-
giendo el material en agua caliente y dejándolo en reposo por unos minutos. Para el estudio
de los tricomas, fue necesario una diafanización de los órganos con hipoclorito de sodio al
50 % con posterior coloración con safranina. Las observaciones y mediciones se realizaron
mediante el uso de un microscopio esterescópico Zeiss Stemi 2000 C.
Hoja
Longitud
Latitud
Forma
Indumento
Figura 2.11: Caracteres diagnósticos de la Hoja.

Androceo
Longitud total de estambres
Altura de insersión
Longitud de anteras
Corola
Longitud de tubo
Longitud de segmentos
Color
Indumento
Caliz
Longitud total
Indumento
Gineceo
Longitud total
Forma del ovario
Tamaño del ovario
Color del nectario
Figura 2.12: Caracteres diagnósticos de la Flor.
Caliz fructífero
Longitud total
Indumento
Fruto
Longitud
Latitud
Forma
Color
Figura 2.13: Caracteres diagnósticos del Fruto.

2.4.4. Tratamiento Taxonómico

Cada especie es tratada de la siguiente manera: nombre del taxón y su cita completa;
en el renglón siguiente, el basónimo (si corresponde) y los datos de la colección tipo, consig-
nándose entre paréntesis si se trata del holotipo, isotipo, lectotipo, sintipos (ver Apéndice
A.1). Cuando la colección tipo fue analizada, se indica el acrónimo del herbario donde se
encuentra depositado seguido por un signo de exclamación (!), caso contrario se coloca n.v.
(non vidi ). Cuando el acrónimo va acompañado con el signo †, signica que el material
tipo fue destruido (Hiepko, 1987). Para el resto del material estudiado, el acrónimo no va
acompañado de ningún signo y signica que el ejemplar citado se encuentra depositado en
ese/esos herbarios.
Las especies se enumeran alfabéticamente, se ilustran con fotografías tomadas a campo

en los distintos viajes realizados.
La vericación de la identidad de cada especie surgió del análisis de las descripciones

originales de cada una de ellas asociadas a su material tipo (holotipo, isotipo, lectotipo o
sintipos); posteriormente, una vez conocido en profundidad el taxón se procedió al análisis
de las colecciones de herbario para su determinación, raticando o recticando los nombres
incluidos en las etiquetas. Esto permitió además, conocer la variabilidad de las especies a
lo largo de su distribución geográca y proponer los sinónimos respectivos.
En el material estudiado (Ver Material selecto estudiado para cada especie), se realizó
una selección de los especímenes a citar consignándose sólo algunos ejemplares que do-
cumentan la distribución geográca de cada especie, por cada división política del país
(Provincia/Estado/Departamento).
El material estudiado se cita de la siguiente manera: País. Provincia o Estado. Depar-

tamento o Partido: localidad, fecha, Colector y número y (acrónimo del herbario). Cada
ejemplar está separado del siguiente por un punto cuando pertenece a divisiones políticas
distintas y con punto y coma cuando pertenecen a distintas localidades dentro de la divi-
sion política de menor jerarquía.
Las abreviaturas para los materiales tipo son Est. = Estado; Prov. = Provincia; Dpto.
= Departamento; Pdo. = Partido; s.n. = sin número; s.f. = sin fecha, s.d. = sin datos.
La distribución geográca para cada especie está basada en todas las colecciones de
herbario analizadas; cuando se cita un lugar cuyo material no fue visto, se indica la fuente
bibliográca de donde se tomó el dato.
2.5. Resultados y Discusión 23
2.5. Resultados y Discusión

Como resultado de un arduo trabajo de revisión de las colecciones de los herbarios,
viajes a campo y colaboraciones con botánicos del Perú, el número de especies de Salpichroa
aumentó de 16 ((Keel, 1984), (Pereyra Villanueva et al., 2007)) a 22 especies (incluida
una especie nueva y N. formosa ), las cuales se presentan a continuación en 6 secciones
denominadas: 2.5.1 Descripción del género; 2.5.2 Especies que mantienen su nomenclatura
original; 2.5.3 Cambios nomenclaturales; 2.5.4 Especie nueva; 2.5.5 Inclusión de Nectouxia
formosa ; 2.5.6 Clave diferencial de las especies.
2.5.1. Descripción del género

SALPICHROA Miers
J. Miers, London J. Bot. 4: 321. 1845. ESPECIE TIPO. Salpichroa glandulosa (Hook.)
Miers (= Atropa glandulosa Hook.), lectotipo designado por L. Abrams, Ill. Fl. Pacic
States 3: 672. 1951.
Arbustos trepadores, raro hierbas perennes; tallos aéreos herbáceos o leñosos, por lo
general con varias costillas o alas, los más jóvenes pubescentes. Hojas solitarias o gemina-
das, pecioladas; láminas enteras, ovadas, angostamente ovadas o deltoides, base truncada
o desigual y ápice agudo. Flores solitarias, rara vez geminadas, péndulas; cáliz con tubo
brevísimo o menos frecuentemente bien desarrollado, segmentos subiguales a desiguales,
pubescentes, a veces con denso indumento glandular o con tricomas ramicados; corola
con preoración valvado-induplicada, tubo completamente urceolado o cilíndrico e inado
en su parte basal y/o por debajo de la fauce, raro con prolongación a modo de anillo libre
por arriba de su borde distal, el tubo corolino siempre más largo que los lóbulos, éstos
patentes o reexos, tapizados en su ápice interno por tricomas cónicos 1- o pluriseriados, a
veces bifurcados; estambres adheridos al tubo corolino muy cerca del ápice o en el cuarto
superior o apenas más abajo, porción libre de los lamentos glabra o pubescente, espatu-
lada en su extremo distal (salvo en S. origanifolia donde es cilíndrica), anteras incluidas
o alcanzando la fauce o exertas, tecas con algo más de su cuarto basal libre; gineceo in-
cluido o exerto, ovario 2-carpelar con nectario basal rojo, anaranjado o amarillento, bien
prominente (a veces, casi tan alto como el ovario), estilo glabro, por excepción pubescente,
estigma subcapitado o globoso. Baya colgante, ovoide o elipsoide, pluriseminada, cubierta
parcialmente o casi íntegramente por los lóbulos calicinales acrescentes; semillas pequeñas,
reniformes, envueltas por un velo blanquecino (paredes radiales y tangencial externa celu-
lósicas); embrión circinado.
Género de unas 22 especies (incluida N. formosa ) mayormente de los Andes sudameri-

canos, desde Venezuela hasta Argentina, excepto por S. origanifolia que es cosmopolita y
N. formosa endémica del sur de EEUU y México.
Obs. El oscurecimiento de las hojas apenas recolectadas evidencian una rápida actividad
enzimática y la descomposición de metabolitos secundarios, ej. withanólidos (Oberti, Obs.
Pers. ), es por ello que los trabajos toquímicos se deben realizar con el material fresco.
2.5.2. Especies que mantienen su nomenclatura original

Las especies de Salpichroa sin cambios en su nomenclatura son 15 en total, 3 de ellas
aunque no cambian su nomenclatura, están incluidas en la siguente sección porque cambian
de jerarquía, pasando a nivel especíco. A continuación, las 12 especies restantes se listan
alfabéticamente con su cita, basónimo y sinónimos (si corresponde), una breve diagnosis,
material selecto estudiado y fotografías tomadas a campo o cedidas por colegas.
1. Salpichroa dependens (Hook.) Miers, London J. Bot. 4: 325. 1845.

Basónimo: Atropa dependens Hook., tab. 107. 1837. TIPO. PERÚ. Eastern side of the
Cordillera of Peru, s.f., Mathews 829 (holotipo, BM!, isotipo, K!). Figura 2.14.
Nombre vulgar: No registra.
Caracteres diagnósticos: Planta arbustiva, escandente de 3 m de altura. Corola amarillo-

verdoso, sin dientes interlobulares, de hasta ca. 8 cm long. Lóbulos corolinos y calicinos
triangulares. Tubo calicino bien desarrollado y desgarrado a la madurez. Androceo y gine-
ceo muy exertos. Nectario anaranjado. Bayas ovoides.
Distribución geográca y hábitat: Esta especie se conoce de las partes altas de las cuen-
cas del Mantaro y del Huallaga (Knapp et al., 2006) y en la sierra de Huancayo en Perú.
Crece en bosques nublados de montaña o bosques de arbustos cerca de barrancos húmedos
a 3400-3780 m s. m.
Usos: No registra.
Material selecto estudiado: PERÚ. Junín. Camino a Pariahuanca Barboza 3949 (CORD).
2. Salpichroa didierana Jaubert, Bull. Soc. Bot. France 8: 117. 1861.

TIPO. PERU. Dpto. Cuzco: Urubamba, Ruta Abra Málaga/Carrizales, Km 146, 13
◦
◦
6'49 S, 72 20'49 W, 3630 m, 05 May 2014, S. Leiva & G. E. Barboza 5684 (Neotipo,
designado por Gonzáles (Gonzáles Arce et al., 2016); CORD 000442!), isoneotipo, HAO!).
Figura 2.15.
Nombre vulgar: Jacapaillo (Perú: Keel & Andrade 442 ).
Caracteres diagnósticos: Arbusto trepador de 5-7 m de alto. Corola amarillo-verdoso,

sin dientes interlobulares, tubular ligeramente más ancha en la garganta, de hasta 14 cm
long. Lóbulos corolinos y los calicinos angosto-triangulares inclinados a un lado. Androceo
y gineceo muy exertos. Nectario amarillo. Bayas ovoides negras a la madurez.
Distribución geográca y hábitat: Especie endémica de Perú, de distribución limitada

en los Departamentos de Cuzco y Pasco (Leiva González et al., 2016) (Knapp et al., 2006).
Crece en bosques nublados de montaña, ocasionalmente cerca de las Ruinas Incas en el
centro sur de Perú, a 3110-4300 m s. m.
(a) Planta (b) Gineceo
(c) Flor
Figura 2.14: Salpichroa dependens.

Usos: Frutos comestibles (Leiva González et al., 2016).
PERÚ Cuzco. Urubamba. Ruta Abra Málaga/Carriza-

Material selecto estudiado:
les, Km 146. Leiva 5684 (CORD). Cuzco. Urubamba. Desde Ollantaytambo, entre Abra
Málaga y Carrizales, Km 145/147 (ruta nueva). Barboza 3417 (CORD). Cuzco. La Con-
vección. Road from Ollantaytambo, to Chaullay (Km marker 144) Plowman 4746 (CORD).
(a) Fruto (b) Flor
(c) Planta
Figura 2.15: Salpichroa didierana.

3. Salpichroa diusa Miers, London J. Bot. 7: 335. 1848.

TIPO. ECUADOR. Prov. Pichincha: the middle region of Pichincha, s.f., Jameson 32
(lectotipo designado por Gonzáles (Gonzáles Arce et al., 2016); K001089541!). Figura 2.16.
Salpichroa quitensis Benoist, Bull. Soc. Bot. France 85: 54. 1938. TIPO. ECUADOR. Prov.
Pichincha: Slope of Pichincha, above Rumipampa, 30 Mar 1930, Benoist 2319
(holotipo, P!).
Nombre vulgar: Cherche (Ecuador: André 3177 ) (Moreno-Murillo et al., 2001).
Caracteres diagnósticos: Arbusto de 3 m de altura. Corola amarilla, sin dientes inter-

lobulares, tubular, glabra por dentro, de hasta ca. 2 cm long. Lóbulos corolinos y calicinos
triangular-lanceolados. Androceo incluso y gineceo exerto. Bayas ovoides con cáliz fructí-
fero que excede la longitud de la baya.
Distribución geográca y hábitat: Se encuentra al borde de caminos, en sub-páramos de

pastos o entre los arbustos, 2900-3630 m s. m. (Keel, 1984). En Ecuador central, a lo largo
de los Andes.
Usos: Fruto comestible y usado para la elaboración de helado (Macbride, 1962).
Material selecto estudiado: ECUADOR. Napo. Cantón Quijos. Papallacta. Alrede-

dor de Laguna Papallacta a 3285 m s. m. Deanna 126 (CORD). Pichincha. Cantón Quito.
Km. 22-23 de la carretera antigua Quito-Sto. Domingo de los Colorados, entre San Juan y
Chiriboga, estribaciones occidentales del volcán Pichincha. Colecciones en bosque nublado
de vegetación primario y alrededores a 3448 m s. m. Deanna 137 (CORD).
4. Salpichroa gayi Benoist, Bull. Soc. Bot. France 85: 54. 1938.
TIPO. PERU. Sin datos, 1839-1840, Gay 2308 (holotipo, P!; isotipo, P!). Figura 2.17.
Nombre vulgar: Pinku-Pinku (Perú: Brunel 136 ); Pires (Perú: Davis et al. 1420 );
Ccapapuno (Perú: West 3853 ); Rocotitos y Pepino silvestre (Perú: Keel 423 ).
Caracteres diagnósticos: Especie arbustiva, escandente. Corola amarillenta con franjas

purpúreas en su mitad distal, tubular pubescente, de hasta ca. 1,7 cm long. Lóbulos coroli-
nos angosto-triangulares. Androceo incluso y gineceo íntegramente ciliado. Nectario rojizo.
Bayas ovoides.
Distribución geográca y hábitat: Especie endémica del Perú. Crece en áreas pedrego-
sas, cercos, laderas. Conocida de dos poblaciones en las cuencas de los ríos Vilcanota y
Urubamba en Perú (Knapp et al., 2006); 3550-3600 m s. m. Todas las demás, cerca de las
Ruinas de Sacsahuaman y Kenco, cerca de Cuzco, Perú.

PERÚ. Cuzco. A 0,5hs. hike from Cuzco, Suqsaywaman

Ruins, elev. 3550. Keel (CORD 29218). Urubamba. Cuzco. Desvío Chinchero, en la co-
munidad de Taucca. Barboza 3431 (CORD). Cuzco. Urubamba. Chincheros. Trail from
Chinchero plaza to Antakillqa hillside. Davis et al. s. n. (CORD 21299) Cuzco. Cuzco.
Arriba de Quenkos. Barboza 3397 (CORD). Cuzco. Cuzco. Arriba de Quenkos. Barboza
3935 (CORD).
(a) Planta (b) Flor
(c) Flores
Figura 2.16: Salpichroa diusa.

(a) Flor (b) Flores y cáliz con gineceo
(c) Planta
Figura 2.17: Salpichroa gayi.

5. Salpichroa hirsuta (Meyen) Miers, London J. Bot. 4: 325. 1845.

Basónimo: Atropa hirsuta Meyen, Reise Erde 1: 466. 1834. TIPO. PERU. Dpto. Puno:
Pizacoma, 4580 m, Apr 1831, Meyen s.n. (lectotipo designado por Gonzáles (Gonzáles Arce
et al., 2016); BR 0000005528813!), Figura 2.18 (fotos: gentileza de Biol. Paul Gonzáles).
Nombre vulgar: Llungullungu (Perú: Shepard 76 ); Llautia (Perú: Keel 487 ); Yuncu-
yuncu (Perú: Keel 453 ).
Caracteres diagnósticos: Arbusto de 2 m de altura. Corola amarillento-verdosa, infun-

dibuliforme gradualmente más ancha en la parte superior, de hasta ca. 4 cm long. Lóbulos
corolinos semicirculares apiculados. Androceo exerto y gineceo incluso. Bayas ovoides vio-
leta oscuro cuando maduras.
Distribución geográca y hábitat: Crece en Puna, regiones secas y rocosas entre 3000-
4580 m s. m.(Keel, 1984). Ocasionalmente cerca de las Ruinas Incas en Perú. También a
lo largo del Lago Titicaca, extendiéndose del oeste al centro de Bolivia.
Usos: Frutos comestibles y las hojas son pastadas por llamas (Keel, 1984).
BOLIVIA. Oruro. Quebrada de Pairumani, a 50 Km al

S.E. de Oruro. Magliola s.n. (CORD). La Paz Copacabana., Cerro del Calvario, barranco
terroso. Hunziker 8158 (CORD). PERÚ. Puno Puno, Sillustani a 3291 m s. m. Cocucci
5664
(a) Planta (b) Flor
Figura 2.18: Salpichroa hirsuta

6. Salpichroa leucantha Pereyra, Quispuscoa & Leiva, Arnaldoa 14(1): 54. 2007.
TIPO. PERÚ. Dpto Libertad. Prov. Otuzco: Dist. Salpo, El Tablón (ruta Salpo-
Platanar), 1800 m, 3 Mar 2007, Leiva et al. 3611 (holotipo HAO†; isotipos, F, HAO,
HUT, HUSA, MO) (Pereyra Villanueva et al., 2007), Figura 2.19.
Nombre vulgar: Cuytulumbo o Cuytulume (Perú: Leiva et al. 3611 ).
Caracteres diagnósticos: Arbusto apoyante de 2,5-3 m de altura. Corola blanca, tubu-

lar ligeramente urceolada en la parte superior, de hasta ca. 1,2 cm long. Lóbulos corolinos
triangulares reexos, revolutos. Androceo y gineceo inclusos. Bayas cónicas, verdes a la
madurez, ligeramente doblada hacia un costado.
Distribución geográca y hábitat: Especie endémica de Perú. Hasta el momento reco-

lectada solamente en los alrededores de El Tablón, Distrito Salpo, Noreste de Perú. Crece
entre otras especies, en áreas pedregosas, zona de montaña 1800-2161 m s. m.
Usos: Fruto comestible (Pereyra Villanueva et al., 2007).
Material selecto estudiado: PERÚ. La Libertad. Otuzco. Distrito Salpo: Salpo-Rayampampa,

El Tablón. Leiva 5670 (CORD). La Libertad. Salpo. Barboza 3948 (CORD).
7. Salpichroa micrantha Benoist, Bull. Soc. Bot. France 85: 55. 1938.
TIPO. PERU. Sin datos, 1839-1840, Gay 1973 (lectotipo designado por Gonzáles (Gon-
záles Arce et al., 2016), P 00431918!; isolectotipo, P00431919!). Figura 2.20.
Nombre vulgar: Chinriques (Perú: Iltis & Ugent 1158 ).
Caracteres diagnósticos: Arbusto de 0,6-1 m de altura. Corola amarillo-verdosa, tubular

ligeramente constricta en su altura media, glabro, menor a 1 cm long. Lóbulos corolinos
triangulares reexos. Androceo y gineceo inclusos. Nectario rojo. Bayas ovoides verdes a
la madurez.
Distribución geográca y hábitat: Especie endémica de Perú. Hasta el momento recolec-

tada sólo en el Departamento de Cuzco. Se la encuentra en grietas rocosas, es un arbusto
apoyante que crece entre otras especies. Generalmente en climas subtropical y bosque hú-
medo, 2400-3600 m s. m.
Material selecto estudiado: PERÚ. Cuzco. Prov. Calca: Ingreso a las Ruinas de Pisaq.
Barboza 3939 Cuzco. Prov. Calca: Ingreso a las Ruinas de Pisaq. Barboza 3404Cuzco.
Prov. Calca: Pisaq en dirección al norte subiendo por la ladera. Barboza 3409 Cuzco.
Prov. Paucartambo. Cerca de Acuyo Grande, en la comunidad Chawaitire, entre Km 9
y 10. Barboza 3414 (CORD). Cuzco. Prov. Paucartambo. Comunidad de Mauaipampa
Barboza 3410 (CORD). Cuzco. Prov. Paucartambo. a 2 Km de Paucartambo, en la co-

munidad de Callipata, al borde del colegio. Leiva 5677 (CORD).
(a) Flor (b) Frutos
(c) Planta
Figura 2.19: Salpichroa leucantha.

(a) Flor (b) Gineceo
(c) Planta
Figura 2.20: Salpichroa micrantha.

8. Salpichroa microphylla (Dunal) Keel, Monogr. Syst. Bot. Missouri Bot.

Gard. 45: 1259. 1993.
Basónimo: Juanulloa microphylla Dunal, Prodr. [A. P. de Candolle] 13 (1): 531. 1852.
TIPO. PERU. Dpto. Junín: Huasahuasi, 5-12 Dec 1779, Pavón s.n. (holotipo, G!). Figura
2.21 (fotos: gentileza de Biol. Paul Gonzáles).
Salpichroa longiora Benoist, Bull. Soc. Bot. France 85: 408. 1938. TIPO. PERU. Dpto.
Junín: Huasahuasi, Oct-Dec 1779, Dombey s.n. (holotipo, P!).
Caracteres diagnósticos: Arbusto de hasta 3 m de altura. Corola amarilla, tubular elon-

gada, ca. 6,5 cm long. con dientes interlobulares conspicuos, lóbulos corolinos triangular-
lanceolados netamente reexos. Tubo calicinal bien denido. Androceo y gineceo muy exer-
tos. Bayas ovoides.
Distribución geográca y hábitat: Arbusto que crece en bosques semi-húmedos, subpuna

entre 3500-4000 m s.m.
Usos: No registra.
Material selecto estudiado: PERÚ. Junín. Prov. Tarma: on the road from Bella vista
to Marayniyokg, about 1 hr. from Palca. Keel 386 (MO).
(a) Androceo y gineceo muy exertos (b) Flor
Figura 2.21: Salpichroa microphylla

9. Salpichroa origanifolia (Lam.) Baill., Hist. Pl. 9: 288. 1888.

Basónimo: Physalis origanifolia Lam., Tabl. Encycl. 2: 28. 1794. Atropa origanifolia
(Lam.) Desf., Tabl. École Bot., ed. 3 (Cat. Pl. Horti Paris): 396. 1829. Salpichroa origa-
nifolia (Lam.) Thell., Mem. Soc. Sci. Nat. Chebourg. 38: 452. 1912. TIPO. ARGENTI-
NA. Buenos Aires, Commerson s.n. (lectotipo, P 00431931!; isolectotipos, P 00431932!, P
00431933!, P 00431934!, P 00431935!). Figura 2.22.
Atropa rhomboidea Hook., Bot. Misc. 1: 135. 1829. Salpichroa rhomboidea (Hook.) Miers
((sub nom. Salpichroma rhomboidea ), London J. Bot. 4: 326. 1845. Perizoma
rhomboidea (Hook.) Miers, London J. Bot. 4: 327. 1845. Perizoma rhomboidea
(Hook.) Small, Flora Southeastern USA: 991. 1903. TIPO. ARGENTINA. Buenos
Aires. Buenos Ayres and Pampas, Gillies s.n. (holotipo, K 000640379!; isotipo, E
00394798!).
Salpichroa rhomboidea Hook. var. divaricata Miers, London J. Bot. 4: 328. 1845. TIPO.
ARGENTINA. Prov. Córdoba. Pampas, ab Esquina de Medrano usque Frayle
Muerto, ProvinciæCordovensis, s.f., Miers s.n. (holotipo, BM n.v.).
Salpichroa rhomboidea Hook. var. pubescens Miers, London J. Bot. 4: 329. 1845. TIPO.
ARGENTINA. Prov. San Luis: Pampas, San Luiz usque Rio Quinto, s.f., Miers
s.n. (holotipo, BM n.v.).
Jaborosa montevidensis Casar., Nov. Stirp. Bras. 9: 78. 1845. TIPO. URUGUAY. Reperi
circa Montevideo, s.f., Casaretto 432 (holotipo, TO!).
Salpichroa parviora Dunal (sub nom. Salpichroma parviorum ), Prodromus Systematis

Naturalis Regni Vegetabilis 13(1): 476. 1852. TIPO. BRASIL. Est. Sao Paulo: sin
datos, 1833, Gaudichaud s.n. (holotipo, P!).
Salpichroa rhomboidea Hook. var. mollis Dammer, Bot. Jahrb. Syst. 37: 640. 1906. TI-
PO. BOLIVIA. Huayavilla, 2500 m, 20 Nov 1903, Fiebrig 2144 (holotipo, K
000640388!; isotipos, BM 000629608, E 00394800!, GH 00077394!, GH 00077395!,
GOET 003459!, M0 172081!, P 00431955!, U 0006796!, US 00027908!).
Nombre vulgar: Canambú, Chirusilla, Chumisquera, Corota de gallo, Huevito

de gallo, Huevo de gallo, Meloncillo, Tomatillo, Uva, Uvilla (Argentina) (Basso y
Barboza, 2013).
Caracteres diagnósticos: Corola blanca, urceolada, de 7-11 mm, con un denso anillo tri-
comático subbasal en su interior; androceo y gineceo muy exertos, alcanzan o sobrepasan la
altura media de los lóbulos corolinos. Nectario rojo. Bayas ovoides, blancas a la madurez;
pericarpo dulce.
Distribución geográca y hábitat: Especie sudamericana, adventicia en Europa, África,

Australia y Estados Unidos de América. Desde Perú y Bolivia llega a la Argentina hasta
el norte de la Patagonia, extendiéndose también hacia Chile, Paraguay, Uruguay y Brasil.
Habita desde el nivel del mar hasta los 2500 m s. m.; es bastante frecuente en lugares
modicados, bordes de caminos y alambrados.
Usos: Las bayas son comestibles cuando maduras, muy palatables y dulces. Tanto las
hojas como los tallos tienen atribuidos usos como narcóticos y sedantes a la par que las
raíces se emplean como abluente (Rapoport et al., 2009).
ARGENTINA. Buenos Aires. Pdo. La Plata. Los Ta-

las, Albo 170 (CORD). Catamarca. Dpto. Belén: Hualfín, Sayago 593 (CORD). Chaco.
Dpto. Presidencia de la Plaza: Villa Angela 312 viniendo desde la Clotilde, Chiarini & Wah-
lert 916 (CORD). Córdoba. Dpto. Colón: Villa Allende, A. T. Hunziker 17354 (CORD).
Corrientes. Dpto. Empedrado: Puerto Empedrado, Schwarz 9900 (CORD). Distrito Fe-
deral. Riachuelo, Castellanos 825 (CORD). Entre Ríos. Dpto. Paraná: alrededores de la
Ciudad de Paraná, Oberti s.n. (CORD 895). Formosa. Dpto. Pilcomayo: RN 86, Km 83,
Morel 6900 (CORD). Jujuy. Dpto. Tumbaya: Volcán, cerros al oeste, Cocucci et al. 2664
(CORD). La Pampa. Dpto. Toay: desvío de unos 500 m a los 2 km hacia el noroeste,
pasando Finca la Macarena, Barboza et al. 1169 (CORD). La Rioja. Dpto. Chamical:
alrededores de Santa Lucía, situada al piedemonte de la Sierra de Los Llanos, Biurrun
2348 (CORD). Río Negro. Dpto. Adolfo Alsina: 100 km del Puente Viedma-Patagones,
Correa 10115 (BAB). Salta. Dpto. Rosario de Lerma: sobre el camino viejo rumbo a Cam-
po Quijano, yendo por el Barrio El Tránsito, Barboza 1595 (CORD). San Juan. Dpto.
Valle Fértil: San Agustín, detrás del Dique, Kiesling 4513 (CORD). San Luis. Dpto.
Coronel Pringles: alrededores de la gruta de Intihuasi, Cerana 1235 (CORD). Santa Fe.
Dpto. Rosario: Rosario, Lewis 1656 (CORD). Tucumán. Dpto. Tafí del Valle: a 28 km
de Tafí rumbo a Amaicha del Valle, Barboza et al. 3020 (CORD). BOLIVIA. Santa
Cruz. Prov. Florida: Bermejo, en la propiedad de la Sra. Melania, al frente del restaurante
de la localdad. Barboza 3649 (CORD). Chuquisaca. Entre arbustos en suelo arenoso.
CORD 29346. BRASIL. Santa Catharina. CORD 29351. Pelotas. Beira de estrada.
Costa Sacco s. n. (CORD 29352). URUGUAY. Canelones. Santa Lucía. Teague s. n.
(CORD 29355). San José. Cuchilla Peryra. Teague s. n. (CORD 29356). Maldonado.
Cerro Pelado. Castellanos 17296 (CORD). ESTADOS UNIDOS. Wisconsin. Richland
Co. 3 miles of Richland center. Nee 16062 (CORD).
10. Salpichroa proboscidea Benoist, Bull. Soc. Bot. France 85: 409. 1938.
TIPO. PERU. Sin datos, 1839-1840, Gay 1061 (holotipo, P!). Figura 2.23.
Nombre vulgar: Nustos (Perú: Luteyn & Lebrón-Luteyn 6441 ).
Caracteres diagnósticos: Arbusto apoyante de 1-2 m de altura. Corola rosa-salmón,

elongada tubular, de hasta ca. 8 cm long. y lóbulos triangulares apicuminados, color ama-
rillos, totalmente reexos. Androceo y gineceo exertos. Nectario amarillo. Bayas ovoides.
Distribución geográca y hábitat: Especie endémica de Perú. Esta especie sólo se ha

recolectado en un lugar en el Sur de Perú, cerca de del Parque Nacional Abra Acanacu. Es
una reserva de bosque nuboso y húmedo a 2500-3500 m s. m.

PERÚ Paucartambo. Cuzco: Entre Km 17 y 18 de Pau-

cartambo a Abra Anaco. Barboza 3411 (CORD). Paucartambo. Cuzco: Adove Paucar-
tambo on road to Abra Anaca. Plowman et al. 4924 (CORD). Paucartambo. Cuzco: Km
95-94, Paucartambo-Patria road; 18-17 NE of Paucartambo. Luteyn 6441 (CORD).
(a) Sector de rama con ores (b) Fruto
(c) Flor (d) Cáliz y gineceo (Nectario rojo)
Figura 2.22: Salpichroa origanifolia

(a) Flor (b) Gineceo
(c) Planta
Figura 2.23: Salpichroa proboscidea

11.Salpichroa ramosissima Miers, London J. Bot. 4: 326. 1845.

TIPO. PERÚ. Dpto. Lima: Purruchuco, Abr 1830-1841, Mathews 1053 (holotipo, K
000640387!). Figura 2.24.
Salpichroa dilatata Dammer, Bot. Jahrb. Syst. 37: 639. 1906 (sub nom. Salpichroma di-
latata). TIPO. PERU. Dpto. Ancash: Near Ocros, 3200-3400 m, 27 Mar 1903,
Weberbauer 2679 (holotipo, B†; lectotipo designado por Gonzáles (Gonzáles Ar-
ce et al., 2016); F 648196! fragmento).
Salpichroa uncu Benoist, Bull. Soc. Bot. France 85: 55. 1938. TIPO. PERU. Dpto. Lima:
Acotama, 22 Jul-22 Oct 1778, Dombey s.n. (lectotipo designado por Gonzáles et
al., 2016; P00431963!; isolectotipos, P 00431964!, P 00431965!, P 00431966!).
Nombre vulgar: Callalluma (Perú: Vilcapoma 129 ); Callayuma (Perú: Keel 492 ).
Caracteres diagnósticos: Arbusto leñoso de 60-70 cm de alto. Corola amarillo-verdosa,

tubulosa-urceolada, de 12-17,8 mm, más o menos crasa, constricta sólo en la fauce, glanduloso-
pubescente. Lóbulos corolinos son muy cortos y reexos. Gineceo incluso, nectario rojo.
Bayas ovoides verdes a la madurez.
Distribución geográca y hábitat: Recolectada en centro-oeste y sur de Perú, poco fre-

cuente en Bolivia. Crece en zonas húmedas, bordes de caminos, chacras, cercos, áreas
pedregosas, entre los 2500-3500 m s. m.
Usos: En la diagnosis se mencionan bayas rojas; según otros autores y observaciones

personales realizadas en Perú, las bayas llegando a la madurez son de color verde claro.
Dichos frutos son comestibles según datos de los coleccionistas (Leiva González et al., 2016).
Obs: Esta especie fue citada para Argentina por Basso & Barboza (Basso y Barboza,
2013) sobre la base de un único ejemplar. Los intensivos viajes de campo realizados en
Perú permitieron conocer mejor a esta entidad y comprobar que la muestra de Argentina
no corresponde a esta especie sino a S. lehmannii.
Material selecto estudiado: Bolivia. La Paz. Inquisivi, along road from Quime to
Inquisivi, 4 Km. (by air) SW of Inquisivi, valley of Rio Calasaya, 1 Km S. of Tupaya.
Nee 37557 (CORD). Colomi. Cochabamba. Grietas húmedas. Cárdenas 4096 (CORD).
PERÚ. La Libertad. Otuzco. Distrito Salpo: Salpo-Cogón. Leiva 5662 (CORD). Ju-
nín. Tarma. Carretera Tarma-La Orolla. km 19-20 desde el Desvío La Orolla-Cerro de
Pasco hacia Tarma. Debajo de poblado Conchas bajo. En borde de carretera, apoyante
en rocas. Deanna 58. (CORD). Huarochiri. Lima. Matucana, arriba del Pueblo, Loma
Larga. Barboza 3373 (CORD). Huarochiri. Lima. Al costado de la ruta. Barboza 3376
(CORD). Huarochiri. Lima. Chicla al borde del rio acceso por el cementerio. Barboza
3380 (CORD). Huarochiri. Lima. Matucana, arriba del pueblo sobre margen izquierda
del Rio Rimac. Barboza 3370 (CORD). Canta. Lima. Entre Carhua y Pariamarca. Barboza
3386 (CORD). Canta. Lima. Entre Carhua y PariamarcKm 15 y 16, rumbo a Pirocancha.
Barboza 3392 (CORD). Canta. Lima. Entre Obrajillo y San Buenaventura. en borde de
camino. Deanna 55 (CORD). Tarma. Junín. Carretera Tarma-La Orolla. Km 19-20 desde
el Desvío La Orolla-Cerro de Pasco hacia Tarma. Debajo de poblado Cochas Bajo. En
borde de carretera, apoyante en rocas. Deanna 57 (CORD). Cajamarca. San Marcos. 50
Km from Cajamarca on road to San Marcos. Sarkinen 4646 (CORD). Cajamarca. San
Marcos. 38 Km from Cajamarca on road to San Marcos, just before Matara. Sarkinen 4645
(CORD).
(a) Flor (b) Fruto
(c) Planta
Figura 2.24: Salpichroa ramosissima

12. Salpichroa scandens Dammer, Bot. Jahrb. Syst. 37: 641. 1906 (sub nom.
Salpichroma scandens ).
TIPO. BOLIVIA. Dpto. Cochabamba: Padcaya, 2000 m, Dec 1903, Fiebrig 2590 (lec-
totipo, K 000640386!; isolectotipos, A 00077397!, BM 000629609!, E00394801!, F0073036!,
F0073037!, G!, GH 00077396!, GOET 003460!, M 0172080!, P 00431993!, S, U, US 00027909!,
W!). Figura 2.25.
Nombre vulgar: Pepino silvestre (Perú: Keel 415 ).
Caracteres diagnósticos: Arbusto escandente de 3 m de altura. Corola amarillo-verdosa,

hipocraterimorfa, membranácea, de 18-24 mm, tubo con una constricción superando su al-
tura media y otra en la fauce, inado entre ambas constricciones, glabro por fuera. Gineceo
exerto, nectario anaranjado. Bayas ovoides.
Distribución geográca y hábitat: Especie del sur de Perú y oeste de Bolivia hasta el
noroeste de la Argentina, característica de la Prepuna. Habita preferentemente en zonas
semiáridas, entre rocas, hasta los 3550 m s.m.
Usos: Frutos comestibles.
Material selecto estudiado: ARGENTINA. Catamarca. Dpto. Belén: Pozo de Pie-

dras, Barboza et al. 3469 (CORD). Jujuy. Dpto. Tumbaya: Laguna de Volcán, Cialdella
et al. 529 (CORD, SI). Salta. Dpto. Santa Victoria: Rodeo Pampa, Barboza et al. 1775
(CORD). Tucumán. Dpto. Tafí del Valle: a 28 Km de Tafí rumbo a Amaicha del Valle,
Barboza et al. 3015 (CORD). BOLIVIA. Cochabamba. Prov. Cercado, along Rio Sulti,
3 Km of Angostura dam,13 Km. SE of center of Cochabamba on road to Santa Cruz. Nee &
Solomon 34105 (CORD). Cochabamba. Prov. Cochabamba. Desde Cochabamba rumbo
a Monte Punco, Km 51-52. Barboza 3618. (CORD). Quillacollo Prov. Cochabamba. Sipe-
Sipe, en un baldío del pueblo. Barboza 3615 (CORD). Tarija. Prov. Cercado. Unos 25 Km
antes de llegar a Tarija viviendo desde Camargo. Barboza 3008 (CORD). Sud Chichas.
Prov. Potosí. Desde Villazón rumbo a Tupiza. Barboza 3607 (CORD). Nor Chichas.
Prov. Potosí. Molle Grande, entre Vitichi y Tuctapari. Barboza 3610 (CORD).
(a) Flor (b) Fruto
(c) Planta
Figura 2.25: Salpichroa scandens

2.5.3. Cambios nomenclaturales

En esta sección se presentan tres casos de cambios nomenclaturales dentro del género.
Cada caso se titulará bajo el título de Conicto usando el nombre original de la especie.
Estos casos son: Conicto en S. tristis, Conicto en S. glandulosa y Conicto en S. we-
berbaueri. Luego sigue una breve discusión de los taxones que resultan modicados y los
nombres involucrados con la posterior propuesta.
2.5.3.1. Conicto en Salpichroa tristis

Desde que Keel (Keel, 1984) propusiera la var. lehmannii para S. tristis, los distin-
tos tratamientos de oras regionales o catálogos han aceptado esta propuesta (Brako y
Zarucchi, 1993), (Barboza y Hunziker, 1998), (Jørgensen y León-Yánez, 1999), (Basso y
Barboza, 2013), (Jørgensen et al., 2014).
El análisis de los caracteres morfológicos, basados fundamentalmente en material fresco

junto a la revisión de los ejemplares tipo y las colecciones de herbario, acompañado de la
evidencia toquímica (Ver Capítulo 4) permitió jerarquizar dichas variedades a nivel espe-
cíco, que es lo que se presenta a continuación:
13. Salpichroa tristis Miers, London J. Bot. 7: 335. 1848 (sub nom. Salpichroma
tristis ).
TIPO. ECUADOR. Andibus Quitensibus, Jameson 125 (lectotipo designado por Gon-
záles (Gonzáles Arce et al., 2016); K 001089539!). Figura 2.26.
Salpichroma mandonianum Wedd., Chlor. Andina. 2: 98. 1859. TIPO. BOLIVIA. Dpto.
La Paz: Vic. of Sorata, 3000 m, Nov 1857, Mandon 437 (lectotipo, P 00432004!
; isolectotipos, BM 000629611!, BR 0000005529148!, F 0073034!, GH, GOET
003462!, K 000640383!, MPU 013446!, NY 00138915!, NY 00138916!, P 00432003!,
S, W).
Salpichroa mandoniana Wedd. var. tucumanensis Griseb., Abh. Konigl. Ges. Wiss. Göt-
tingen 19: 218. 1874. TIPO. ARGENTINA. Prov. Tucumán: near Tafí, 1 Jan 1872,
Lorentz 369 (holotipo, GOET 003461!; isotipos, CORD 00004984!, K 000640378!).
Salpichroa colubrina Benoist, Bull. Soc. Bot. France 85: 53. 1938. TIPO. ECUADOR.
Prov. Pichincha: Cotocallao, on the way from Pamasqui, 5 Feb 1931, Benoist
3799 (holotipo, P 00432016!; isotipos, P 00432017! & P 00432018!)
Nombre vulgar: Uvilla de la Sierra (Basso y Barboza, 2013); belladona (Moreno-

Murillo et al., 2001) (Argentina).
Caracteres diagnósticos: Arbusto apoyante de 40-70 cm de altura. Corola amarillo-

verdosa, tubulosa, de 18-22,5 mm, tubo apenas constricto en la mitad superior y en la
fauce, lóbulos angostamente ovados, glabrescente, lóbulos adpresos al tubo corolino; gine-
ceo incluso. Bayas ovoides, verdes a la madurez.
Distribución geográca y hábitat: Especie de amplia distribución. Se extiende a lo largo

de la cordillera andina desde Venezuela hasta el noroeste argentino; crece en matorrales,
al costado del camino entre arbustos, sobre piedras o en paredes rocosas, generalmente en
zonas semidesérticas, entre los 1500-3700 m s. m.
Material selecto estudiado: ARGENTINA. Catamarca. Dpto. Ambato: Sierra de

Ambato (Falda E), alrededor de la Casa de Cubas, A. T. Hunziker & Di Fulvio 19844
(CORD). Jujuy. Dpto. Dr. Manuel Belgrano: Lagunas de Yala, Cabrera & Kiesling 20170
(CORD). Salta. Dpto. Chicoana: desde Cachi a Chicoana, Novara 1600 (CORD). Tu-
cumán. Dpto. Tafí del Valle: Carapunco, Barboza et al. 2482 (CORD). BOLIVIA. Co-
chabamba. Temporal. Hilarde s. n. (CORD 29542). Cochabamba. Carrasco. Zapata
Rancho rumbo a Santa Cruz por ruta 7, camino viejo Cochabamba-Santa Cruz. Barboza
1881 (CORD). Cochabamba. Carrasco. Tirique rumbo a Monte Punko. Barboza 3622
(CORD). Cochabamba. Carrasco. Cañacota, Abundante sobre pircas en el cementerio.
Barboza 3621 (CORD). Cochabamba. Carrasco. Carrasco 59,9 Km al E. del puente so-
bre el Rio Pucara (Punata) por el camino entre Cochabamba y Santa Cruz. (Cerca de la
Est. Chulichuncani). Solomon 15930 (CORD). Santa Cruz. Prov. Vallegrande, 4 Km SW
of El Trigal. Nee & Solomon 36533. (CORD). COLOMBIA. Cundinamarca. Páramo
de San Miguel, extremo occidental de la Sabana de Bogotá. 2800-300 m s. m. Gutierrez
274 (CORD). ECUADOR. Pichincha. Small hill near the town to Calacali. Keel s. n.
(CORD 29541). PERÚ. La Libertad. Santiago de Chuco. ca. 1 Km out side Santiago
de Chuco on road from Shorey and Shorey chico at stream crossing; secundary vegetation
along road, along stream in highly disturbed Eucalyptus plantation and premontane fo-
rest vegatation. Knapp 10587 (CORD). Chota. Cajamarca. Bosque El Pargo, La Loma,
entre Llama y Huambos. 2-3 Km desde desvío de la carretera. Bosque primario. Deanna
64 (CORD). Chota. Cajamarca. Bosque El Pargo, La Loma, entre Llama y Huambos.
2-3 Km desde desvío de la carretera. Deanna 65 (CORD). Cajamarca. Cajamarca. Por-
con Bajo, Km 15 carretera a Hualgayoc 3100 m s. m. Gomez-Sosa & Leiva 449 (CORD).
VENEZUELA. Mérida. Quebrada Motatan, 4 Km despúes de Mucubaji, páramo Santo
Domingo. Mancilla 5834 (CORD).
(a) Flor (b) Fruto
(c) Planta
Figura 2.26: Salpichroa tristis

14. Salpichroa lehmannii Dammer, Bot. Jahrb. Syst. 37: 640. 1906 (sub nom.
Salpichroma lehmannii ).
TIPO. ECUADOR. Prov. Azuay: Cuenca, 2500-2800 m, Nov-Dec 1880, Lehmann 5555
(lectotipo designado por Gonzáles (Gonzáles Arce et al., 2016) K 000640381!; isolectotipos,
GH 00077392!). Figura 2.27.
Salpichroa tristis Miers var. lehmannii (Dammer) Keel, Monogr. Syst. Bot. Missouri Bot.
Gard. 45: 1259. 1993.
Salpichroma foetida Dammer, , Bot. Jahrb. Syst. 37: 639. 1906. TIPO. BOLIVIA. Dpto.
Tarija: Puna Patanca, 3800 m, 9 Jan 1904, Fiebrig 2625 (lectotipo, K 000640384!;
isolectotipos A 00077391!, BM 000992211!, E 00394799! F!, G, GH 00077390!,
GOET 003463!, L 0003616!, M 0172079!, P 00432000!, S, U).
Salpichroma alata Dammer, Meded. Rijks-Herb. 29: 26. 1916. TIPO. BOLIVIA. Dpto. La
Paz: Quebrada de Araca, 3700 m, Oct 1911, Herzog 2435 (lectotipo designado
por Gonzáles (Gonzáles Arce et al., 2016), L 0003615!; isolectotipos, S, W). .
Salpichroa sarmentosa Benoist, Bull. Soc. Bot. France 85: 55. 1938. TIPO. BOLIVIA.
Dpto. La Paz: Vic. of La Paz, 3700 m, Dec 1856, Mandon 436 (holotipo, P
00432005!; isotipos, F 0073035!, fragmento, G 00343064!).
Nombre vulgar: No hay registros.
Caracteres diagnósticos: Arbusto de 3 m de altura. Corola amarillo-verdosa a veces

con líneas violáceas, tubulosa, de 9,8-15 mm, densamente glanduloso-pubescente; tubo con
marcadas constricciones en su mitad superior y en la fauce. Gineceo exerto. Bayas ovoides.
Distribución geográca y hábitat: Esta variedad se distribuye desde Colombia, Ecua-

dor, Perú, Bolivia, Chile, hasta el noroeste de la Argentina; característica de la Prepuna
y Puna, en acantilados rocosos, matorrales y sobre otros arbustos espinosos. Habita hasta
los 3500 m s. m.
Usos: No hay registros.
ARGENTINA. Jujuy. Dpto. Tilcara: Alfarcito pr. Sali-

nas Grandes, Fries 951 (CORD, S). Jujuy. Dpto. Yavi: Yavi Chico, camino a la Escuela
Rosario Wayar,Barboza et al. 1734 (CORD). BOLIVIA. Frías. Potosí. Entre Chullpa
Kasha y Yurak Kasha, km 490-489. Barboza 3612. (CORD). La Paz. Murillo. Calacoto
ca. 5 Km hacia Palca, Ovejuyo. Beck 2403 (CORD). La Paz. Murillo. 3 Km NE of Venta-
nilla on road to mina San Francisco along Rio Choquekkota. Solomon 12869 (CORD). La
Paz. Murillo. Botton of valley of Rio Achumani, 10 Km. E of center of La Paz. Nee 33316
(CORD). Potosí. Frías. Desde Oruro rumbo a Potodí, en el Km490, unos 50 Km antes
de llegar a Potosí. Barboza 2998 (CORD). COLOMBIA. Nariño. Between Cumbal and
The Lake of Cumbal. Fernandez et al. 1066 (NY). CHILE. Parinacota. Entre Putre
y Parinacota. Cocucci 3279 (CORD). PERÚ. Cajamarca. Contumaza. Bosque Cachil.
Leiva 1769 (MO).
(a) Flor (b) Fruto
(c) Planta
Figura 2.27: Salpichroa lehmannii

Estas dos entidades se diferencian claramente por el tamaño y color de la corola, in-
dumento y longitud del gineceo. Así, mientras que S. tristis posee una corola de 16,5 - 22
mm de longitud, con indumento no glandular y el gineceo exerto, S. lehmannii posee una
corola mucho más pequeña, que ronda entre 9,8 - 13 mm, con indumento glandular y el
gineceo apenas exerto. Figura 2.28 (fotos: gentileza de Biol. Paul Gonzáles & Dr. Andrea
A. Cocucci).
Figura 2.28: Comparación entre S. tristis y S. lehmannii
2.5.3.2. Conicto en Salpichroa glandulosa

Keel (Keel, 1984) propuso dos subespecies: ssp. glandulosa y ssp. weddellii, propuesta
que fue seguida por Nee en Jørgensen (Jørgensen et al., 2014). A su vez, Keel asignó varios
sinónimos para la ssp. glandulosa. Se revisaron nuevamente los tipos de estos sinónimos y
se pudo comprobar que el tipo de S. amoena no se ajustaba el tipo de S. glandulosa. Por
ello, se intensicaron los viajes de campo a los respectivos topotipos para conocer mejor y
entender a estos taxones. De ello, resultó que se revalida S. amoena como especie buena. De
igual manera, se trabajó con la ssp. weddellii, llegando a la conclusión de que también debe
ser jerarquizarse a nivel de especie. En síntesis, se rescatan de este conicto tres especies
válidas: S. amoena, S. glandulosa y S. weddellii, que a continuación se presentan:
15. Salpichroa amoena Benoist, Bull. Soc. Bot. France 85: 409. 1938.
TIPO. BOLIVIA: Dpto. la Paz, Prov. Laracaja: Viciniis Sorata inter Laripata et Ti-
coguaya, Paracollo, 3300-3600 m, Aug-Jan 1898-1899, Mandon 438 (holotipo, P!; isotipos,
BM!, G, GH, K, NY, P, S, W). Figura 2.29.
Caracteres diagnósticos: Arbusto apoyante muy pubescente. Corola amarilla, tubular

ca. 5,5-8 cm long., lóbulos corolinos triangulares muy acuminados con dientes interlobu-
lares notables ca. 11 mm. Androceo exerto y gineceo superando a los estambres. Bayas
ovoides.
Distribución geográca y hábitat: Crece en puna y sub-puna, en montaña de bosque

húmedo, entre rocas. Sudeste de Perú y noroeste de Bolivia entre 3050-4700 m s. m.
Usos: No registra.
BOLIVIA. La Paz. Murillo, km 34, La Rinconada. Hun-

ziker 8183 (CORD). La Paz. Murillo, 12,1 Km below the dam al Lago Zongo, Zongo
valley, Moist puna. Solomon 13024 (CORD). PERÚ. Urubamba. Cuzco. Huayllabam-
ba, Laguna de Yanaccocha. Barboza 3428 (CORD).
16. Salpichroa glandulosa (Hook.) Miers, London J. Bot. 4: 325. 1845.

Basónimo: Atropa glandulosa Hook., Bot. Misc. 2: 230. 1831. TIPO. PERU. Dpto.
Pasco: Huaylluay, near Pasco, Crucksanks s.n. (lectotipo designado por Gonzáles (Gon-
záles Arce et al., 2016) K! fragmentos de la porción central de la cartulina). Figura 2.30
(fotos: gentileza de Biol. Paul Gonzáles).
Salpichroa glandulosa (Hook.) Miers var. longiora Dunal, Prodr. [A. P. de Candolle] 13
(1): 472. 1852. TIPO. PERU. Sin datos, Pavón s.n. (holotipo, G!; isotipo, BM!).
Nombre vulgar: Pepino silvestre (Perú: Luteyn & Lebrón-Luteyn 3663 ); Aqha Aqha
(Perú: Davis at al. 1554 ); Pire-pire (Perú: Davis et al. 1707 ).
Caracteres diagnósticos: Corola amarilla, con dientes interlobulares notables ca. 5 mm,
tubular ca. 5,5 cm long. Lóbulos corolinos y calicinos triangulares. Androceo y gineceo
igualmente exertos. Bayas ovoides.
Distribución geográca y hábitat: Mayormente en puna o subpuna, en bosque de mon-

taña, sobre rocas o grietas. También se la ha recolectado al lado de carreteras y entre
arbustos a 3000-4700 m s. m. Se extiende desde el Oeste y parte del Sur del Perú, hasta el
Noroeste de la cordillera en Bolivia.
Usos: Frutos comestibles, por personas (Perú: Davis et al. 1707 ) y animales (Perú:
Mathews in Hooker, 1837 ); Planta aromática (Perú: Boeke 1134 ) y Keel 418 ) (Keel, 1984).
PERÚ. Cajamarca. Camino Cajamarca a Hualcayac.

Scolnik 1347 (CORD). Ayacucho. 14 Km NE of Quinua. Keel s. n. (CORD 29226).
(a) Flor (b) Fruto
(c) Planta
Figura 2.29: Salpichroa amoena

(a) Planta (b) Flor
Figura 2.30: Salpichroa glandulosa

17. Salpichroa weddellii Benoist, Bull. Soc. Bot. France 85: 408. 1938.
TIPO. BOLIVIA. Dpto. Cochabamba: Between Llave and Morochata, Dec 1846, Wed-
dell 4116 (holotipo, P!; isotipo, P!). Figura 2.31.
Salpichroa glandulosa (Hook.) Miers ssp. weddellii (Benoist) Keel, Novon 3(1): 46. 1993.
Caracteres diagnósticos: Corola amarilla-verdosa, sin dientes interlobulares, tubular,

hasta ca. 3,5 cm long. Lóbulos corolinos ovados triangulares a lanceolados. Androceo y
gineceo exertos. Bayas ovoides.
Distribución geográca y hábitat: Bosque nuboso de montaña, en la vertiente seca o

línea de nieve cerca, con mayor frecuencia en la roca húmeda con grietas, a 3000-4050 m
s. m., en el Departamento de Cochabamba o en el Sureste del lado de la Cordillera Tres
Cruces en Bolivia (Keel, 1984).
Usos: No registra.
Material selecto estudiado: BOLIVIA. Oruro. Cercado. A 1 km antes de Sarayi rumbo

a Oruro. Barboza 3630 (CORD).
(a) Hoja (b) Fruto
Figura 2.31: Salpichroa weddellii
S. glandulosa y S. amoena dieren de S. weddellii en que las dos primeras poseen dientes
interlobulares en la corola, mientras que estos dientes están ausentes en S. weddellii. Por
su parte entre S. glandulosa y S. amoena hay una diferencia muy grande en la longitud
de estos dientes; los de S. glandulosa miden aproximadamente 5 mm, mientras que en S.
amoena se extienden de 6 a 11,5 mm. Figura 2.32.
(a) S. glandulosa (b) S. amoena
Figura 2.32: Dientes interlobulares corolinos
2.5.3.3. Conicto en Salpichroa weberbaueri

Bajo este nombre, Keel (Keel, 1984) citó dos sinónimos: S. diusa Miers var. longiora
Hicken y S. tenuiora Benoist, criterios que se siguieron en los catálogos de Perú y Ecuador
(Brako y Zarucchi, 1993), (Jørgensen y León-Yánez, 1999). Se revisaron nuevamente los
tipos de estos sinónimos y se pudo comprobar que éstos no se ajustaban a S. weberbaueri.
Del análisis aquí realizado, resulta la revalidación de estos taxones como buenas especies.
Respecto a S. tenuiora, conserva su nombre original; en cambio, en S. diusa var. longi-
ora, no se puede realizar la transferencia como S. longiora por ya existir este nombre (S.
longiora Benoist, sinónimo de S. microphylla ). Se propone entonces, un nuevo nombre:
S. incaica.
Por otro lado, al revisar la colección tipo de S. microloba descripta por Keel en 1993
(Keel, 1993), se advirtió una coincidencia total con el correspondiente de S. weberbaueri,
por lo que aquí se propone a S. microloba como sinónimo nuevo.
En conclusión, se rescatan de este conicto tres especies válidas: S. incaica, S. tenuiora

y S. weberbaueri, que se presentan a continuación:
18. Salpichroa incaica P. Gonzáles & Barboza, nom. nov. (Inédito)

S. diusa Miers var. longiora Hicken, Apuntes Hist. Nat. 1: 175. 1913, non Salpichroa
longiora Benoist, 1938. TIPO. PERU. Dpto. Cuzco: Sicuani, 3551 m, 6 Mar
1903, Hicken s.n. (lectotipo designado por Gonzáles (Gonzáles Arce et al., 2016);
SI 003276!; isolectotipos: SI-036295!; SI-036294!; S 04-3006!). Figura 2.33.

Caracteres diagnósticos: Arbusto de 1,3-1,5 m de altura. Corola amarilla, tubular ape-

nas ensanchada desde la parte media, de ca. 3 cm long., patentes. Lóbulos corolinos
triangular-lanceolados, mayores de 3 mm long. Androceo y gineceo exertos. Nectario ama-
rillo. Bayas ovoides, verdes a la madurez.
Distribución geográca y hábitat: Especie endémica de Perú, de amplia distribución en

la zona centro-sur de Perú. Crece en áreas arbustivas, entre los 2000-4500 m s.m.
Obs: El nuevo nombre que se asigna a esta especie, alude al endemismo que presenta
en el Cuzco, cuna de la civilización incaica.
PERÚ. Cuzco. Prov. Calca. Quello-Quello, cerca de Pisaq.

Barboza 3415 (CORD). Cuzco. Prov. Calca. Adove Hacienda Venero,Juchuy Cuzco. Keel
(CORD 29549).
(a) Flor (b) Cáliz con gineceo y corola
(c) Planta
Figura 2.33: Salpichroa incaica

19. Salpichroa tenuiora Benoist, Bull. Soc. Bot. France 85: 54. 1938.
TIPO. ECUADOR. Prov. Tungurahua: Baños, 2134 m, Sep 1857, Spruce 5057 (holoti-
po, P!; isotipos, BM, C, G, GH, GOET, K, NY, W). Figura 2.34 (fotos: gentileza de Dra.
Rocio Deanna & Mg. Segundo Leiva).
Caracteres diagnósticos: Corola verde-amarillenta, tubular apenas ensanchada en el

tercio superior, de ca. 2 cm long. Lóbulos corolinos triangular-lanceolados, mayores de 3
mm long. Androceo y gineceo inclusos. Bayas ovoides.
Distribución geográca y hábitat: Hasta el momento sólo se la ha recolectado en la cor-

dillera oriental de Ecuador a 2000 m s. m.
Usos: No registra.
Material selecto estudiado: ECUADOR. Pichincha. Cantón Quito. km 30,5 de la

carretera antiguaQuito-Sto Domingo de los Colorados, entre San Juan y Chiriboga, estri-
baciones occidentales del volcán Pichincha. Deanna 135 (CORD). Cotopaxi. At the edge
of the town Pilaló (between Quevado & Latunga) Keel 502 (CORD).
(a) Planta (b) Flor
Figura 2.34: Salpichroa tenuiora

20. Salpichroa weberbaueri Dammer, Bot. Jahrb. Syst. 37: 640. 1906.
TIPO. PERU. Dpto. Ancash: Near Ocros, 3500-3700 m, 28 Mar 1903, Weberbauer
2693 (holotipo, B†; lectotipo designado por Gonzáles (Gonzáles Arce et al., 2016), MOL
00004981!; isolectotipos, G 00343118!; F 648164!, fragmentos). Figura 2.36.
Salpichroa microloba Keel, Novon 46:48. 1993. TIPO. PERU. Dpto. Lima: Arquircancha,
nr. Lachaqui, 3658 m, 2 Feb-1979, Keel & Vilcapoma 397 (holotipo, NY, isotipos
MO, USM).
Nombre vulgar: Ayanata (Perú: Keel & Vilcapoma 397, Vilcapoma 129 ); Callalluma
(Perú: Vilcapoma 130 ); Shuculumpa (Perú: Cerrate & Tovar 1909 ).
Caracteres diagnósticos: Arbusto apoyante de 0,5-1,4 m de altura. Corola amarilla, tu-

bular, de ca. 3,4 cm long. Lóbulos corolinos triangulares o triangular-lanceolados, revoluto,
de 2-3,2 mm long. Cáliz ligeramente zigomorfo. Androceo y gineceo inclusos. Bayas ovoi-
des, negras a la madurez.
Distribución geográca y hábitat: De amplia distribución. Subpuna o bosque montaño-

so, cerca de arroyos o de campos cultivados. En caminos, sobre muros de piedra o grietas
rocosas; 2438-3800 m s. m. Centro-oeste de Perú.
Material selecto estudiado: PERÚ. Canta. Lima, Lachaquí. Barboza 3395 (CORD).
Canta. Lima, entre km 15 y 16, rumbo a Pirocancha. Barboza 3387 (CORD). Canta.
Lima, Pirocancha. Barboza 3393 (CORD).
S. incaica y S. tenuiora dieren de S. weberbaueri en que las dos primeras poseen

lóbulos corolinos mayores a 3 mm, mientras que la última posee lóbulos muy pequeños;
menor a 2 mm (Erróneamente Keel la describió como una especie nueva y la denominó,
por ésta característica, como S. microloba ). Cabe destacar que S. incaica tiene el gineceo
exerto, mientras que S. tenuiora no. Figura 2.35.
(a) S. incaica (b) S. tenuiora
Figura 2.35: Comparación entre S. incaica y S. tenuiora

(a) Flor (b) Fruto
(c) Planta
Figura 2.36: Salpichroa weberbaueri

2.5.4. Especie nueva

A continuación se mencionan los caracteres diagnósticos de una especie nueva de Sal-
pichroa cuya descripción aparecerá en una futura publicación (Gonzáles Arce et al., 2016).
21. Salpichroa salpoensis S. Leiva, sp. nov. (Inédito)

TIPO: PERÚ. Dpto. Libertad. Prov. Otuzco: Dist. Salpo, abajo del Murañe (ruta
Salpo-Pagash), 2598 m s. m., 29 Apr 2014, S. Leiva, G. Barboza & A. C. Ibáñez 5668
(holotipo HAO!; isotipos, CORD 0044215!; HAO!). Figura 2.37 (fotos: gentileza de Mg.
Segundo Leiva).
Nombre vulgar: Cuytulume (Perú: Leiva 5667 ).
Caracteres diagnósticos: Corola amarillo-verdosa, tubular angostada en la parte media,

6-7 veces más larga que ancha, de ca. 1,5 cm long. Lóbulos corolinos triangulares lanceo-
lados. Androceo y gineceo inclusos. Frutos morado intenso a la madurez.
Distribución geográca y hábitat: Encontrada hasta ahora sólo en la region de Salpo,

Departamento San Martín, Perú.
Usos: Frutos comestibles (Leiva, com. pers.)
Material selecto estudiado: PERÚ. La Libertad. Otuzco. Distrito Salpo. Salpo-Pagash

arriba de El Murañe. Leiva 5668 (CORD). La Libertad. Otuzco. Distrito Salpo. Salpo-
Pagash arriba de El Murañe. Leiva 5667 (CORD). La Libertad. Otuzco. Arriba de San
Andrés de Cárcel, camino a Salpo. Leiva 562 (CORD).
(a) Flor y fruto (b) Fruto
(c) Planta
Figura 2.37: Salpichroa salpoensis

2.5.5. Inclusión de Nectouxia formosa
Como se mencionó en la Sección 2.1.4, Hunziker (Hunziker, 2001), reconoce la Tribu

Jaboroseae formada por tres géneros: Salpichroa, Nectouxia (monotípico, N. formosa ) y
Jaborosa. La evidencia molecular (Ver Capítulo 3), por otro lado, avala la inclusión de N.
formosa al género Salpichroa.
Nectouxia fue descripto en 1818 mientras que Salpichroa en 1845, lo que le conere
prioridad, Art. 11.3 del Código Internacional de Nomenclatura (CIN) (McNeill et al., 2012).
En vista de ello, no se puede transferir N. formosa a Salpichroa. Desde el punto de vista
nomenclatural, hay dos soluciones posibles: Transferir todas las especies de Salpichroa
a Nectouxia, Art. 11 del CIN (McNeill et al., 2012); o proponer al Comité General de
Nomenclatura la conservación del nombre Salpichroa sobre Nectouxia, Art. 14 del CIN
(McNeill et al., 2012). Una vez realizada la propuesta, la decisión se tomará en el próximo
Congreso Internacional de Botánica (Art. 14 A), evento en el que se reúne el Comité
General de Nomenclatura. Por lo tanto, en este trabajo, se presenta a Nectouxia formosa
con su nombre actual.
22. Nectouxia formosa Kunth, Nov. Gen. Sp. [H.B.K.] 3(9): 11 (t. 193) (ed.
qto.). 1818.
TIPO. MÉXICO. Hidalgo, Real del Monte, Humboldt & Bonpland 4085 (holotipo P
00670597!; isotipos, P 00156719!, P 00156720!). Figura 2.38, fotografías del sitio web Ma-
lezas de México (Lezama, 2005).
Nectouxia bella Miers, Ann . Nag. Nat. Hist., ser. 2,4: 138. 1849. TIPO. MEXICO. Hidalgo,
Real del Monte, Coulter 1270 (lectotipo, K, n.v.).
Caracteres diagnósticos: Corola amarilla, con tubo prolongado a modo de anillo libre
por arriba de su borde distal, de ca. 5 cm long. Lóbulos corolinos anchamente obovados,
reexos. Cáliz ligeramente zigomorfo. Androceo y gineceo inclusos. Bayas cubiertas ínte-
gramente por el cáliz fructífero. Hierbas rizomatosas.
Distribución geográca y hábitat: Se la encuentra al Sur de Estados Unidos (original-

mente en el oeste de Texas); México (Chihuahua y Nuevo León hasta Oaxaca y Veracruz).
Se la encuentra en caminos. Habita en bosques de pinos, desde el nivel del mar hasta los
700 m s. m.
Usos: No registra.
Obs: Probablemente extinta en Estados Unidos, dado que no existen colecciones mo-
dernas en los herbarios consultados.
ESTADOS UNIDOS. Texas. Chisos Mts. Mueller 8276

(MO).MEXICO. Hidalgo. Real del monte, camino a Tezuantla. Medina Cota 1970
(CORD). Distrito Federal. Cerro Esquihuil, delegación de Milpa Alta. Pastizal en ladera
de cerro. Ventura 2805 (CORD). Distrito Federal. Cerro de Topilejo, delegación de

Tlalpan. Bosque de encinos en ladera de cerro. Ventura 1484. (CORD). Distrito Federal.
Cerro de Topilejo, delegación de Tlalpan. Bosque de encinos en ladera de cerro. Ventura
1337. (CORD).
(a) Flor (b) Fruto
(c) Planta
Figura 2.38: Nectouxia formosa

2.5.6. Clave diferencial de las especies

En esta Sección, se presenta una clave dicotómica actualizada en base a los caracteres
diagnósticos enriquecidos con las observaciones a campo.
1. Tubo corolino mayor a 5 cm de long.
2. Tubo calicino bien evidente, mayor a 7 mm de long.
3. Tubo corolino densamente pubescente por fuera, dientes interlobulares
ausentes, lóbulos no reexos. Tubo calicino desgarrado a la madurez.
S. dependens
3'. Tubo corolino glabro o glabrescente por fuera, dientes interlobulares
conspicuos, lóbulos netamente reexos. Tubo calicino no desgarrado a la
madurez.
S. microphylla
2'. Tubo calicino apenas connado en la base, menor a 2 mm de long.
4. Corola con tubo de color rosado por fuera y con lóbulos amarillos adaxial y
abaxialmente, o éstos parduscos internamente.
S. proboscidea
4'. Corola íntegramente amarilla.
5. Tubo corolino mayor a 8 cm de long. Cáliz de 3-5 cm de long., a menudo
con pelos ramicados.
S. didierana
5'. Tubo corolino menor a 8 cm de long. Cáliz menor de 3 cm de long., con
pelos no ramicados.
6. Corola con dientes interlobulares notables. Estambres sólo con las
anteras exertas.
7. Corola externamente muy pilosa, tubo hasta ca. 5,5 cm long., lóbulos
triangulares, ca. 5 mm long. Estambres con la mitad de las anteras
exertas. Gineceo de igual longitud o apenas superando a los
estambres. Plantas densamente pubescentes.
S. glandulosa
7'. Corola externamente glabrescente, tubo 5,5-8 cm long., lóbulos muy
acuminados, de 6-11,5 mm long. Estambres con anteras totalmente
exertas. Gineceo superando 2-3 mm a los estambres. Plantas
esparcidamente pubescentes.
S. amoena
6'. Corola sin dientes interlobulares. Estambres con los lamentos y anteras
exertos.
S. weddellii
1'. Tubo corolino menor a 5 cm de long.
8. Corola con tubo prolongado a modo de anillo libre por arriba de su borde distal,
lóbulos anchamente obovados, tubo cubierto en sus

3 / partes basales por el cáliz.
4
Bayas cubiertas íntegramente por el cáliz fructífero. Hierbas rizomatosas.
N. formosa
8'. Corola sin tubo prolongado a modo de anillo libre por arriba de su borde distal,
lóbulos triangulares, tubo cubierto en menos de sus

3 / partes basales por el cáliz.
4
Bayas cubiertas parcialmente por el cáliz fructífero. Subarbustos o arbustos.
9. Tubo corolino menor a 1,5 cm de long.
10. Corola íntegramente blanca.
11. Tubo corolino urceolado, casi tan largo como ancho, con denso anillo
tricomático sub-basal en su interior; lóbulos enrollados. Androceo y
gineceo exertos. Cáliz y estilo pubescentes. Bayas blancas a la madurez.
S. origanifolia
11'. Tubo corolino ligeramente urceolado, dos veces más largo que ancho,
anillo tricomático ausente pero con tricomas a lo largo del área de
soldadura de los lamentos; lóbulos reexos. Androceo y gineceo
inclusos. Cáliz y estilo glabros. Bayas verdes a la madurez.
S. leucantha
10'. Corola íntegramente verde-amarillentas o con manchas purpúreas por
fuera.
12. Tubo corolino ligeramente urceolado.
S. ramosissima
12'. Tubo corolino tubuloso.
13. Tubo corolino pubescente externamente.
14. Cáliz y corola glandular- pubescentes. Corola amarilla o, a veces,
violácea.
15. Estilo excediendo a los estambres. Lóbulos corolinos
triangulares, de 3 x 1,1 mm, tubo pubescente internamente.
Estambres por debajo del borde superior del tubo.
S. lehmannii
15'. Estilo más corto que lo estambres. Lóbulos corolinos
linear-lanceolados a oblongo-lanceolados, de 6 x 1,1, tubo
glabro internamente. Estambres superando en 1 mm el borde
superior del tubo.
S. gayi
14'. Cáliz y corola con tricomas no glandulares. Corola amarillenta o
verdosa-amarillenta.
16. Tubo corolino enangostado en la parte media, 6-7 veces más
largo que ancho. Gineceo con algunos pelos en la parte distal
del ovario y base del estilo. Área libre de los lamentos
estaminales aplanados. Frutos morado intenso a la madurez.
S. salpoensis
16'. Tubo corolino recto, 3-4 veces más largo que ancho. Gineceo
glabro. Área libre de los lamentos cilíndricos. Frutos
desconocidos a la madurez.
S. diusa
13'. Tubo corolino glabro externamente.
17. Tubo corolino menor a 1 cm. Estilo más corto que los estambres.
S. micrantha
17'. Tubo corolino mayor a 1 cm. Estilo excediendo o de igual long.
que los estambres.
18. Corola suculenta verdoso-amarillenta, tubo con
ensanchamiento cilíndrico en su ápice y con tricomas en el
cuarto basal de su interior. Estilo siempre incluso. Lóbulos del
cáliz triangular-lanceolado con ápice recto. Filamentos rectos.
Conectivo ensanchado.
S. tristis
18'. Corola membranácea cremosa o amarillo-pálida, glabra
internamente, tubo con ensanchamiento globoso en su ápice.
Estilo usualmente exerto. Lóbulos del cáliz subulados con ápice
recurvado en post-antesis. Filamentos inclinados hacia el
centro. Conectivo cilíndrico, no ensanchado.
S. scandens
9'. Tubo corolino mayor a 1,5 cm de long.
19. Corola infundibuliforme, con lóbulos semicirculares apiculados.
S. hirsuta
19'. Corola tubular, con lóbulos triangulares o triangular-lanceolados.
20. Lóbulos corolinos triangulares de 2-3 mm long.
S. weberbaueri
20'. Lóbulos corolinos triangular-lanceolados, mayores de 3 mm long.
21. Corola tubular apenas ensanchada en el tercio superior, tubo glabro
a glabrescente, con tricomas eglandulares. Área libre de los
lamentos ca. 2,5 mm, aplanada y ensanchada superando el ancho
de las anteras. Anteras ca. 2 mm de long. e inclusas ca. 2 mm por
debajo de la garganta. Estilo incluso al nivel de lo estambres.
S. tenuiora
21'. Corola tubular gradualmente ensanchándose desde la parte media,
tubo pubescente, con tricomas glandulares y no glandulares. Área
libre de los lamentos casi inexistente, liformes, nunca ensanchados.
Anteras ca. 3,5 mm, a la altura de la garganta o ligeramente exertas
0,5 mm. Estilo exerto en 1-2 mm.
S. incaica
2.6. Conclusiones
De 16 especies reconocidas al inicio de esta Tesis para Salpichroa, se aceptan ahora 22
(incluida N. formosa ). El aumento en el número de especies surge de la rehabilitación de
5 taxones como especies válidas; una especie nueva y la incorporación de N. formosa. A
continuación se detallan estos cambios:
Especies que conservan su nombre original

1. S. dependens
2. S. didierana
3. S. diusa
4. S. gayi
5. S. glandulosa
6. S. hirsuta
7. S. leucantha
8. S. micrantha
9. S. microphylla
10. S. origanifolia
11. S. proboscidea
12. S. ramosissima
13. S. scandens
14. S. tristis
15. S. weberbaueri
Especies rehabilitadas
16. S. amoena
17. S. incaica (nuevo nombre dado para S. diusa var. longiora )
18. S. lehmannii
19. S. tenuiora
20. S. weddellii
2.6. Conclusiones 69
Especie nueva
21. S. salpoensis
Inclusión de Nectouxia formosa
22. Transferencia a realizarse si se logra la conservación del nombre Salpichroa sobre

Nectouxia.
Con esta revisión se actualizaría la nomenclatura y composición del género Salpichroa.

Capítulo 3
Filogenia
Resumen: Con el objeto de evaluar la monolia de Salpichroa y de dilucidar relacio-

nes entre sus especies, se realizó un análisis de logenético basado en secuencias de un
marcador nuclear (ITS) y dos del cloroplasto (psbA-trnH y ndhF-rpl32 ). Se incluyeron
todos los taxones aceptados por Keel (1984), los taxones de validez dudosa, Nectouxia
formosa y dos muestras sin identicar. Para ello, se realizaron los análisis de Máxima
Parsimonia e Inferencia Bayesiana. Los resultados indican que Salpichroa resulta un
grupo monolético sólo si incluye a N. formosa. En el género, además, se distinguie-
ron dos clados principales bien soportados. Este estudio contribuyó a resolver algunos
problemas taxonómicos pero se requiere de datos mas informativos para dilucidar con
mayor conanza las anidades entre las especies ya que las relaciones interespecícas
no quedaron completamente resueltas.
71
72 Capítulo 3. Filogenia
3.1. Introducción
3.1.1. Historia Evolutiva
Los organismos evolucionan, es decir, van cambiando a lo largo del tiempo. Estos cam-
bios (mutaciones, deleciones, inserciones) se producen en el ADN de un modo más o menos
aleatorio. La interacción con el medio determina cuáles de estos cambios continuará en
el tiempo de acuerdo a la supervivencia de los individuos. Las secuencias de los genes
existentes actualmente son un espejo del pasado. Analizando estas secuencias es posible
intentar reconstruir la historia de un gen, determinando qué cambios se han producido,
cuándo se han producido y por qué. La información resultante puede ayudar, por ejemplo,
a comprender la función de una proteína (Biología Molecular), a determinar por qué una
población es resistente a una determinada enfermedad (Epidemiología), o a resolver un
caso legal (Medicina Forense). Este tipo de estudios también sirve para reconstruir el ár-
bol de la vida, esto es, para conocer las relaciones de parentesco que hay entre los seres vivos.
Cuando se habla de una logenia se hace referencia a una hipótesis sobre la historia
evolutiva y las relaciones de parentesco a diferentes niveles. El objetivo de los métodos de
reconstrucción logenética es utilizar la información actual para hacer inferencias sobre el
pasado, buscando obtener hipótesis que sean lo más ables posible. Las hipótesis resultan-
tes normalmente se expresan en forma de un árbol, en el que la topología representa las
relaciones de parentesco entre las distintas entidades (genes o taxones). Hay que señalar
que en algunas situaciones (cuando hay recombinación o transferencia horizontal de genes)
la historia evolutiva no se puede representar como un árbol.
Charles Darwin, a mediados del siglo XIX en su obra El origen de las especies publica
por primera vez el árbol que se observa en la Figura 3.1. En él, resume cómo las especies
derivan de un ancestro en común. Incluso para el mismo Darwin su propuesta fue difícil
de aceptar, tardando más de 50 años en hacerla pública. Posteriormente, sería ridiculizado
en caricaturas mostrándolo como un ser híbrido mitad-mono, haciendo referencia a que
nuestra especie tiene como a ancestro a especies primates.
(a) Charles Darwin (b) Arbol de la vida (c) Caricatura
Figura 3.1: La obra de Darwin El origen de las especies y su crítica

Un árbol logenético es un diagrama en el que las ramas terminales se corresponden

con las entidades que se están estudiando y los nodos internos se reeren a los ancestros
hipotéticos de éstas (Golobo y Pol, 2005).
El punto de partida para conocer la logenia de los organismos es establecer homolo-

gías, es decir caracteres (cualquiera sea su naturaleza) que derivan de un ancestro común.
Mediante la comparación de homologías es posible establecer anidades, por ejemplo, entre
especies diferentes.
3.1.2. Variación morfológica y variación molecular

En la actualidad se usan tanto datos morfológicos como moleculares para establecer
hipótesis de relaciones logenéticas entre organismos, para estimar la variación dentro de
las poblaciones y para probar hipótesis de adaptaciones ecológicas. Sin embargo, es co-
mún observar incongruencias entre los análisis basados en datos morfológicos y los basados
en datos moleculares (Hillis y Wiens, 2000), lo que ha originado polémicas respecto a qué
tipo de datos pueden proveer información más conable para sustentar hipótesis evolutivas.
El principal argumento en favor de la utilización de caracteres moleculares es que son

universales. En muchos casos, principalmente cuando se requiere comparar linajes con di-
vergencia temprana, es imposible establecer hipótesis de homología morfológica; en cambio,
existen genes presentes en todos los genomas celulares, como los ribosomales, que pueden
proporcionar información para reconstrucciones logenéticas, en casos donde los caracte-
res morfológicos son inaplicables (Avise, 1994). Además, estudios teóricos y empíricos han
mostrado que en la reconstrucción de logenias es crucial contar con numerosos caracte-
res informativos (Hillis, 1994) y los estudios típicos de secuencias nucleotídicas implican
varios cientos o miles de caracteres en contraste con los estudios morfológicos, en los que
un análisis incluye raramente más de cien caracteres (Sanderson y Donoghue, 1989). Los
datos moleculares también tienen la ventaja de trabajar directamente con la base genética
de la variación, mientras se asume la base genética de la mayoría de los caracteres morfoló-
gicos. Asimismo, los caracteres moleculares se pueden seleccionar y denir de una manera
relativamente objetiva (Hillis y Wiens, 2000). En los estudios morfológicos, en cambio, los
caracteres deben ser descubiertos y delimitados generalmente sin un criterio explícito para
su selección o codicación, por lo que tienen el potencial de ser arbitrarios. Sin embar-
go, tienen la ventaja de permitir un muestreo taxonómico mucho más exhaustivo, lo que
es importante para las revisiones sistemáticas, los estudios de evolución de caracteres y
la valoración logenética. Asimismo, los especímenes de museo ofrecen muchos caracteres
morfológicos para una gran cantidad de taxones, mientras que un muestreo de este tipo
para un estudio molecular puede ser difícil por el alto costo de la secuenciación, la ne-
cesidad de material relativamente fresco y apropiadamente conservado, así como por la
inaccesibilidad a las áreas donde se distribuyen algunos de ellos (Hillis y Wiens, 2000).
En síntesis, tanto los acercamientos moleculares como morfológicos tienen ventajas y

desventajas, por lo que ambos enfoques siguen desempeñando un papel crucial en el estudio
de casi todos los grupos de organismos.
3.1.3. Métodos Filogenéticos

Existen dos tipos de métodos de reconstrucción logenética, los basados en distancias y
los basados en caracteres. Los primeros resumen la información de un alineamiento múltiple
en una matriz de distancias entre secuencias, datos con los que se reconstruye un árbol
evolutivo. Estos métodos son: Unweighted Pair-Group Method with Arithmetic Means
(UPGMA) y Neighbor Joining (NJ). Por su parte, los métodos basados en caracteres
hacen uso de la información de cada posición de un alineamiento múltiple para inferir la
mejor hipótesis de relaciones de parentesco (Harrison y Langdale, 2006). Estos métodos
son: Máxima verosimilitud o Maximum Likelihood (ML), Máxima Parsimonia (MP) e
Inferencia Bayesiana (IB), éstos dos últimos utilizados en esta Tesis.
3.1.3.1. Máxima Parsimonia
El método de Máxima Parsimonia (MP) se basa en el principio de la navaja de Occam:

La hipótesis más sencilla es la más probable. En términos de secuencias, el árbol más
parsimonioso, y por lo tanto el preferido, es aquél con el menor número de cambios, similar
al principio de evolución mínima.
El método de MP pondera posiciones/caracteres informativos, que son aquellas po-

siciones que dan pistas sobre cómo se relacionan las entidades. Un sitio completamente
conservado, por ejemplo, no sería informativo. Formalmente, un sitio informativo es aquél
en el que al menos hay dos estados diferentes y en el que cada uno de los estados está
representado en al menos dos de las entidades en estudio.
3.1.3.2. Inferencia Bayesiana
El método de Inferencia Bayesiana (IB) determina, para cada árbol, la probabilidad de

que sea la hipótesis correcta en función de los datos. A la probabilidad de cada árbol, dado
un determinado conjunto de datos, se denomina probabilidad posterior porque se calcu-
la la probabilidad de una hipótesis a partir de los resultados que produciría dicha hipótesis.
Por alguna razón matemática, no existe una solución analítica al sistema de Bayes en el
problema de inferencia logenética. No obstante, existe una aproximación para estimar la
distribución de probabilidad posterior (es decir, la probabilidad de cada árbol): el Markov
Chain Monte Carlo (MCMC). El proceso podría resumirse de la siguiente manera: 1) se
inicializan al azar los parámetros que se quiere inferir (topología, longitud de ramas, pa-
rámetros de modelo evolutivo); 2) seguidamente se hace un pequeño movimiento aleatorio
(modicación de los parámetros) y se evalúa la función de probabilidad; 3) si los valores
mejoran, entonces se acepta el movimiento y se repite el proceso y 4) si los valores no
mejoran, el nuevo estado se acepta con una probabilidad proporcional al empeoramiento
producido. Se asume que si se repite este proceso muchas veces, por ejemplo un millón de
veces, se obtiene una estimación de la probabilidad asociada a cada estado, osea a cada
árbol.
3.1.4. Contraste de hipótesis

Las reconstrucciones logenéticas mediante IB tienen la gran ventaja de expresar la
probabilidad de cada árbol y de ese modo es posible ver si existen otros árboles con proba-
bilidad similar a la del árbol más probable, es decir, otras hipótesis alternativas que sean
plausibles. En cambio, en el caso de ML (maximum likelihood / máxima verosimilitud),
sólo sabemos cuál es el árbol más probable pero no se conoce su probabilidad ni la de
otros árboles. Por eso, para técnicas como la de ML, NJ (Neighbor Joining) o MP (Má-
xima Parsimonia) es muy importante realizar un contraste de hipótesis, para saber cuán
soportada por los datos se encuentra la hipótesis obtenida.
3.1.4.1. Bootstrapping no paramétrico

El análisis de Bootstrap se puede aplicar a los métodos ML, MP o NJ. Este análisis
realiza repetidos muestreos del alineamiento, por ejemplo 100 ó 1000 veces, con reemplazo
de parte de los mismos, y para cada una de esas muestras busca la mejor hipótesis. Para
interpretar los resultados, se calcula un árbol consenso y en él se indica para cada rama en
cuántas ocasiones se ha obtenido dicha topología, que se expresa como un porcentaje. Los
valores de bootstrap mayores del 90 % evidencian relaciones fuertemente soportadas. Por
otro lado, las relaciones establecidas se consideraran sin soporte o poco conables, cuando
los valores de Bootstrap son menores al 50 %.
3.2. Antecedentes
Los datos moleculares combinados con métodos logenéticos han tenido un alto impacto
en el campo de la sistemática, transformando los conceptos de las relaciones y circuscrip-
ciones en todos los niveles de jerarquía taxonómica (Small et al., 2004). En el pasado, la
anatomía comparada, la citogenética, la ecología y la morfología habían sido usadas para
inferir relaciones logenéticas entre los taxones. Gracias al progreso de las técnicas mole-
culares, numerosos fragmentos del genoma han podido ser usados en estudios de logenia.
Actualmente, los estudios logenéticos involucran ya sea un conjunto de datos diferentes
regiones del genoma nuclear, mitocondrial o plastidial, o bien información combinada de
un conjunto de datos morfológicos y moleculares.
En los últimos años, la clasicación de la familia Solanaceae (grupo monolético que

contiene aproximadamente 94 géneros y 2500 especies (Barboza et al., 2016)), basada prin-
cipalmente por caracteres morfológicos, ha sido modicada en base a resultados de estudios
de logenia molecular, (Olmstead et al., 2008), (Särkinen et al., 2013).
Olmstead y colegas presentaron una propuesta de reconstrucción logenética de So-

lanaceae en base a dos regiones de ADN del cloroplasto, los marcadores ndhF y trnLF
(Olmstead et al., 2008). En su estudio incluyeron 89 géneros y 195 especies lo que repre-
senta una muestra casi completa a nivel de géneros y proporciona un marco de relaciones
para toda la familia que ayudó a integrar estudios logenéticos parciales publicados pre-
viamente. En dicha propuesta se reconocen 3 Subfamilias, Solanoideae, Nicotianoideae y
Cestroideae, nuevas Tribus y se plantean grupos informales. Si bien este sistema muestra
un gran avance en la resolución de las relaciones de parentesco entre los distintos taxones,
aún se encuentran numerosos clados cuyas relaciones son inciertas dada la escasez de es-
pecies analizadas de determinados géneros. Entre los varios casos controvertidos presentes,
se encuentra la Tribu Jaboroseae, que aparece desmembrada en comparación con la clasi-
cación de Hunziker (Hunziker, 2001). Como se mencionó en el Capítulo 2, estos autores
propusieron dos clados informales para los géneros tradicionales de Jaboroseae: uno, lla-
mado Salpichroina, que incluye a Salpichroa (sólo una especie estudiada) y a Nectouxia
(monotípico), mientras que el otro, llamado Atropina, reúne a las 3 especies analizadas de
Jaborosa, junto con géneros de otras Tribus, Figura 3.2. Recientemente, nuevos estudios de
logenia molecular en la familia muestran que Jaborosa pertenece efectivamente al clado
Atropina, siendo Latua (Särkinen et al., 2013) o Atropa (Moré et al., 2015) su grupo
hermano, según los diferentes estudios.
Debido al reducido muestreo de especies y al poder de resolución limitado de las regiones

de ADN estudiados hasta el momento, la posición de Salpichroa permanece aún incierta.
Además, nada se conoce aún sobre las relaciones entre sus especies. En este estudio se
amplían el muestreo de especies y la información molecular para intentar obtener una
reconstrucción logenética completa del género Salpichroa.
Fragmento
Figura 3.2: Fragmento de la propuesta logenética de Olmstead et al. (2008) de la Familia

Solanaceae. Clado Salpichroina: Salpichroa (sólo una especie estudiada) y Nectouxia
(monotípico); Clado Atropina: 3 especies de Jaborosa, junto con géneros de otras Tribus.

Delimitar con precisión el número de especies que comprende Salpichroa.
Poner a prueba la monolia de Salpichroa.
Evaluar la relación de Salpichroa con Jaborosa.
Evaluar la relación de Salpichroa con Nectouxia.
Establecer una hipótesis de relaciones interespecícas para Salpichroa.
Confrontar y evaluar las propuestas taxonómicas a través de evidencia molecular.


3.4.1. Material estudiado
3.4.1.1. Género Salpichroa
Se incluyeron en el estudio 20 especies de Salpichroa más dos especies sin determinar,
las cuales se muestran en la Tabla 3.1. Los ejemplares están depositados en el Museo
Botánico de Córdoba (CORD).
Tabla 3.1: Materiales estudiados del género Salpichroa. Colectores: Gloria Barboza (GB),
Rocio Deanna (RD), Paul Gonzáles (PG), Andrea Cocucci (AC) y Segundo Leiva (SL).
Mayores datos de colección se indican en el Capítulo 2.
Especie Colector Procedencia

1. S. amoena GB 3428 Perú
2. S. dependens GB 3949 Perú
3. S. didierana GB 3417 Perú
4. S. diusa RD 137 Ecuador
5. S. gayi GB 3397 Perú
6. S. glandulosa PG 2746 Perú
7. S. hirsuta AC 5664 Perú
8. S. incaica GB 3415 Perú
9. S. lehmannii GB 3612 Bolivia
10. S. leucantha SL 4690 Perú
11. S. micrantha GB 3404 Perú
12. S. microphylla PG 3305 Perú
13. S. origanifolia GB 3599 Argentina
14. S. proboscidea GB 3411 Perú
15. S. ramosissima GB 3370 Perú
16. S. scandens GB 3605 Argentina
GB 2485 Argentina
17. S. tenuiora RD 135 Ecuador
18. S. tristis GB 3621 Argentina
19. S. weberbaueri GB 3387 Perú
20. S. weddellii GB 3630 Bolivia
21. Salpichroa sp. 1 RD 65 Perú
22. Salpichroa sp. 2 SL 5668 Perú
3.4.1.2. Grupo externo

Se utilizaron a especies de otros géneros de la Subfam. Solanoideae, incluida la única
especie de Nectouxia y una especie de la Subfam. Cestroideae, a saber:
Solanoideae: Jaborosa integrifolia, Jaborosa reexa, Lycium cestroides, Lycium carolinia-

num, Lycium australe, Nolana coelestis, Nolana wedermannii Dunalia brachyacantha,
Saracha punctata, Vassobia dichotoma, Nectouxia formosa, Solanum nigrum, Sola-
num jamaicense, Solanum elaeagnifolium y Solanum virginianum.
Cestroideae: Nicotiana tabacum.
3.4.2. Extracción de ADN

Se extrajo ADN genómico de hojas jóvenes deshidratadas en sílica gel usando el método
de microextracción DNeasy®Plant Mini Kit (QIAGEN, Inc.). Se evaluó la calidad de ADN
extraído mediante electroforesis en gel de agarosa.
3.4.3. Análisis molecular

Se analizaron tres marcadores moleculares: ITS del genoma nuclear y psbA-trnH y
ndhF-rpl32 del genoma del cloroplasto. La amplicación de los marcadores se hizo me-
diante PCR de acuerdo a los protocolos de White para ITS (White et al., 1990), de Sang
para psbA-trnH (Sang et al., 1997) y de Miller para ndhF-rpl32 (Miller et al., 2009).
Se usaron primers universales para ITS (White et al., 1990) y primers diseñados para
psbA-trnH (Sang et al., 1997) y para ndhF-rpl32 (Shaw et al., 2007). En la Tabla 3.2 se
encuentra detallada esta información.
Tabla 3.2: Regiones de ADN nuclear (ITS), del cloroplasto (psbA-trnH, ndhF-rpl32 ) y las
secuencias de los primers utilizados para la amplicación por PCR y su posterior secuen-
ciación.
Region del ADN Primer (5'3')

ITS ITS5: GGA AGT AAA AGT CGT AAC AAG G
ITS4: TCC TCC GCT TAT TGA TAT GC
psbA-trnH trnH
GU G : CGC GCA TGG TGG ATT CAC AAT CC
psbA: GTT ATG CAT GAA CGT AAT GCT C

ndhF-rpl32 rpL32-R: CCA ATA TCC CTT YYT TTT CCA A
ndhF: GAA AGG TAT KAT CCA YGM ATA TT
Los productos de PCR fueron limpiados con el sistema Clean-up, utilizando la combi-
nación de enzimas exonucleasa I (Exo I, Thermo Scientic) y fosfatasa alcalina termosen-
sible (Fastap, Thermo Scientic), siguiendo el protocolo de Werle (Werle et al., 1994). Los
productos obtenidos de las amplicaciones fueron secuenciados en un secuenciador capi-
lar automático (Servicio de Secuenciación del CERELA-CONICET, Tucumán, Argentina).
Las secuencias para todas las especies del grupo externo fueron obtenidas del GenBank.
Los detalles se muestran en la Tabla 3.3.
Las secuencias obtenidas por secuenciación o de la base de datos GenBank fueron edi-
tadas y alineadas utilizando el programa Mega 5.1 (acoplado con Muscle). Se realizó un
análisis combinado que reunió toda la información de los tres marcadores en una misma
matriz.
Tabla 3.3: Materiales analizados del grupo externo. Detalles de las secuencias obtenidas
del GenBank
Marcadores
Especie
trnH-psbA ndhF-rpl32 ITS
Jaborosa integrifolia gb|KJ632477.1| gb|KJ685449.1| gb|AY028148.1|
Jaborosa reexa gb|KJ632488.1| gb|KJ685459.1|
Lycium cestroides gb|FJ189609.1| gb|FJ189671.1| gb|DQ124623.1|
Lycium carolinianum gb|GQ301192.1| gb|GQ301194.1| gb|DQ124622.1|
Lycium australe gb|HM195021.1| gb|HM195001.1| gb|AY028131.1|
Nolana coelestis gb|FJ189605.1| gb|FJ189667.1| gb|FJ439763.1|
Nolana wedermannii gb|FJ189604.1| gb|FJ189666.1| gb|FJ439764.1|
Dunalia brachyacantha gb|KP747398.1| gb|KP308151.1| gb|KP267804|
Saracha punctata gb|KP747399.1| gb|KP280050.1| gb|DQ314182.1|
Vassobia dichotoma gb|KP267788.1| gb|KP294521.1| gb|KP267801|
Solanum nigrum gb|EU750555.1| gb|KF055419.1| gb|KC540796.1|
Solanum jamaicense gb|GU135400.2| gb|HQ457259.1| gb|GU799063.1|
Solanum elaeagnifolium gb|HM016411.1| gb|HQ457255.1| gb|AY996508.1|
Solanum virginianum gb|JX511986.1| gb|KF055420.1| gb|AY996561.1|
Nectouxia formosa gb|KJ632492.1| gb|KJ685463.1| Secuencia propia
Nicotiana tabacum gb|FJ493313.1| gb|KF055431.1| emb|AJ012367.1|
3.4.4. Análisis logenético

El análisis de Máxima Parsimonia (MP) se realizó utilizando PAUP*4.0 (Swoord,
2002). Se hicieron búsquedas heurísticas y permutación de ramas según el método Tree-
Bisection-Reconnection (TBR) (1000 repeticiones, almacenando 10 árboles por repetición).
Los gaps fueron tratados como datos faltantes. Se realizó el análisis de Bootstrap (BS) (1000
repeticiones, cada una con 10 réplicas aplicando TBR y almacenando 10 árboles por repli-
cación) para evaluar el apoyo interno de los clados.
El análisis de Inferencia Bayesiana (BI) se realizó utilizando MrBayes 3.2.2 (Ronquist

et al., 2012). Se realizaron 5 millones de generaciones utilizando la búsqueda de cadenas de
Markov Monte Carlo (MCMC). El primer 25 % de los árboles fue descartado como burn-
in y los árboles restantes se utilizaron para construir un árbol de consenso con valores
de probabilidad posterior (PP). El modelo de sustitución de nucleótidos fue seleccionado
antes del análisis siguiendo el criterio de información de Akaike mediante JModelTest ver-
sión 2.1.3 (Darriba et al., 2012). El modelo que mejor se ajustó a los datos fue el GTR+I+G.
3.5. Resultados 83
3.5. Resultados
Se obtuvieron secuencias completas de los tres marcadores para la mayor parte de las
especies analizadas. A continuación se describen las topologías de los árboles obtenidos por
Máxima Parsimonia e Inferencia Bayesiana.
3.5.1. Maxima Parsimonia

El análisis de parsimonia del conjunto de datos de los tres marcadores combinados dio
lugar a 14 árboles más parsimoniosos de 892 pasos (CI: 0,624; RI: 0,785) por lo que se
calculó un árbol de consenso estricto (Figura 3.3) en el que se basan las interpretaciones.
El número de caracteres Parsimoniosamente Informativos (PI) fue el 13,2 % del total.
Las especies del grupo externo se dividen en varios subclados. Las especies de Solanum
forman un clado fuertemente soportado que se resuelve como grupo hermano de Salpichroa
pero sin soporte.
El principal resultado de este análisis es que Salpichroa forma un grupo monolético

fuertemente soportado (BS 100 %) sólo si se incluye en él a Nectouxia formosa. Por otro
lado, dentro de este grupo, las especies se dividen en dos clados principales: uno media-
namente soportado formado por S. origanifolia - S. scandens - N. formosa (BS 76 %) y
el otro, con alto soporte integrado por las restantes especies (BS 100 %), si bien la mayor
parte de sus ramas internas presentan bajo o ningún soporte. Este último clado se divide a
su vez en dos subclados, el primero integrado por las especies S. lehmannii - S. tristis (BS
99 %) y el segundo que contiene el resto de las especies (BS 50 %), entre las que se denen
algunas anidades con mediano o bajo soporte, a saber: S. gayi - S. incaica (BS 75 %), S.
micrantha - S. ramosissima (BS 57 %) y Salpichroa sp. 1 - Salpichroa sp. 2 - S. tenuiora
- S. leucantha (BS 53 %).
S. amoena
S. weberbaueri
S. proboscidea
S. dependens
57 S. micrantha
S. ramosissima
S. sp.1
49
S. sp. 2 (S. salpoensis )
Salpichroa
53
S. tenuiflora
S. leucantha
S. didierana
S. microphylla
50 75 S. gayi
S. incaica
S. diffusa
40
100 S. glandulosa
S. hirsuta
S. weddellii
100 99 S. lehmannii
S. tristis
100 S. origanifolia
76
100 S. scandens
S. scandens
Nectouxia formosa
Solanum nigrum
100
78 Solanum jamaicense
100
Solanum elaeagnifolium
Solanum virginianum
99 Dunalia brachyacantha
100
Saracha punctata
52 Vassobia dichotoma
78 Jaborosa integrifolia
Jaborosa reflexa
97 Lycium cestroides
99 Lycium carolinianum
98
Lycium australe
96 Nolana coelestis
Nolana werdermannii
Nicotiana tabacum
Figura 3.3: Filogenia de Salpichroa. Árbol de consenso estricto de los 14 árboles más par-
simoniosos de 892 pasos (CI: 0,624; RI: 0,785) obtenido a partir del conjunto de datos
combinados (marcadores del cloroplasto psbA-trnH y ndhF-rpl32 + nuclear ITS). Valores
de BS sobre las ramas (>40 %).
3.5. Resultados 85
3.5.2. Inferencia Bayesiana

El árbol de consenso de mayoría inferido en el análisis de IB para la combinación de
los tres marcadores se presenta en la Figura 3.4.
Salpichroa forma un grupo monolético fuertemente soportado (1,00 PP) sólo si se

incluye en él a Nectouxia formosa, en tanto que el clado formado por las especies de Solanum
resulta el grupo hermano de este conjunto, coincidiendo con el árbol consenso estricto del
análisis de MP. Dentro del clado Salpichroa + Nectouxia se dividen los mismos dos clados
principales resueltos en el análisis de MP, pero en este caso ambos fuertemente soportados
(Figura 3.4): 0,96 PP el clado formado por S. origanifolia - S. scandens - N. formosa ;
1,00 PP el clado que agrupa a las restentes especies. Dentro de este último clado es donde
se observan algunas incongruencias entre ambos análisis realizados. Salpichroa leucantha
resulta la especie hermana de las restantes especies del grupo, con un soporte de 1,00 PP;
mientras que en las restantes especies las relaciones no están completamente resueltas,
observándose varias politomías (Figura 3.4). Sin embargo, se resuelven algunas anidades
interespecícas que coinciden con las observadas en el análisis de MP, por ejemplo S. gayi
- S. incaica 1,00 PP o S. ramosissima - S. micrantha 0,90 PP.
0,59
S. amoena
0,74 S. didierana
1 S. gayi
S. incaica
0,64 S. diffusa
S. weddellii
0,62 0,91
S. glandulosa
S. hirsuta
S. weberbaueri
0,89
S. proboscidea
S. dependens
0,95 0,57 S. microphylla
1 S. lehmannii
S. tristis
0,9 0,9 S. micrantha
S. ramosissima
1
0,7 S. sp 1
Salpichroa
0,5
S. sp 2 (S. salpoensis)
S. tenuiflora
1
1 S. leucantha
1 S. origanifolia
1 S. scandens
0,96
0,99 S. scandens
Nectouxia formosa
Solanum nigrum
1
0,76 Solanum jamaicense
0,95 1
Solanum elaeagnifolium
Solanum virginianum
1 Dunalia brachyacantha
1
Saracha punctata
1 Vassobia dichotoma
1 Jaborosa integrifolia
Jaborosa reflexa
1 Lycium cestroides
1 Lycium carolinianum
1
Lycium australe
1 Nolana coelestis
Nolana werdermannii
1
Nicotiana tabacum
0.1
Figura 3.4: Filogenia de Salpichroa. Filograma obtenido mediante Inferencia Bayesiana, a

partir del conjunto de datos combinados (marcadores del cloroplasto psbA-trnH y ndhF-
rpl32 + nuclear ITS). Los valores de PP se indican en cada rama.
3.6. Discusión 87
3.6. Discusión
Para que una hipótesis logenética sea considerada robusta, las topologías de los árboles
obtenidos, usando los diferentes métodos MP e IB, deben ser congruentes. En esta Sección
se hará una comparación de los árboles obtenidos mediante MP e IB y una discusión para
contrastar estos resultados con los antecedentes de logenias parciales de Solanaceae.
Los resultados de los análisis logenéticos obtenidos mediante MP e IB muestran varias

congruencias e incongruencias entre los respectivos árboles consenso. En términos generales,
las principales incongruencias se observan en un sector de los árboles donde se registran
los valores de soporte más bajos. A continuación se discuten semejanzas y diferencias y se
combinan resultados logenéticos con reordenamientos taxonómicos (Figura 3.5).
Clado Salpichroa + Nectouxia : En ambas reconstrucciones se recupera a Salpichroa

como un grupo monolético fuertemente soportado siempre incluyendo a N. formosa.
Esta especie, N. formosa, aparece resuelta en un clado basal junto a S. scandens y S.
origanifolia. La estrecha anidad entre estos dos géneros ya había sido mostrada en
logenias existentes para la familia (Olmstead et al., 2008), (Särkinen et al., 2013),
también con alto soporte, pero con un bajo muestreo (solo una especie de Salpichroa
analizada). En esta Tesis, con un muestreo del 100 % de las especies del género, se
ratican los resultados previos. Desde el punto de vista morfológico, distintos taxonó-
mos tempranamente habían sugerido una fuerte semejanza entre ellos (Miers, 1849),
(Whalen, 1984), (Hunziker, 2001) sugiriendo la posible sinonimia entre ambos. Sin
embargo, hasta la actualidad nadie formalizó esta sinonimia a pesar de la evidencia
molecular existente. El alto valor de BS (100 %) aquí obtenido no deja dudas sobre
la unicación de Nectouxia con Salpichroa (Ver Capítulo Botánica).
Las relaciones de las especies dentro del clado Salpichroa + Nectouxia resultan sólo
parcialmente resueltas, observándose diversos subclados con bajo o ningún soporte.
En ambas reconstrucciones logenéticas se observa una división dicotómica basal,
fuertemente soportada (BS 100 %). Así, se distinguen dos grupos bien denidos cons-
tituidos por las mismas especies en ambos casos, los cuales se identican como Clado
menor y Clado mayor.
Clado menor: Las relaciones interespecícas dentro de este clado son completamente
congruentes entre ambos análisis. Nectouxia formosa es la especie hermana de S.
scandens y S. origanifolia. Morfológicamente, las 3 especies comparten similar gine-
ceo, es decir un nectario bien prominente y estigma exerto. De ellas, la más divergente
sería N. formosa por presentar una prolongación del tubo corolino que sobresale a
modo de un anillo y los lóbulos, anchamente ovados, alcanzan dimensiones simila-
res a la mitad de la longitud del tubo, a diferencia de las otras dos que carecen de
un tubo prolongado y con lóbulos muy cortos triangulares u angostamente trian-
gulares. Además, N. formosa es una hierba perenne, endémica del sur de EEUU y
México, mientras las restantes son arbustos apoyantes de las montañas andinas (S.
origanifolia con una distribución cosmopolita).
Clado mayor: Es en este clado donde se observan los puntos más débiles dadas las in-
congruencias en las relaciones interespecícas entre ambos análisis empleados. No
obstante, algunas anidades se mantienen. A continuación se presentan primero los

grupos con alto/mediano soporte y luego aquellos que, a pesar de poseer bajo sopor-
te, permitieron tomar algunas decisiones taxonómicas:
S. lehmannii - S. tristis : Distintos taxonómos aceptan la variedad lehmannii

(Keel, 1984), (Hunziker, 2001), (Basso y Barboza, 2013) para S. tristis. Nues-
tros resultados rectican que son dos especies buenas. Desde el punto de vista
morfológico (Ver Capítulo 2), estas dos entidades se diferencian, en términos
generales, por el tamaño de la corola, indumento y longitud del gineceo. Salpi-
chroa tristis posee corola más larga y gineceo exerto a diferencia de S. lehmannii.
Desde el punto de vista logenético, en ambos análisis estos dos taxones están
fuertemente relacionados (99 % BS; 1,00 PP) aunque cierta distancia evolutiva
se observa en el análisis de IB, evidenciado por el largo de las ramas. Este re-
sultado fortalece la propuesta de jerarquizarlas a nivel especie. Por último, la
evidencia toquímica también acompaña la propuesta de considerlas como dos
especies con propia identidad ya que S. tristis carece de withanólidos (Basso et
al., 2016a) mientras que en S. lehmannii se han aislado ocho de estos metabo-
litos (Nicotra et al., 2013).
S. gayi - S. incaica : Estas dos especies se asemejan morfológicamente en cuanto

al color y forma de la corola y longitud del gineceo. Ambas presentan corolas
amarillentas de forma tubular y ensanchadas en la fauce, en tanto que el gineceo
es exerto. Salpichroa gayi posee franjas purpúreas en la corola y nectario fuerte-
mente rojizo, mientras que S. incaica es monocromática y tiene un nectario de
color amarillo. En ambos análisis estos dos taxones se resuelven como especies
hermanas con alto soporte (75 % BS; 1,00 PP). Salpichroa incaica (nuevo nom-
bre para S. diusa var. longiora ) había sido considerada por Keel (Keel, 1984),
como un sinónimo de S. weberbaueri. El análisis molecular permitió rescatar de
dicha sinonimia a este taxón.
S. micrantha - S. ramosissima : Ambas especies, desde lo morfológico comparten

un nectario rojo, gineceo incluso y un tubo corolino amarillo-verdoso con lóbulos
reexos; la gran diferencia entre estos dos taxones es que S. micrantha, como
lo indica su nombre, tiene la corola tubular menor a un centímetro mientras
que S. ramosissima se caracteriza por corolas urceoladas que alcanzan casi el
doble de esta longitud. Estas dos especies se resuelven como especies hermanas
con bajo-mediano soporte (57 % BS; 0,90 PP). Keel, por otro lado, no relaciona
estos dos taxones entre sí, sino que relaciona a S. ramosissima con N. formosa
por la forma de la corola y a S. micrantha con S. gayi porque ambas tienen los
estambres inclusos (Keel, 1984).
Salpichroa sp. 1 - Salpichroa sp. 2 - S. tenuiora : Este grupo de tres especies se

resuelve con muy bajo soporte en ambos análisis (49 % BS; 0,50 PP). Salpichroa
tenuiora no había sido considerada como buena especie por Keel (Keel, 1984),
quien la sinonimizó bajo S. weberbaueri. En los árboles obtenidos estas dos espe-
cies se resuelven en clados distintos. Respecto a las otras dos especies, Salpichroa
3.6. Discusión 89
sp. 1 y Salpichroa sp. 2, son colecciones recientes, resolviéndose Salpichroa sp.

2 como especie nueva (= S. salpoensis ); Salpichroa sp. 1 queda como un taxón
indeterminado a la espera de mayores colecciones que permitan conocer mejor
a esta entidad.
S. diusa - S. weddellii - S. glandulosa - S. hirsuta : Este grupo de cuatro espe-

cies se resuelve en ambos análisis, soportado sólamente en IB (0,90 PP); dentro
del grupo se observa en ambos casos una politomía. A pesar de ello, fue posible
distinguir a S. glandulosa de S. weddellii, ésta última considerada subespecie
de S. glandulosa por Keel (Keel, 1984). Mientras que S. glandulosa posee una
corola con dientes interlobulares notables y anteras apenas exertas, en S. wed-
dellii la corola carece de tales dientes y sobresalen los lamentos estaminales y
las anteras.
S. amoena : Esta entidad aparece agrupada con distintas especies en cada aná-
lisis, siendo una de las incongruencias obtenidas. A pesar de esto, se puede
concluir que es una especie buena ya que se desprende de S. glandulosa, ubicada
en un clado distinto en los árboles obtenidos.
La Posición de Salpichroa + Nectouxia en Solanaceae: No fue posible precisar la

posición de Salpichroa + Nectouxia en el sistema de la familia dado el bajo mues-
treo de grupo externo utilizado. En nuestro caso, Solanum se resuelve como grupo
hermano del clado Salpichroa + Nectouxia en tanto que se destaca, una vez más que
Jaborosa se resuelve en un clado distante de estos géneros. Esto último concuerda con
la propuesta de Moré y colegas (Moré et al., 2015). En la reconstrucción logenética
que proponen, se utilizan 18 especies del género Jaborosa, sólo 3 especies Salpichroa,
la única de Nectouxia y 6 especies más para conformar el grupo externo. En ese
análisis, basado en un marcador nuclear waxy y cuatro del cloroplasto (trnH-psbA,
trnD-trnT, rpl32-trnL y ndhF-rpl32 ), no sólo se plantea la monolia de Salpichroa
con la inclusión de Nectouxia, sino que Atropa resulta grupo hermano de Jaborosa
lo que coincide con hipótesis anteriores de ubicar a Jaborosa en un clado informal
llamado Atropina (Olmstead et al., 2008) (Särkinen et al., 2013).
S. amoena
S. weberbaueri
S. proboscidea
S. dependens
57 S. micrantha
S. ramosissima
S. sp.1
49
S. sp.2 ( S. salpoensis )
Salpichroa
53
S. tenuiflora
S. leucantha
S. didierana
S. microphylla
50 75 S. gayi
S. incaica
S. diffusa
40
100 S. glandulosa
S. hirsuta
S. weddellii
100 99 S. lehmannii
S. tristis
100 S. origanifolia
76
100 S. scandens
S. scandens
Out-Group N. formosa
Grupo Externo
Figura 3.5: Conictos taxonómicos en Salpichroa. Fragmento del árbol de consenso extricto
basado en Máxima Parsimonia donde se identican los conictos taxonómicos por color.
Conicto en S. tristis (rosa), Conicto en S. glandulosa (verde), Conicto en S. weberbaueri
(celeste), posible especie nueva e inclusión de N. formosa (amarillo), especies en cursiva.
3.7. Conclusiones
Sobre el número de especies que comprende Salpichroa
Se propone que el género Salpichroa consta de 22 especies.
Sobre la monolia de Salpichroa

Salpichroa representa un grupo monolético sólamente si se incluye en el género a Nectou-
xia formosa.
Sobre las relaciones interespecícas

Se recuperan dos clados principales con fuerte soporte. La resolución dentro del clado me-
nor fue alta, mientras que las anidades dentro del clado mayor no están completamente
resueltas y sólo en algunos casos se observan altos soportes.
Sobre las propuestas taxonómicas

El análisis logenético permitió resolver los conictos taxonómicos, rehabilitando especies
bajo sinonimia, rehabilitando taxones infraespecícos a nivel de especie y proponiendo la
descripción de una nueva especie.
Sobre la relación de Salpichroa con Jaborosa

No fue posible precisar la posición de Salpichroa + Nectouxia en Solanaceae dado el bajo
muestreo del grupo externo utilizado. No obstante, se ratica que Salpichroa y Jaborosa
no son grupos hermanos.
Capítulo 4
Fitoquímica
Resumen: Del estudio toquímico realizado sobre 14 especies pertenecientes al gé-

nero Salpichroa, sólo dos presentaron withanólidos en su extracto vegetal. De éstas se
aislaron seis compuestos nuevos (Salpichrólido S, 2-en-Salpichrólido S, Salpichrólido
T, Salpichrólido U, Salpichrólido V y Salpichrólido 6) y cinco compuestos conocidos
(Salpichrólido A, Salpichrólido C, Salpichrólido D, Salpichrólido I y el 2,3-dihidro Sal-
pichrólido B). Al comparar los withanólidos aislados de Salpichroa con los aislados
de Jaborosa, géneros que tradicionalmente formaban parte de la misma Tribu, en-
contramos que son estructuralmente muy diferentes. Estos resultados acompañan la
propuesta logenética de que Jaborosa y Salpichroa estén distantes.
93
94 Capítulo 4. Fitoquímica
4.1. Introducción
4.1.1. Productos Naturales

Los procesos químicos que ocurren en los seres vivos, dan lugar a la síntesis de un
enorme número de sustancias, conocidas como productos naturales (PN), muchas de las
cuales exhiben efectos biológicos de alta selectividad. Por este motivo los PN han consti-
tuido durante siglos la principal fuente de agentes medicinales. Asimismo, los PN reejan
una expresión de la complejidad de un organismo vivo, que clásicamente posee dos tipos
de metabolismos: primario y secundario.
El metabolismo primario implica una serie de reacciones interrelacionadas mediadas por

enzimas catabólicas, anbólicas y anabólicas que proporcionan intermediarios biosintéti-
cos y energía, capaces de convertir precursores biosintéticos en macromoléculas esenciales,
tales como ADN, ARN, proteínas, lípidos y polisacáridos.
Por otro lado, el metabolismo secundario produce metabolitos en una fase de desarrollo
posterior al crecimiento. Generalmente son producidos por grupos taxonómicos relaciona-
dos o cercanos de organismos, tienen una estructura química inusual y variada y constituyen
a menudo una mezcla de productos estrechamente relacionados entre sí, de una misma fa-
milia química. Mientras que el metabolismo primario es básicamente el mismo para todos
los sistemas vivos, el metabolismo secundario generalmente es especíco de cada especie
en particular. A veces se denen como una manifestación de la diferenciación.
El papel metabólico de los metabolitos secundarios es poco conocido. Sin embargo, su

papel ecológico se ha demostrado ampliamente. El carácter generalizado de la producción
de metabolitos secundarios y la preservación de sus vías biosintéticas multigénicas en la
naturaleza, indican que los metabolitos secundarios cumplen funciones de supervivencia en
los organismos que los producen (Demian y Fang, 2000).
4.1.2. Withanólidos
El estudio toquímico del presente trabajo de Tesis, está centrado en la búsqueda de
metabolitos secundarios propios de la Fam. Solanaceae, llamados withanólidos (w.). La
química de estos compuestos ha sido objeto de estudio en numerosos trabajos (Chen et al.,
2011), (Misico et al., 2011), (Ray y Gupta, 1994).
El primer w. aislado y caracterizado fue en el año 1965, casi simultáneamente por La-
vie de Withania somnifera (Lavie et al., 1965) y por Kupchan de Acnistus arborescens (L.)
Schelecht (Kupchan et al., 1965). Este compuesto fue nombrado como Withaferina A (Fi-
gura 4.4b) haciendo referencia a la especie del cual fue aislado, dando origen al nombre de
esta familia de compuestos (Figura 4.1a).
(a) Withanólido esqueleto normal (b) Withaferina A
Figura 4.1: Withanólidos
4.1.3. Clasicación de los Withanólidos

Los w. se denen químicamente como, esteroides polioxigenados con base de un esque-
leto tipo ergostano de 28 átomos de carbono. Una característica común es la presencia de
átomos de oxígeno en el C-1, C-22 y C-26, sin embargo hay algunas excepciones donde C-22
no está funcionalizado. Los w. pueden ser clasicados en dos grandes grupos en función del
arreglo de la cadena lateral, (Misico et al., 2011), los que tienen una γ -lactona entre las
posiciones C-23 y C-26 (Grupo A, Figura 4.2) y los que tienen una δ -lactona o un δ -lactol
que involucran los C-22 y C-26 (Grupo B, Figura 4.3).
Grupo A: Withanólidos con cadena lateral γ -lactona o γ -lactol

Dividido en seis subgrupos.
W. Espiránicos-γ -lactonas
Trechonólidos
Subtriora-γ -lactonas
Ixocarpalactonas
Perulactonas
Taccanólido-γ -lactonas
Grupo B: Withanólidos con cadena lateral δ -lactona o δ -lactol

Este grupo está dividido en trece subgrupos. Los w. con esqueletos no modicados
son los más abundantes y se consideran los precursores biogenéticos del resto de
los grupos. Todos los w. conocidos tienen la misma estereoquímica en C-22 (22R),
excepto cuando los sustituyentes sobre C-22 o C-23 cambian las prioridades relativas
de los grupos alrededor del centro asimétrico. Sobre este gran grupo se suele hacer
una subdivisión adicional, según la disposición de la cadena lateral: w. 17β (arreglo
normal ), y w. 17α orientación inusual. En este último caso, generalmente se presenta
la posición 17β -hidroxi sustituida (con el hidroxilo libre o formando un éter cíclico).
W. con esqueleto normal
Withaphysalinas
Physalinas
Acnistinas
Withajardinas
Withametelinas
Sativólidos
Subtriora-δ -lactonas
W. Espiránicos-δ -lactonas
W. tipo norbornano
W. con el anillo D Aromático
W. con el anillo A Aromático
Taccalonólido-δ -lactonas
Figura 4.2: Grupo A w. con cadena lateral γ -lactona o γ -lactol. R= O, H u OH

Figura 4.3: Grupo B w. con cadena lateral δ -lactona o δ -lactol. R= O, H u OH

4.1.4. Withanólidos en el Reino Vegetal

4.1.4.1. Géneros de la Familia Solanaceae que contienen withanólidos
Entre los cerca de 100 géneros aceptados en Solanáceas (Olmstead et al., 2008), la apa-
rición de withanólidos se limita sólo a la Subfam. Solanoideae. De los aproximadamente
800 w. descriptos hasta el momento, más del 95 % están presentes en unos pocos géneros
de esta Subfam. La Tabla 4.1 resume todos los géneros y especies que se sabe contienen
withanólidos hasta la fecha (Misico et al., 2011).
Los cuatro principales contribuyentes de withanólidos son los géneros Jaborosa Juss.,
Datura L., y Physalis L. del Norte y Sur del continente americano, y Withania Pauq.
nativa del Viejo Mundo. Sin embargo, ca. 50 % de sus especies, se han investigado toquí-
micamente. Jaborosa es un género interesante de América del Sur con mucha variedad de
color, olor, corola y la morfología como una adaptación a los diferentes polinizadores que
crecen desde el Sur de Perú a la Argentina en hábitats muy diversos. Datura comprende
hierbas perennes o anuales de corta duración, mayormente con ores grandes, comunes en
ambientes semiáridos de México y el suroeste de los Estados Unidos, pero introducidas
en muchos países. Physalis incluye sobre todo las hierbas de América (América Central,
México y Estados Unidos, con excepción de la Euroasiática P. alkekengi ) con ores solita-
rias colgantes color amarillas o blancas, y el cáliz de fructicación ampliada. Por último,
Withania es un género bien conocido de Europa y Asia, el cual posee hierbas perennes o
arbustos con ores perfectas o imperfectas.
La Tabla 4.1 incluye también cuatro géneros monotípicos, Acnistus Schott (Sur de Mé-
xico al Este de Brasil y Paraguay), Margaranthus Schltdl. (Sur de Estados Unidos a las
Antillas), Schraderanthus Averett (de México a Guatemala) y Discopodium Hochst. (Áfri-
ca tropical). En el resto de géneros que fueron caracterizadas toquímicamente, se han
descripto withanólidos sólo en algunas pocas especies.
4.1.4.2. Géneros No Solanáceas que contienen withanólidos

Se han detectado w. en nueve especies pertenecientes a diferentes Familias, incluyendo
los rizomas de las especies de Tacca J. R. Forst. y G. Forst. en dos especies del género
Dioscorea (Fam. Dioscoreaceae, antes Fam. Taccaceae), en una especie del género Tricho-
lepis DC. (Fam. Asteraceae Bercht. & J. Presl), y en las partes aéreas de Senna siamea
(Fam. Leguminosae), en la corteza de Eucalyptus globulus (Fam. Myrtaceae) y en especies
de Ajuga (Fam. Lamiaceae). También se han detectado compuestos relacionados, en es-
pecímenes del Reino Animal, como en la tortuga Amyda japonica, en un coral blando del
género Minabea y varias especies del género Paraminabea (Chao et al., 2011) y en una es-
ponja del género Strongylacidon, sin embargo, las estructuras de todos ellos se caracterizan
por tener 27 átomos de carbono (en lugar de 28) como es típico en los esteroides de origen
animal.
Tabla 4.1: Géneros de la Subfam. Solanoideae (Solanaceae) que contienen w.
Tribu Género spp con w./total Tipo de w.

Physaleae Physalis 17/90 Anillo D aromático o
(Physalinae) insaturado de seis miembros
Physalinas, Withaphysalinas
Neophysalinas, Cyclophysalinas
Esqueletos sin modicar
Physangulidina y derivados
Perulactonas
Margaranthus 1/1 Physalinas
Witheringia 2/12 Physalinas
Brachistus 2/4 Physalinas
Physalinae Acnistus 1/1 Acnistinas, withaphyisalinas
(Iochrominae) Esqueletos sin modicar
Iochroma 4/25 Esqueletos sin modicar
Eriolarynx 1/3 Withaphyisalinas
Vassobia 1/2 Esqueletos sin modicar
Dunalia 2/5 Acnistinas, Withaphysalinas
Physalinae Withania 6/20 Esqueletos sin modicar
(Whitaninae) Tubocapsicum 1/2 Acnistinas
Discopodium 1/1 Acnistinas
Physaleae Larnax 2/30 Subtrioralactonas
Esqueleto sin modicar
Datureae Datura 7/11 Withametelinas
Hyoscyameae Hyoscyamus 1/17 Esqueletos sin modicar
Lycieae Lycium 2/80 Esqueletos sin modicar
Solaneae Solanum 2/1500 Esqueletos sin modicar
Géneros no Deprea 4/7 Withajardinas
asignados Withaphysalinas
a un clado Physangulidina
Exodeconus 1/6 Esqueletos sin modicar
Jaborosa 14/23 Anillo A aromático
Trechonólidos, Sativólidos
Norbornanos
Lactonas-δ -espiránicas
Lactonas-γ -espiránicas
Nicandra 2/3 Anillo D aromático
Withajardinas
Salpichroa 1/22 Anillo D aromático
Schraderanthus 1/1 Physalinas
4.1.5. Rol de los Metabolitos Secundarios como

Marcadores Quimiotaxonómicos
Para la clasicación de las plantas, los sistemáticos tradicionales se enfocan fundamen-
talmente en las características anatómicas, morfológicas y moleculares, en tanto que el
contenido químico juega normalmente un rol secundario en su clasicación. Pero si en-
tendemos que los PN son consecuencia de una selección a lo largo de la evolución de las
especies, los metabolitos secundarios, pueden aportar una información valiosa para la ca-
racterización de taxones a diferentes niveles.
Como ya se ha mencionado, a la fecha se han descripto aproximadamente 800 w. La

mayoría de ellos están restringidos a algunos géneros de la Subfamilia Solanoideae. En la
Tabla 4.1, se resumen los géneros pertenecientes a la subfamilia Solanoideae que contienen
w. según la clasicación logenética más reciente (Olmstead et al., 2008), (Särkinen et al.,
2015), (Ng y Smith, 2016). Como se han reportado w. en 23 géneros y casi 70 especies de
Solanoideae, es posible realizar algunas consideraciones quimiotaxonómicas.
La evaluación de la quimiotaxonomía de esta familia, muestra resultados interesantes

a nivel de clados superiores, como sucede en el caso de la Tribu Physaleae, donde a ni-
vel de las tres subtribus presentes, existen w. con determinados núcleos: Physalinas en la
subtribu Physalinae; Withaphysalinas en la Tribu Iochrominae y Acnistinas presentes en
Iochrominae y Withaninae, pero ausentes en todos los demás géneros investigados.
Los géneros Jaborosa y Salpichroa, que según Hunziker pertenecen a la Tribu Jaboro-
seae (Hunziker, 2001), contienen w. con arreglos exclusivos y diferentes entre sí, por lo que
se pueden hacer consideraciones quimiotaxonómicas.
El género Jaborosa, con más del 50 % de sus especies estudiadas, presenta w. con es-
queletos modicados de manera repetitiva en diferentes especies, tales como los núcleos
trechonólido, sativólido, espiránico en C-22 y espiránicas en C-23, Figura 4.4.
El género Salpichroa, por otro lado, presenta w. con el anillo D aromático. Esta evi-
dencia toquímica coincide con las nuevas propuestas logenéticas que ubicarían en clados
independientes a estos géneros. Esto se muestra con detalle en la Sección 4.2.
(a) Sativólido (b) Trechonólido
Figura 4.4: Withanólidos aislados en varias especies de Jaborosa Juss.

4.2. Antecedentes
4.2.1. Withanólidos en Salpichroa
Salpichroa origanifolia Miers (Figura 4.5) es la única especie del género, que crece en
todo el mundo y por lo tanto ha sido la más estudiada hasta el momento. Los w. aisla-
dos de esta especie reciben el nombre trivial de Salpichrólidos. En líneas generales esta
especie se caracteriza por la presencia de w. con el anillo D aromático o w. con esqueleto
normal y que presentan diferentes grados de oxidación en el anillo D. Estos últimos son
considerados por varios autores como precursores biogenéticos del anillo D aromático (Gill
et al., 1990). Ésta es una característica estructural solamente compartida con Nicandra
physalodes (Glotter, 1991) y Physalis hispida (Cao et al., 2014). Las estructuras son mos-
tradas en la Figura4.6.
Figura 4.5: Salpichroa origanifolia
(a) Salpichrólido con esqueleto normal (b) Salpichrólido con

funcionalizado en el anillo D. el anillo D aromático.
Figura 4.6: Salpichrólidos representativos

De la misma se aislaron 18 Salpichrólidos (Salpichrólidos A-R), en diferentes épocas

del año y en diferentes regiones de Argentina. Fueron reportados en el siguiente orden;
Salpichrólido A (Veleiro et al., 1992); Salpichrólidos B, C y D (Veleiro et al., 1994); Salpi-
chrólidos E y F (Tettamanzi et al., 1996); Salpichrólidos G, H e I (Tettamanzi et al., 1998);
Salpichrólidos J, K, L, M y N (Tettamanzi et al., 2001) y Salpichrólidos O, P, Q y R (Ni-
cotra et al., 2013). Se muestran en las siguientes guras los compuestos recién nombrados
por tipo de esqueleto.
(a) Salpichrólido A (b) Salpichrólido B
(c) Salpichrólido C (d) Salpichrólido G
Figura 4.7: Salpichrólidos con Anillo D aromático con cadenal lateral sin modicar.
(a) Salpichrólido D (b) Salpichrólido L
(c) Salpichrólido N (d) Salpichrólido O
(e) Salpichrólido P (f) Salpichrólido Q
Figura 4.8: Salpichrólidos con esqueleto normal.

(a) Salpichrólido E (b) Salpichrólido F
(c) Salpichrólido H (d) Salpichrólido I
(e) Salpichrólido J (f) Salpichrólido K
(g) Salpichrólido M
Figura 4.9: Salpichrólidos con Anillo D aromático con cadenal lateral modicada.

A partir de lo anteriormente expuesto se plantea como objetivo el estudio toquímico
de las especies de Salpichroa. Esto implica,
Analizar la composición química.
Valorar su rol como marcador quimiotaxonómico.


Como se menciona en la Parte Experimental, Sección 4.6.3, todos los extractos de la
parte aérea fresca de cada planta, fueron sometidos a particiones y repetidas cromato-
grafías. A las fracciones que por CCD revelaban al UV, se le realizaron experimentos de
1
RMN- H para determinar la presencia o ausencia de w. en ellas.
A continuación se hará una breve presentación de la espectroscopía de RMN- H de los

1
w. para facilitar al lector el posterior análisis.
4.4.1. Espectroscopía de RMN-1 H de Salpichrólidos

Como se mencionó en la Sección 4.2, hasta ahora los w. aislados de Salpichroa origa-
nifolia presentan dos tipos de esqueleto diferentes, w. esquelo normal y w. con anillo D
aromático.
W. esqueleto normal: Las señales caracterísicas de los w. con esqueleto normal, Figura
4.10, a nivel general son:
El patrón de sustitución más frecuente en el anillo A da lugar a señales de dos

protones vinílicos en el rango de δ 6,0 - 6,7 correspondientes a los H-2 y H-3.
Estas señales son consistentes con un sistema 1-oxo-2-en, muy frecuente en los
w.
La cadena lateral da lugar a las señales del H-22 a δ 3,5 - 4,2 y principalmente
del H-26 a δ 4,98 a un elevado desplazamiento químico correspondiente a la
estructura de un epoxi-lactol.
Las señales de los metilos H3 -27 y H3 -28 se desplazan cerca de δ 1,4 conrmando
la presencia de una función epóxido en las posiciones C-24 y C-25.
W. anillo D aromático: Las señales particulares presentes en los w. con anillo D aro-
mático, Figura 4.11, son:
La presencia del anillo D aromático se evidencia por las señales que aparecen
en el rango δ 6,8 - 7,8 correspondiente a protones aromáticos. Por ejemplo en el
Salpichrólido A se observa un doblete a δ 7,12 corresponde al H-15, el doblete
a δ 6,98 al H-16 y el singlete a δ 6,89 al H-18.
En el anillo B es evidente la presencia de un 5α,6α epóxido por la aparición de

la señal a δ 3,22 d correspondiente al H-6. La multiplicidad y la constante de
acoplamiento indican que el epóxido es α (J = 4,7 Hz).
Con esta breve introducción a la espectroscopía RMN de los w. se presentan a continua-

ción los resultados correspondientes al estudio toquímico del material vegetal estudiado,
el cual se ha dividido en dos grupos; las especies que poseen y las que no poseen w.
1
Figura 4.10: Espectro de RMN- H del Salpichrólido R, w. con esqueleto normal, en CDCl3
a 400,13 MHz respecto a TMS
1
Figura 4.11: Espectro de RMN- H del Salpichrólido A, w. con anillo D aromático, en CDCl3
a 400,13 MHz respecto a TMS
4.4.2. Especies Salpichroa con ausencia de withanólidos

Se analizaron exhaustivamente los extractos de CH2 Cl2 y AcOEt de 14 especies Salpi-
chroa. En la Tabla 4.2 se muestran las especies que fueron estudiadas en esta Tesis. En la
cuarta columna se muestra el resultado como positivo o negativo haciendo referencia a la
presencia (+) o ausencia (-) respectivamente de estos metabolitos (Basso et al., 2016a).
Tabla 4.2: Resultados del estudio Fitoquímico de las especies pertenecientes al género
Salpichroa. Las Especies analizadas (14/22) fueron recolectadas e identicadas por la Dra.
Gloria Barboza (GB) y el Ing. Armando Hunziker (AH).
Especie Colector Procedencia Resultado

S. amoena GB 3428 Perú
S. dependens GB 3949 Perú
S. didierana GB 3417 Perú
S. gayi GB 3431 Perú
S. incaica GB 3415 Perú
S. lehmannii GB 1734 Argentina +
S. leucantha GB 3948 Perú
S. micrantha GB 3404 Perú
S. proboscidea GB 3411 Perú
S. ramosissima GB 3370 Perú
S. scandens GB 3042 Argentina +
S. scandens GB 3615 Bolivia +
S. tristis GB 3621 Bolivia
S. tristis GB 1711 Argentina
S. weberbaueri GB 3387 Perú
S. weddellii GB 3630 Bolivia
Como se puede apreciar en la Tabla 4.2, doce de las especies no presentaron w. en su

extracto. Este resultado fue inesperado ya que en el estudio Fitoquímico de otros géneros
pertenecientes a la Subfam. Solanoideae han presentado una alto porcentaje de especies con
contenido de w. en su extracto, como es el caso de Datura, Jaborosa, Physalis, Withania,
sólo por nombrar algunos (Misico et al., 2011). Ver Tabla 4.1, en la Sección 4.1.4.1. Por
otro lado, en otros géneros como Solanum (ca. 1500 especies) los w. han sido reportados
sólo en dos especies hasta ahora (Zhu et al., 2001a), (Zhu et al., 2001b), (Zhu et al., 2001c),
(Niero et al., 2006). Por lo que no es raro que los w. esten ausentes en algunas especies
de Salpichroa. A continuación se muestra en la Figura 4.12, una lámina con las especies
estudiadas que no presentaron w. en su extracto.
Como se mostró en la Tabla 4.2, de todas las especies antes descriptas, sólo dos presenta-
ron contenido withanólido. Estas especies son: Salpichroa lehmannii y Salpichroa scandens,
ésta última fue recolectada en dos lugares geográcos diferentes Bolivia y Argentina. Se
muestran estos resultados en la Sección 4.4.3, Sección 4.4.4 y Sección 4.4.5.
(a) S. gayi (b) S. tristis (c) S. ramosissima
(d) S. weberbaueri (e) S. incaica (f) S. micrantha
(g) S. leucantha
(h) S. didierana (i) S. proboscidea (j) S. amoena (k) S. dependens
Figura 4.12: Especies Salpichroa que fueron estudiadas en esta Tesis con ausencia de w.
4.4.3. Salpichrólidos aislados de Salpichroa lehmannii
Figura 4.13: Foto de Salpichroa lehmannii
(a) 1: Salpichrólido S (b) 2: 2-en-Salpichrólido S
(c) 3: Salpichrólido T (d) 4: Salpichrólido U
Figura 4.14: Salpichrólidos nuevos aislados de Salpichroa lehmannii

El extracto de la parte aérea fresca de S. lehmannii fue sometido a sucesivas etapas de

puricación para obtener cuatro nuevos withanólidos. Estos compuestos fueron nombrados
posteriormente como Salpichrólido S, 2-en-Salpichrólido S, Salpichrólido T y Salpichrólido
U, Figura 4.14 (Nicotra et al., 2013).
Además se obtuvieron cuatro compuestos reportados previamente; identicados como

7 8
Salpichrólido A ( ) (Veleiro et al., 1992), Salpichrólido C ( ) (Veleiro et al., 1994), Salpi-
9
chrólido D ( ) (Veleiro et al., 1994) y 2,3-dihidro Salpichrólido B ( 10). Ver Figura 4.15.
Todos los compuestos conocidos se aislaron previamente de muestras de S. origanifolia
recogidas en diferentes regiones y en diferentes épocas del año, excepto el compuesto semi-
sintético 2,3-dihidro Salpichrólido B, obtenido por hidrogenación de Salpichrólido B (Bado
et al., 2004), el cual se informa aquí por primera vez como un producto natural.
(a) 7: Salpichrólido A (b) 8: Salpichrólido C
(c) 9: Salpichrólido D (d) 10: 2,3-dihidro Salpichrolido B
Figura 4.15: Salpichrólidos conocidos aislados de Salpichroa lehmannii

4.4.3.1. Salpichrólido S (1)
9555
9526
9367
8942
9917
3050
2898
9750
8962
8921
8833
8789
8745
8691
8591
8349
8285
7833
7740
7596
7505
5413
5234
5073
4912
4736
4327
4168
3995
3447
3359
3278
3198
3112
9377
9284
1884
1793
1612
1529
1346
1263
3821
3665
2130
1988
0621
6.
6.
6.
6.
4.
4.
4.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
2.
2.
2.
2.
2.
2.
2.
2.
1.
1.
1.
1.
1.
7. 0 6. 5 6. 0 5. 5 5. 0 4. 5 4. 0 3. 5 3. 0 2. 5 2. 0 1. 5 1. 0
( ppm )
1
Figura 4.16: RMN- H a 400,13 MHz del Salpichrólido S ( ) respecto TMS (δ ). 1
Los espectros de RMN- H y RMN-

1 13 C de este compuesto mostraron señales de un w.
monoglicosilado, en donde el aglucón es el 2,3-dihidro Salpichrólido B ( 10), previamente

obtenido a partir de la reducción de 2,3-dihidrosalpichrólido A (Bado et al., 2004).
La principal diferencia observada entre los compuestos 1 y 7 es el desplazamiento de

la señal del C-1 (δ 80,8 en 1 y δ 72,2 en 7), consistente con la presencia de una sustitución
en la posición 1 de un glicósido. Esto fue conrmado por las correlaciones HMBC de H3 -
19/C-1 (1,06/80,8) y H-1'/C-1 (4,30/80,8). Se muestra en la Figura 4.17.
La identicación del azúcar se realizó mediante análisis de experimentos COSY, HSQC

y HMBC. Los desplazamientos químicos correspondientes al resto del azúcar estuvieron en
buena concordancia con la presencia de una D-glucosa. Las señales anoméricas de δH 4,30
(d, J = 7,6 Hz)/δC 105,0 fueron asignados a una unidad de β -glucopiranosil (Bravo et al.,
2001). Con el n de determinar la conguración absoluta de la glucosa, el compuesto 1 se
hidrolizó con ácido clorhídrico 3 M para producir D-glucosa.
El producto de esa hidrólisis se analizó por CCD contra un testigo de D-glucosa es-
tándar, en donde se obtuvo un valor de Rf idéntico, lo que conrmaría que el producto
de la hidrólisis fue la D-glucosa. Además se midió la rotación óptica de este producto, ob-
teniendose un valor positivo, el cual concuerda y conrma la presencia de este sustituyente.
1
Figura 4.17: HMBC del Salpichrólido S ( ) en CDCl3 con respecto a TMS, 400,13 MHz
4.4.3.2. 2-en-Salpichrólido S (2)
0243
9275
9143
8931
6. 0417
5. 7880
5. 7667
4. 9608
4. 3294
4. 3111
9408
9283
9041
8770
3. 7538
5367
5140
4810
4583
4480
4355
4275
4084
2823
2581
0454
0337
1. 9777
1. 9447
1. 3573
1. 1836
1. 1660
1. 0369
7.
6.
6.
6.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
7. 0 6. 5 6. 0 5. 5 5. 0 4. 5 4. 0 3. 5 3. 0 2. 5 2. 0 1. 5 1. 0
( ppm )
1
Figura 4.18: RMN- H a 400,13 MHz del 2-en-Salpichrólido S ( ) respecto TMS (δ ). 2
El Salpichrólido 2 no pudo ser obtenido en su forma pura por CCD en fase normal o
reversa. En consecuencia, fue caracterizado de una muestra que contenía la mezcla de 1y
2 en una proporción 1:1.

1 13 C muestran señales de un w. monoglicosilado, cuyo
aglucón es el Salpichrólido B, previamente aislado de S. origanifolia (Veleiro et al., 1994)

Figura 4.18.
La diferencia más grande observada en el espectro de RMN-

13 C es la señal correspon-
diente al C-1 que es de δ 70,9 para el Salpichrolido B y δ 79,7 para el compuesto 2. El

β -D-glucosa en la posición C-1 fue establecido usando una combinacion de los experimen-
tos COSY, HSQC y HMBC.
4.4.3.3. Salpichrólido T (3)

0839
0632
0600
8161
8104
8035
7979
7910
7853
7784
7728
0340
0283
0089
0033
9634
9440
9314
9170
9038
8991
8935
8828
8765
8715
8652
8546
8489
4250
2450
2324
1779
1716
1653
1289
1227
1164
4011
3842
3672
2487
2305
7.
7.
7.
6.
6.
6.
6.
6.
6.
6.
6.
6.
6.
6.
6.
4.
4.
4.
4.
4.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
1.
1.
1.
1.
1.
7. 5 7. 0 6. 5 6. 0 5. 5 5. 0 4. 5 4. 0 3. 5 3. 0 2. 5 2. 0 1. 5
( ppm )
1
Figura 4.19: RMN- H a 400,13 MHz del Salpichrólido T ( ) respecto TMS (δ ). 3

1 13 C muestran que los anillos A, B y D y la cadena
lateral están estrechamente relacionados a los de Salpichrólido A ( ), lo que indica que 7

diferían en el patrón de sustitución del anillo C.
El espectro de RMN- H de
1 3 exhibió una señal en δ 4,93 indicando la presencia de
un grupo β -hidroxi en la posición C-12. El patrón de acoplamiento spin-spin del H-12
(dd, J = 10,8; 5,0 Hz) indicó su orientación axial. El patrón de sustitución en el anillo C
fue conrmado por las correlaciones entre las señales observadas en el experiemto HMBC.
Las correlaciones claves observadas en este último fueron entre H-12/C-14 (4,93/137,2),
H-11α/C-12 (2,88/69,8) y H-11α/C-13 (2,88/139,7), Figura 4.20.
Otras diferencias obvervadas en los experimentos de RMN- H y RMN-

1 13 C fueron el
cambio del desplazamiento químico de H-18 a δ 6,90 para Salpichrólido A ( ) a 7 δ 7,43 para
3 y la resonancia del C-11 de δ 25,4 a 36,1 respectivamente.
Figura 4.20: Espectro HMBC del compuesto 3 en CDCl3 con respecto a TMS, 400,13 MHz
4.4.3.4. Salpichrólido U (4)
v
7740
7684
7615
7558
7489
7433
0246
0195
9995
9945
1901
1819
1738
1663
1581
1500
3. 6426
2418
2299
1647
1584
1515
1164
1095
1026
2. 1606
1. 3791
1. 2757
1. 2581
6.
6.
6.
6.
6.
6.
6.
6.
5.
5.
4.
4.
4.
4.
4.
4.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
6. 8 6. 4 6. 0 5. 6 5. 2 4. 8 4. 4 4. 0 3. 6 3. 2 2. 8 2. 4 2. 0 1. 6 1. 2
( ppm )
1
Figura 4.21: RMN- H a 400,13 MHz del Salpichrólido U ( ) respecto TMS (δ ). 4
El espectro IR reveló la presencia de un grupo hidroxilo (3459 cm

−1 ) y dos grupos
ceto (1708 y 1684 cm

−1 ). El Compuesto 4 1 13
exhibió espectros RMN- H y RMN- C estre-
chamente relacionados con los de los anillos A-D del Salpichrólido A ( ). Las principales 7
diferencias entre estas sustancias resultaron de las señales correspondientes a la cadena
lateral. Se hizo evidente en 4 la unión de C-17 a un sustituyente de cadena abierta, ya que
1
las señales características de RMN- H para esta cadena lateral fueron: (i) una señal en δ
4,17 (ddd, J = 12,6; 6,4 y 3,1 Hz) asignado a H-22 (ii) un doblete para el grupo metilo
C-21 en δ 1,27 (J =7,1 Hz), indicando la ausencia de un grupo hidroxi en C-20, y (iii) un
singlete a δ 2,16, típico de un grupo metilo unido a un carbonilo.
El espectro de RMN-
13 C del C -hidroxicetona (4) estaba de acuerdo con la estructura
25
propuesta por las señales a δ 71,8; 209,5 y 30,9 asignadas a C-22, C-24 y C-25 respectiva-
mente.
En la naturaleza, el Salpichrólido A puede preceder al compuesto 4 en términos de su

formación biosintética. Si la función 24,25-epoxi se abre, por ejemplo, hidrolizando a un
diol, la escisión retro-aldólica puede proceder, dando lugar al w. 4 (Begley et al., 1972).
Las conguraciones en C-20 y C-22 pueden ser asignadas como en Salpichrólido A (20R,
22S), basado en las consideraciones de biosíntesis antes mencionadas. Los w. con la misma
relación biogenética entre 4 y Salpichrólido A (Nic-17 y Nic-1, respectivamente) han sido
aislados de Nicandra physalodes (Begley et al., 1972), (Bates y Eckert, 1972).
4.4.4. Salpichrólidos aislados de Salpichroa scandens argentina
Figura 4.22: Salpichroa scandens argentina
5
Figura 4.23: Salpichrólido V ( ) aislado de
Salpichroa scandens de Argentina
De S. scandens recolectada en Argentina, se aisló un withanólido nuevo al que se

5
denominó Salpichrólido V ( ) (Figura 4.23), junto con cuatro compuestos reportados pre-
7 8
viamente; Salpichrólido A ( ) (Veleiro et al., 1992), Salpichrólido C ( ) (Veleiro et al.,
1994), Salpichrólido I (11) (Tettamanzi et al., 1998) y Salpichrólido S (1) (Nicotra et al.,
2013), Figura 4.24.
(c) 11: Salpichrólido I (d) 1: Salpichrólido S
Figura 4.24: Salpichrólidos conocidos aislados de Salpichroa scandens argentina

4.4.4.1. Salpichrólido V (5)
Metilos H3
19,27 y 28
H3-21
Aromáticos
H-15, 16 y 18
H-26 H-6 H-4
H-3 H-2 H-22
1
Figura 4.25: RMN- H a 400,13 MHz del Salpichrólido V ( ) respecto TMS (δ ). 5

1 13 C muestran que los anillos A, C y D y la cadena
lateral están estrechamente relacionados a los de Salpichrólido A, lo que indica que diferían
en el patrón de sustitución del anillo B.
La ausencia de la señal a δH 3,22 d y δC 64,7 correspondiente al 5α,6α epóxido corres-

pondiente al anillo B y la aparición de la señal a δH 4,07 t δC 64,0; sugieren una sustitución
diferente en C-6. Según datos reportados en bibliografía (Nicotra et al., 2003), los despla-
zamientos químicos en RMN-
13 C para el anillo B de C-5 a δ 77,5 y C-6 a δ 64,0, sugieren
una clorhidrina, con Cl en la posición C-6 y OH en C-5.
El espectro de masa de alta resolución del Salpichrólido V ( ) conrma la presen- 5

cia de cloro en la molécula. El valor teórico calculado para [M+Na]
+ es 509,2052. En la
Figura 4.26 se muestra el espectro, en el cual se seleccionaron dos zonas (A y B) para

un análisis más detallado. En la zona A; se observa el pico del ion molecular [M+Na]
+
(509,2066 para C28 H35 ClNaO5 ). La abundancia relativa de [M+Na+2]

+ y la relación 3:1
+ + +
entre [M+Na] y [M+Na+2] conrma la presencia de cloro en [M+Na] . En la zona B;
+
se muestra el ion [M+Na-HCl] , que corresponde a la molécula luego de la pérdida de HCl.
El patrón de sustitución en el anillo B fue conrmado por las correlaciones entre las
señales observadas en el experimeto HMBC. Las correlaciones claves observadas en este
último fueron entre H-6/C-5 (4,07/77,5), H-6/C-10 (4,07/52,9) y H-6/C-8 (4,07/32,9).
Zona A)
Zona B)
(A)
(B)
[M+Na]+
[M-HCl]+
[M-HCl+1]+
[M+Na+1]+
Figura
[M+Na+2]+
5
4.26: Espectrometría de masa de Alta Resolución del Salpichrólido V ( ) A) Zona
[M-HCl+2] +
ampliada del ion molecular B) Zona ampliada correspondiente a la pérdida de HCl.
El patrón de acoplamiento spin-spin del H-6 (t, J = 2,9 Hz) indicó su orientación axial,
Figura 4.27. Se conrma la orientación del H-6α y por lo tanto Cl-6β encontrando efecto
NOE entre H-6α (4,13 t) y el H-9 (2,16) ya que ambos protones estan en el mismo plano
y cercanos entre sí, Figura 4.28.
4.07
2.57
2.53
2.27
2.24
2.20
2.19
2.18
2.14
2.13
2.06
H-6 H-7β H-7α H-9
4.4 4.3 4.2 4.1 4.0 3.9 3.8 3.7 3.6 3.5 3.4 3.3 3.2 3.1 3.0 2.9 2.8 2.7 2.6 2.5 2.4 2.3 2.2 2.1 2.0 ppm
Figura 4.27: NOESY selectivo del Salpichrólido V ( ) respecto de TMS (δ ). 5
Figura 4.28: Estereoquímica del Salpichrólido V ( ) 5

4.4.5. Salpichrólidos aislados de Salpichroa scandens boliviana
Figura 4.29: Salpichroa scandens boliviana
Figura 4.30: Salpichrólido 6 aislado de

Salpichroa scandens de Bolivia
De S. scandens recolectada en Bolivia, se aisló un withanólido nuevo denominado 6

7
(Figura 4.30), junto con tres compuestos conocidos; Salpichrólidos A ( ) (Veleiro et al.,
8 5
1992), C ( ) (Veleiro et al., 1994), y el derivado clorhidrina anteriormente descripto ( ),
Figura 4.31.
(c) 5: Salpichrólido V (d) 1: Salpichrólido S
Figura 4.31: Salpichrólidos conocidos aislados de Salpichroa scandens boliviana

4.4.5.1. Salpichrólido 6
Metilos H3
19,27 y 28
H3-21
Aromáticos
H-15, 16 y 18
H-26
H-3 H-2 H-22
1
Figura 4.32: RMN- H a 400,13 MHz del Salpichrólido 6 respecto TMS (δ ).

1 13 C muestran que el compuesto 6 está estrechamente
8
relacionado al Salpichrólido C ( ), pero dieren en el patrón de sustitución del anillo B.
La señal a δC 77,4 correspondiente a la posición 5 es identica que en 8 conrmando un

OH, pero las señales a δH 3,36 y δC 82,1 correspondientes a la posición 6 y δH 1,79; 2,54
y δC 28,7 correspondientes a la posición 7, sugieren una sustitución diferente en C-6.
La aparición de dos nuevas señales en RMN-

13 C combinado con HSQC indican que δH
3,75; 3,42 a δC 65,0 y δH 1,36 t; 3,42 a δC 18,6 corresponden a un OEtilo.
4.5. Conclusiones
El enfoque de esta parte de nuestro trabajo se basó en el estudio Fitoquímico de espe-
cies pertenecientes al género Sapichroa y su posible rol como marcador quimiotaxonómico.
A continuación se presentan las conclusiones de este estudio.
Composición química
Fueron estudiadas 14 especies Salpichroa del total (22 si se incluye a N. formosa ), doce de
ellas no presentaron w. en su extracto. Estas son, S. tristis, S. ramosissima, S. weddellii,
S. didierana, S. proboscidea, S. amoena, S. gayi, S. weberbaueri, S. micrantha, S. incaica,
S. dependens y S. leucantha.
Sólo dos especies mostraron contenido w. en su extracto. Estas especies son, S. lehman-
nii y S. scandens. Esta última fue recolectada en dos lugares geogracos diferentes, una
muestra del norte argentino y la otra de la sierra boliviana.
Se aislaron seis compuestos w. nuevos (Salpichrólido S, 2-en-Salpichrólido S, Salpichró-

lido T, Salpichrólido U, Salpichrólido V y Salpichrólido 6) y cinco compuestos conocidos
(Salpichrólido A, Salpichrólido C, Salpichrólido D, Salpichrólido I y el 2,3-dihidro Salpi-
chrólido B). Estos compuestos están dentro de la categoría w. con anillo D aromático o w.
con esqueleto normal con oxidación en el anillo D, llamados Salpichrólidos.
Rol como marcador quimiotaxonómico

El hecho de que doce especies de las 22 que fueron estudiadas no presentaron contenido w.
fue inesperado comparado con los antecedentes de Jaborosa, las cuales todas las especies
estudiadas hasta el momento contienen w. En nuestro estudio se encontraron w. solamente
en un 20 % de las especies estudiadas del género. Es por esta razón que proponemos a los
Salpichrólidos como marcadores taxonómicos relativos a nivel genérico.
Podemos armar que son marcadores a nivel genérico porque de las especies que hasta
el momento fueron estudiadas y sí presentaron w., todas ellas contenían arreglos estructu-
rales exclusivos del género, arreglos característicos de los Salpichrólidos.
Pero son marcadores relativos por que, la ausencia de w. en el extracto de una especie
Salpichroa no signica que ésta no pertenezca al género. Pero la presencia, por otro lado,
lo conrmaría.
Por último, al comparar los w. aislados de Salpichroa con los aislados de Jaborosa,
géneros que tradicionalmente formaban parte de la misma Tribu, encontramos que los Sal-
pichrólidos son estructuralmente muy diferentes de los Sativólidos y Trechonólidos y otros
arreglos exclusivos de ese género. Estos resultados acompañan la propuesta logenética de
que Jaborosa y Salpichroa estén distantes.
4.6. Parte Experimental

4.6.1. Materiales y Métodos
Para lograr los objetivos propuestos se recurrió a técnicas de extracción, puricación
y caracterización para separar y puricar los compuestos de interés del material vegetal y
para determinar sus estructuras.
4.6.1.1. Técnicas Cromatográcas

La cromatografía es un método de separación que se basa en las diferentes anidades
de un compuesto por una fase móvil y otra estacionaria. Para puricar los metabolitos se
emplearon una combinación de estas técnicas cromatográcas.
Cromatografía en Columna en Fase Normal (CC): En este caso se empleó Sílica Gel 60
G (70-230 mesh ASTM; 0,063-0,200 mm de diámetro de partícula o 230-400 mesh ASTM;
0,040-0,063 mm), Merck. La muestra a separar se aplicó como cabeza, adsorbida en sílica
(pastilla de siembra).
Cromatografía en Columna en Fase Reversa (CCFR): Se empleó Sílica gel 100 C18 -RF;
0,040-0,063 mm (230-400 Mesh, ASTM), Fluka.
Cromatografía en Capa Delgada en Fase Normal (CCD): En todos los casos se utili-
zaron cromatofolios base aluminio o vidrio (20x20 cm) de sílica gel 60 G (Merck) o Sil
G-100 (Macherey-Nagel) de 0,25 mm de espesor, con indicador de uorescencia de 254 nm
(F254 ). La detección de los productos en las placas se realizó por uorescencia, empleando
una lámpara ultravioleta a una longitud de onda de 254 ó 360 nm, y óleum (disolución de
H2 SO4 :EtOH 2:8) y con posterior calentamiento a 120◦ C.
Cromatografía en Capa Delgada de Alta Resolución (CCAR): Estas cromatografías

se realizaron en placas NANO-SIL 20 UV 254 de 10x10 cm, soporte vidrio, de 0,2 mm
de espesor, que contienen nanosílica 60, de tamaño de partícula 2-10 µm, de la marca
Macherey-Nagel.
Cromatografía de Exclusión Molecular (CEM): Para este tipo de cromatografía se uti-

lizó como fase estacionaria Sephadex LH-20 de la marca Sigma, que requiere una previa
estabilización del polímero en una suspensión con MeOH (4,1 mL/g) durante, al menos,
12 Hs. A continuación se virtió en la columna y se dejó reposar 1 hora. Se eluyó la co-
lumna con MeOH. La muestra a cromatograar se disolvió en el solvente de elución a una
concentración no superior al 5 % del volumen muerto de la columna.
4.6.1.2. Espectroscopía de Resonancia Magnética Nuclear

1
Los espectros de RMN- H, RMN-
13 C y los experimentos en dos dimensiones fueron
◦
tomados a temperatura ambiente (25 C) en un equipo Bruker AVANCE II AV-400 (400,13
1
MHz para H y 100,63 MHz para
13 C) o un VARIAN direct drive (499,79 y 600,24 MHz
1
para H; 125,68 y 150,95 MHz para
13 C).
4.6. Parte Experimental 129
Los espectros de Resonancia Magnética Nuclear (RMN) se llevaron a cabo en disolu-

ción de cloroformo deuterado (CDCl3 , 99,8 % Sigma Aldrich) empleando Tetrametilsilano
(TMS) como referencia interna. Los desplazamientos químicos (δ ) se indican en partes por
millon (ppm) y están referenciados respecto a la señal del TMS. Las constantes de acopla-
1
miento (J ) en los espectros de RMN de Protón (RMN- H) se expresan en Hertz (Hz).
Las asignaciones de los distintos protones y carbonos se llevaron a cabo mediante el aná-
lisis de los experimentos de correlación homo y heteronucleares: Correlation Spectroscopy
(COSY), Heteronuclear Single-Quantum Correlation (HSQC), H-Detected Multiple-Bond
Heteronuclear-Quantum Coherence (HMBC) y Nuclear Overhauser Eect SpectroscopY
(NOESY).
4.6.1.3. Espectroscopia Infrarroja

Los espectros Infrarrojo (IR), se realizaron en espectrofotómetros Nicolet 5-SXC-FTIR.
Los productos se disolvieron en cloroformo grado espectroscópico en todos los casos y se
aplicaron en forma de película sobre una pastilla de cloruro de plata de 0,2 mm de espesor.
Los valores de número de onda se expresan en cm
−1 .
4.6.1.4. Espectroscopia Ultravioleta

Los espectros Ultravioleta (UV) se llevaron a cabo en un espectrofotómetro Shimadzu
UV 260 con celdas de cuarzo 1 mL de volumen y 1 cm de paso óptico empleando MeOH
grado espectroscópico como disolvente. Los valores de la longitud de onda máxima de
absorción (λ) se expresan en nanómetros (nm).
4.6.1.5. Espectrometría de masas

Los espectros de masas de alta resolución se realizaron empleando las técnicas por
electrospray (ESI), en los siguientes modelos de espectrómetros: Micro TOF II Bruker
Daltonics o Waters model LCT Premier XE. Las señales se describen en unidades de
masa/carga (m/z) y entre paréntesis se indica el ión al que corresponde y las intensidades
relativas de cada señal respecto al pico base.
4.6.1.6. Rotación Óptica Especíca ([α]21 D )

La actividad óptica se midió en un polarímetro JASCO P-1010. Las medidas se toma-
ron usando la línea D de sodio (589 nm), a una temperatura de 20◦ C. Los productos se
disolvieron en MeOH, calidad HPLC. La longitud de las celdas empleadas para las medidas
fue de 10 cm, y la concentración de cada muestra se expresa en g/100 mL de disolución.
4.6.1.7. Solventes y Reactivos

Todos los solventes utilizados para puricación fueron destilados antes de ser utilizados:
Acetato de Etilo (AcOEt), Hexano (Hx), Metanol (MeOH), Etanol (EtOH) y Diclorome-
tano (CH2 Cl2 ). Para las cromatografías en fase normal, las combinaciones de solventes más
empleadas fueron: Hx:AcOEt (en gradiente de polaridad creciente, 1:0 a 0:1) AcOEt:MeOH
(en gradiente de polaridad creciente, 1:0 a 0:1) CH2 Cl2 :MeOH (en gradiente de polaridad
creciente, 1:0 a 4:1)
4.6.2. Material Vegetal

El material vegetal que se utilizó, se obtuvo a través de viajes de campo al Norte de
Argentina (Salta y Jujuy), Bolivia y Perú, durante Enero y Febrero del 2012 y 2013. Para
ello, se contó con convenios realizados con botánicos de dichos países que facilitaron y
garantizaron la búsqueda y recolección de las especies a ser estudiadas. En la siguiente
Tabla 4.3, se muestran las especies recolectadas e identicadas por la Botánica Dra. Gloria
Barboza (GB), seguido del número con el que están registradas en el Museo Botánico de
Córdoba (CORD), Universidad Nacional de Córdoba.
Tabla 4.3: Especies del género Salpichroa. 14/22 analizadas para el estudio toquímico.
n Especie Colector Procedencia

1 S. amoena GB 3428 Urubamba, Cuzco. Perú.
2 S. dependens GB 3949 Junín, camino a Pariahuanca. Perú
3 S. didierana GB 3417 Urubamba, Cuzco. Perú
4 S. gayi GB 3431 Urubamba, Cuzco.Perú
5 S. incaica GB 3415 Quello-Quello, Cuzco. Perú
6 S. lehmannii GB 1734 Yaví Chico, Jujuy. Argentina
7 S. leucantha GB 3948 Salpo, Junín. Perú
8 S. micrantha GB 3404 Pisaq, Cuzco. Perú
9 S. proboscidea GB 3411 Paucartambo, Cuzco. Perú
10 S. ramosissima GB 3370 Matucana, Lima. Perú
11 S. scandens GB 3042 Tafí, Tucumán. Argentina
S. scandens GB 3615 Quillacollo, Cochabamba. Bolivia
12 S. tristis GB 3621 Carrasco, Cochabamba. Bolivia
S. tristis GB 1711 Inernillo, Tucumán. Argentina
13 S. weberbaueri GB 3387 Canta, Lima. Perú
14 S. weddellii GB 3630 Cercado, Oruro. Bolivia.
4.6.3. Extracción y Puricación

Todas las muestras, material vegetal fresco, fueron sometidas a maceración en etanol
(EtOH) y se extrajo al menos 3 veces. Se evaporó el solvente a presión reducida. Al extrac-
to etanólico se le adicionó agua y a la mezcla hidroalcohólica se la particionó con Hx en
una proporción Hx-EtOH-H2 O (10:3:1) 3 veces para eliminar lípidos y pigmentos. Poste-
riormente se eliminó el etanol por evaporación a baja presión. La fase acuosa resultante se
extrajo con CH2 Cl2 (1:1) 3 veces, siendo ésta la fracción de interés. Posteriormente a la fase
acuosa se le hizo una última partición con AcOEt (1:1) 3 veces, la cual fue analizada con
experimentos de RMN en busca de w. de alta polaridad. Los extractos orgánicos se secaron
con Na2 SO4 anhidro, se ltraron y se concentraron a sequedad. Todos los extractos de la
Fase CH2 Cl2 se sometieron a CEM. Sobre las fracciones de interés, analizadas por CCD,
1
se realizaron espectros de RMN H. Aquellas fracciones que presentaron señales caracterís-
ticas de los w. fueron sometidas a sucesivas técnicas cromatográcas a n de puricar los
compuestos de interés. Este procedimiento se muestra en el diagrama de la Figura 4.33.
Material Vegetal Fresco
Extracción
EtOH
3 veces
Evaporación EtOH
Primer Partición
Fase Hx Hx: EtOH: H2O
(10:3:1)
Evaporación EtOH
Cromatografía Segunda Partición

CEM Fase CH2Cl2 H2O : CH2Cl2
(1:1)
Tercera Partición
Fase AcOEt H2O : AcOEt
(1:1)
Figura 4.33: Diagrama de Extracción y Partición del Material Vegetal

4.6.3.1. Extracción y Puricación de w. de S. lehmannii

Material Vegetal
Se utilizó una muestra de material vegetal que fue recolectada por Barboza G., Oberti
J. C. y Matesevach en Argentina, Prov. Jujuy, Depto. Yavi, Yavi Chico, camino hacia la
escuela Rosario Wayal, a 3400 m.s.m., 22◦ 05'54 S; 65◦ 27'18 O. Fecha de recolección: 21-
III-2006. La especie, Abundante sobre Prosopis, con frutos maduros amarillentos . Identi-
cada como Salpichroa lehmannii por la Dra. Gloria Barboza y depositada en el Herbario
del Museo de la UNC con el número GB 1734.
Figura 4.34: Salpichroa lehmannii

Extracción y Puricación
Las hojas frescas de Salpichroa lehmannii (700 g) se trituraron con EtOH a tempera-
tura ambiente inmediatamente después de la recolección, se dejó en maceración y luego
el extracto de EtOH se concentró bajo presión reducida. Se desgrasó por partición con
Hx-EtOH-H2 O (10:3:1).
La Fase EtOH-H2 O se particionó con Hexano (3 x 300 mL), y el EtOH se evaporó a

presión reducida. El residuo se diluyó con H2 O y se extrajo con CH2 Cl2 (3 x 200 mL).
La fase orgánica se secó con Na2 SO4 anhidro, luego se ltró, y se evaporó hasta seque-
dad a presión reducida. El residuo (1,8 g) se sometió a CC con la mezcla de solventes
n-Hx-AcOEt y AcOEt-MeOH, de polaridad creciente para dar seis fracciones (I-VI) que
contuvieron withanólidos.
Fracción I [Hx-AcOEt (60:40), 330 mg] se sometió a CC, eluyendo con mezclas de po-
laridad creciente de n-hexano-AcOEt y AcOEt-MeOH para dar compuestos Salpichrólido
7
A ( ) (150,1 mg) y 2,3 dihidro Salpichrólido B ( 10) (60,3 mg).
Fracción II [Hx-AcOEt (40:60), 140 mg] se sometió a CC con n-hexano, mezclas de

8
polaridad creciente de AcOEt obteniéndose el Salpichrólido C ( ) (50,2 mg).
Fracción III [Hx-AcOEt (10:90), 120 mg] se separó mediante cromatografía en colum-
na con n-hexano-AcOEt y mezclas de AcOEt-MeOH de polaridad creciente para dar dos
fracciones principales que contienen withanólidos: A (4,0 mg) y B (34,0 mg). Fracción A se
fraccionó por CCD preparativa con CH2 Cl2 -MeOH (94:6) obteniendo Salpichrólido U ( ) 4
(2,0 mg), mientras que la Fracción B se cromatograó con n-hexano-AcOEt (30:70) para
3
dar Salpichrólido T ( ) (4,0 mg).
Fracción IV [AcOEt-MeOH (98: 2), 130 mg] se cromatograó en C18 sílica gel usando
1
MeOH- H2 O (55:45), obteniéndose Salpichrólido S ( ) (41,0 mg).
Fracción V [AcOEt-MeOH (95: 5), 100 mg] se cromatograó en fase reversa usando
MeOH-H2 O (55:45). La fracción obtenida resultó una mezcla (8 mg), a la cual se le realizó
una CCD con CH2 Cl2 -MeOH (95:5) pero no pudo ser puricada por ninguna de los dos
1
tipos de cromatografías, ni de fase reversa ni fase normal. El espectro de RMN- H indicó
1 2
que esa mezcla consistiá en los compuestos Salpichrólido S ( ) y 2-en-Salpichrólido S ( )
en una proporción 1:1.
Fracción VI [AcOEt-MeOH (92: 8), 65 mg] se cromatograó con la mezcla de polaridad

9
creciente de AcOEt-MeOH para dar Salpichrólido D ( ) (7,0 mg).
A continuación, en la Figura se muestra el diagrama de separación cromatográca de

los componentes de S. lehmannii.
134
Material Vegetal
Salpichroa lehmannii
(700 g)
Extracción
Partición
Hx: AcOEt
Fase CH2Cl2 100:0 a 0:100
(1,8 g) AcOEt: MeOH
100:0 a 90:10
Fracción Fracción Fracción Fracción Fracción Fracción

I II III IV V VI
CC CC CC CC CC CC
Hx: AcOEt Hx: AcOEt Hx: AcOEt AcOEt:MeOH AcOEt:MeOH AcOEt:MeOH
60:40 40:60 10:90 98:2 95:5 92:8
(330 mg) (140 mg) (120 mg) (130 mg) (100 mg) (65 mg)
CCFR CCFR CCFR

CC CC CC
AcOEt:MeOH AcOEt:MeOH AcOEt:MeOH AcOEt:MeOH AcOEt:MeOH AcOEt:MeOH
55:45 55:45 55:45
Fracción Fracción
CCD
A CCD B CC preparativa
(4,0 mg) preparativa (34,0 mg) Hx: AcOEt CH2Cl2:MeOH
CH2Cl2:MeOH 30:70
(94:6) (95:5)
10 7 8 4 3 1 1 y 2 9
Di hidro Salp B Salp A Salp C Salp U Salp T Salp S Salp S y 2enSalp S Salp D
(63,3 mg) (150 mg) (50,2 mg) (2,0 mg) (4,0 mg) (41,0 mg) (8,0 mg) (7,0 mg)
Capítulo 4.
Figura 4.35: Diagrama de separación cromatográca de Salpichroa lehmannii

Fitoquímica
4.6.3.2. Extracción y Puricación de w. de S. scandens argentina

Material Vegetal
Se trabajó con una muestra de material vegetal recolectada por Barboza G. y Oberti
J. C. en Argentina, Prov. Tucumán, Depto. Tafí, desde Ta del Valle rumbo a Amaicha
del Valle. Km 89/90, a 2845 m s.m., 26◦ 42'12,9 S; 65◦ 47'58 O. Fecha de recolección:
10-IV-2011. Identicada como Salpichroa scandens por la Dra. Gloria Barboza, se depositó
en el Herbario del Museo de la UNC con el número GB 3042.
Figura 4.36: Salpichroa scandens argentina

Las hojas frescas de Salpichroa scandens argentina (590 g) se trituraron con EtOH a
temperatura ambiente inmediatamente después de la recolección, se dejó en maceración y
luego el extracto de EtOH se concentró bajo presión reducida hasta obtener un residuo de
22,9 g. Éste se desgrasó por partición con Hx-EtOH-H2 O (10:3:1).
La Fase EtOH-H2 O se particionó con Hexano (3 x 300 mL), y el EtOH se evaporó a

presión reducida. El residuo se diluyó con H2 O y se extrajo con CH2 Cl2 (3 x 200 mL).
La fase orgánica se secó con Na2 SO4 anhidro, luego se ltró, y se evaporó hasta sequedad
a presión reducida. El residuo (1,85 g) se sometió a CEM usando MeOH como único sol-
vente. Las cuatro fracciones (I-IV) obtenidas fueron sometidas a CC usando mezclas de
solventes CH2 Cl2 :MeOH y AcOEt, en proporciones de polaridad creciente hasta obtener
los compuestos puricados.
Fracción I [316,1 mg] se sometió a CC, eluyendo con mezclas de polaridad creciente de
7
CH2 Cl2 :MeOH para dar Salpichólido A ( ) (185,9 mg) y una Fracción A (17,0 mg) que se
fraccionó en CCD preparativa con CH2 Cl2 :MeOH al 6 % obteniendose Salpichrólido I ( 11)
7
(7,4 mg) y Salpichólido A ( ) (3,5 mg).
Fracción II [89,7 mg] se sometió a CC con CH2 Cl2 :MeOH en mezclas de polaridad
1
creciente para dar Salpichólido S ( ) (8,1 mg) y una Fracción B (26,2 mg) que se fraccionó
5
en CCD preparativa con CH2 Cl2 :MeOH al 2 % obteniendose Salpichrólido V ( ) (9,6 mg)
7
y Salpichólido A ( ) (8,0 mg).
Fracción III [340,7 mg] se sometió a CC con AcOEt al 100 % para dar Salpichólido C
8
( ) (25,2 mg).
A continuación, en la Figura 4.37, se muestra el diagrama de puricación de la Fase

CH2 Cl2 de S. scandens.
Material Vegetal
Salpichroa scandens arg.
arg
(590g)
Extracción
Partición
Fase CH2Cl2
CEM
MeOH
Fracción Fracción Fracción

I II III
(316,1 mg) (89,7 mg) (340,7mg)
CC CC CC
MeOH:CH2Cl2 MeOH:CH2Cl2 AcOEt
2% 5% 100%
7 1
Salp A Salp S
(185,9 mg) (8,1 mg)
Fracción A Fracción B
(17,0 mg) CCD (26,2 mg)
CCD
preparativa preparativa
MeOH:CH2Cl2 MeOH:CH2Cl2
6% 2%
11 7 5 7 8
Salp I Salp A Salp V Salp A Salp C
(7,4 mg) (3,5 mg) (9,6 mg) (8,0 mg) (25,2 mg)
Figura 4.37: Diagrama de separación cromatográca de Salpichroa scandens argentina

137
4.6.3.3. Extracción y Puricación de w. de S. scandens boliviana

Material Vegetal
Se trabajó con una muestra vegetal recolectada por Barboza G., Cossa T. y Basso A. en
Bolivia, Dpto. Cochabamba. Prov. Quillacollo: Sipe-Sipe, en un baldío del pueblo, a 2590
m s.m., 17◦ 27'6,6 S; 66◦ 21'11,6 O. Fecha de recolección: 28-II-2012. La especie, Planta
poco pegajosa , fue depositada en el Herbario del Museo de la UNC con el número GB 3615.
Figura 4.38: Salpichroa scandens boliviana

Las hojas frescas de Salpichroa scandens boliviana (1,0 kg) se trituraron con EtOH a
temperatura ambiente inmediatamente después de la recolección, se dejó en maceración
y luego el extracto de EtOH se concentró bajo presión reducida hasta obtener 31,1 g de
residuo. Éste se desgrasó por partición con Hx-EtOH-H2 O (10:3:1).
La fase EtOH-H2 O se particionó con Hexano (3 x 300 mL), y el EtOH se evaporó a

presión reducida. El residuo se diluyó con H2 O y se extrajo con CH2 Cl2 (3 x 200 mL). La
fase orgánica se secó con Na2 SO4 anhidro, luego se ltró, y se evaporó hasta sequedad a
presión reducida. El residuo (6,2 g) se sometió a CEM usando MeOH como único solvente.
Las dos fracciones (I-II) obtenidas fueron sometidas a CC usando mezclas de solventes
CH2 Cl2 :MeOH en proporciones de polaridad creciente hasta obtener los compuestos puri-
cados.
Fracción I [738,5 mg] se sometió a CC, eluyendo con mezclas de polaridad creciente de
CH2 Cl2 :MeOH para dar dos fracciones en mezcla. La Fracción A (31,0 mg) a la cual se
la sometió a CCD preparativa con CH2 Cl2 :MeOH al 2 % obteniendose Salpichrólido A ( )7
(8,8 mg) y la Fracción B (27,0 mg) se la sometió a CCD preparativa con CH2 Cl2 :MeOH
1 6
al 2 % obteniendose Salpichrólido S ( ) (4,8 mg) y el Salpichrólido ( ) (2,7 mg)
Fracción II [1,46 g] se sometió a CC con CH2 Cl2 :MeOH en mezclas de polaridad cre-
7
ciente para dar Salpichrólido A ( ) (239,0 mg), la Fracción C (40,0 mg) y Salpichrólido C
8
( ) (150,0 mg). La Fracción C se sometió a CCD preparativa con CH2 Cl2 :MeOH al 4 %
7 5
obteniendose Salpichólido A ( ) (2,8 mg) y el Salpichrólido V ( ) (3,7 mg).
A continuación, en la Figura 4.39, se muestra el diagrama de puricación de la Fase

CH2 Cl2 de S. scandens de Bolivia.
4.6.4. Caracterización de los Compuestos Nuevos

Se muestran las tablas con los desplazamientos químicos asignados a los compuestos
nuevos antes mencionados. Tabla 4.4, Tabla 4.5 y Tabla 4.7. Luego, a cada compuesto
nuevo se lo caracteriza por completo con sus datos físicos y espectroscópicos.
140
Material Vegetal
Salpichroa scandens bol.
(1,0 Kg)
Extracción
Partición
Fase CH2Cl2 CEM

MeOH
Fracción Fracción
I II
CC (738,5 mg) (340,7 mg)
MeOH:CH2Cl2
2%
Fracción A Fracción B
(31,0 mg) (27,0 mg)
CC
7 MeOH:CH2Cl2 8
CCD
preparativa Salp A 5% Salp C
CCD (239,0 mg) (120 mg)
MeOH:CH2Cl2 preparativa
6% MeOH:CH2Cl2
5%
Fracción C
(40 mg)
7 6 1 5 7
Salp A Salp Salp S Salp V Salp A
(8,0 mg) (2,7 mg) (4,8 mg) (3,7 mg) (2,8 mg)
Capítulo 4.
Figura 4.39: Diagrama de separación cromatográca de Salpichroa scandens boliviana

Fitoquímica
1
Tabla 4.4: Desplazamientos Químicos en RMN- H a 400,13 MHz de Salpichrólidos S ( ) 1
2
y 2-en-Salpichrólido S ( ), aislados de S. lehmannii respecto de TMS (δ ). Constante de
acoplamiento J entre paréntesis en Hz.
Posición Salpichólido S 2-en-Salpichólido S

1 2
1 3,97 s 3,97 an
2α 2,16 td (13,3; 4,2) 6,06 s
2β 1,85 m -
3α 2,06 da (14,1) 5,78 an
3β 1,01 da (14,1) -
4α - 2,67 m
4β - 1,68 m
5 - -
6 2,92 d (4,7) 3,04 d (4,7)
7α 1,85 m 1,32 m
7β 2,62 ddd (15,2; 7,8; 4,7) -
8 2,81 m 2,77 m
9 2,24 ta (11,9) 2,32 m
10 - -
11α 1,79 m 1,75 m
11β 1,28 m 1,29 m
12α 2,80 m 2,89 m
12β 2,70 m 2,73 m
13 - -
14 - -
15 7,06 d (8,1) 7,02 an
16 6,95 dd (8,1; 1,5) 6,94 an
17 - -
18 6,89 s 6,89 an
19 1,06 s 1,04 s
20 2.67 q (6,8) 2,67 m
21 1,21 d (7,1) 1,17 d (7,0)
22 3,88 ddd (10,9; 6,5; 2,1) 3,91 m
23α 1,89 dd (14,2; 2,4) 1,96 d (13,2)
23β 1,57 dd (14,2; 11,4) 1,57 dd (14,1; 11,5)
24 - -
25 - -
26 4,99 s 4,96 s
27 1,38 s 1,36 s
28 1,37 s 1,36 s
1' 4,30 d (7,6) 4,32 d (7,3)
2' 3,42 t (7,9 ) 3,46 m
3' 3,49 t (8,8) 3,47 m
4' 3,52 t (8,9 ) 3,52 m
5' 3,33 dt (8,1; 4,3) 3,27 m
6'α 3,84 dd (11,9; 3,2) 3,77 m
6'β 3,77 dd (11,9; 4,7) 3,77 m
Tabla 4.5: Desplazamientos Químicos en RMN-H

1 a 400,13 MHz de Salpichrólidos T (3) y
4
U ( ) aislados de S. lehmannii respecto de TMS (δ ). Constante de acoplamiento J entre
paréntesis en Hz.
Posición Salpichólido T Salpichólido U

3 4
1 3,97 s 3,97 an
2 6,02 dd (10,3; 3,0) 6,01 ddd (10,1; 2,9; 1,0)
3 6,78 ddd (10,3; 5,0; 2,3) 6,77 ddd (10,1; 5,0; 2,2)
4α 1,92 dd (19,6; 5,0) 1.91 ddd (19,5; 5,0; 1,0)
4β 3,14 dt (19,6; 2,8) 3,14 dt (19,6; 2,6)
5 - -
6 3,23 d (5,0) 3,24 d (4,8)
7α 1,83 m 1,84 td (13,8; 2,9)
7β 2,68 m -
8 2,80 m 2,76 m
9 2,21 td (12,1; 1,8) 2,09 td (11,7; 2,3)
10 - -
11α 2,88 ddd (11,4; 5,0; 1,8) 2,59 m
11β 1,32 m 1,29 td (12,0; 4,3)
12α 4,93 dd (10,8; 5,0) 2,93 ddd (16,5; 12,2; 4,4)
12β 2,70 m 2,75 m
13 - -
14 - -
15 7,12 d (8,3) 7,15 d (8,0)
16 7,09 dd (8,3; 1,5) 7,02 dd (8,0; 1,6)
17 - -
18 7,43 s 6,95 sa
19 1,40 s 1,38 s
20 2,79 m 2,76 m
21 1,24 d (7,0) 1,27 d (7,1)
22 3,87 ddd (11,3; 5,8; 2,5) 4,17 ddd (12,6; 6,4; 3,1)
22-OH - 3,65 s
23α 1,85 m 2,61 m
23β 1,58 m 2,49 dd (17,1; 9,5)
24 - -
25 - 2,16 m
26 4,98 d (9,0) 4,96 s
26-OH 3,43 d (9,0) 4,96 s
27 1,38 s 1,36 s
28 1,37 s 1,36 s
Tabla 4.6: Desplazamientos Químicos en RMN-H

1 a 400,13 MHz de Salpichrólidos V 5 y
Salpichrólido 6 aislados de S. scandens respecto de TMS (δ ). Constante de acoplamiento
J entre paréntesis en Hz.
Posición Salpichólido V Salpichólido

5 6
1 - -
2 5,91 dd (10,2; 2,8) 5,93 dd (10,2; 2,1)
3 6,57 ddd (10,2; 5,1; 2,2) 6,63 ddd (10,2; 5,1; 2,1)
4α 2,22 m 3,35 m
4β 3,41 dt (19,8; 2,8) 2,08 m
5 - -
6 4,07 t (2,9) 3,36 s
7α 2,54 m
7β 2,23 1,79 m
8 3,14 ta (11,8) 2,98 m
9 2,16 m 2,18 m
10 - -
11α 2,41 da (12,2) 2,49 m
11β 1,33 m 1,40 m
12α 2,97 m 3,02 s
12β 2,75 da (17,0) 2,80 m
13 - -
14 - -
15 7,14 d (8,2) 7,24 d (8,1)
16 6,94 dd (8,2; 1,2) 7,00 dd (24,9; 6,3)
17 - -
18 6,88 sa 6,94 s
19 1,36 s 1,39 s
20 2,68 m -
21 1,18 d (7,1) 1,26 m
22 3,79 ddd (11,3; 5,7; 2,6) 3,86 ddd (11,3; 5,9; 2,4)
23α 1,77 dd (14,4; 2,5) 1,83 m
23β 1,51 m 1,59 m
24 - -
25 - -
26 4,92 d (9,9) 4,99 sa
26-OH 3,35 d (9.9) -
27 1,31 s 1,34 s
28 1,29 s -
1'α - 3,75 m
1'β - 3,42 m
2' - 1,36 m
Tabla 4.7: Desplazamientos Químicos en RMN-C

13 a 100,63 MHz de Salpichrólidos S (1),
2 3 4 5 6
2-en-Salpichrólido S ( ), T ( ), U ( ), V ( ) y Salpichrólido ( ) respecto de TMS (δ ).
Constante de acoplamiento J entre paréntesis en Hz.
C Salp. S 2-en-Salp. S Salp. T Salp. U Salp. V Salp.

1 2 3 4 5 6
1 80,7 79,7 202,2 202,6 203,0 204,2
2 28,0 126,5 128,8 128,9 129,1 128,5
3 30,0 128,7 142,6 142,5 141,1 141,5
4 30,0 32,4 34,2 33,2 37,1 35,3
5 64,8 62,5 64,5 64,6 77,5 77,4
6 57,6 56,8 58,8 59,0 64,0 82,1
7 30,0 30,1 30,2 30,4 35,0 28,7
b
8 32,1 32,7 33,5 33,6 32,9 32,6
b
9 34,5 34,7 33,7 36,4 38,8 38,3
10 40,5 39,8 48,3 48,7 52,9 52,7
11 22,2 23,0 36,1 25,3 26,0 25,7
12 30,0 30,5 69,8 30,6 31,0 30,7
13 138,6 139,0 139,7 138,2 137,8 137,6
14 136,5 138,3 137,2 137,5 137,3 138,1
15 125,8 126,8 126,1 126,8 126,1 125,5
16 126,4 126,4 127,2 125,6 125,7 125,0
17 140,6 140,9 141,2 140,2 140,9 140,5
18 128,0 128,4 125,9 128,5 129,5 129,0
19 15,8 16,0 14,2 14,8 16,3 16,4
20 43,2 43,8 43,2 44,6 43,3 42,8
21 17,7 18,3 17,3 17,1 17,6 17,0
22 67,6 68,1 67,4 71,8 67,8 67,2
b
23 34,2 34,8 33,4 47,4 34,0 33,5
a
24 64,1 64,6 64,9 209,5 65,2 64,9
a
25 63,3 63,5 63,7 30,9 64,0 63,6
26 91,6 92,0 91,7 - 91,7 91,6
27 16,6 17,2 16,5 - 16,9 14,7
28 18,6 19,1 18,8 - 19,1 18,6
1' 105,0 76,6 65,0
2' 76.4 143,5 18,6
3' 73,5 73,7
4' 70,0 70,4
5' 75,4 75,9
6' 62,0 62,6
a, b
Estos valores pueden ser intercambiables.
4.6.4.1. Salpichrólido S (1)
(20S, 22R, 24S, 25S, 26R)-5α,6α:22,26:24,25-triepoxi-1α-O-D-glucosil-26-hidroxi-17

(13 → 18) abeo-ergosta-13,15,17-trieno.
Cristales incoloros (Hx-AcOEt); Pf 153 − 155◦ C; [α]21 D -53,3 (c 1,2; CH2 Cl2 ); UV
(MeOH) λ max (log ) 215 (3,96) nm; IR (película seca) ν max 3416, 2934, 1505, 1081, 1034
y 754 cm
−1 .
RMN-1 H (CDCl3 - D2 O (95:05); 400,13 MHz) δ 7,06 (1H; d; 8,1; H-15); 6,95 (1H;
dd; 8,1; 1,5; H-16); 6,89 (1H; sa; H-18);4,99 (1H; s; H-26); 4,30 (1H; d; 7,6; H-1'); 3,97 (1H;
sa; H-1); 3,88 (1H; ddd; 10,9; 6,5; 2,1; H-22); 3,84 (1H; dd; 11,9; 3,2; H-6á); 3,77 (1H; dd;
11,9; 4,7; H-6); 3,52 (1H; t; 8,9; H-4'); 3,49 (1H; t; 8,8; H-3'); 3,42 (1H; t; 7,9; H-2'); 3,33
(1H; dt; 8,1; 4,3; H-5'); 2,92 (1H; d; 4,7; H-6); 2,81 (1H; m; H-8); 2,80 (1H; m; H-12α); 2,70
(1H; m; H-12β ); 2,67 (1H; q; 6,8; H-20); 2,62 (1H; ddd; 15,2; 7,8; 4,7; H-7β ); 2,24 (1H; ta;
11,9; H-9); 2,16 (1H; td; 13,3; 4,2; H-2α); 2,06 (1H; da; 14,1; H-3α); 1,89 (1H; dd; 14,2; 2,4;
H-23α); 1,85 (2H; m; H-2α; H-7α); 1,79 (1H; m; H-11α); 1,57 (1H; dd; 14,2; 11,4; H-23β );
1,38 (3H; s; H3 -27); 1,37 (3H; s; H3 -28); 1,28 (1H; m; H-11β ); 1,21 (3H; d; 7,1; H3 -21);
1,06 (3H; s; H3 -19); 1,01 (1H; da; 14,1; H-3β ).
RMN-13 C (CDCl3 ; 100,63 MHz) δ 140,6 (C; C-17); 138,6 (C; C-13); 136,5 (C; C-14);
128,0 (CH; C-18); 126,4 (CH; C-16); 125,8 (CH; C-15); 105,0 (CH; C-1'); 91,6 (CH; C-26);
80,7 (CH; C-1); 76,4 (CH; C-2'); 75,4 (CH; C-5'); 73,5 (CH; C-3'); 70,0 (CH; C-4'); 67,6
(CH; C-22); 64,8 (C; C-5); 64,1 a (C; C-24); 63,3 a (C; C-25); 62,0 (CH2 ; C-6'); 57,6 (CH;
C-6); 43,2 (CH; C-20); 40,5 (C; C-10); 34,5 (CH; C-9); 34,2 (CH2 ; C-23); 32,1 (CH; C-8);
30,0 (CH2 ; C-3; C-4; C-7; C-12); 28,0 (CH2 ; C-2); 22,2 (CH2 ; C-11);18,6 (CH3 ; C-28);
17,7 (CH3 ; C-21); 16,6 (CH3 ; C-27); 15,8 (CH3 ; C-19) (a las asignaciones pueden ser
intercambiables).
+ (4), 406 (55), 388 (47), 373 (28), 294

EIMS m/z ( %): 568 (47), 553(38), 436 [M - Glc]
+
(78), 157 (25), 123 (100), 113 (49), 55 (20); HRMS-ESI-TOF m/z [M + NH4 ] 634,3587
(calculado para C34 H52 NO10 ; 634,3585).
Hidrólisis e Identicación del azúcar en el Salpichrólido S (1) y 2-en-Salpichrólido

S (2)
La mezcla de los compuestos 1 y 2 (4 mg de cada uno) se disolvió en MeOH (5 mL)

y se calentó a reujo con HCl (0,5 N; 3 mL) durante 4 hs. La mezcla de reacción se
diluyó con H2 O y se extrajo con CHCl3 (3 x 10 mL). A continuación, la fase acuosa se
neutralizó con Ag2 CO3 , y el precipitado se ltró para dar un monosacárido, el cual se
disolvió en 1 mL de H2 O y se mantuvo durante toda la noche antes de su análisis por CCD
y determinación de rotación óptica. El monosacárido del compuestos 1 dio un valor de Rf
de 0,22 (CHCl3 -MeOH-H2 O, 13:7:2 (fase móvil)) y una rotación especíca ([α]
21
D +34 (c
0,1; H2 O) consistente con D-glucosa.
4.6.4.2. 2-en-Salpichrólido S (2)
[(20S, 22R, 24S, 25S, 26R)- 5α,6α; 22,26; 24,25 -triepoxi-1α-O-D-glucosil-26-hidroxi-

17 (13 → 18) abeo-ergosta-2, 13, 15, 17-tetraeno].
Sólido amorfo color blanco. El compuesto se aisló en mezcla junto a SL-1, los datos
espectroscópicos de RMN fueron adquiridos de la mezcla 1/2.
RMN-1 H (CDCl3 - D2 O (95:05); 400,13 MHz) δ 7,02 (1H; da; 7,5; H-15); 6,94 (1H;
da; 7,5; H-16); 6,89 (1H; sa; H-18); 6,06 (1H; sa; H-2); 5,78 (1H; da; 9,0; H-3); 4,96 (1H; s;
H-26); 4,32 (1H; d; 7,3; H-1'); 3,93 (1H; sa; H-1); 3,91 (1H; m; H-22); 3,77 (2H; m; H-6');
3,52 (1H; m; H-4'); 3,47 (1H; m; H-3'); 3,46 (1H; m; H-2'); 3,27 (1H; m; H-5'); 3,04 (1H;
d; 4,7; H-6); 2,89 (1H; m; H-12α); 2,77 (1H; m; H-8); 2,73 (1H; m; H-12β ); 2,67 (2H; m;
H-4α; H-20); 2,32 (1H; m; H-9); 1,96 (1H; da; 13,2; H-23α); 1,75 (1H; m; H-11α); 1,68 (1H;
m; H-4β ); 1,57 (1H; dd; 14,1; 11,5; H-23β ); 1,36 (6H; s; H3 -27; H3 -28); 1,32 (1H; m; H-7α);
1,29 (1H; m; H-11β ); 1,17 (3H; d; 7,0; H3 -21); 1,04 (3H; s; H3 -19).
RMN-13 C (CDCl3 ; 100,63 MHz) δ 140,9 (C; C-17); 139,0 (C; C-13); 138,3 (C; C-14);
128,7 (CH; C-3); 128,4 (CH; C-18); 126,8 (CH; C-15); 126,5 (CH; C-2); 126,4 (CH; C-16);
105,2 (CH; C-1'); 92,0 (CH; C-26); 79,7 (CH; C-1); 76,6 (CH; C-2'); 75,9 (CH; C-5'); 73,7
(CH; C-3'); 70,4 (CH; C-4'); 68,1 (CH; C-22); 64,6 (C; C-24); 63,5 (C; C-25); 62,6 (CH2;
C-6'); 62,5 (C; C-5); 56,8 (CH; C-6); 43,8 (CH; C-20); 39,8 (C; C-10); 34,8 (CH2; C-23);
34,7 (CH; C-9); 32,7 (CH; C-8); 32,4 (CH2 ; C-4); 30,5 (CH2 ; C-12); 30,1 (CH2 ; C-7); 23,0
(CH2 ; C-11); 19,1 (CH3 ; C-28); 18,3 (CH3 ; C-21); 17,2 (CH3 ; C-27); 16,0 (CH3 ; C-19).
4.6.4.3. Salpichrólido T (3)
(20S, 22R, 24S, 25S, 26R) - 5α,6α; 22,26; 24,25-triepoxi-12β , 26-dihidroxi-17 (13 →
18)abeo-ergosta-2;13;15;17-tetraen-1-ona
Sólido blanco, amorfo; [α]

21 λ )
D -4,8 (c 0,2; CH2 Cl2 ); UV (MeOH) max (log 216
(4.00) nm; IR (película seca) ν −1 .
max 3428, 2930, 1684, 1377, 1022, 750 cm
RMN-1 H (CDCl3 ; 400,13 MHz) δ 7,43 (1H; sa; H-18); 7,12 (1H; d; 8,3; H-15); 7,09
(1H; dd; 8,3; 1,5; H-16); 6,78 (1H; ddd; 10,3; 5,0; 2,3; H-3); 6,02 (1H; dd; 10,3; 3,0; H-2);
4,98 (1H; d; 9,0; H-26); 4,93 (1H; dd; 10,8; 5,0; H-12); 3,87 (1H; ddd; 11,3; 5,8; 2,5; H-22);
3,43 (1H; d; 9,0; OH-26); 3,23 (1H; d; 5,0; H-6); 3,14 (1H; dt; 19,6; 2,8; H-4β ); 2,88 (1H;
ddd; 11,4; 5,0; 1,8; H-11α); 2,80 (1H; m; H-8); 2,79 (1H; m; H-20); 2,68 (1H; m; H-7β ); 2,21
(1H; td; 12,1; 1,8; H-9); 1,92 (1H; dd; 19,6; 5,0; H-4α); 1,85 (1H; m; H-23α); 1,83 (1H; m;
H-7α); 1,58 (1H; m; H-23δ ); 1,40 (3H; s; H3 -19); 1,38 (3H; s; H3 -27); 1,37 (3H; s; H3 -28);
1,32 (1H; m; H-11β ); 1,24 (3H; d; 7,0; H3 -21).
RMN-13 C (CDCl3 ; 100,63 MHz) δ 202,2 (C; C-1); 142,6 (CH; C-3); 141,2 (C; C-17);
139,7 (C; C-13); 137,2 (C; C-14); 128,8 (CH; C-2); 127,2 (CH; C-16); 126,1 (CH; C-15);
125,9 (CH; C-18); 91,7 (CH; C-26); 69,8 (CH; C-12); 67,4 (CH; C-22); 64,9 (C; C-24); 64,5
(C; C-5); 63,7 (C; C-25); 58,8 (CH; C-6); 48,3 (C; C-10); 43,2 (CH; C-20); 36,1 (CH2 ; C-11);
34,2 (CH2 ; C-4); 33,7
a (CH; C-9); 33,5a (CH; C-8); 33,4a (CH ; C-23); 30,2 (CH ; C-7);
2 2
a
18,8 (CH3 ; C-28); 17,3 (CH3 ; C-21); 16,5 (CH3 ; C-27); 14,2 (CH3 ; C-19); ( Asignaciones
que son intercambiables).
EIMS m/z ( %) 466 [M] + (1), 448 [M + H2 O]

+ (6), 432 (7), 420 (30), 418 (49), 405
(69), 403 (99), 326 (47), 306 (100), 263 (35), 123 (93), 109 (65), 97 (40), 57 (24), 55 (42);
HRMS-ESI-TOF m/z [M]
+ 466.2370 (calculado para C H O ; 466,2355).
28 34 6
4.6.4.4. Salpichrólido U (4)
(5α,6α-epoxi 22-hidroxi-26,27-dinor-17 (13 → 18) abeo-5α- colestan 2,13,15,17-tetraen-

1,24-diona.
Sólido amorfo color blanco; [α]

21
D +14.9 (c 0,09; CH2 Cl2 ); UV (MeOH) λ max (log )
204 (4.09) nm; IR (película seca) ν −1
max 3459, 2918, 1708, 1684, 1377, 1268 cm
RMN-1 H (CDCl3 ; 400,13 MHz) δ 7,15 (1H; d; 8,0; H-15); 7,02 (1H; dd; 8,0; 1,6;
H-16); 6,95 (1H; sa; H-18); 6,77 (1H; ddd; 10,1; 5,0; 2,2; H-3); 6,01 (1H; ddd; 10,1; 2,9; 1,0;
H-2); 4,17 (1H; ddd; 12,6; 6,4; 3,1; H-22); 3,65 (1H; s; OH-22); 3,24 (1H; d; 4,8; H-6); 3,14
(1H; dt; 19,5; 2,6; H-4β ); 2,93 (1H; ddd; 16,5; 12,2; 4,4; H-12α); 2,76 (2H; m; H-8; H-20);
2,75 (1H; m; H-12β ); 2,71 (1H; m; H-7β ); 2,61 (1H; m; H-23α ); 2,59 (1H; m; H-11α );
2,49 (1H; dd; 17,1; 9,5 Hz; H-23δ ); 2,16 (3H; s; H3 -25); 2,09 (1H; td; 11,7; 2,3; H-9); 1,91
(1H; ddd; 19,5; 5,0; 1,0; H-4α ); 1,84 (1H; td; 13,8; 2,9; H-7α ); 1,38 (3H; s; H3 -19); 1,29
(1H; td; 12,0; 4,3; H-11β ); 1,27 (3H; d; 7,1; H3 -21).
RMN-13 C (CDCl3 ; 100,63 MHz) δ 209,5 (C; C-24) ; 202,6 (C; C-1); 142,5 (CH; C-3);
140,2 (C; C-17); 138,2 (C; C-13); 137,5 (C; C-14); 128,9 (CH; C-2); 128,5 (CH; C-18);
126,8 (CH; C-15); 125,6 (CH; C-16); 71,8 (CH; C-22); 64,6 (C; C-5); 59,0 (CH; C-6); 48,7
(C; C-10); 47,4 (CH2; C-23); 44,6 (CH; C-20); 36,4 (CH; C-9); 33,6 (CH; C-8); 33,2 (CH2 ;
C-4); 30,9 (CH3 ; C-25); 30,6 (CH2 ; C-12); 30,4 (CH2 ; C-7); 25,3 (CH2 ; C-11); 17,1 (CH3 ;
C-21); 14,8 (CH3 ; C-19).
EIMS m/z ( %): 394 [M]

+ (1), 376 [M + H O]+ (19), 336 (21), 308 (49), 307 (100),
2
+
290 (9), 171 (10), 117 (12), 91 (9), 55 (6); HRMS-ESI-TOF m/z [M] 394,2125 (calculado
para para C25 H30 O4 ; 394,2144).
4.6.4.5. Salpichrólido V (5)
(20S,22R;24S;25S;26R)-6β cloro-22,26,24,25-diepoxi-5α,26-dihidroxi-17 (13 → 18)abeo-

5α-ergosta-2;13;15;17-tetraen-1-ona
Sólido blanco amorfo; [α]

21 λ )
D - 3,4 (c 0,6; CHCl3 ); UV (MeOH) max (log 216
(4,20) nm; IR ν −1
max 3433; 3048; 1686; 1031; 735 cm
RMN-1 H (CDCl3 ; 400,13 MHz) δ 7,14 (1H; d; 8,2; H-15); 6,94 (1H; dd; 8,2; 1,2; H-16);
6,88 (1H; sa; H-18); 6,57 (1H; ddd; 10,2; 5,1; 2,2; H-3); 5,91 (1H; dd; 10,2; 2,8; H-2); 4,92
(1H; d; 9,9; H-26); 4,07 (1H; t; 2,9; H-6); 3,79 (1H; ddd; 11,3; 5,7; 2,6; H-22); 3,41 (1H; dt;
19,8; 2,8; H-4β ); 3,35 (1H; d; 9,9; OH-26) 3,14 (1H; ta; 11,8; H-8); 2,97 (1H; m; H-12α);
2,75 (1H; da; 17,0; H-12β ); 2,68 (1H; m; H-20); 2,55 (1H; dt; 14,5; 2,9; H-7β ); 2,41 (1H;
da; 12,2; H-11α); 2,23 (1H; m; H-7α); 2,22 (1H; m; H-4α); 2,16 (1H; m; H-9); 1,77 (1H;
dd; 14,4; 2,5; H-23α); 1,51 (1H; m; H-23β ); 1,36 (3H; s; H-19); 1,33 (1H; m; H-11β ); 1,31
(3H; s; H-27); 1,29 (3H; s; H-28); 1,18 (3H; d; 7,1; H-21).
137,8 (C; C-13); 137,3 (C; C-14); 129,5 (CH; C-18); 129,1 (CH; C-2); 126,1 (CH; C-15);
125,7 (CH; C-16); 91,7 (CH; C-26); 77,5 (CH; C-5); 67,8 (CH; C-22); 65,2 (C; C-24); 64,0
(C; C-6); 64,0 (C; C-25); 52,9 (CH; C-10); 43,3 (C; C-20); 38,8 (CH; C-9); 37,1 (CH2 ; C-4);
35,0 (CH2 ; C-7); 34,0 (CH; C-23); 32,9 (CH; C-8); 31,0 (CH2 ; C-12); 26,0 (CH2 ; C-11);
19,1 (CH3 ; C-28); 17,6 (CH3 ; C-21); 16,9 (CH3 ; C-27); 16,3 (CH3 ; C-19).
HRMS-ESI-TOF m/z [M+Na]

+ 509,2066 (calc. para C H ClNaO ; 509,2052).
28 35 5
4.6.4.6. Salpichrólido 6
(20S,22R;24S;25S;26R)-6β oxi-etil-22,26,24,25-diepoxi-5α,26-dihidroxi-17 (13 → 18)abeo-

ergosta-2;13;15;17-tetraen-1-ona
Sólido amorfo color blanco. El compuesto se aisló en mezcla junto a Salpichrólido A,

los datos espectroscópicos de RMN fueron adquiridos de la mezcla 3:1.
RMN-1 H (CDCl3 ; 400,13 MHz) δ 7,24 (1H; d; 8,1; H-15); 7,00 (1H; dd; 24,9; 6,3; H-
16); 6,94 (1H; s; H-18); 6,65 (1H; ddd; 10,2; 5,1; 2,1; H-3); 5,93 (1H; dd; 10,2; 2,1; H-2); 4,99
(1H; s; H-26); 3,86 (1H; ddd; 11,3; 5,9; 2,4; H-22); 3,75 (1H; m; H-1'α); 3,42 (1H; m; H-1'β );
3,36 (1H; s; H-6); 3,35 (1H; m; H-4β ); 3,02 (1H; s; H-12β ); 2,98 (1H; m; H-8); 2,80 (1H; m;
H-12α); 2,49 (1H; m; H-11β ); 2,49 (1H; m; H-11α); 2,54 (1H; m; H-7β ); 1,79 (1H; m; H-7α);
2,08 (1H; m; H-4α); 2,18 (1H; m; H-9); 1,83 (1H; m; H-23α); 1,59 (1H; m; H-23β ); 1,36
(3H; m; H-2'); 1,35 (3H; s; H-28); 1,39 (3H; s; H-19); 1,34 (3H; s; H-27); 1,26 (3H; m; H-21).
137,6 (C; C-13); 138,1 (C; C-14); 129,0 (CH; C-18); 128,5 (CH; C-2); 125,5 (CH; C-15);
125,0 (CH; C-16); 91,6 (CH; C-26); 82,1 (C; C-6); 77,4 (CH; C-5); 67,2 (CH; C-22); 65,0
(CH3 CH2 0; C-1'); 64,9 (C; C-24); 63,6 (C; C-25); 52,7 (CH; C-10); 42,8 (C; C-20); 38,3
(CH; C-9); 35,3 (CH2 ; C-4); 28,7 (CH2 ; C-7); 33,5 (CH; C-23); 32,6 (CH; C-8); 30,7 (CH2 ;
C-12); 25,7 (CH2 ; C-11); 18,6 (CH3 CH2 O; C-2'); 17,0 (CH3 ; C-21); 18,6 (CH3 ; C-28); 16,4
(CH3 ; C-19); 14,7 (CH3 ; C-27).
Capítulo 5
Biotransformaciones
Resumen: En búsqueda de derivados bioactivos, este trabajo se dirigió a evaluar la

capacidad de los hongos lamentosos de biotransformar los w. mayoritarios aislados
de Salpichroa origanifolia, Salpichrólidos A, C y G. Se encontró que la incubación de
Salpichrólido A con Rhizomucor miehei produjo hidroxilación en los anillos B y C (C-7
y C-12) y llevaron a la apertura del epóxido C-5-C-6 mientras que la incubación de los
sustratos Salpichrólidos C y G con R. miehei llevaron a la apertura de los epóxidos
C-24-C-25; C-5-C-6 respectivamente. La biotransformación de Salpichrólido A con
Cunninghamella elegans produjo hidroxilaciones estereoselectivas, derivados oxidados
y reducidos en diferentes posiciones de los anillos A, B y C y la apertura del epóxido
C-5- C-6. Además, la incubación de Salpichrólido A con Curvularia lunata dio lugar
a la apertura selectiva de los epóxidos C-5-C-6 o C-24-C-25. Los resultados obtenidos
abren la perspectiva de la utilización de hongos lamentosos en biotransformaciones
de withanólidos.
153
154 Capítulo 5. Biotransformaciones
El presente trabajo fue realizado en el marco de cooperación entre los grupos de in-
vestigación en Productos Naturales de la Universidad de Granada (UGR, España) y la
Universidad Nacional de Córdoba (UNC, Argentina). Este trabajo tuvo lugar en la Fa-
cultad de Ciencias de la Universidad de Granada, durante el período comprendido entre
Septiembre 2013-Febrero 2014 y fue dirigido por el Prof. Dr. Antonio Martínez.
5.1. Introducción
5.1.1. Los productos naturales y la búsqueda de nuevos fármacos
La importancia de los productos naturales (PN) radica en las diversas funciones biológi-
cas que poseen. Pueden ser útiles por sus posibilidades directas como agentes terapéuticos,
pueden servir como modelos para la preparación de sustancias bioactivas, como materia
prima para la síntesis de sustancias de interés farmacológico y/o interés industrial como
estructuras privilegiadas usando el concepto de farmacología para aquellos productos que
son capaces de interactuar con diversas proteínas y realizar acciones útiles para la salud
en procesos patológicos. Sin lugar a dudas, los productos naturales son estructuras bioló-
gicamente validadas a través de la co-evolución con el resto de los seres vivos (Newman y
Cragg, 2016), (Kingston y Newman, 2005).
En el mundo moderno, los compuestos bioactivos naturales constituyen la columna

vertebral de las farmacopeas actuales. Así mismo, el origen de los fármacos modernos se
relaciona en gran parte con el descubrimiento de principios activos en la naturaleza cons-
tituyendo la mayor fuente de fármacos prototipo. Así, los primeros fármacos obtenidos
de fuentes naturales, fueron identicados en plantas superiores (Saklani y Kutty, 2008),
(Kingston, 2011). Posteriormente, se han utilizado los PN como modelo para realizar modi-
caciones estructurales especícas y generar nuevos fármacos (Kingston y Newman, 2005).
De esta forma, los PN o sus derivados, constituyen una buena parte del arsenal terapéutico
disponible.
A pesar de esto, con la llegada de la robótica, la bioinformática, la biotecnología, el

modelado molecular (química in silico ), el cribado farmacológico de alto rendimiento (High
Throughput Screening, HTS) y los métodos de síntesis combinatoria en la década de los 90
(Newman et al., 2003), empezó a decaer la utilización de los PN. Sin embargo, actualmente
existe un renovado interés en el mundo de la industria farmacéutica y la medicina por las
sustancias bioactivas de origen natural. Prueba de ello es que de las 1562 nuevas entidades
químicas (NCEs) aprobadas para uso como fármacos por la FDA (Food and Drugs Ad-
mnistration) en los últimos 33 años (1981-2014), (Newman y Cragg, 2016) los PN o sus
derivados de distintos orígenes y análogos, representan más del 50 % de los fármacos que
existen actualmente, Figura 5.1. Los porcentajes representan el número de entidades de
cada área, contabilizando un total de 1562 NCEs.
La gran ventaja de los PN por sobre los compuestos sintéticos no es solamente que
presentan propiedades biológicas superiores, sino la novedad de sus estructuras. Los PN
poseen estructuras tridimensionales bien denidas, con una variedad de grupos funcionales
y ubicados en una orientación espacial única. Esto permite que la interacción sea con mayor
eciencia en los sitios objetivos (Quinn et al., 2008). Estos hechos han sido validados por
los conceptos de estructura privilegiada y dominio propuestos por Evans (Evans et al.,
1988) y Brohm (Brohm et al., 2002) respectivamente.
Los principales inconvenientes en el estudio de los PN han sido siempre (Harvey, 2008),
(Kingston, 2011) i) la baja disponibilidad de estos productos en su fuente de origen ii)
dicultad de su síntesis total dada la cantidad de centros estereogénicos (Vasilevich et al.,
2012) iii) los costos de recolección, dicultades en el acceso y variabilidad del material
(puede que los metabolitos presentes en una colección estén ausentes en otra) y iv) los
problemas en materia de patentes (derechos a la propiedad intelectual).
V6% B 16 %
S*/NM 10 %
N4%
S* 4 %
NB 1 %
S/ NM 11 %
ND 21 %
S 27 %
B Biológico/biotecnológico
NB Producto Natural origen Botánico
ND Derivado de PN (semisintético)
S* Sintético con un farmacóforo natural
S Totalmente Sintético
S/NM Sintético/Natural mimético (obt. Por métodos in silico)
S*/NM Sintético con un farmacóforo natural/Natural mimético
V Vacunas
Figura 5.1: Fuentes de nuevas drogas aprobadas 1981-2014, n = 1562.
5.1.2. Estrategias para la producción de compuestos bioactivos

El gran desafío en la búsqueda de compuestos bioactivos es tomar las ventajas estruc-
turales que presentan los PN y sortear las dicultadas que estos tienen, principalmente la
baja disponibilidad. Para ello se proponen diferentes estrategias de producción de compues-
tos similares a los PN con el objetivo de ampliar la variedad estructural, medir diferentes
actividades biológicas y lograr estudios de relación estructura-actividad en la búsqueda del
compuesto bioactivo más eciente. A continuación, algunas de las estrategias más utiliza-
das.
Química combinatoria
El objetivo básico de la química combinatoria consiste en la producción de gran-
des colecciones (bibliotecas) de compuestos con una amplia diversidad estructural, a
través de síntesis rápida o modelado computacional. Las colecciones obtenidas son
sometidas posteriormente a ensayos biológicos, constituyendo así una fuente alter-
nativa de compuestos líderes (Lee y Breitenbucher, 2003). Es posible encontrar mu-
chos ejemplos en las décadas del 80 y 90 de quimiotecas que contienen cientos de
miles de nuevos compuestos químicos. Las mismas, basadas principalmente en pép-
tidos, nucleósidos o carbohidratos, tenían poco éxito y baja especicidad (Paterson
y Anderson, 2005). Estos resultados fueron atribuidos a la carencia de complejidad
asociada con los PN bioactivos, tales como elementos estereogénicos, sustituyentes

heterocíclicos o estructuras policíclicas (Lee y Schneider, 2001).
Semisíntesis
La preparación de análogos no naturales a partir de metabolitos secundarios puede
incrementar las propiedades de un fármaco, tales como bioactividad, farmacociné-
tica, solubilidad, etc. Recientemente surge el concepto de síntesis orientada a la
diversidad (Burke y Schreiber, 2004) inspirado en la diversidad de metabolitos que
se originan en la naturaleza a partir de un mismo precursor común. Así, a partir de
un sustrato y dependiendo de las condiciones de reacción utilizadas, se puede llegar
a quimiotecas con diversidad de unidades básicas, diversidad de esqueleto o diver-
sidad estereoquímica. Otra estrategia que permite el acceso a análogos de PN es la
síntesis total derivada. En este caso, se usan intermedios en una síntesis total de un
producto natural para obtener análogos que no son fácilmente asequibles mediante
la correspondiente ruta biosintética. En la bibliografía cientíca se pueden encontrar
diversos ejemplos de quimiotecas. Un ejemplo del diseño de una quimioteca focali-
zada lo constituye el trabajo realizado por el grupo de Nicolaou, al preparar más de
10000 derivados de benzopiranos y evaluarlos biológicamente (Nicolaou et al., 2000).
Para ello, revisaron los antecedentes publicados sobre benzopiranos y encontraron
cerca de 5000 estructuras con interesantes actividades biológicas.
Diversicación de extractos
Los extractos naturales contienen en su mayoría bibliotecas de un gran número de
compuestos que, aunque no se hayan caracterizado, poseen diferentes estructuras y
grupos funcionales que pueden alterarse químicamente. Estas transformaciones pue-
den dar lugar a cambios en las propiedades biológicas de sus componentes. Si los gru-
pos funcionales más comunes en la naturaleza, se transforman en grupos funcionales
que raramente se encuentran en ella, se podría disponer de estructuras novedosas y
quizá activas (López et al., 2007).
Biotransformaciones
Las transformaciones biológicas o biotransformaciones (Faber, 2011) se presentan
como un muy buen complemento de las reacciones de transformación química a la
hora de diversicar estructuras de compuestos de interés. La ventaja fundamental de
estos procesos es que se realizan generalmente en condiciones quimio-, regio- y este-
reocontroladas, pudiendo en algunos casos, superar a similares métodos empleados
en el área de síntesis. Las biotransformaciones son métodos muy ventajosos en caso
de establecerse sistemas biocatalíticos de manejo sencillo y resultan una alternativa
racional desde el punto de vista ecológico al momento de planicar un proceso en
particular. Si bien se produce una elevada cantidad de biomasa, este tipo de residuos
es totalmente degradable, minimizando así el uso de reactivos químicos de difícil o
nula degradación.
5.1.3. Las Biotransformaciones
Dadas las ventajas que presentan las biotransformaciones por sobre las demás estrate-
gias, es que fue elegida para la obtención de derivados de origen natural en este trabajo.
Es por ello que ampliaremos un poco más acerca de este método.
En las últimas décadas, las biotransformaciones se han estudiado extensivamente por-

que son consideradas importantes para modicar compuestos orgánicos de bajo costo y
obtener productos con alto valor agregado, los cuales en muchos casos son difíciles de ob-
tener de fuentes naturales o por medios sintéticos. Mediante el empleo de esta técnica, se
ha logrado introducir y optimizar un gran número de reacciones para ser empleadas en la
síntesis de moléculas quirales de importancia en la industria farmacéutica (Luna, 2004),
(Sharma et al., 2005) de cosméticos (Veit, 2004), agroquímicos y de materiales especiali-
zados, entre otras (Liu et al., 2004).
Las biotransformaciones, como se mencionó anteriormente, se caracterizan por la ver-

satilidad, la eciencia, la regioselectividad, la quimioselectividad y la enantioselectividad
de los procesos enzimáticos implicados (Shaw et al., 2003); además, el metabolismo de los
sustratos sometidos a biotransformación, ocurre bajo condiciones suaves y con bajo con-
sumo de energía; los reactivos y solventes que se utilizan regularmente en estos procesos
poseen baja toxicidad, y por ello son considerados amigables con el ambiente y se pueden
ubicar en el campo de la biotecnología blanca o la química verde (Davies, 2007).
Cabe destacar que de todos los tipos de transformaciones catalizadas por sistemas en-
zimáticos, la hidroxilación selectiva de átomos de carbono en posiciones no activadas es
particularmente interesante. La hidroxilación microbiológica remota en un compuesto or-
gánico de estructura compleja es una herramienta sintética muy útil, ya que seguidamente
se pueden llevar a cabo sobre el grupo hidroxilo introducido diversas actuaciones químicas.
La utilización de métodos químicos convencionales para la inserción de un grupo hidroxilo
u otro grupo funcional de utilidad en posiciones remotas de un esqueleto puede ser bastante
complicada, mientras que microbiológicamente podría ser relativamente sencilla y permiti-
ría el acceso químico, no sólo al carbono que soporta a estos nuevos grupos funcionales sino
incluso a la zona donde se encuentra. La mayor dicultad en la utilización de estos proce-
sos radica en encontrar el microorganismo apropiado capaz de originar la biohidroxilación,
por lo que hay que realizar estudios previos con diferentes microorganismos (generalmente
hongos lamentosos) sobre los sustratos y derivados análogos. En este contexto, la trans-
formación microbiana de productos naturales es una poderosa herramienta semisintética
(Donova y Egorova, 2012). Con estos procedimientos sencillos, García-Granados y cole-
gas (Parra et al., 2009), (Garcia-Granados et al., 2007), (García-Granados et al., 2005),
(García-Granados et al., 2004), (García-Granados et al., 2000), (García-Granados et al.,
1998), (García-Granados et al., 1993) han obtenido una gran variedad de nuevos pro-
ductos sesquiterpénicos y diterpénicos usando los hongos lamentosos Curvularia lunata,
Cunninghamella elegans, Fusarium moniliforme, Rhizopus nigricans, Gliocladium roseum
y Aspergillus niger.
5.1.4. Sustratos propuestos: Salpichrólidos

El requisito fundamental para que una biotransformación sea exitosa, es el contacto
entre el sustrato y las enzimas/microorganismos actuantes. Para ello el sustrato debe ser
fácilmente soluble en medio acuoso y capaz de pasar la membrana celular sin ejercer un
efecto tóxico sobre el biocatalizador. Por lo general se alimenta un cultivo de microorga-
nismos puro con una solución concentrada estéril. La fase de crecimiento óptima para la
alimentación y la concentración de sustrato se determina experimentalmente.
Los sustratos que no son solubles en medio acuoso se disuelven en un solvente relati-
vamente no tóxico antes de incorporarlo al cultivo pero teniendo la precaución de que éste
sea miscible en agua, por ejemplo; metanol, etanol, etilenglicol, acetona, propilenglicol,
dimetilsulfóxido, etc. Otra posibilidad para aumentar la solubilidad es añadir un agente
emulsionante.
Los sustratos que afectan al crecimiento o la viabilidad de los microorganismos, se aña-

den al cultivo sólo después de que se ha completado la fase de crecimiento. Si la biotrans-
formción de un sustrato seleccionado no da resultados satisfactorios, deberá considerarse
una modicación química de menor importancia del sustrato, por ejemplo, la adición, eli-
minación o modicación de un grupo protector o cambio de estado de oxidación de un
grupo funcional. Tales medidas pueden mejorar las propiedades del sustrato permitien-
do el aumento de la solubilidad, disminución de la toxicidad, mejora de la permeabilidad
a través de la membrana de la célula y una mayor anidad a la enzima (Leuenberger, 1990).
A partir de los estudios toquímicos sobre especies pertenecientes al género Salpichroa

(Solanaceae), se han aislado numerosos compuestos esteroidales denominados Salpichróli-
dos (withanólidos), los que proponemos como sustrato de biotransformaciones en la bús-
queda de compuestos más activos y menos tóxicos. Estos compuestos se caracterizan por
la diversidad estructural que presenta el núcleo esteroidal y la cadena lateral, además de
una gran diversidad de actividad biológica, lo que los hace interesantes en la búsqueda de
nuevas estructuras activas. Hasta la fecha, sólo unos pocos w. han sido reportados como
sustratos en biotransformaciones (Sección 5.2).
5.2. Antecedentes
La modicación de los productos naturales por parte de los microorganismos puede
dar lugar a nuevas estructuras con potenciales actividades biológicas. La aplicación de esta
estrategia para withanólidos (w.) ha sido revisado por Anjaneyulu y colegas (Anjaneyulu
et al., 1998). El objetivo principal de la mayoría de los trabajos publicados en este campo
ha sido producir nuevos compuestos altamente oxigenados. Esto quiere decir introducir
grupos hidroxilo, regio y estereoselectivamente en posiciones difíciles de lograr por medios
químicos y que además sean compuestos bioactivos que presenten una gran diversidad de
propiedades biológicas.
El primer trabajo publicado en biotransformaciones de w. fue realizado por Rosazza

y colegas, en el cual se utilizó Withaferina A como sustrato en varias cepas de hongos, a
saber: Cunninghamella blakesleeana, Cunninghamella echinulata,Cunninghamella elegans,
Curvularia lunata, Mucor microsporus y Stemphyllum consortiale (Rosazza et al., 1978).
Se obtuvo el mismo perl de metabolitos con todas ellas pero con Cunninghamella ele-
gans se obtuvo el mayor rendimiento. La acción de Cunninghamella elegans sobre este w.
produjo dos derivados, sólo uno de ellos se logró describir como 14α-hidroxiwithaferina
A (37 %) y el otro no logró caracterizarse. Más adelante, Fuska reintenta la incubación
de Withaferina A con Cunninghamella elegans, la cual produjo 12β -hidroxiwithaferina A
(25 %) y 15β -hidroxiwithaferina A (32 %) (Fuska et al., 1982), Figura 5.2. Estos mismos
productos hidroxilados se han obtenido tras la incubación con Cunninghamella echinula-
ta (Wijeratne et al., 2008), Figura 5.3. Varios informes también describen la producción
de withanólidos (en su mayoría Withaferina A) por cultivos de brotes de Withania som-
nifera (Jha et al., 2005), (Ray y Jha, 2001), (Sangwan et al., 2007) y (Sharada et al., 2007).
La biotransformación de Physalina H por el hongo Rhizopus stolonifer dio un produc-

to de eliminación con un 2,1 % de rendimiento Figura 5.4, mientras que en la incubación
con Cunninghamella elegans se obtuvo isophysalina B y 6-deoxisalina H con el 9,4 % de
rendimiento global (Choudhary et al., 2006) Figura 5.5.
Figura 5.2: Biotransformación de Withaferina A por Cunninghamella elegans

Figura 5.3: Biotransformación de Withaferina A por Cunninghamella elegans y Cunning-

hamella echinulata
Figura 5.4: Biotransformación de Physalina H por Rhizopus stolonifer

Figura 5.5: Biotransformación de Physalina H por Cunninghamella elegans

La biotransformación del Trechonólido A con el hongo Aspergillus niger fue realizada

por Bisogno y colegas, ésta produjo la apertura del epóxido del sustrato. Aunque este
producto fue descripto anteriormente como jaborotetrol (Fajardo et al., 1991), los autores
destacan un mecanismo novedoso de síntesis; la apertura del epóxido transcurrió sin que
la unión cetal presente en la molécula sufriera hidrólisis, situación que presenta una al-
ternativa adecuada para transformaciones de compuestos que presentan funcionalizaciones
sensibles al medio ácido, método por el cual tradicionalmente se obtienen dioles a partir
de epóxidos (Bisogno et al., 2008), Figura 5.6.
Figura 5.6: Biotransformación de Trechonólido A por Aspergillus niger
Además hay trabajos en glucosidación enzimática, donde se aislaron dos glucosiltrans-

ferasas especícas de W. somnifera. La citosólica 3β -hidroxi esterol glucosiltransferasa fue
la más activa sobre 24 metilen-colesterol, y mostró una actividad moderada para la 3β -O-
monoglucosilación del aglucón del Withanósido V (Sharma et al., 2007). Por otro lado, la
27-hidroxi glucosiltransferasa monoglucosiló varios 27-hidroxiwithanolidos (Madina et al.,
2007), Figura 5.7.
Figura 5.7: Glucosidación enzimática de 3β y 27-hidroxi-withanólidos
Existen a la fecha, pocos trabajos publicados sobre w. que aborden esta línea de inves-
tigación. Ninguno de ellos utiliza Salpichrólidos como sustrato.

Se pretende buscar cepas de hongos lamentosos que sean capaces de transformar Sal-
pichrólidos A, C y G (withanólidos), los cuales se han aislado en cantidades apreciables a
partir de plantas pertenecientes al género Salpichroa (Solanaceae).
Realizar ensayos de biotransformación con distintos hongos lamentosos.
Obtener derivados regio-selectivos a través de las cepas seleccionadas.
Aislar y puricar los productos mayoritarios de la biotransformación y caracterizarlos

mediante los métodos espectroscópicos pertinentes.

5.4.1. Los Sustratos
De Salpichroa origanifolia (Lam.) Baillon, se extrajeron tres componentes mayoritarios;
Salpichrólido A (1,8 g), Salpichrólido C (0,8 g) y Salpichrólido G (0,3 g). Los datos físicos
y espectroscópicos concordaban con los datos reportados para estos compuestos (Veleiro
et al., 1992), (Tettamanzi et al., 1998), (Veleiro et al., 1994), respectivamente (Ver Sección
5.6.3). La caracterización fue mediante métodos espectroscópicos de resonancia magnética
nuclear en una y dos dimensiones. Las estructuras de los sustratos propuestos se muestran
en la Figura 5.8.
(a) Salpichrólido A (b) Salpichrólido C
(c) Salpichrólido G
Figura 5.8: Sustratos: Salpichrólidos A, C y G de Salpichroa origanifolia
5.4.2. Ensayos Previos

Los objetivos de estos ensayos fueron; i) Conrmar que los productos aislados de las
biotransformaciones se hayan producido por efecto de la digestión del microorganismo. ii)
Determinar el tiempo óptimo de incubación de los sustratos en el medio fúngico. iii) Denir
con qué especies es más efectiva la biotransformación. iv) Conrmar si las biotransforma-
ciones son reproducibles.
i) Control Negativo
Para conrmar, en el caso de aislar un compuesto diferente al de partida, que el cambio
químico encontrado en los productos aislados se haya producido por efecto de la digestión
del microorganismo y no por una descomposición del sustrato debido a las condiciones de
reacción, se inoculó el sustrato en un medio de cultivo estéril y en ausencia del hongo. El
control negativo constó de recuperar inalterado el sustrato inoculado.
Salpichrólido A
Control Negativo x 2. De los 100 mg inoculados se recuperaron 84,2 mg inalterados.
Salpichrólido C
Salpichrólido G
Sólo se recuperó el sustrato de partida y no un compuesto derivado de éste, por lo que

el Control Negativo fue el esperado. Se estima que en cada etapa de puricación se pierde
un 20 % de la muestra, por lo tanto la masa recuperada de los sustratos está dentro de lo
esperado.
ii) Tiempo Óptimo de Reacción

Se inoculó el sustrato Salpichrólido A, en una concentración de 30 mg en 1 mL de
EtOH. Se probó con las cuatro cepas disponibles y se hicieron duplicados o triplicados,
Rhizopus oryzae x 2, Rhizomucor miehei x 3, Cunninghamella elegans x 2, Curvularia lu-
nata x 3. Cada Erlenmeyer contenía 100 mL de medio de cultivo con el hongo desarrollado.
Se realizaron extracciones de 10 mL de cada uno, cada 24 horas.
En la Tabla 5.1 se muestra la masa de la fase orgánica extraída en cada experimento. En

la primer parte de la Tabla (Condiciones) se indica el microorganismo utilizado y la masa
total del sustrato inoculado y en la segunda parte (Resultados), se muestra el seguimiento
día a día de las extracciones realizadas referidas en miligramos.
Tabla 5.1: Masa (mg) de la fase orgánica extraída por día en el Ensayo Previo. Sustrato,
Salpichrólido A, utilizado en todas las especies de hongo.
Condiciones Resultados
Especie Salp A Día Día Día Día Día
Inoculado 1 2 3 4 7
Rhizopus oryzae x 2 60,0 27,1 54,3 81,7 - -
Rhizomucor miehei x 3 90,0 25,8 51,0 76,5 - -
Cunninghamella elegans x 2 60,0 5,3 13,3 21,4 27,5 58,1
Curvularia lunata x 3 90,0 3,7 10,1 13,2 18,6 25,9
El seguimiento de la reacción de biotransformación se realizó por CCD contra el testigo

Salpichrólido A, en CH2 Cl2 -Acetona (5:1). La fase orgánica de cada extracto reveló que,
para el Día 1, aún tenían alto contenido del compuesto de partida. Los siguientes días y de
forma gradual, fueron apareciendo e intensicando nuevos componentes con diferentes Rf
respecto al testigo, lo que nos indica que se está llevando a cabo la reacción de la manera
esperada.
No se observaron diferencias entre los perles de CCD del extracto de R. miehei entre
el día 2 y 3, por lo tanto se decidió detener la reacción. Este criterio se repitió con el
extracto de R. oryzae, además la masa extraída fue mayor que la inoculada, lo cual indica
que tendría alto contenido de materia orgánica perteneciente al hongo.
En el caso de los extractos de C. elegans y C. lunata se decidió dejar unos días más
para evaluar su evolución. Perles idénticos entre el sexto y séptimo día indican que se
debe detener la reacción. Se recupera poca masa de la reacción con C. lunata.
Se dene como tiempo óptimo de reacción: Para R. oryzae y R. miehei, tres días mínimo
para una masa de 30 mg de sustrato. Para C. elegans y C. lunata, siete días mínimo para
una masa de 30 mg de sustrato.
iii) Elección de Especies

El siguiente paso fue denir cuáles de estas cuatro especies de microorganismos eran las
más adecuadas para realizar la biotransformación. Para ello, luego de detenidas las reaccio-
nes de los ensayos previos, se procedió a particionar y secar las fases orgánicas. Cada fase
orgánica se sometió a CC con elución de mezcla de solventes a polaridad creciente. Este
procedimiento se explica detalladamente en la Sección 5.6.7. Luego a la fracción aislada
que revelaba al UV, se la sometía a experimentos de RMN, si éstos indicaban la presencia
de los sustratos inoculados modicados. Ésto denía a la fracción como interesante y por lo
tanto la biotransformación había sido exitosa. Todos los extractos presentaron fracciones
con la presencia de w. en su contenido.
Sin embargo, la fase organica de R. oryzae contenía gran cantidad de impurezas y pro-
porcionalmente fue muy pequeña la masa de producto obtenido, por ello se desestimó para
su uso en reacciones de biotransformación subsiquientes.
Por otro lado, el extracto de R. miehei, fue con el que se obtuvo más variedad de pro-
ductos, por lo que fue elegido para realizar las reacciones con los demás sustratos.
iv) Reproducibilidad de la Reacción

Al comparar los productos obtenidos de los Ensayos Previos con los obtenidos de los
Ensayos de Biotransformación, a mayor escala de masa de sustrato, se encontró que éstos
fueron los mismos. Se llegó a la conclusión de que estas reacciones fueron reproducibles
y por lo tanto los esquemas de puricación también fueron los mismos. los esquemas de
puricación se encuentran en la Sección 5.6.
5.4.3. Ensayos de Biotransformación

Las biotransformaciones se realizaron con el total de masa disponible de cada sustrato
a inocular y durante el tiempo y las condiciones que se jaron anteriormente en los Ensayos
Previos, Figura 5.9.
Salpichrólido A
50 mg disuelto en 1 mL de EtOH por cada Erlenmeyer. Rhizomucor miehei x 8,
Cunninghamella elegans x 6 y Curvularia lunata x 6.
Salpichrólido C
50 mg disuelto en 1 mL de EtOH por cada Erlenmeyer. Rhizomucor miehei x 5,
Cunninghamella elegans x 3 y Curvularia lunata x 2.
Salpichrólido G
50 mg disuelto en 1 mL de EtOH por cada Erlenmeyer. Rhizomucor miehei x 3 y
Cunninghamella elegans x 2.
A continuación se describirán los productos aislados de cada reacción de biotransforma-

ción combinando experimentos en una y dos dimensiones de RMN, usando como referencia
los espectros de RMN de los sustratos Salpichrólido A, C y G respectivamente. Las estruc-
turas propuestas concuerdan con los espectros de masa de alta resolución. El análisis de
las señales caracteristicas de los w. se encuentra en el Capítulo 4, Sección 4.4.1.
(a) Cunninghamella elegans (b) Curvularia lunata
(c) Rhizomucor miehei (d) Sistema
Figura 5.9: Incubación de los sustratos luego de una semana de crecimiento de los hongos
5.4.4. Biotransformación de Salpichrólido A por Rhizomucor miehei
Luego de 7 días de incubación de la biotransformación del Salpichólido A con el R.

miehei, el extracto de la fase orgánica fue sometido a sucesivas etapas de puricación. Se
recuperó 4,6 % del sustrato y se obtuvieron cuatro nuevos withanólidos; los derivados 1
(0,3 %), 2 (2,0 %), 3 (0,8 %) y 4 (1,2 %). Se muestran en la Figura 5.10.
(a) Derivado 1 (b) Derivado 2
(c) Derivado 3 (d) Derivado 4
Figura 5.10: Productos novedosos de biotransformación de Salpichrólido A por Rhizomucor

miehei
Además se obtuvo un 4 % de compuesto reportado previamente; identicado como

Salpichrólido T, aislado previamente de S. lehmannii (Nicotra et al., 2013), Figura 5.11.
Figura 5.11: Salpichrólido T. Derivado del Salpichrólido A por Rhizomucor miehei

Como se puede apreciar en la Figura 5.12, la acción del R. miehei sobre el Salpichrólido
A, ha sido la biohidroxilación de los Anillo B y C. Oxidación de un hidroxilo formando un
carbonilo. Apertura del epóxido selectivamente y sin modicación en la cadena lateral.
Figura 5.12: Biotransformación del Salpichrólido A por Rhizomucor miehei
1
A continuación, se muestran los espectros de RMN- H de cada derivado y se discuten
las señales diagnóstico que avalan las estructuras propuestas.
5.4.4.1. Derivado 1
7.851
7.846
7.434
7.429
7.414
7.409
7.289
6.805
6.800
6.793
6.787
6.780
6.774
6.768
6.762
6.046
6.040
6.019
6.015
4.971
4.945
3.866
3.858
3.853
3.846
3.838
3.824
3.547
3.541
3.509
3.502
3.419
3.393
3.267
3.255
3.206
3.200
3.193
3.151
3.144
1.433
1.378
1.346
1.271
Metilos
H3-19, 21,
27 y 28
Aromáticos
H-15 y 16
H-18 H-3 H-2 H-26 H-22 H-4
8.0 7.5 7.0 6.5 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 ppm
1
Figura 5.13: RMN- H a 400,13 MHz del Derivado 1 respecto de TMS (δ ).
1
Los espectros de RMN- H (Figura 5.13) y RMN-
13 C del Derivado 1, muestran que los
anillos A, B y D y la cadena lateral están estrechamente relacionados a los de Salpichrólido
A, lo que indica que dieren en el patrón de sustitución del anillo C, Tablas 5.2 y 5.4.
La desaparición de las señales correspondientes a H-12α y β, junto al desplazamiento

de las señales del C-11 a δ 41,1; nos indicarían una sustitución en la posicion C-12. Por
otro lado, el espectro de RMN-
13 C del Derivado 1 exhibió dos señales correspondientes
a carbonos carbonilo en δ 201,3 y 198,5. El primero correspondiente a C-1 y el segundo
asignado a C-12, conrmando un carbonilo en esta posición. El patrón de sustitución en
el anillo C fue conrmado por las correlaciones entre las señales observadas en el experi-
mento HMBC. Las correlaciones claves observadas en este último fueron entre H3 -19/C-1
(1,45/201,3), H-11α/C-12 (3,53/198,5) y H-18/C-12 (7,85/198,5).
5.4.4.2. Derivado 2
Metilos
H3-19, 21,
27 y 28
Aromáticos
H-15, 16 y 18
H-12
H-3 H-2 H-26 H-22 H-4
1
1
anillos A, B y D y la cadena lateral están estrechamente relacionados a los de Salpichrólido
A, lo que indica que dieren en el patrón de sustitución del anillo C, Tablas 5.2 y 5.4.
1
El espectro de RMN- H del Derivado 2 exhibió una señal en δ 4,81 indicando la pre-
sencia de un grupo OH. El cambio del desplazamiento químico de H-18, originalmente de
δ 6,90 para Salpichrólido A, a δ 7,18 para el Derivado 2 y la resonancia del C-11 δ 25,4 a
33,6 respectivamente sugiere que el sustituyente está en la posición 12.
El patrón de sustitución en el anillo C conrma al OH en la posición C-12, por las co-

rrelaciones entre las señales observadas en el experimento HMBC. Las correlaciones claves
observadas en este último fueron entre H-18/C-12 (7,18/68,4), H-11α/C-12 (2,78/68,4) y
H-12β /C-14 (4,81/137,3).
El patrón de acoplamiento spin-spin del H-12 (t, J = 2,9 Hz) fue comparado con el
Salpichrólido T, el cual tiene un grupo OH en la posición 12 con orientación β (Nicotra
et al., 2013). El Salpichólido T presenta un acoplamiento spin-spin del H-12 (dd, J = 10,8;
5,0 Hz) diferente al derivado obtenido. Esto nos indicó que el grupo hidroxi del Derivado
2 tiene una orientación α.
5.4.4.3. Derivado 3
7.789
7.768
7.032
7.028
7.007
6.918
6.787
6.782
6.775
6.769
6.762
6.756
6.750
6.744
6.028
6.023
6.003
5.997
5.001
4.977
4.082
4.071
4.061
3.880
3.874
3.866
3.859
3.852
3.846
3.838
3.831
3.429
3.403
3.218
3.212
3.205
3.107
1.857
1.851
1.821
1.815
1.426
1.387
1.358
1.253
1.235
Metilos
H3-19, 21,
27 y 28
Aromáticos H-6
H-18 y 16
H-15 H-3 H-2 H-26 H-22 H-4

H-7
7.5 7.0 6.5 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 ppm
1
1
anillos A, C y D y la cadena lateral están estrechamente relacionados a los de Salpichrólido
A, lo que indica que dieren en el patrón de sustitución del anillo B, Tablas 5.3 y 5.4.
El espectro de RMN- H del Derivado

1 3 exhibió una señal en δ 4,06 indicando la presen-
cia de un grupo hidroxi, el cual fue ubicado en la posición C-7 dada la correlación COSY
con H-6 (δ 3,10) y H-8 (δ 2,63). Otras diferencias observadas con el sustrato, fueron el
cambio del desplazamiento químico de H-15 de δ 6,99 para Salpichrólido A a δ 7,78 para
el Derivado 3 y la resonancia del C-8 δ 33,3 a 42,7 respectivamente.
El patrón de sustitución en el anillo B fue conrmado por las correlaciones entre las
señales observadas en el experiemto HMBC. Las correlaciones claves observadas en este
último fueron entre H-8/C-7 (2,63/70,7), H-6/C-7 (3,10/70,7), H-6/C-8 (3,10/42,7) y H-
6/C-5 (3,10/65,4).
El patrón de acoplamiento spin-spin del H-7α (dd, J = 8,4; 3,7 Hz) indicó la orientación
β del grupo OH.
5.4.4.4. Derivado 4
7.637
7.616
7.045
7.025
6.983
6.809
6.803
6.796
6.790
6.784
6.778
6.771
6.765
6.406
6.401
6.392
6.388
6.027
6.021
6.002
5.996
4.989
4.966
3.974
3.964
3.882
3.876
3.867
3.861
3.854
3.847
3.839
3.832
3.477
1.883
1.877
1.847
1.841
1.387
1.359
1.281
1.259
Metilos
H3-19, 21,
27 y 28
Aromáticos
H-16 y 18
H-15 H-3 H-7 H-2 H-26 H-6 H-22 H-4 H-12
7.5 7.0 6.5 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 ppm
1
1
anillos A, C y D y la cadena lateral están estrechamente relacionados a los de Salpichrólido
A, lo que indica que dieren en el patrón de sustitución del anillo B, Tablas 5.3 y 5.4.
La ausencia de la señal a δH 3,22 d y δC 64,7 correspondiente al 5α,6α epóxido del

anillo B y la aparición de la señal a δH 3,98 d, δC 73,0; sugieren una sustitución diferente
en C-6. Según datos reportados en bibliografía (Veleiro et al., 1994), los desplazamientos
químicos en RMN-
13 C para el anillo B de C-5 a δ 77,3 y C-6 a δ 73,0; sugieren un 5α,6β -
diol en estas posiciones.
La aparición de una señal doble doblete a δ 6,40, correspondiente a un protón olefínico,

presenta correlación COSY con la señal de H-6 (δ 3,98), lo que ubica a éste en la posición
7.
Consistente con este sistema, se encontraron dos señales de carbonos vinílicos en el

experimento de RMN-
13 C, una a δ 115,0 y otra a δ 131,5 sugiriendo una doble ligadura en
el anillo B. Esta insaturación se ubica entre los C-7 y C-8, dada las asignaciones HSQC a
δH 6,40 y δC 115,0 para 7 y el carbono cuaternario C-8 a δC 131,5.
Figura 5.17: Salpichrólido A
1
Tabla 5.2: RMN- H a 400,13 MHz del Derivado 1 y Derivado 2, obtenidos de la biotransfor-
mación de Rhizomucor miehei comparados con el sustrato Salpichrólido A (SA) respecto
de TMS (δ ). Constante de acoplamiento J entre paréntesis en Hz. Resaltadas con color,
las diferencias observadas.
H SA 1 2
2 6,00 ddd (10,1; 2,8; 1,0) 6,03 dd (10,1; 2,5) 6,01 dd (10,1; 2,5)
3 6,76 ddd (10,1; 5,0; 2,5) 6,78 ddd (10,1; 5,1; 2,5) 6,78 ddd (10,1; 5,1; 2,5)
A
4α 1,90 dd (19,4; 5,0) 1,95 dd (19,7; 5,1) 1,93 m
4β 3,14 (19,4; 2,5; 2,8) 3,17 dt (19,7; 2,5) 3,14 dt (19,5; 2,5)
6 3,24 d (4,9) 3,26 d (4,9) 3,24 d (4,9)
7α 1,83 m 2,03 dd (15,3; 10,9) 1,93 m
B 7β 2,71 m 2,83 m 2,72 m
8 2,73 m 2,96 m 2,60 m
9 2,08 m 2,68 m 2,64 m
11α 2,57 m 3,53 dd (15,0; 2,5) 2,78 m
11β 1,30 m 2,29 dd (15,0; 14,1) 1,53 m
C
12α 2,91 m - -
12β 2,72 m - 4,81 t (2,9)
15 6,99 dd (8,2; 1,6) 7,28 m 7,16 d (8,2)
D 16 7,12 dd (8,2; 1,6) 7,42 dd (8,3; 2,1) 7,11 dd (8,2; 1,9)
18 6,90 d (1,6) 7,85 d (2,1) 7,18 d (1,9)
19 1,38 s 1,43 s 1,37 s
20 2,72 m 2,83 m 2,76 m
21 1,24 d (7,0) 1,27 m 1,23 d (7,1)
22 3,84 ddd (11,3; 5,6; 2,6) 3,84 ddd (11,3; 5,4; 2,8) 3,88 ddd (11,1; 6,4; 2,5)
23α 1,82 m 1,85 dd (14,6; 12,6) 1,89 m
23β 1,57 m 1,52 m 1,58 m
26 4,98 d (9,8) 4,97 d (10,1) 4,95 sa
27 1,37 s 1,38 s 1,357 s
28 1,35 s 1,35 s 1,365 s
OH-26 3,40 d (9,5) 3,41 d (10,1) -
1
Tabla 5.3: RMN- H a 400,13 MHz del Derivado 3 y Derivado 4, obtenidos de la biotransfor-
mación de Rhizomucor miehei comparados con el sustrato Salpichrólido A ( SA) respecto
de TMS (δ ). Constante de acoplamiento J entre paréntesis en Hz. Resaltadas con color,
las diferencias observadas.
H SA 3 4
2 6,00 ddd (10,1; 2,8; 1,0) 6,01 ddd (10,2; 2,7; 0,8) 6,00 dd (10,2; 2,3)
3 6,76 ddd (10,1; 5,0; 2,5) 6,76 ddd (10,2; 5,0; 2,3) 6,80 ddd (10,2; 5,3; 2,3)
A
4α 1,90 dd (19,4; 5,0) 1,99 ddd (19,7; 5,0; 0,8) 2,35 dd (19,9; 5,3)
4β 3,14 (19,4; 2,5; 2,8) 3,19 dt (19,8; 2,7) 3,45 dt (19,9; 5,3)
6 3,24 d (4,9) 3,10 sa 3,98 d (5,3)
7α 1,83 m 4,06 dd (8,4;3,7) 6,40 dd (5,3;1,9)
B 7β 2,71 m - -
8 2,73 m 2,63 dd (12,3;8,7) -
9 2,08 m 2,07 m 2,98 da (12,2)
11α 2,57 m 2,57 m 2,53 m
11β 1,30 m 1,37 m 1,58 m
C
12α 2,91 m 2,90 ddd (15,5;12,2;4,5) 3,08 ddd (16,8;13,3;4,4)
12β 2,72 m 2,73 m 2,89 dt (16,8;3,2)
15 6,99 dd (8,2; 1,6) 7,78 d (8,2) 7,64 d (8,3)
D 16 7,12 dd (8,2; 1,6) 7,02 dd (8,3;1,6) 7,05 dd (8,3;1,4)
18 6,90 d (1,6) 6,92 d (1,6) 6,99 sa
19 1,38 s 1,42 s 1,29 s
20 2,72 m 2,74 m 2,77 q (6,7)
21 1,24 d (7,0) 1,24 d (7,2) 1,26 d (7,2)
22 3,84 ddd (11,3; 5,6; 2,6) 3,86 ddd (11,2;5,8;2,6) 3,87 ddd (11,2;5,9;2,4)
23α 1,82 m 1,83 dd (14,4;2,6) 1,87 dd (14,4;2,5)
23β 1,57 m 1,58 m 1,59 m
26 4,98 d (9,8) 4,99 d (9,8) 4,99 d (9,4)
27 1,37 s 1,39 s 1,40 s
28 1,35 s 1,36 s 1,37 s
OH-26 3,40 d (9,5) 3,43 d (9,8) 3,43 m
Tabla 5.4: RMN-

13 C a 100,03 MHz del Derivados 1, 2, 3 y 4, obtenidos de la biotransfor-
mación de Rhizomucor miehei comparados con el sustrato Salpichrólido A (SA) respecto
de TMS (δ ). Resaltadas con color, las diferencias observadas.
C SA 1 2 3 4
1 202,78 201,3 202,8 202,4 203,4
2 128,9 128,7 129,2 129,3 128,3
A
3 142,66 142,4 143,0 142,6 143,6
4 33,66 33,5 33,9 33,3 33,7
5 64,75 64,3 64,9 65,4 77,3
6 59,14 57,8 59,1 63,8 73,0
7 30,45 29,3 30,1 70,7 115,0
B
8 33,28 32,4 29,8 42,7 131,5
9 36,45 35,9 33,2 33,6 37,4
10 48,84 48,3 48,6 48,8 50,4
11 25,44 41,1 33,6 26,2 27,2
12 30,68 198,5 68,4 31,0 30,8
C
13 137,85 144,4 138,1 138,0 138,4
14 137,11 141,9 137,3 137,0 138,4
15 125,66 126,3 126,7 127,7 124,5
16 126,56 133,6 128,3 126,1 126,3
D
17 140,47 141,9 141,8 141,3 144,0
18 128,84 126,3 130,1 129,0 129,7
19 14,96 15,2 15,5 15,3 16,4
20 43,04 43,0 43,6 43,3 43,6
21 17,30 17,3 17,9 17,5 17,6
22 67,51 67,2 67,7 67,8 67,8
23 33,76 33,9 34,4 34,0 34,3
24 64,94 64,9 64,9 65,2 65,1
25 63,72 63,7 63,9 64,0 64,0
26 91,76 91,5 92,0 92,1 92,0
27 16,67 16,5 16,9 16,9 16,9
28 18,86 18,6 19,1 19,1 19,1
5.4.5. Biotransformación de Salpichrólido C por Rhizomucor miehei
Luego de 7 días de incubación de la biotransformación del Salpichólido C con el R.

miehei, el extracto de la fase orgánica fue sometido a sucesivas etapas de puricación. Se
recuperó 32 % del sustrato y además se obtuvo una mezcla de compuestos polares los cuales
se acetilaron en piridina (Py) y anhídrido acético (Ac2 O ) para facilitar su separación. Estos
derivados son, 5a (8 %), 5b (1,4 %). El primero reportado previamente como un derivado
de Salpichrólido A (Tettamanzi et al., 1998) y el segundo nuevo, Figura 5.18.
(a) Derivado 5a (b) Derivado 5b
Figura 5.18: Productos de Biotransformación de Salpichrólido C por Rhizomucor miehei
La acción del R. miehei sobre el Salpichrólido C sólo ha sido la apertura del epóxido
de la cadena lateral, Figura 5.19.
Figura 5.19: Biotransformación del Salpichrólido C por Rhizomucor miehei

5.4.5.1. Derivado 5b
7.096
6.968
6.948
6.896
6.584
6.578
6.571
6.565
6.558
6.553
6.546
6.540
5.944
5.938
5.918
5.912
5.610
5.071
4.941
4.934
4.928
3.721
3.708
3.700
3.687
3.672
2.420
2.413
2.404
2.384
2.376
2.113
2.106
2.024
1.415
1.319
1.249
1.231
1.207
Metilos
H3-19, 21,
27 y 28
Metilos
de los
Acetilos
H-26 OH-24
Aromáticos
H-15, 16 y 18 H-6
H-3 H-2 H-22
7.0 6.5 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 ppm
1
Figura 5.20: RMN- H a 400,13 MHz del Derivado 5b respecto de TMS (δ ).

1 13 C del Derivado 5b, muestran que
los anillos A, C y D están estrechamente relacionados a los de Salpichrólido C, lo que in-
dica que dieren en el patrón de sustitución del anillo B y la cadena lateral, Tablas 5.5 y 5.6.
Según datos reportados en bibliografía (Veleiro et al., 1994), los desplazamientos quí-
micos en RMN-
13 C para el anillo B de C-5 a δ 76,5 y C-6 a δ 75,9; sugieren la apertura del
epóxido. La señal a δC 76,5 correspondiente a la posición 5 es idéntica que en el sustrato
conrmando un OH en esta posición, pero las señales a δH 4,91 t y δC 75,9 correspondientes
a la posición 6 y δH 1,93 m; 2,36 dt y δC 30,2 correspondientes a la posición 7, sugieren
una sustitución diferente en C-6, ubicando al primer sustituyente acetilo en esta posición.
Esto se conrma con RMN-
13 C.
Los espectros de RMN-

13 C mostraron cuatro señales carbonilo, δC 203,5; 170,3; 172,9
y 169,7. La primera correspondiente al C-1 por correlación HMBC con H3 -19 (203,3/1,29),
mientras que las demás señales corresponden a los carbonilos de un triacetoxi derivado.
El patrón de sustitución fue conrmado por las correlaciones entre las señales observadas
en el experiemto HMBC. Las correlaciones claves observadas en este último fueron entre
H-6/C O-6 (4,91/170,3) y H-26/C O-26 (5,58/169,7).
El cambio del desplazamiento químico de H-26 δ 4,99 para Salpichrólido C a δ 5,58

en el Derivado 5b y las resonancia de los carbonos en las posiciones 24 y 25 que pasan
de δC 64,8 a 73,1 y de δC 63,7 a 89,0 respectivamente, son correspondientes a la apertura
del epóxido y conrman la sustitución del acetilo en 26. Además este sistema, ubica a la
cuarta señal carbonilo de δC 172,9 de un acetilo en la posición 25.
La señal a δH 5,04 s corresponde a un OH, y presenta correlación HMBC con δC 40,3;

73,1 y 89,0 correspondientes a las posiciones 23, 24 y 25 respectivamente, conrmando que
esta señal pertenece a un OH en la posición 24. La conguración de C-24, C-25 y C-26
fue determinada como 24R, 25S y 26R a través de la correlación observada entre la señal
asignada al H-22 (δ 3,67) y la resonancia correspondiente al H-26 y H3 -28 (δ 1,27) en un
experimento NOESY.
Figura 5.21: Salpichrólido C
1
Tabla 5.5: RMN- H a 400,13 MHz del Derivado 5b, obtenido de la biotransformación de
Rhizomucor miehei comparado con el sustrato Salpichrólido C ( SC) respecto de TMS (δ ).
Constante de acoplamiento J entre paréntesis en Hz. Resaltadas con color, las diferencias.
H SC 5b
2 5,89 dd (10,2; 2,2) 5,89 dd (10,2; 2,2)
3 6,60 ddd (10,2; 5,2; 2,2) 6,53 ddd (10,2; 5,2; 2,2)
A
4α 2,08 m 2,09 m
4β 3,35 dt (19,7; 2,5) 2,86 m
6 3,63 sa 4,91 t (2,6)
7α 1,87 m 1,93 m
B 7β 2,15 m 2,36 dt (14,6; 3,4)
8 2,99 m 2,87 m
9 2,44 m 2,16 m
11α 2,11 m 2,45 m
11β 1,39 m 1,35 m
C
12α 3,01 m 2,94 m
12β 2,81 m 2,72 m
15 7,16 d (8,1) 7,08 d (8,1)
D 16 6,99 dd (8,1; 1,5) 6,93 dd (8,1; 1,5)
18 6,95 sa 6,87 sa
19 1,32 s 1,29 s
20 2,72 m 2,81 m
21 1,22 d (7,1) 1,21 d (7,1)
22 3,88 ddd (12,0; 6,0; 2,5) 3,67 m
23α 1,93 m 1,51 m
23β 1,60 m 1,51 m
26 4,94 s 5,58 s
27 1,36 s 1,39 s
28 1,35 s 1,17 s
OH-26 3,37 sa -
OH-24 - 5,04 s
CH3 CO-6 - 2,083 s
CH3 CO-25 - 1,99 s
CH3 CO-26 - 2,077 s
Tabla 5.6: RMN-

13 C a 100,03 MHz del Derivado 5b, obtenido de la biotransformación de
Rhizomucor miehei comparado con el sustrato Salpichrólido C ( SC) respecto de TMS (δ ).
Resaltadas con color, las diferencias observadas.
C SC 5b
1 204,41 203,5
2 128,6 129,3
A
3 141,76 140,7
4 35,53 35,6
5 77,33 76,5
6 74,77 75,9
7 34,04 30,8
B
8 32,48 33,3
9 38,32 38,3
10 52,21 52,7
11 26,04 26,2
12 30,95 31,0
C
13 137,64 137,8
14 138,3 137,7
15 125,74 125,9
16 125,64 125,7
D
17 140,88 140,2
18 128,48 129,4
19 14,93 14,9
20 43,47 43,3
21 17,81 17,3
22 67,79 76,3
23 34,25 40,3
24 64,61 73,1
25 63,58 89,0
26 91,82 93,9
27 16,74 12,2
28 18,84 24,3
CH3 C O-6 - 170,3
C H3 CO-6 - 21,7
CH3 C O-25 - 172,9
C H3 CO-25 - 22,2
CH3 C O-26 - 169,7
C H3 CO-26 - 21,4
5.4.6. Biotransformación de Salpichrólido G por Rhizomucor miehei
Luego de 7 días de incubación de la biotransformación del Salpichólido G con el R.

miehei, el extracto fue sometido a sucesivas etapas de puricación. Se recuperó 15 % del
sustrato y además se obtuvo una mezcla de compuestos polares los cuales se acetilaron
para facilitar su separación. Estos derivados son, 6a (3 %) y 6b (2,7 %).
La acción del R. miehei sobre el Salpichrólido G sólo ha sido la apertura del epóxido
del Anillo B. De la posterior acetilación se obtuvieron dos derivados, Figura 5.22.
Figura 5.22: Biotransformación del Salpichrólido G por Rhizomucor miehei y posterior

acetilación.
5.4.6.1. Derivado 6a
6.580
6.571
6.567
6.555
6.550
6.542
6.537
6.008
5.887
5.881
5.862
5.856
3.920
3.914
3.904
3.898
3.891
3.886
3.876
3.870
3.677
3.670
3.660
3.215
3.209
3.202
3.167
3.160
3.154
3.093
3.063
3.033
2.919
2.714
2.674
2.527
2.497
1.985
1.309
1.296
1.248
1.141
Metilos
H3-19, 21,
27 y 28
Metilos
de los
Acetilos
H-26
Aromáticos
H-16 y 18
H-3 H-2 H-22 H-6 H-8
6.5 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 ppm
1
Figura 5.23: RMN- H a 400,13 MHz del Derivado 6a respecto de TMS (δ ).
1
13 C del Derivado 6a, muestran que los
anillos A, C y D están estrechamente relacionados a los de Salpichrólido G, lo que indica
que dieren en el patrón de sustitución del anillo B, D y la cadena lateral, Tablas 5.7 y
5.8.
La ausencia de la señal a δH 3,24 s y δC 60,7 correspondiente al 5α,6α epóxido co-

rrespondiente al anillo B y la aparición de la señal a δH 3,67 t, δC 75,7; sugieren una
sustitución diferente en C-6. Según datos reportados en bibliografía (Veleiro et al., 1994),
los desplazamientos químicos en RMN-
13 C para el anillo B de C-5 a δ 77,9 y C-6 a δ 75,7;
sugieren la apertura del epóxido para dar un 5α,6β -diol.
Los espectros de RMN-

13 C mostraron tres señales carbonilo, δC 204,2; 170,7 y 169,4.
La primera correspondiente al C-1 por correlación HMBC con H3 -19 (204,2/1,31), mientras
que las demás señales corresponden a los carbonilos del sustituyente acetilo.
Las correlaciones entre las señales observadas en el experiemto HMBC entre H-26/C O-
26 fue (6,01/170,7), ubican al primer acetilo en esta posición. Mientras que el segundo se
deduce por el cambio de desplazamiento químico que se observa en C-15, que se encuentra
a δ 154,7 para Salpichrólido G y cambia a δ 150,0 para el Derivado 6a, lo que conrma
que el segundo acetilo está en esta posición.
6.767
6.541
6.537
6.527
6.520
6.515
6.507
6.502
6.494
6.489
6.008
5.903
5.897
5.878
5.871
4.807
4.801
4.793
3.912
3.907
3.897
3.891
3.884
3.878
3.869
3.864
2.149
2.094
1.987
1.294
1.288
1.246
1.134
Metilos
H3-19, 21,
27 y 28
Metilos
de los
Acetilos
H-26
Aromáticos
H-16 y 18 H-6
H-3 H-2 H-22 H-8
7.0 6.5 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 ppm
1
Figura 5.24: RMN- H a 400,13 MHz del Derivado 6b respecto de TMS (δ ).
Este compuesto presenta señales similares a las del Derivado 6a, la gran diferencia
con este compuesto es el singlete en 2,09 correspondiente a otro sustituyente acetilo y la
presencia de una señal extra correspondiente a un carbonilo en el espectro de RMN-
13 C.
Tablas 5.7 y 5.8.
El patrón de sustitución de los acetilos en el Derivado 6b fue conrmado por las co-
rrelaciones entre los picos observados en el experiemto HMBC. Las correlaciones claves
observadas en este último fueron entre H-26/CH3 C O-26 (6,00/170,7) y C-6/CH3 CO-6
(76,5/2,09), posicionando estos sustituyentes en las mencionadas pocisiones. Mientras que
el tercer acetilo se deduce su ubicación por el cambio de desplazamiento químico que se
observa en C-15. Para Salpichrólido G es δC 154,7 y cambia a δ 150,0 para el Derivado 6b,
similar al Derivado 6a, lo que conrma que este acetilo esta en esta posición.
Figura 5.25: Salpichrólido G
1
Tabla 5.7: RMN- H a 400,13 MHz del Derivado 6a y Derivado 6b, obtenidos de la bio-
transformación de Rhizomucor miehei comparados con el sustrato Salpichrólido G ( SG)
respecto de TMS (δ ). Constante de acoplamiento J entre paréntesis en Hz. Resaltadas con
color, las diferencias observadas.
H SG 6a 6b
2 5,98 dd (10,2; 2,8) 5,87 dd (10,2; 2,8) 5,89 dd (10,2; 2,4)
3 6,74 ddd (10,2; 5,0; 2,2) 6,56 ddd (10,2; 5,2; 2,2) 6,51 ddd (10,2; 5,2; 2,3)
A
4α 3,10 dt (19,4; 2,8) 3,18 dt (19,4; 2,8) 2,84 dt (19,5; 2,6)
4β 1,86 m 2,04 ddd (19,3; 5,2) 2,05 m
6 3,24 d (5,0) 3,67 t (2,8) 4,80 t (2,8)
7α 1,52 m 1,80 m 1,82 m
B 7β 3,32 d (5,0) 2,57 m 2,68 m
8 2,79 m 3,07 t (11,6) 2,95 ta (12,5)
9 2,05 td (10,7; 1,0) 2,11 m 2,16 m
11α 2,57 m 2,52 da (12,0) 2,51 da (12,0)
11β 1,1 m 1,14 m 1,16 m
C
12α 2,84 m 2,92 td (16,3; 4,0) 2,95 m
12β 2,64 m 2,70 dt (16,3; 2,7) 2,71 m
15 - - -
D 16 6,40 s 6,57 d (1,4) 6,54 d (1,5)
18 6,47 s 6,76 d (1,4) 6,77 d (1,5)
19 1,38 s 1,31 s 1,288 s
20 2,65 m 2,60 m 2,60 q (6,8)
21 1,18 d (7,1) 1,13 d (7,1) 1,13 d (7,1)
22 3,84 ddd (11,4; 6,2; 2,5) 3,89 ddd (11,3; 6,3; 2,4) 3,89 ddd (11,3; 6,3; 2,2)
23α 1,87 m 1,81 m 1,81 m
23β 1,58 m 1,53 m 1,51 m
26 4,99 sa 6,01 s 6,00 s
26-OH 3,24 s - -
27 1,39 s 1,25 s 1,25 s
28 1,37 s 1,30 s 1,294 s
CH3 CO-6 - - 2,09 s
CH3 CO-15 - 2,22 s 2,15 s
CH3 CO-26 - 1,98 s 1,99 s
Tabla 5.8: RMN-

13 C a 100,03 MHz del Derivado 6a y Derivado 6b, obtenidos de la bio-
transformación de Rhizomucor miehei comparados con el sustrato Salpichrólido G ( SG)
respecto de TMS (δ ). Resaltadas con color, las diferencias observadas.
C SG 6a 6b
1 203,23 204,2 203,4
2 128,93 129,4 129,4
A
3 142,77 141,0 140,2
4 33,62 35,5 35,4
5 65,07 77,9 76,5
6 60,76 75,7 76,8
7 29,44 34,1 30,2
B
8 32,49 31,6 32,5
9 38,56 41,2 40,6
10 49,34 53,4 53,2
11 24,4 24,7 24,8
12 31,81 32,4 32,4
C
13 140,57 141,1 140,9
14 124,29 130,3 129,7
15 154,76 150,0 150,0
16 112,44 120,5 120,5
D
17 141,63 141,8 142,0
18 121,55 127,0 127,3
19 15,07 14,8 14,7
20 42,95 42,8 42,7
21 17,61 17,3 17,3
22 67,44 71,0 70,9
23 33,95 34,4 34,4
24 64,82 62,0 62,0
25 63,79 61,1 61,1
26 91,87 92,0 91,9
27 16,71 16,9 16,9
28 18,88 18,5 18,5
CH3 C O-6 - - 170,1
C H3 CO-6 - - 21,7
CH3 C O-15 - 169,4 169,1
C H3 CO-15 - 21,6 21,4
CH3 C O-26 - 170,7 170,7
C H3 CO-26 - 21,5 21,5
5.4.7. Biotransformación de Salpichrólido A por Curvularia lunata
Luego de 7 días de incubación de la biotransformación del Salpichólido A con el C.

lunata, el extracto de la fase orgánica fue sometido a sucesivas etapas de puricación. Se
recuperó 24 % del sustrato y además se obtuvieron dos compuestos reportados previamen-
te; identicado como Salpichrólido C (6,4 %) y Salpichrólido M (5,8 %), los cuales fueron
aislados previamente de S. origanifolia (Veleiro et al., 1994) y (Tettamanzi et al., 2001)
respectivamente, Figura 5.26.
(a) Salpichrólido C (b) Salpichólido M
Figura 5.26: Productos de la Biotransformación de Salpichrólido A por Curvularia lunata
Como se puede apreciar en la Figura 5.27, la acción del C. lunata sobre el Salpichrólido
A sólo ha sido la apertura del epóxido selectivamente del Anillo B por un lado y de la
cadena lateral por el otro.
Figura 5.27: Biotransformación del Salpichrólido A por Curvularia lunata

5.4.8. Biotransformación de Salpichrólido A por Cunninghamella ele-

gans
Luego de 7 días de incubación del Salpichólido A con el C. elegans y posterior acetila-

ción, se recuperó 11,6 % del sustrato, dos compuestos nuevos; 7 (5,8 %) y 8 (3,2 %), siendo
el derivado acetilado 8a (1,7 %), Figura 5.28. Además, se obtuvieron tres compuestos re-
portados; Salpichrólido C (1,6 %) (Veleiro et al., 1994), Salpichrólido T (4,0 %) (Nicotra et
al., 2013) y el 2,3-dihidro Salpichrólido B (2,4 %) (Bado et al., 2004), Figura 5.29.
(c) Derivado 8a
Figura 5.28: Productos novedosos de la Biotransformación de Salpichrólido A por Cun-

ninghamella elegans y posterior acetilación
(a) Salpichrólido C (b) Salpichrólido T
(c) 2,3-dihidro Salpichrólido B
Figura 5.29: Productos conocidos de Biotransformación de Salpichrólido A por Cunning-

hamella elegans
Como se puede apreciar en la Figura 5.30, la acción del C. elegans sobre el Salpichrólido
A ha sido la biohidroxilación en el Anillo A y C, reducción del carbonilo, hidrogenación de
la doble ligadura, apertura del epóxido selectivamente y la no-modicación en la cadena
lateral. De la acetilación, se obtuvo un derivado.
Figura 5.30: Biotransformación del Salpichrólido A por Cunninghamella elegans

5.4.8.1. Derivado 7
6.934
6.918
6.914
6.832
6.685
6.674
6.660
6.648
5.990
5.988
5.965
5.963
4.931
4.906
3.803
3.797
3.789
3.783
3.775
3.769
3.761
3.754
3.680
3.370
3.345
3.330
3.319
1.467
1.316
1.289
1.177
1.159
Metilos
H3-19, 21,
27 y 28
Aromáticos
H-15, 16 y 18 OH-26
H-3 H-2 H-26 H-22 H-4
7.0 6.5 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 ppm
1
1
anillos B, C y D y la cadena lateral están estrechamente relacionados a los de Salpichrólido
A, lo que indica que dieren en el patrón de sustitución del anillo A, Tablas 5.9 y 5.11.
1
Su espectro de RMN- H mostró las señales características de protones olefínicos en
H-2, H-3 en δ 5,96 (d, J = 10,1 Hz) y δ 6,66 (dd, J = 10,1; 4,5 Hz) respectivamente, y
la señal correspondiente a un protón carbinólico a δ 3,66 (d, J = 4,5 Hz). La correlación
encontrada entre H-3 con señal en δ 3,66 en el espectro COSY sugirió que el grupo hidroxi
está situado en C-4. Esta suposición se conrmó por la correlación entre las señales de
HMBC de H-4 y C-2 a δ 129,4; C-3 en δ 141,9; C-5 en δ 64,3 y C-10 en δ 47,9 y entre
la señal de H- 3 y C-10 y C-4 en δ 72,5. La orientación del grupo hidroxilo en C-4 se
determinó por comparación de la multiplicidad y el valor de la constante de acoplamiento
entre la señal H-4 con aquellas del compuesto denominado Withangulatina G, con un
sistema 1-oxo-2-en-4β -hidroxi-5α,6β -dihidroxi en los anillos A/B (Damu et al., 2007).
5.4.8.2. Derivado 8
6.991
6.922
6.918
6.898
6.813
4.917
4.906
4.253
4.071
3.831
3.811
3.805
3.797
3.791
3.783
3.777
3.768
3.763
2.894
2.883
1.313
1.288
1.178
Metilos
H3-19, 21,
27 y 28
Aromáticos
H-15, 16 y 18 H-2 H-3 H-1 H-22
H-26 OH-26
7.0 6.5 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 ppm
1
1
anillos B, C y D y la cadena lateral están estrechamente relacionados a los de Salpichró-
lido A, lo que indica que dieren en el patrón de sustitución del anillo A, Tablas 5.10 y 5.11.
El espectro RMN- H del Derivado

1 8 mostró la ausencia de las resonancias olefínicas
a alta frecuencia características del doble enlace entre C-2 y C-3 del Salpichrólido A.
Presentó, además, una señal a δ 3,79 asignado a H-22; una señal a δ 4,91 asignado a H-
26 y tres señales singlete ancho en δ 3,83; 4,25 y 4,07 que correspondes a tres protones
carbinólicos adicionales. En el espectro de HSQC, estas señales correlacionan con las señales
en δC 75,6; 74,3 y 72,6, respectivamente, lo que conrma la presencia de tres grupos OH en
el anillo A. Para facilitar la elucidación estructural y la orientación de estos sustituyentes
hidroxi, el Derivado 8 se acetiló para dar el triacetil-Derivado 8.
6.979
6.893
6.877
6.784
6.002
5.219
5.215
5.021
3.947
3.936
3.931
3.925
3.919
3.908
3.903
3.842
3.813
2.852
2.840
2.052
2.026
1.992
1.289
1.244
1.134
1.122
1.117
Metilos
H3-19, 21,
27 y 28
Metilos
de los
Acetilos
H-26
Aromáticos
H-15, 16 y 18 H-2 H-3 H-22 H-1
7.0 6.5 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 ppm
1
Figura 5.33: RMN- H a 600,24 MHz del Derivado 8a respecto de TMS (δ ).
El espectro de RMN- H del Derivado

1 8a, Tablas 5.10 y 5.11, exhibió tres señales sin-
glete correspondientes a grupos acetoxi en δ 2,04; 2,02 y 1,98 y tres señales de protones
carbinólicos a δ 6,00 asignado a H-26 y las señales δ 5,22 y 5,01.
La señal en δ 3,93 del Derivado 8 se mantuvo prácticamente sin cambios en el Derivado

8a. Un examen detallado del espectro COSY del Derivado 8a condujo a la identicación
del sistema de spin XABCX2 que consiste en OH-1 (δ 2,63 d, J = 11,9 Hz), H-1 (δ 3,82
da, J = 11,9 Hz), H-2 (δ 5,22 sa), H-3 (δ 5,01 sa) y H2 -4 (δ 2,51 dd, J = 15,4; 3,7 Hz y δ
1,43 da, J = 15,4 Hz), lo que sugiere la presencia de un sistema 1-hidroxi-2,3diacetoxi en
el anillo A. Esta suposición se conrmó inequívocamente a través del esperimento HMBC.
La orientación de los sustituyentes en C-1, C-2 y C-3 fue determinado por el análisis de
las constantes de acoplamiento y conrmadas por el experimento NOESY. Se observó efec-
to NOE entre H-1 y H-2 (δ 5,22), H-11α (δ 1,81) y H3 -19 (δ 1,12), Figura 5.34, indicando
una orientación β del H-1, protón geminal al grupo hidroxilo en la posición 1 (δH 3,92). La
multiplicidad de las señales asignadas a H-2 (δ 5,22 sa) y H-3 (δ 5,01 sa), fue consistente
con la orientación β del grupo acetilo en C-2 y una orientación α del sustituyente acetoxi
en C-3 para el confórmero más estable de la estructura propuesta (MMFF94 campo de
fuerza en Macromodel). Esta suposición se conrmó por las correlaciones relevantes obser-
vados en el espectro NOESY de H-2 con H-1, H-3, y OH-1 y de H-3 con H-2, H-4α, y H-4β .
H-2
H-2
OH-1
OH-C1
H-11
H-7β
H3H-19
3-19
H-1
H-1
Figura 5.34: NOESY selectivo del Derivado 8a respecto de TMS (δ ).
La modelización de las posibles estructuras con las dos orientaciones posibles para el
H-1 (α o β) nos indica que sólo en el caso de una orientación 1β para el H-1 explicaría el
NOE existente entre H3 -19, H-11α y H-2, Figura 5.35.
(a) OH-1α (b) OH-1β
Figura 5.35: Posibles dos orientaciones para OH-1 (α o β) en el Derivado 8a

Figura 5.36: Salpichrólido A
1
Tabla 5.9: RMN- H a 600,24 MHz del Derivado 7, obtenidos de la biotransformación de
Cunninghamella elegans comparados con el sustrato Salpichrólido A ( SA) respecto de
TMS (δ ). Constante de acoplamiento J entre paréntesis en Hz. Resaltadas con color, las
diferencias observadas.
H SA 7
2 6,00 ddd (10,1; 2,8; 1,0) 5,96 d (10,1)
3 6,76 ddd (10,1; 5,0; 2,5) 6,66 dd (10,1; 4,5)
A
4α 1,90 dd (19,4; 5,0) 3,66 t (4,5)
4β 3,14 (19,4; 2,5; 2,8) -
6 3,24 d (4,9) 3,31 d (4,9)
7α 1,83 m 1,81 dd (15,0; 11,1)
B 7β 2,71 m 2,69 m
8 2,73 m 2,76 m
9 2,08 m 2,01 td (11,7;2,2)
11α 2,57 m 2,41 dq (12,5; 2,2)
11β 1,30 m 1,27 m
C
12α 2,91 m 2,84 td (12,8; 4,3)
12β 2,72 m 2,68 m
15 6,99 dd (8,2; 1,6) 7,05 d (8,1)
D 16 7,12 dd (8,2; 1,6) 6,92 da (8,1)
18 6,90 d (1,6) 6,82 sa
19 1,38 s 1,46 s
20 2,72 m 2,68 m
21 1,24 d (7,0) 1,16 d (7,2)
22 3,84 ddd (11,3; 5,6; 2,6) 3,78 ddd (11,3; 5,8; 2,5)
23α 1,82 m 1,77 dd (14,4; 2,3)
23β 1,57 m 1,51 dd (14,4; 11,2)
26 4,98 d (9,8) 4,91 d (9,9)
27 1,37 s 1,31 s
28 1,35 s 1,29 s
OH-26 3,40 d (9,5) 3,41 d (9,9)
1
Tabla 5.10: RMN- H a 499,79 MHz del Derivado 8 y a 600,24 MHz del Derivado 8a,
obtenidos de la biotransformación de Cunninghamella elegans comparados con el sustrato
Salpichrólido A ( SA) respecto de TMS (δ ). Constante de acoplamiento J entre paréntesis
en Hz. Resaltadas con color, las diferencias observadas.
H SA 8 8a
1 - 3,93 sa 3,92 da (11,9)
2 6,00 ddd (10,1; 2,8; 1,0) 4,25 sa 5,22 sa
A
3 6,76 ddd (10,1; 5,0; 2,5) 4,07 sa 5,01 sa
4α 1,90 dd (19,4; 5,0) 2,66 m 2,51 dd (15,4; 3,7)
4β 3,14 (19,4; 2,5; 2,8) 1,22 m 1,43 da (15,4)
6 3,24 d (4,9) 2,88 d (3,3) 2,84 d (4,7)
7α 1,83 m 2,57 m 2,58 m
B 7β 2,71 m 1,83 m 1,81 m
8 2,73 m 2,81 m 2,78 m
9 2,08 m 2,21 ta (12,0) 2,21 td (12,3; 1,6)
11α 2,57 m 1,82 m 1,81 m
11β 1,30 m 1,22 m 1,18 m
C
12α 2,91 m 2,70 m 2,68 m
12β 2,72 m 2,70 m 2,68 m
15 6,99 dd (8,2; 1,6) 7,00 d (8,0) 7,01 d (8,0)
D 16 7,12 dd (8,2; 1,6) 6,91 da (8,0) 6,88 da (8,0)
18 6,90 d (1,6) 6,81 sa 6,78 sa
19 1,38 s 1,19 s 1,12 s
20 2,72 m 2,66 m 2,59 m
21 1,24 d (7,0) 1,18 d (7,5) 1,13 d (5,6)
22 3,84 ddd (11,3; 5,6; 2,6) 3,79 ddd (10,9; 5,8; 2,5) 3,93 ddd (11,5; 6,2; 2,2)
23α 1,82 m 1,77 m 1,81 m
23β 1,57 m 1,50 dd (14,2; 11,4) 1,48 m
26 4,98 d (9,8) 4,91 d (5,6) 6,00 s
27 1,37 s 1,31 s 1,24 s
28 1,35 s 1,29 s 1,28 s
OH-26 3,40 d (9,5) 3,50 m -
OH-1 - - 2,63 d (11,9)
CH3 CO-2 - - 2,04 s
CH3 CO-3 - - 2,02 s
CH3 CO-26 - - 1,98 s
Tabla 5.11: RMN-

13 C a 150,95 MHz del Derivado 7, 8a y 125,03 MHz del Derivado 8,
obtenidos de la biotransformación de Cunninghamella elegans comparados con el sustrato
Salpichrólido A ( SA) respecto de TMS (δ ). Resaltados con color, las diferencias observadas.
C SA 7 8 8a
1 202,78 202,7 75,6 73,0
2 128,9 129,4 74,3 73,2
A
3 142,66 141,9 72,6 70,90
4 33,66 72,5 32,4 30,4
5 64,75 64,3 63,9 62,1
6 59,14 59,1 55,2 55,0
7 30,45 30,2 30,3 30,4
B
8 33,28 33,4 31,5 31,4
9 36,45 37,0 35,8 36,1
10 48,84 47,9 39,7 39,8
11 25,44 25,2 22,3 21,7
12 30,68 30,8 30,8 30,8
C
13 137,85 137,9 136,6 138,8
14 137,11 137,1 139,2 136,4
15 125,66 126,6 126,6 126,6
16 126,56 125,7 126,0 126,3
D
17 140,47 140,1 140,7 140,7
18 128,84 128,9 128,8 128,7
19 14,96 16,5 15,8 15,5
20 43,04 43,3 43,4 43,0
21 17,3 17,6 17,7 17,7
22 67,51 67,8 67,8 70,86
23 33,76 33,9 34,1 34,5
24 64,94 65,2 65,1 62,0
25 63,72 64,0 64,0 61,1
26 91,76 92,0 92,0 92,0
27 16,67 16,9 17,0 16,9
28 18,86 19,1 19,2 18,5
CH3 C O-2 - - - 169,2
C H3 CO-2 - - - 21,48
CH3 C O-3 - - - 169,9
C H3 CO-3 - - - 21,6
CH3 C O-26 - - - 170,6
C H3 CO-26 - - - 21,5
5.4.9. Consideraciones Metabólicas

Rhizomucor miehei y Cunninghamella elegans son dos hongos lamentosos que se han
utilizado para biohidroxilar sustratos diterpénicos y triterpénicos; (Martinez et al., 2015),
(Martinez et al., 2013), (García-Granados et al., 1995a); por lo que en la formación de los
productos Salpichrólido T; 2,3-dihidro Salpichrólido B y el Derivado 3 estarían implicadas
monooxigenasas del citocromo P-450 presentes en R. miehei y en C. elegans que serían
responsables de las biohidroxilaciones del sustrato Salpichrólido A en las posiciones de
C-1, C-7 y C-4 (Figura 5.37). Hay mucha información bibliográca en la que se observa
que los hongos lamentos, además de las biohidroxilaciones, pueden actuar como bolsas
de enzimas catalizando una gran variedad de transformaciones debido a la presencia de
deshidrogenasas, oxidasas, reductasas o epóxido hidrolasas entre otras enzimas (Garcia-
Burgos et al., 2006),(Cano et al., 2011). Así, el Derivado 1 podría formarse a partir del
Salpichrólido T por oxidación de éste mediante la acción de una oxidasa de R. miehei. Se
han descrito reacciones de oxidación de alcoholes usando células completas de R. miehei.
Con otros hongos lamentosos también se ha observado oxidación regioselectiva de uno
de los grupo hidroxilo de ent-óxidos de manoilo (García-Granados et al., 2004), (García-
Granados et al., 1995b). La reducción del grupo ceto del Salpichrólido T por la acción de
una deshidrogenasa presente en R. miehei originaría el Derivado 2 con una conguración
C-12S para el 12-hidroxiderivado obtenido (Figura 5.37). La mayoría de las reducciones
llevadas a cabo con levaduras y muchos microorganismos siguen la regla de Prelog (Prelog,
1964). La transferencia de hidrógeno tiene lugar por la cara Re de la cetona proquiral,
dando alcoholes con conguración S (Basso et al., 2016b) (García-Granados et al., 1994),
(García-Granados et al., 1999), (Fraga et al., 1999).
La acción de epóxido hidrolasas presentes en R. miehei, C. elegans y Curvularia lunata

podrían justicar la apertura estereoselectiva de los grupos epoxy en las sustratos Salpi-
chrólidos A, C y G para dar los dihidroxi-derivados Salpichrólido C, M y los Derivados 5a
y 6a. Esto se muestra en la Figura 5.38.
Las cetonas α,β -insaturadas son buenos sustratos para las eno-reductasas, obteniéndo-
se dihidrocetonas (Romagnolo et al., 2015), (Toogood et al., 2014), (Winkler et al., 2012).
Así, la reducción del doble enlace del sistema α,β -insaturado del sustrato Salpichrólido A
catalizado por una eno-reductasa de C. elegans daría lugar a un 2,3-dihidro-1-oxoderivado
que posteriormente sería reducido por una alcoholdeshidrogenasa de C. elegans para dar
el Derivado 7 (Figura 5.39). La reducción del doble enlace puede competir con la reduc-
ción del grupo carbonilo obteniéndose en este caso el alcohol alílico con conguración S en
C-1. La epoxidación enzimática de este alcohol y posterior apertura del mismo originaría
el trihidroxiderivado 8 (Figura 5.39). Epoxidaciones y obtención de dihidroxiderivados a
partir de los dobles enlaces de sustratos diterpénicos se ha observado en algunas biotrans-
formaciones con C. elegans y otros hongos lamentosos (García-Granados et al., 1995a),
(García-Granados et al., 1995b), (García-Granados et al., 1990b), (García-Granados et al.,
1990a), (García-Granados et al., 1986).
Figura 5.37: Posible vía para obtener los Derivados 1-4 y 7 a partir de Salpichrólido A
Figura 5.38: Posible vía para obtener Derivados 5a, 6a, Salpichrólido C y M
Figura 5.39: Posible vía para obtener el Derivado 8 y 2,3-dihidro Salpichrólido B a partir
del Salpichrólido A
5.5. Conclusiones
Sobre las Cepas de hongos
En términos generales se encontró que las cepas de hongos lamentosos Rhizomucor miehei,
Cunninghamella elegans y Curvularia lunata son microorganismos efectivos para biotrans-
formar w.
Rhizopus oryzae se descartó como cepa interesante dado el gran porcentaje de pro-
ductos laterales obtenidos en relación al producto derivado de la reacción.
Rhizomucor miehei fue la cepa más efectiva de las cuatro, logrando una gran variedad
de productos regio-estero selectivos.
Sobre los Sustratos

Entre los sustratos utilizados, Salpichrólidos A, C y G (w.), el más versatil fue el Sal-
pichrólido A, pudiéndose aislar de las reacciones con este compuesto, mayor variedad de
productos que utilizando cualquiera de los otros dos sustratos.
Sobre los Productos

Los resultados obtenidos en los ensayos previos fueron idénticos a los ensayos de biotrans-
formación a mayor escala. Es por ésto que podemos armar que las biotransformaciones
con estas cepas son reproducibles. Además, podemos decir que cada microorganismo tiene
un mecanismo de acción diferente.
Biotransformación con R. miehei : Biohidroxilación en los Anillos B y C. Oxidación

de un hidroxilo formando un carbonilo. Apertura de epóxido selectivamente.
Biotransformación con C. lunata : Apertura de epóxido selectivamente.
Biotransformación con C. elegans : Biohidroxilación en los Anillos A y C. Reducción

en el anillo A. Apertura de epóxido selectivamente.
Sobre las Biotransformaciones

Se logró la biotransformación de manera reproducible de los sustratos propuestos. Se ob-
tuvieron doce productos, de los cuales cuatro son PN ya descriptos en bibliografía y ocho
son nuevos derivados.
La aplicación de biotransformación a través de los hongos lamentosos resultó una he-

rramienta eciente para obtener diversidad estructural en metabolitos relativamente poco
reactivos como los withanólidos. Los derivados obtenidos son particularmente valiosos no
sólo por su potencial biológico sino por el hecho de que las funcionalidades tales como
grupos hidroxilo y carbonilo tienen la posibilidad de acceder a un mayor número y mayor
variedad de derivados.

5.6.1. Materiales y Métodos
Se utilizaron las técnicas y los equipos antes descritos en el Capítulo 4, Sección 4.6.1.
5.6.2. Material vegetal

Salpichroa origanifolia (Lam.) Baillon (Figura 4.8d) fue recolectada en Córdoba, Argen-
tina, en Junio del 2013. Una muestra se ha depositado en el Museo Botánico de Córdoba,
Universidad Nacional de Córdoba, bajo CORD 52365. El material vegetal fue identicado
por la Prof. Gloria E. Barboza (IMBIV-CONICET, Córdoba, Argentina).
5.6.3. Extracción y Puricación de los Sustratos

La planta fresca (aprox 5,0 kg) se trituró con EtOH a temperatura ambiente inme-
diatamente después de la recolección. El residuo obtenido después de la evaporación del
disolvente se particionó con hexano-EtOH-H2 O (10:3:1), la fase hidroalcohólica se concen-
tró, y la fase acuosa resultante se extrajo con CH2 Cl2 . El extracto CH2 Cl2 se secó sobre
Na2 SO4 anhidro, se ltró, y se evaporó hasta sequedad a presión reducida. El residuo ob-
tenido (5,3 g) se fraccionó inicialmente por cromatografía líquida al vacío. La elución con
mezclas de Hx-AcOEt de polaridad creciente (80:20 a 0:100) proporcionó cuatro fracciones
conteniendo withanólidos. Estas fracciones se reunieron (3,8 g) y fueron sometidas a varias
cromatografías. La elución con CH2 Cl2 -MeOH (100:0 a 90:10) proporcionó (en orden de
elución) Salpichrólido A (1,8 g), Salpichrólido G (0,3 g), y Salpichrólido C (0,8 g). las
constantes físicas y los datos espectroscópicos concordaban con los datos reportados para
estos compuestos (Veleiro et al., 1992), (Veleiro et al., 1994), (Tettamanzi et al., 1998). La
caracterización fue mediante métodos espectroscópicos de resonancia magnética nuclear en
una y dos dimensiones.
5.6.4. Selección de Cepas de Hongos

Se abordaron las especies Rhizopus oryzae (CECT 2339), Rhizomucor miehei (CECT
2749), Cunninghamella elegans (CECT 2113) y Curvularia lunata (CECT 2131); las cua-
les se obtuvieron de la Colección Española de Cultivos Tipo (CECT), Departamento de
Microbiología de la Universidad de Valencia, España, Figura 5.40. Fueron sembrados y de-
sarrollados en los correspondientes medios de cultivos, con lo que se obtuvieron preparados
aptos para utilizar en los procesos de biotransformación.
(a) C. elegans (b) C. lunata (c) R. miehei (d) R. oryzae
Figura 5.40: Microorganismos utilizados para realizar las biotransformaciones.

5.6.5. Medio de cultivo, Fermentación e Inoculación

En todos los experiemtos el medio utilizado para la proliferación de los microorganis-
mos se preparó con 24 g/L de papa dextrosada (Scharlau 02-483) en agua destilada. El
medio se ajustó a pH 5,6 a 25◦ C, a continuación se autoclavó a 121◦ C durante 15 min. La
fermentación a pequeña escala se llevó a cabo en erlenmeyers de 100 mL y se colocó 25
mL de medio estéril. La fermentación a gran escala se realizó en erlenmeyers de 250 mL
conteniendo 90 mL del medio. Protocolo indicado en los trabajos de García-Granados y
colegas (García-Granados et al., 2005), (García-Granados et al., 2004), (García-Granados
et al., 2000).
5.6.5.1. Inoculación del microorganismo

En la fermentación a gran y pequeña escala, se inocularon en cada erlenmeyer con el
medio de cultivo esterilizado, 1 mL del microorganismo resuspendido en una solución salina
(9 %). Las incubaciones fueron mantenidas a 28◦ C en una habitación termostatizada con
agitador orbital a 150 rpm durante 6 días.
5.6.5.2. Inoculación de los sustratos

Una vez que los microorganismos se desarrollaron agotando los nutrientes del medio,
se procedió a la distribución de los sustratos (5-10 %), previamente disueltos en EtOH,
manteniendo las condiciones estériles necesarias en este tipo de manipulaciones. Estas
incubaciones se dejaron bajo agitación orbital a 150 rpm y 28◦ C durante una semana.
5.6.6. Ensayos y Reacciones de Biotransformación

5.6.6.1. Ensayos Previos
Los objetivos de estos ensayos fueron; i) Conrmar que los productos aislados de las
biotransformaciones se hayan producido por efecto de la digestión del microorganismo. ii)
Determinar el tiempo óptimo de incubación de los sustratos en el medio fúngico. iii) Denir
con qué especies es más efectiva la biotransformación. iv) Conrmar si las biotransforma-
ciones son reproducibles.
i) Control negativo: Se inoculó el producto de partida en la misma concentración que

en las reacciones de biotransformación pero en ausencia del microorganismo. Se sometieron
a las mismas condiciones y al mismo tiempo de reacción. Luego se procedió a recuperar el
metabolito del medio como se expresa en la Sección 5.6.7. El control negativo consta de
recuperar inalterado el sustrato inoculado.
ii) Tiempo óptimo de incubación: Para determinarlo, se le realizaron controles cada

24 Hs de cada reacción de biotransformación a pequeña escala de sustrato. Cada control,
constó de tomar una alícuota de 10 mL de cada erlenmeyer y se procedió a extraer del
medio los productos obtenidos como se describe en la Sección 5.6.7. Si luego de la extrac-
ción se aislaba un producto diferente del inoculado, la especie de hongo sería apta para la
biotransformación. Se denió el tiempo óptimo de incubación cuando ya no hay cambios
en la cantidad de masa o variedad de productos obtenidos de la extracción.
iii) Elección de especies: Para denir qué especies eran más efectiva la biotransforma-
ción, se comparó la cantidad y diversidad de los derivados aislados.
iv) Reproducibilidad de la reacción: Para determinar la reproducibilidad de las biotrans-

formaciones se compararon las fracciones obtenidas de las puricaciones de estos ensayos
con las fracciones de las biotransformaciones a mayor escala.
5.6.6.2. Ensayos de Biotransformaciones

Las biotransformaciones se realizaron con el total de masa disponible del sustrato a
inocular y durante el tiempo y las condiciones que se jaron luego de los ensayos previos.
5.6.6.3. Reacción de Acetilación

Los productos obtenidos que presentaron alta polaridad debido a grupos hidroxilo pre-
sentes en la estructura, se los sometió a una reacción de acetilación. Los productos de esta
reacción, al reemplazar el protón por un grupo acetilo, disminuyen la polaridad del com-
puesto en general, lo que favorece su puricación y además conrma en los experimentos
de RMN la posición y cantidad de sustituyentes hidroxilo en la molécula.
La mezcla de compuestos polares fue disuelta en una mezcla de piridina (Py) y anhí-
drido acético (Ac2 O ). La reacción se mantiene durante 12 hs en oscuridad. Se detiene la
acetilación enjuagando con una solución de KHSO4 (neutraliza la piridina) y luego se ha-
cen varias particiones con CH2 Cl2 . La fase acuosa se descarta. La fase orgánica se seca con
Na2 SO4 anhidro, luego se ltra con papel y se lleva a sequedad a baja presión. Se purica
con CCD preparativa. Esta reacción se llevó a cabo en tres oportunidades. A continuación
se describe en que proporciones de reactivos fue llevado a cabo cada acetilación:
Biotransformación de Salpichrólido C por R. miehei, Fracción II (44,5 mg) en 3 mL

piridina y 1,5 mL de anhídrido acético. Se puricaron los Derivados 5a (25,0 mg)
(Tettamanzi et al., 1998) y 5b (4,4 mg).
Biotransformación de Salpichrólido G por R. miehei, Fracción VII-VIII (25,8 mg) en
3 mL piridina y 1,5 mL de anhídrido acético. Se puricaron los compuestos 6a (18,0
mg) y 6b (5,0 mg).
Biotransformación de Salpichrólido A por C. elegans, Fracción IX (9,7 mg) en 1 mL
piridina y 0,5 mL de anhídrido acético. Se puricó el Derivado 8a (5,2 mg).
5.6.7. Extracción y Puricación de los Productos obtenidos de las Bio-

transformaciones
A todos los medios de cultivo se los procesó de igual manera. Primero, para favorecer la
ruptura de las células, se agregó NaCl, luego se procedió a la ltración del microorganismo
del medio de cultivo acuoso. Se realizó una partición con varios lavados de CH2 Cl2 . La fase
orgánica se recuperó y se secó con Na2 SO4 anhidro, se ltró con papel y luego se llevó a
sequedad a baja presión. La fase acuosa se descartó.
La fase orgánica obtenida en cada proceso de biotransformación fue puricada mediante

CC (o CCD preparativa si la masa de la mezcla era <20 mg) utilizando sílica gel como fase
estacionaria y mezclas de disolventes orgánicos como eluyentes. Todos los solventes utiliza-
dos para puricación fueron destilados antes de ser utilizados: Acetato de Etilo (AcOEt),
Hexano (Hx), Metanol (MeOH), Etanol (EtOH) y Diclorometano (CH2 Cl2 ).
A continuación y de forma más detallada, se describe cómo fue el proceso de puricación

para cada biotransformación.
5.6.7.1. Biotransformación de Salpichrólido A por Rhizomucor miehei

Salpichrólido A (400 mg) se disolvió en EtOH (8 mL), y fue distribuido en ocho erlen-
meyers con cultivo de R. miehei. Se incubaron durante 7 días en un agitador a temperatura
ambiente, después de lo cual se procesaron los cultivos como se ha indicado anteriormente.
El medio de cultivo se particionó con CH2 Cl2 (3 x 200 mL). La fase orgánica se secó
con Na2 SO4 anhidro, luego se ltró, y se evaporó hasta sequedad a presión reducida. El
residuo (289,3 g) se sometió a CC con la mezcla de solventes CH2 Cl2 -Acetona (15:1 a 0:1),
de polaridad creciente para dar en total ocho fracciones de las cuales cuatro contuvieron
w. Esquema en Figura 5.41.
Fracción I [CH2 Cl2 -Acetona (8:1)] se obtuvo el producto de partida, Salpichrólido A

(18,5 mg; 4,6 %).
Fracción II [CH2 Cl2 -Acetona (5:1), 15,7 mg] se sometió a CCD de Alta Resolución con
una mezcla de solventes n-Hx-AcOEt (1:1). Se obtuvo el Derivado 1 (1,3 mg; 0,3 %).
Fracción IV-V [CH2 Cl2 -Acetona (2:1), 128,0 mg] se juntaron las fracciones IV y V y se
la sometió a CC con una mezcla de solventes CH2 Cl2 -MeOH (1-6 %). Se obtuvieron dos
subfracciones. La Fracción A (51,5 mg), que se la sometió a CCD de Alta Resolución en
n-Hx-AcOEt (4:6). De allí se obtuvieron los Derivados 3 (3,4 mg; 0,8 %), Salpichrólido T
(16,6 mg; 4 %) y el compuesto 2 (8,1 mg; 2,0 %). A la Fracción B (12,8 mg) se la sometió
a CCD en n-Hx-AcOEt (4:6). Se obtuvo el compuesto 4 (4,9 mg; 1,2 %).
210
R. miehei
Extracción
chrólido A por Rhizomucor miehei

Partición
Fase CH2Cl2 CC
CH2Cl2:Acetona
15:1 a 0:1
Fracción Fracción CC
II IV-V CH2Cl2:MeOH
1-6%
Fracción Fracción
A CCD B
CCD preparativa CCD
preparativa (51,5 mg) Hx-AcOEt (4:6) (12,8 mg) preparativa
Hx:AcOEt Alta Resolución
1:1 Hx-AcOEt (4:6)
Capítulo 5.
1 3 Salp T 2 4
(1,3 mg) (3,4 mg) (16,6 mg) (8,1 mg) (4,9 mg)
Figura 5.41: Esquema de puricación de los productos de la biotransformación de Salpi-

Biotransformaciones
5.6.7.2. Biotransformación de Salpichrólido C por Rhizomucor miehei

Salpichrólido C (250 mg) se disolvió en EtOH (5 mL), y fue distribuido en cinco erlen-
residuo (128,7 g) se sometió a CC con la mezcla de solventes CH2 Cl2 -Acetona (5:1-1:2), de
polaridad creciente para dar dos fracciones que contuvieron w. Esquema en Figura 5.42.
Fracción I [CH2 Cl2 -Acetona (3:1)] se obtuvo el producto de partida, Salpichrólido C

(81,4 mg; 32 %).
Fracción II [CH2 Cl2 -Acetona (1:1); 44,5 mg] se acetiló para dar 39,0 mg de una mezcla
que se sometió a una CC con polaridad creciente de la mezcla de solventes CH2 Cl2 -Acetona
(6:1-1:1) Se obtuvieron los compuestos derivados 5a (25,0 mg; 8 %)(Tettamanzi et al., 1998)
y 5b (4,4 mg; 1,4 %).
R. miehei
Extracción
Partición
Fase CH2Cl2
CC
CH2Cl2:Acetona
(15:1-1:2)
Fracción
II
Ac2O/Py CC
CH2Cl2:Acetona
(6:1-1:1)
5a 5b
(25,0 mg) (4,4 mg)

chrólido C por Rhizomucor miehei y posterior acetilación.
5.6.7.3. Biotransformación de Salpichrólido G por Rhizomucor miehei

Salpichrólido G (150 mg) se disolvió en EtOH (3 mL), y fue distribuido en tres erlen-
residuo (142,0 g) se sometió a CC con la mezcla de solventes CH2 Cl2 -Acetona (6:1-1:3),
de polaridad creciente para dar en total nueve fracciones de las cuales cinco fracciones
contuvieron w. Esquema en Figura 5.43.
Fracción II-IV [CH2 Cl2 -Acetona (5:1), 110,0 mg] se obtuvo el producto de partida, Sal-
pichrólido G (23,0 mg; 15 %).
Fracción VII-VIII [CH2 Cl2 -Acetona (1:1), 25,8 mg] se acetiló para dar 35,6 mg de una
mezcla que se sometió a CCD de Alta Resolución. Se obtuvieron los compuestos derivados
6a (5,6 mg; 3 %) y 6b (5,2 mg; 2,7 %).
R. miehei
Extracción
Partición
Fase CH2Cl2
CC
CH2Cl2:Acetona
(6:1-1:3)
Fracción
VII-VIII
Ac2O/ Py CCD Prep

Alta Resolución
Hx:AcOEt
(2:8)
6a 6b
(5,6 mg) (5,2 mg)

chrólido G por Rhizomucor miehei
5.6.7.4. Biotransformación de Salpichrólido A por Curvularia lunata

Salpichrólido A (300 mg) se disolvió en EtOH (6 mL), y fue distribuido en seis erlen-
meyers con cultivo de C. lunata. Se incubaron durante 7 días en un agitador a temperatura
residuo (244,2 mg) se sometió a CC con la mezcla de solventes CH2 Cl2 -Acetona (15:1 a
0:1), de polaridad creciente para dar en total nueve fracciones de las cuales seis fracciones
contuvieron w. Esquema en Figura 5.44.
Fracción II-III [CH2 Cl2 -Acetona (5:1)] se juntaron las fracciones II y III. Se obtuvo el
producto de partida, Salpichrólido A (72 mg; 24 %).
Fracción V-VI [CH2 Cl2 -Acetona (3:1)] se juntaron las fracciones V y VI. Se obtuvo el
compuesto Salpichrólido C (20 mg; 6,4 %).
Fracción VII-VIII [CH2 Cl2 -Acetona (2:1)] se juntaron las fracciones VII y VIII. Se
sometió a CCD en CH2 Cl2 -Acetona (8:2). Se obtuvo el compuesto Salpichrólido M (17,4
mg; 5,8 %), compuesto que se obtiene en una mezcla epimérica (Tettamanzi et al., 2001).
C. lunata
Extracción
Partición
Fase CH2Cl2 CC
CH2Cl2:Acetona
15:1 a 0:1
CCD
Fracción Alta Resolución Fracción
V-VI CH2Cl2:Acetona VII-VIII
(8:2)
Salp C Salp M
(20 mg) (17,4 mg)

chrólido A por Curvularia lunata
5.6.7.5. Biotransformación de Salpichrólido A por Cunninghamella elegans

Salpichrólido A (300 mg) se disolvió en EtOH (6 mL), y fue distribuido en seis erlenme-
yers con cultivo de C. elegans. Se incubaron durante 7 días en un agitador a temperatura
residuo (311,9 mg) se sometió a CC con la mezcla de solventes CH2 Cl2 -Acetona(15:1 a 0:1),
de polaridad creciente para dar en total nueve fracciones, de las cuales siete contuvieron
w. Esquema en Figura 5.45.
Fracción I [CH2 Cl2 -Acetona (5:1)] se obtuvo el producto de partida, Salpichrólido A

(34,7 mg; 11,6 %).
Fracción II [CH2 Cl2 -Acetona (3:1); 41,1 mg] se sometió a CC con la mezcla de solven-
tes CH2 Cl2 -Acetona, de polaridad creciente (30:1 a 3:1) para dar el Derivado 7 (17,3 mg;
5,8 %).
Fracción III [CH2 Cl2 -Acetona (3:1); 30,9 mg] se sometió a CCD preparativa con la
mezcla de solventes CH2 Cl2 -Acetona (8:2). Se obtuvo el Salpichrólido T (12,1 mg; 4,0 %)
(Nicotra et al., 2013).
Fracción IV [CH2 Cl2 -Acetona (2:1); 35,1 mg] se sometió a CCD preparativa con la
mezcla de solventes CH2 Cl2 -MeOH (5 %). Se obtuvo el compuesto Salpichrólido C (5,0
mg; 1,6 %).
Fracción V-VII [CH2 Cl2 -Acetona (2:1); 36,9 mg] se juntaron las fracciones V, VI y VII.
Se sometió a CCD preparativa con la mezcla de solventes CH2 Cl2 -Acetona (3:2). Se obtuvo
el compuesto 2,3-dihidro Salpichrólido B (7,4 mg; 2,4 %) (Bado et al., 2004).
Fracción VIII [CH2 Cl2 -Acetona (1:1); 9,7 mg] se obtuvo el compuesto 8 (9,7 mg; 3,2 %).
Fracción IX [CH2 Cl2 -Acetona (0:1); 47,4 mg] se acetiló para dar 35,6 mg de una mezcla
que se sometió a CC, se eluyó con una solventes CH2 Cl2 -Acetona (30:1 a 8:1). Se obtuvo
el compuesto derivado 8a (5,2 mg; 1,7 %).
5.6.8. Caracterización de los Productos

Los productos obtenidos fueron caracterizados mediante métodos espectroscópicos y
datos físicos.
C. elegans
Extracción
Partición
Fase CH2Cl2 CC
chrólido A por Cunninghamella elegans

CH2Cl2:Acetona
15:1 a 0:1
Fracción Fracción Fracción Fracción Fracción Fracción

II III IV V-VII VIII IX
CCD CCD CCD CC

CC preparativa preparativa preparativa Ac2O/ Py
CH2Cl2:Acetona CH2Cl2:Acetona
CH2Cl2:Acetona CH2Cl2:MeOH CH2Cl2:Acetona
30:1 - 3:1 30:1 - 8:1
8:2 5% 3:2
7 Salp T Salp C 2,3 di hidro

idro Salp B 8 8a
(17,3 mg) (12,1 mg) (5,0 mg) (7,4 mg) (9,7 mg) (5,2 mg)

215
5.6.8.1. Derivado 1
[(20S, 22R, 24S, 25S, 26R)-5α,6α:22,26:24,25-triepoxi-26-hidroxi-17 (13→18) abeo-

5α-ergosta-2,13,15,17-tetraen-1,12-diona]

21 λ
D +24,3 (c 0,11; CH2 Cl2 ); UV (MeOH) max (log )
212 (3,58) nm, 252 (3,11) nm; IR (película seca) ν −1
max 2927, 1686, 1031, 675 cm .
7,28 (1H; m; H-15); 6,78 (1H; ddd; 10,1; 5,1; 2,5; H-3); 6,03 (1H; dd; 10,1; 2,5; H-2); 4,97
(1H; d; 10,1; H-26); 3,84 (1H; ddd; 11,3; 5,4; 2,8; H-22); 3,53 (1H; dd; 15,0; 2,5; H-11α);
3,41 (1H; d; 10,1; OH-26); 3,26 (1H; d; 4,9; H-6); 3,17 (1H; dt; 19,7; 2,5; H-4β ); 2,96 (1H;
m; H-8); 2,83 (1H; m; H-7β ); 2,83 (1H; m; H-20); 2,68 (1H; m; H-9); 2,29 (1H; dd; 15,0;
14,1; H-11β ); 2,03 (1H; dd; 15,3; 10,9; H-7α); 1,95 (1H; dd; 19,7; 5,1; H-4α); 1,85 (1H; dd;
14,6; 12,6; H-23α); 1,52 (1H; m; H-23β ); 1,43 (3H; s; H-19); 1,38 (3H; s; H-27); 1,35 (3H;
s; H-28); 1,27 (3H; m; H-21).
RMN-13 C (CDCl3 ; 100,03 MHz) δ 201,3 (C, C-1); 198,5 (C, C-12); 144,4 (C, C-13);
142,4 (CH, C-3); 141,9 (C, C-14); 141,9 (C, C-17); 133,6 (CH, C-16); 128,7 (CH, C-2);
126,3 (CH, C-15); 126,3 (CH, C-18); 91,5 (CH, C-26); 67,2 (CH, C-22); 64,9 (C, C-24);
64,3 (C, C-5); 63,7 (C, C-25); 57,8 (CH, C-6); 48,3 (C, C-10); 43,0 (CH, C-20); 41,1 (CH2 ,
C-11); 35,9 (CH, C-9); 33,9 (CH2 , C-23); 33,5 (CH2 , C-4); 32,4 (CH, C-8); 29,3 (CH2 , C-7);
18,6 (CH3 , C-28); 17,3 (CH3 , C-21); 16,5 (CH3 , C-27); 15,2 (CH3 , C-19).

+ 487,2103 (calculado para C H O Na; 487,2091).
28 32 6
5.6.8.2. Derivado 2
[(20S,22R,24S,25S,26R)-5α,6α:22,26:24,25-triepoxi-12α,26-dihidroxi-17 (13→18) abeo-

5α-ergosta-2,13,15,17-tetraen-1-ona]

21 λ
218 (3,88) nm; IR (película seca) ν̄ −1
max 3443, 2927, 1686, 1031, 738 cm .
RMN-1 H (CDCl3 ; 400,13 MHz) δ 7,18 (1H; d; 1,9; H-18); 7,16 (1H; d; 8,2; H-15); 7,11
(1H; dd; 8,2; 1,9; H-16); 6,78 (1H; ddd; 10,1; 5,1; 2,5; H-3); 6,01 (1H; dd; 10,1; 2,5; H-2);
4,95 (1H; sa; H-26); 4,81 (1H; t; 2,9; H-12β ); 3,88 (1H; ddd; 11,1; 6,4; 2,5; H-22); 3,24 (1H;
d; 4,9; H-6); 3,14 (1H; dt; 19,5; 2,5; H-4β ); 2,78 (1H; m; H-11α); 2,76 (1H; m; H-20); 2,72
(1H; m; H-7β ); 2,64 (1H; m; H-9); 2,60 (1H; m; H-8); 1,93 (1H; m; H-4α); 1,93 (1H; m;
H-7α); 1,89 (1H; m; H-23α); 1,58 (1H; m; H-23β ); 1,53 (1H; m; H-11β ); 1,37 (3H; s; H-19);
1,365 (3H; s; H-28); 1,357 (3H; s; H-27); 1,23 (3H; d; 7,1; H-21).
RMN-13 C (CDCl3 ; 100,03 MHz) δ 202,8 (C, C-1); 143,0 (CH, C-3); 141,8 (C, C-17);
138,1 (C, C-13); 137,3 (C, C-14); 130,1 (CH, C-18); 129,2 (CH, C-2); 128,3 (CH, C-16);
126,7 (CH, C-15); 92,0 (CH, C-26); 68,4 (CH, C-12); 67,7 (CH, C-22); 64,9 (C, C-5); 64,9
(C, C-24); 63,9 (C, C-25); 59,1 (CH, C-6); 48,6 (C, C-10); 43,6 (CH, C-20); 34,4 (CH2 ,
C-23); 33,9 (CH2 , C-4); 33,6 (CH2 , C-11); 33,2 (CH, C-9); 30,1 (CH2 , C-7); 29,8 (CH, C-8);
19,1 (CH3 , C-28); 17,9 (CH3 , C-21); 16,9 (CH3 , C-27); 15,5 (CH3 , C-19).

28 34 6
5.6.8.3. Derivado 3
[(20S,22R,24S,25S,26R)-5α,6α:22,26:24,25-triepoxy-7β -26-dihidroxi-17 (13→18) abeo-


21 λ )
D +7,7 (c 0,51; CH2 Cl2 ); UV (MeOH) max (log
218 (3,65) nm, IR (película seca) ν̄ −1
max 3439, 2927, 1681, 1031, 733 cm .
6,92 (1H; d; 1,6; H-18); 6,76 (1H; ddd; 10,2; 5,0; 2,3; H-3); 6,01 (1H; ddd; 10,2; 2,7; 0,8;
H-2); 4,99 (1H; d; 9,8; H-26); 4,06 (1H; dd; 8,4; 3,7; H-7α); 3,86 (1H; ddd; 11,2; 5,8; 2,6;
H-22); 3,43 (1H; d; 9,8; OH-26); 3,19 (1H; dt; 19,8; 2,7; H-4β ); 3,10 (1H; sa; H-6); 2,90 (1H;
ddd ;15,5; 12,2; 4,5; H-12α); 2,74 (1H; m; H-20); 2,73 (1H; m; H-12β ); 2,63 (1H; dd; 12,3;
8,7; H-8); 2,57 (1H; m; H-11α); 2,07 (1H; m; H-9); 1,99 (1H; ddd; 19,7; 5,0; 0,8; H-4α);
1,83 (1H; dd; 14,4; 2,6; H-23α); 1,58 (1H; m; H-23β ); 1,42 (3H; s; H-19); 1,39 (3H; s; H-27);
1,37 (1H; m; H-11β ); 1,36 (3H; s; H-28); 1,24 (3H; d; 7,2; H-21).
138,0 (C, C-13); 137,0 (C, C-14); 129,3 (CH, C-2); 129,0 (CH, C-18); 127,7 (CH, C-15);
126,1 (CH, C-16); 92,1 (CH, C-26); 70,7 (CH, C-7); 67,8 (CH, C-22); 65,4 (C, C-5); 65,2
(C, C-24); 64,0 (C, C-25); 63,8 (CH, C-6); 48,8 (C, C-10); 43,3 (CH, C-20); 42,7 (CH, C-8);
34,0 (CH2 , C-23); 33,6 (CH, C-9); 33,3 (CH2 , C-4); 31,0 (CH2 , C-12); 26,2 (CH2 , C-11);
19,1 (CH3 , C-28); 17,5 (CH3 , C-21); 16,9 (CH3 , C-27); 15,3 (CH3 , C-19).

28 34 6
5.6.8.4. Derivado 4
[(20S,22R,24S,25S,26R)-22,26:24,25-diepoxy-5α,6β ,26-trihidroxi-17 (13→18) abeo-5α-

ergosta-2,7,13,15,17-pentaen-1-ona]

21 λ
D -23,4 (c 0,31; CH2 Cl2 ); UV (MeOH) max (log )
217 (4,00) nm, 262 (3,81) nm; IR (película seca) ν̄ −1 .
max 3430, 2932, 1681, 1031, 742 cm
6,99 (1H; sa; H-18); 6,80 (1H; ddd; 10,2; 5,3; 2,3; H-3); 6,40 (1H; dd; 5,3; 1,9; H-7α); 6,00
(1H; dd; 10,2; 2,3; H-2); 4,99 (1H; d; 9,4; H-26); 3,98 (1H; d; 5,3; H-6); 3,87 (1H; ddd; 11,2;
5,9; 2,4; H-22); 3,45 (1H; dt; 19,9; 5,3; H-4β ); 3,43 (1H; m; OH-26); 3,08 (1H; ddd; 16,8;
13,3; 4,4; H-12α); 2,98 (1H; da; 12,2; H-9); 2,89 (1H; dt; 16,8; 3,2; H-12β ); 2,77 (1H; q;
6,7; H-20); 2,53 (1H; m; H-11α); 2,35 (1H; dd; 19,9; 5,3; H-4α); 1,87 (1H; dd; 14,4; 2,5;
H-23α); 1,59 (1H; m; H-23β ); 1,58 (1H; m; H-11β ); 1,40 (3H; s; H-27); 1,37 (3H; s; H-28);
1,29 (3H; s; H-19); 1,26 (3H; d; 7,2; H-21).
RMN-13 C (CDCl3 ; 100,03 MHz) δ 203,4 (C, C-1); 144,0 (C, C-17); 143,6 (CH, C-3);
138,4 (C, C-13); 138,4 (C, C-14); 131,5 (C, C-8); 129,7 (CH, C-18); 128,3 (CH, C-2); 126,3
(CH, C-16); 124,5 (CH, C-15); 115,0 (CH, C-7); 92,0 (CH, C-26); 77,3 (C, C-5); 73,0 (CH,
C-6); 67,8 (CH, C-22); 65,1 (C, C-24); 64,0 (C, C-25); 50,4 (C, C-10); 43,6 (CH, C-20);
37,4 (CH, C-9); 34,3 (CH2 , C-23); 33,7 (CH2 , C-4); 30,8 (CH2 , C-12); 27,2 (CH2 , C-11);
19,1 (CH3 , C-28); 17,6 (CH3 , C-21); 16,9 (CH3 , C-27); 16,4 (CH3 , C-19).

28 34 6
[(20S,22R,24R,25S,26R)-6β ,26-diacetoxi-22,26-epoxy- 5α,24, 25-trihidroxi-17 (13→18)

abeo-5α-ergosta-2,13,15,17-tetraen-1-ona]

21 λ )
D -8,4 (c 1,44 ; CH2 Cl2 ); UV (MeOH) max (log
max 3466, 2932, 1739, 1681, 1378, 1054, 738 cm .
Reportado como derivado a partir de Salpichrólido A, (Tettamanzi et al., 1998). Si

bien está descripto se incluyen en este trabajo constantes físicas y HRMS dado que en la
publicación solamente están los datos de RMN.

32 40 9
[(20S,22R,24R,25S,26R)-6β ,25,26-triacetoxi-22,26-epoxy-5α,24-dihidroxi-17 (13→18) abeo-


21 λ
max 3439, 2932,1739, 1686, 1383, 1241, 1058, 742 cm .
6,87 (1H; sa; H-18); 6,53 (1H; ddd; 10,2; 5,2; 2,2; H-3); 5,89 (1H; dd; 10,2; 2,2; H-2); 5,58
(1H; s; H-26); 5,04 (1H; s; OH-24 ); 4,91 (1H; t; 2,6; H-6); 3,67 (1H; m; H-22); 2,94 (1H; m;
H-12α); 2,87 (1H; m; H-8); 2,86 (1H; m; H-4β ); 2,81 (1H; m; H-20); 2,72 (1H; m; H-12β );
2,45 (1H; m; H-11α); 2,36 (1H; dt; 14,6; 3,4; H-7β ); 2,16 (1H; m; H-9); 2,09 (1H; m; H-4α);
2,083 (3H; s; CH3 CO-6); 2,077 (3H; s; CH3 CO-26); 1,99 (3H; s; CH3 CO-25); 1,93 (1H; m;
H-7α); 1,51 (1H; m; H-23α); 1,51 (1H; m; H-23β ); 1,39 (3H; s; H-27); 1,35 (1H; m; H-11β );
1,29 (3H; s; H-19); 1,21 (3H; d; 7,1; H-21); 1,17 (3H; s; H-28).
RMN-13 C (CDCl3 ; 100,03 MHz) δ 203,5 (C, C-1); 172,9 (C, CH3 C O-25); 170,3 (C,
CH3 C O-6); 169,7 (C, CH3 C O-26); 140,7 (CH, C-3); 140,2 (C, C-17); 137,8 (C, C-13);
137,7 (C, C-14); 129,4 (CH, C-18); 129,3 (CH, C-2); 125,9 (CH, C-15); 125,7 (CH, C-16);
93,9 (CH, C-26); 89,0 (C, C-25); 76,5 (C, C-5); 76,3 (CH, C-22); 75,9 (CH, C-6); 73,1 (C,
C-24); 52,7 (C, C-10); 43,3 (CH, C-20); 40,3 (CH, C-23); 38,3 (CH, C-9); 35,6 (CH, C-4);
33,3 (CH, C-8); 31,0 (CH, C-12); 30,8 (CH, C-7); 26,2 (CH, C-11); 24,3 (CH3 , C-28); 22,2
(CH3 , C H3 CO-25); 21,7 (CH3 , C H3 CO-6); 21,4 (CH3 , C H3 CO-26); 17,3 (CH3 , C-21); 14,9
(CH3 , C-19); 12,2 (CH3 , C-27).

28 42 10
[(20S,22R,24S,25S,26R)-15,26-diacetoxi,22,26:24,25-diepoxi-5α,6β -dihidroxi-17 (13→18)

abeo-5α-ergosta-2,7,13,15,17-pentaen-1-ona]

21 λ )
D -45,1 (c 0,3; CH2 Cl2 ); UV (MeOH) max (log
217 (3,90) nm; IR (película seca) ν̄ −1 .
max 3501, 2932, 1743, 1681, 1378, 1218, 733 cm
(1H; ddd; 10,2; 5,2; 2,2; H-3); 6,01 (1H; s; H-26); 5,87 (1H; dd; 10,2; 2,8; H-2); 3,89 (1H;
ddd; 11,3; 6,3; 2,4; H-22); 3,67 (1H; t; 2,8; H-6); 3,18 (1H; dt; 19,4; 2,8; H-4α); 3,07 (1H;
t; 11,6; H-8); 2,92 (1H; td; 16,3; 4,0; H-12α); 2,70 (1H; dt; 16,3; 2,7; H-12β ); 2,60 (1H; m;
H-20); 2,57 (1H; m; H-7β ); 2,52 (1H; da; 12,0; H-11α); 2,22 (3H; s; CH3 CO-15); 2,11 (1H;
m; H-9); 2,04 (1H; ddd; 19,3; 5,2; H-4β ); 1,98 (3H; s; CH3 CO-26); 1,81 (1H; m; H-23α);
1,80 (1H; m; H-7α); 1,53 (1H; m; H-23β ); 1,31 (3H; s; H-19); 1,30 (3H; s; H-28); 1,25 (3H;
s; H-27); 1,14 (1H; m; H-11β ); 1,13 (3H; d; 7,1; H-21).
RMN-13 C (CDCl3 ; 100,03 MHz) δ 204,2 (C, C-1); 170,7 (C, CH3 C O-26); 169,4 (C,
CH3 C O-15); 150,0 (C, C-15); 141,8 (C, C-17); 141,1 (C, C-13); 141,0 (CH, C-3); 130,3
(C, C-14); 129,4 (CH, C-2); 127,0 (CH, C-18); 120,5 (CH, C-16); 92,0 (CH, C-26); 77,9
(C, C-5); 75,7 (CH, C-6); 71,0 (CH, C-22); 62,0 (C, C-24); 61,1 (C, C-25); 53,4 (C, C-10);
42,8 (CH, C-20); 41,2 (CH, C-9); 35,5 (CH2 , C-4); 34,4 (CH2 , C-23); 34,1 (CH2 , C-7);
32,4 (CH2 , C-12); 31,6 (CH, C-8); 24,7 (CH3 , C-11); 21,6 (CH3 , C H3 CO-15); 21,5 (CH3 ,
C H3 CO-26); 18,5 (CH3 , C-28); 17,3 (CH3 , C-21); 16,9 (CH3 , C-27); 14,8 (CH3 , C-19).

32 40 9
[(20S,22R,24S,25S,26R)-6,15,26-triacetoxy,22,26:24,25-diepoxi-5α-hidroxi-17 (13→18)
abeo-5α-ergosta-2,7,13,15,17-pentaen-1-ona]

21 λ )
max 3488, 2927, 1743, 1681, 1370, 1249, 738 cm
(1H; ddd; 10,2; 5,2; 2,3; H-3); 6,00 (1H; s; H-26); 5,89 (1H; dd; 10,2; 2,4; H-2); 4,80 (1H;
t; 2,8; H-6); 3,89 (1H; ddd; 11,3; 6,3; 2,2; H-22); 2,95 (1H; m; H-12α); 2,95 (1H; ta; 12,5;
H-8); 2,84 (1H; dt; 19,5; 2,6; H-4α); 2,71 (1H; m; H-12β ); 2,68 (1H; m; H-7β ); 2,60 (1H;
q; 6,8; H-20); 2,51 (1H; da; 12,0; H-11α); 2,16 (1H; m; H-9); 2,15 (3H; s; CH3 CO-15); 2,09
(3H; s; CH3 CO-6 ); 2,05 (1H; m; H-4β ); 1,99 (3H; s; CH3 CO-26); 1,82 (1H; m; H-7α); 1,81
(1H; m; H-23α); 1,51 (1H; m; H-23β ); 1,294 (3H; s; H-28); 1,288 (3H; s; H-19); 1,25 (3H;
s; H-27); 1,16 (1H; m; H-11β ); 1,13 (3H; d; 7,1; H-21).
RMN-13 C (CDCl3 ; 100,03 MHz) δ 203,4 (C; C-1); 170,7 (C; CH3 C O-26); 170,1 (C;
CH3 C O-6); 169,1 (C; CH3 C O-15); 150,0 (C; C-15); 142,0 (C; C-17); 140,9 (C; C-13); 140,2
(CH; C-3); 129,7 (C; C-14); 129,4 (CH; C-2); 127,3 (CH; C-18); 120,5 (CH; C-16); 91,9
(CH; C-26); 76,8 (C; C-6); 76,5 (C; C-5); 70,9 (CH; C-22); 62,0 (C; C-24); 61,1 (C; C-25);
53,2 (C; C-10); 42,7 (CH; C-20); 40,6 (CH; C-9); 35,4 (CH2 , C-4); 34,4 (CH2 , C-23); 32,5
(CH; C-8); 32,4 (CH2 , C-12); 30,2 (CH2 , C-7); 24,8 (CH2 , C-11); 21,7 (CH3 , C H3 CO-6);
21,5 (CH3 , C H3 CO-26); 21,4 (CH3 , C H3 CO-15); 18,5 (CH3 , C-28); 17,3 (CH3 , C-21); 16,9
(CH3 , C-27); 14,7 (CH3 , C-19).

34 42 10
5.6.8.9. Derivado 7
[(20S,22R,24S,25S,26R)-5α,6α:22,26:24,25-triepoxi-4β ,26-dihidroxi-17 (13→18) abeo-


21 λ )
D +9,5 (c 1,19; CH2 Cl2 ); UV (MeOH) max (log
max 3506, 2932, 1694, 1272, 1036, 742 cm
RMN-1 H (CDCl3 ; 600,24 MHz) δ 7,05 (1H; d; 8,1; H-15); 6,92 (1H; da; 8,1; H-16);
6,82 (1H; sa; H-18); 6,66 (1H; dd; 10,1; 4,5; H-3); 5,96 (1H; d; 10,1; H-2); 4,91 (1H; d;
9,9; H-26); 3,78 (1H; ddd; 11,3; 5,8; 2,5; H-22); 3,66 (1H; t; 4,5; H-4α); 3,41 (1H; d; 9,9;
OH-26); 3,31 (1H; d; 4,9; H-6); 2,84 (1H; td; 12,8; 4,3; H-12α); 2,76 (1H; m; H-8); 2,69 (1H;
m; H-7β ); 2,68 (1H; m; H-12β ); 2,68 (1H; m; H-20); 2,41 (1H; dq; 12,5; 2,2; H-11α); 2,01
(1H; td; 11,7; 2,2; H-9); 1,81 (1H; dd; 15,0; 11,1; H-7α); 1,77 (1H; dd; 14,4; 2,3; H-23α);
1,51 (1H; dd; 14,4; 11,2; H-23β ); 1,46 (3H; s; H-19); 1,31 (3H; s; H-27); 1,29 (3H; s; H-28);
1,27 (1H; m; H-11β ); 1,16 (3H; d; 7,2; H-21).
137,9 (C, C-13); 137,1 (C, C-14); 129,4 (CH, C-2); 128,9 (CH, C-18); 126,6 (CH, C-15);
125,7 (CH, C-16); 92,0 (CH, C-26); 72,5 (CH, C-4); 67,8 (CH, C-22); 65,2 (C, C-24); 64,3
(C, C-5); 64,0 (C, C-25); 59,1 (CH, C-6); 47,9 (C, C-10); 43,3 (CH, C-20); 37,0 (CH, C-9);
19,1 (CH3 , C-28); 17,6 (CH3 , C-21); 16,9 (CH3 , C-27); 16,5 (CH3 , C-19).

28 34 6
5.6.8.10. Derivado 8
[(20S,22R,24S,25S,26R)-5α,6α:22,26:24,25-triepoxi-1α,2α,3β ,26-tetrahidroxi-17 (13→18)

abeo-5α-ergosta-13,15,17-trieno]

21 λ )
max 3415, 2932, 1681, 1031, 762 cm .
RMN-1 H (CDCl3 ; 499,79 MHz) δ 7,00 (1H; d; 8,0; H-15); 6,91 (1H; da; 8,0; H-16); 6,81
(1H; sa; H-18); 4,91 (1H; d; 5,6; H-26); 4,25 (1H; sa; H-2); 4,07 (1H; sa; H-3); 3,83 (1H; sa;
H-1); 3,79 (1H; ddd; 10,9; 5,8; 2,5; H-22); 3,50 (1H; m; OH-26); 2,88 (1H; d; 3,3; H-6); 2,81
(1H; m; H-8); 2,70 (1H; m; H-12α); 2,70 (1H; m; H-12β ); 2,66 (1H; m; H-4α); 2,66 (1H; m;
H-20); 2,57 (1H; m; H-7α); 2,21 (1H; ta; 12,0; H-9); 1,83 (1H; m; H-7β ); 1,82 (1H; m; H-
11α); 1,77 (1H; m; H-23α); 1,50 (1H; dd; 14,2; 11,4; H-23β ); 1,31 (3H; s; H-27); 1,29 (3H; s;
H-28); 1,22 (1H; m; H-4β ); 1,22 (1H; m; H-11β ); 1,19 (3H; s; H-19); 1,18 (3H; d; 7,5; H-21).
RMN-13 C (CDCl3 ; 125,03 MHz) δ 140,7 (C, C-17); 139,2 (C, C-14); 136,6 (C, C-13);
128,8 (CH, C-18); 126,6 (CH, C-15); 126,0 (CH, C-16); 92,0 (CH, C-26); 75,6 (CH, C-1);
74,3 (CH, C-2); 72,6 (CH, C-3); 67,8 (CH, C-22); 65,1 (C, C-24); 64,0 (C, C-25); 63,9 (C,
C-5); 55,2 (CH, C-6); 43,4 (CH, C-20); 39,7 (C, C-10); 35,8 (CH, C-9); 34,1 (CH2 , C-23);
19,2 (CH3 , C-28); 17,7 (CH3 , C-21); 17,0 (CH3 , C-27); 15,8 (CH3 , C-19).

28 38 7
(20S,22R,24S,25S,26R)-2α,3β ,26-triacetoxi-5α,6α:22,26:24,25-triepoxy-1α-hidroxi-17 (13→18)

abeo-5α-ergosta-13,15,17-trieno]

21 λ )
max 2936, 1748, 1378, 1227, 1120, 1045, 760 cm
RMN-1 H (CDCl3 ; 600,24 MHz) δ 7,01 (1H; d; 8,0; H-15); 6,88 (1H; da; 8,0; H-16);
6,78 (1H; sa; H-18); 6,00 (1H; s; H-26); 5,22 (1H; sa; H-2); 5,01 (1H; sa; H-3); 3,93 (1H;
ddd; 11,5; 6,2; 2,2; H-22); 3,82 (1H; da; 11,9; H-1); 2,84 (1H; d; 4,7; H-6); 2,78 (1H; m; H-8);
2,68 (1H; m; H-12α); 2,68 (1H; m; H-12β ); 2,63 (1H; d; 11,9; OH-1); 2,59 (1H; m; H-20);
2,58 (1H; m; H-7α); 2,51 (1H; dd; 15,4; 3,7; H-4α); 2,21 (1H; td; 12,3; 1,6; H-9); 2,04 (3H; s;
CH3 CO-2); 2,02 (3H; s; CH3 CO-3); 1,98 (3H; s; CH3 CO-26); 1,81 (1H; m; H-7β ); 1,81 (1H;
m; H-11α); 1,81 (1H; m; H-23α); 1,48 (1H; m; H-23β ); 1,43 (1H; da; 15,4; H-4β ); 1,28 (3H;
s; H-28); 1,24 (3H; s; H-27); 1,18 (1H; m; H-11β ); 1,13 (3H; d; 5,6; H-21); 1,12 (3H; s; H-19).
RMN-13 C (CDCl3 ; 150,95 MHz) δ 170,6 (CH, CH3 C O-26); 169,9 (CH, CH3 C O-3);
169,2 (CH, CH3 C O-2); 140,7 (C, C-17); 138,8 (C, C-13); 136,4 (C, C-14); 128,7 (CH, C-
18); 126,6 (CH, C-15); 126,3 (CH, C-16); 92,0 (CH, C-26); 73,2 (CH, C-2); 73,0 (CH, C-1);
70,9 0 (CH, C-3); 70,9 (CH, C-22); 62,1 (C, C-5); 62,0 (C, C-24); 61,1 (C, C-25); 55,0
(CH, C-6); 43,0 (CH, C-20); 39,8 (C, C-10); 36,1 (CH, C-9); 34,5 (CH2 , C-23); 31,4 (CH,
C-8); 30,8 (CH2 , C-12); 30,4 (CH2 , C-4); 30,4 (CH2 , C-7); 21,7 (CH2 , C-11); 21,6 (CH3 ,
C H3 CO-3); 21,5 (CH3 , C H3 CO-26); 21,5 (CH3 , C H3 CO-2); 18,5 (CH3 , C-28); 17,7 (CH3 ,
C-21); 16,9 (CH3 , C-27); 15,5 (CH3 , C-19).

34 44 10
Capítulo 6
Actividad Biológica
Resumen: Fué de gran interés profundizar el estudio de los Salpichólidos naturales y

semisintéticos obtenidos a lo largo de este trabajo, debido a la gran variedad estructu-
ral y dadas las numerosas bioactividades que presentan en sus antecedentes. Para ello
se probaron dos actividades biológicas diferentes; la actividad totóxica sobre especies
Monocotiledóneas y Dicotiledóneas y la capacidad citotóxica sobre líneas celulares de
cáncer de próstata dependientes y no dependientes de andrógenos. Se observó que al-
gunos compuestos muestran propiedades totóxicas selectivas pudiendo actuar como
controladores de crecimiento selectivo contra especies consideradas maleza. Por otro
lado, no mostraron capacidad citotóxica diferenciada, resultado que contrasta con los
antecedentes, los cuales proponen a los w. con anillo D aromático como antiprolifera-
tivos en líneas celulares de cáncer de mama dependientes de estrógeno.
227
228 Capítulo 6. Actividad Biológica
6.1. Introducción
6.1.1. Actividad Biológica de los Withanólidos
Los w., componentes principales de muchas plantas medicinales, han atraído conside-
rablemente la atención de los investigadores del área de los PN, debido a la gran variedad
estructural y a las numerosas bioactividades que presentan. Algunas características estruc-
turales se asocian generalmente con determinadas propiedades biológicas. Este hecho los
convierte en potenciales candidatos para la investigación y el desarrollo (Misico et al., 2011).
Las primeras plantas medicinales de uso popular que producen w. estudiadas toquími-
camente fueron; Withania somnifera, que es codiciada ya que es comparada con el ginseg
en vista de las variadas propiedades terapéuticas que se le han atribuido (Sharma, 1984)
y Acnistus arborescens ampliamente conocida por su uso en tratamientos anticancerígenos
(Kupchan et al., 1969). Withaferina A (Figura 6.1) está presente en ambas especies y ha
sido evaluada extensamente, con algunas aproximaciones recientes sobre su mecanismo de
acción.
Figura 6.1: Withaferina A
Debido a este hallazgo se han realizado modernos estudios de componentes de estas

plantas y tales drogas poseen actividad antiestrés, antiinamatoria, antitumoral, antibió-
tica, hipnótica y depresora del SNC (Sharma y Daninn, 1992). También se han descripto
propiedades hepatoprotectoras, inmunoreguladoras, antialimentarias contra insectos, etc.
La actividad biológica de los w. en general, se ha revisado en varios trabajos (Budhiraja
y Shudir, 1987), (Ray y Gupta, 1994), (Veleiro, 2005), (Misico et al., 2011), (Chen et al.,
2011).
A continuación se presenta un breve resumen de algunas de estas actividades biológicas

de los w. de origen natural:
Actividad insecticida
Las propiedades insecticidas de los w. fueron reportados por primera vez a comienzos
de los 1960s de los compuestos aislados de la planta Nicandra physalodes. El compo-
nente mayoritario de esta planta, Nicandrenona, fue demostrado como responsable
de esta actividad, también es conocido por su sabor amargo (Yamamoto y Fraenkel,
1960), (Nalbandov et al., 1964), (Begley et al., 1972), (Bates y Eckert, 1972). Desde
entonces, varios w. han demostrado tener actividad insecticida.
Actividad antitumoral
Los términos citotóxico, antitumoral y anticancerígeno tienen diferentes implican-
cias para describir la actividad de un determinado producto. Un agente citotóxico es
aquel que es tóxico para las células tumorales de manera in vitro. Si esta actividad
se mantiene al hacer un experimento in vivo, se dice que el producto tiene actividad
antitumoral. El término anticancerígeno se reserva para aquellos productos que son
tóxicos para las células tumorales en tratamientos clínicos (Evans, 1989).
Numerosos trabajos sobre w. se han enfocado en el estudio de actividades biológicas

relativas al Cancer, la mayoría de ellos en citotoxicidad sobre líneas celulares (Chen
et al., 2011), (Misico et al., 2011). A lo largo de los años se han planteado muchas
relaciones estructura-actividad, las cuales establecen que la presencia de una cetona
α,β -insaturada en el anillo A y un 5β ,6β -epóxido en el anillo B, son esenciales para
que estos metabolitos posean propiedades antitumorales (Machin et al., 2010).
Actividad quimiopreventiva
Algunos w. exhiben propiedades quimiopreventivas ya que inducen la enzima qui-
nona reductasa o la enzima ciclooxigenasa 2 (COX-2). Estas enzimas promueven la
transformación de compuestos tóxicos para el ADN, en otros menos inocuos y fáciles
de eliminar. Por ejemplo, se observó que la Jaborosalactona P produce una inducción
signicativa de la quinona reductasa en hígado y cólon, pero no en pulmón, estómago,
o glándula mamaria de ratas (Misico et al., 2002).
Actividad tripanocida
A partir de Physalis angulata se aislaron unos 10 w. que se ensayaron in vitro co-
mo tripanocidas contra epimastigotes y tripomastigotes de Trypanosoma cruzi. Los
resultados indicaron que la actividad tripanocida contra tripomastigotes era mucho
mayor que contra epimastigotes, lo que sugiere su potencialidad como agentes qui-
mioterapéuticos para el tratamiento de la enfermedad de Chagas (Nagafuji et al.,
2004).
Actividad leishmanicida
La leishmaniasis es una enfermedad protozoaria con distribución endémica (88 países
de todo el mundo, en particular en América y Asia). Cada año se reportan alrededor
de 1,5 millones de nuevos casos. Debido al restringido número de fármacos dispo-
nibles, los nuevos compuestos de fuentes sintéticas o naturales son esenciales para
controlar esta enfermedad. A partir de Physalis minima se aislaron una serie de phy-
salinas que han sido examinadas como leishmanicidas en un ensayo in vitro (Choud-
hary et al., 2007). Algunas exhibieron interesantes actividades. Los resultados de esta
investigación demostraron que la presencia del sistema 2-en-1-ona y 5β ,6β -epoxi es
importante para la actividad (Cardona et al., 2006).
Actividad inmunorregulatoria
Estudios farmacológicos han demostrado la capacidad inmunomoduladora de los w.
La artritis reumatoidea es una enfermedad autoinmune que tiene una alta asociación
con las células T y B. De la especie Withania coagulans, una hierba medicinal utilizada
para el tratamiento del reumatismo, bronquitis y enfermedades degenerativas, se
aislaron unos diez w. que exhibieron actividades relativamente buenas frente a la

inhibición de la proliferación de células T y B. La presencia de un sistema 2,5-dien-
1-ona en los anillos A y B, junto a un 17β -OH y un grupo CH3 en C-27, incrementan
la actividad inmunorregulatoria (Maurya et al., 2008).
Sinaptogénesis y derivaciones neuríticas

Facilitar la sinaptogénesis y la reconstrucción de las redes neuronales en el cerebro
dañado es necesario para el tratamiento terapéutico de enfermedades neurodegene-
rativas que producen degeneración neuronal y atroa. Varios w. aislados del extracto
metanólico de raíces de Withania somnifera han demostrado la regeneración y re-
construcción neurítico-sináptica de neuronas corticales dañadas, evitando la atroa
dendrítica y axonal (Kuboyama et al., 2005), (Zhao et al., 2002).
Actividad inhibitoria de colinesterasa

Los inhibidores de la colinesterasa de origen natural son de especial interés en el
desarrollo de fármacos, debido a la participación de la colinesterasa en la enfermedad
de Alzheimer y otras demencias relacionadas. Los inhibidores de acetilcolinesterasa
(AChE) activan las funciones centrales colinérgicas mediante el aumento de los ni-
veles de acetilcolina en el cerebro. W. aislados de Withania somnifera resultaron ser
moderados inhibidores de la enzima acetilcolinesterasa.(Sehgal et al., 2012), (Choud-
hury et al., 2004).
Actividad totóxica
Los w. son productos naturales que exhiben una potente totoxicidad selectiva bajo
condiciones de laboratorio, lo cual hace que el potencial alelopático de las especies
de Solanaceae sea un buen tema de investigación. Un buen herbicida debe poseer
un efecto totóxico selectivo en especies invasoras, mientras que no debe ejercer
efectos deletéreos en cultivos comerciales. A la fecha se han reportado numerosos
w. aislados de especies de los géneros Iochroma y Jaborosa con actividad totóxica
selectiva hacia especies dicotiledóneas (Vaccarini y Bonetto, 2000). Este antecedente
hace interesante la idea de usar los principales compuestos del género Salpichroa para
probar esta actividad.
6.2. Antecedentes
6.2.1. Actividad Biológica de los Salpichrólidos
Los w. representan atractivos núcleos de investigación, no sólo por sus complejas ca-
racterísticas estructurales sino también por sus múltiples actividades biológicas. Particu-
larmente, los Salpichrólidos (Figura 6.2) han demostrado: Actividad insecticida y antipro-
liferativa.
(a) Salpichrólido con esqueleto normal (b) Salpichrólido con

funcionalizado en el anillo D. el anillo D aromático.
Figura 6.2: Salpichrólidos representativos
Actividad Insecticida
Los primeros antecedentes de w. con actividad antialimentaria fueron informados por
(Nalbandov et al., 1964) quienes ensayaron la Nicandrenona (Nic-1) aislada de Nican-
dra physalodes, frente a larvas de Manduca sexta (gusano del tabaco). Posteriormente
se aislaron w. con propiedades antialimentarias de otras especies de Solanáceas y se
estudió la participación de los w. presentes en frutos de Physalis peruviana en la
protección de los mismos durante un mecanismo de defensa química (Baumann y
Meier, 1993).
En base a estos antecedentes se ha investigado la propiedad insecticida-antialimentaria

de los componentes mayoritarios de Salpichroa origanifolia, Salpichrólidos A, C, G y
algunos derivados sintéticos, sobre tres especies de insectos. Se encontró una aprecia-
ble actividad antialimentaria sobre la mosca común, Musca domestica (Mareggiani
et al., 2000), la peste de grano almacenado, Tribolium castaneum (Mareggiani et al.,
2002) y la mosca mediterránea, Ceratitis capitata (Bado et al., 2004). El Salpichróli-
do A fue el más activo en todos los casos produciendo un retraso en el desarrollo de
las larvas sobrevivientes. Se comparó este resultado contra un medio de bajo valor
nutritivo, el cual produjo un porcentaje de demora en el desarrollo igual al causado
por el Salpichrólido A.
Los efectos de Salpichrólidos C y G dieren de una especie de insecto a la otra, por

lo que ambos compuestos producen retraso en el desarrollo únicamente a concentra-
ciones altas (2.000 ppm) en M. domestica y C. capitata, pero Salpichrólido G fue
casi tan ecaz como Salpichrólido A en T. castaneum. En cuanto a la toxicidad, los

tres Salpichrólidos producen mortalidad signicativa para larvas de M. domestica,
mostrando un valor de CE50 de 200-300 ppm (Concentración Efectiva Media de-
nida como la concentración de compuesto que produce un efecto en el 50 % de la
población), pero sólo Salpichrólidos A y G tienen este efecto sobre C. capitata (Bado
et al., 2004). Los autores proponen que las diferencias podrían estar relacionadas con
diferentes mecanismos desintoxicantes .
En cuanto a la actividad de los derivados sintéticos de estos Salpichrólidos se pudo

observar que, la oxidación del hemicetal en la cadena lateral para dar la δ -lactona
elimina la actividad en M. domestica y en T. castaneum. Sin embargo, la acetilación
redujo drásticamente la actividad sólo para esta última especie de insectos. El efecto
de grupos funcionales en los anillos A y B afectan la actividad resultante sobre larvas
de C. capitata (Bado et al., 2004). Salpichrólido B, un componente minoritario de
S. origanifolia, fue el más activo de todos los Salpichrólidos ensayados, produciendo
una mortalidad signicativa cuando se incorporaró a la dieta incluso a dosis bajas
(CE50 83 ppm). También produjo retrasos de desarrollo claramente observados en
larvas sobrevivientes a 25 ppm. La reducción del doble enlace produjo una dismi-
nución signicativa en la actividad. La oxidación de Salpichrólido C a la 6-cetona o
reordenamiento del 5,6-epóxido en Salpichrólido A a la ∆ 2,4 -6α-alcohol da lugar a
compuestos inactivos.
El contenido de Salpichrólidos en S. origanifolia se monitoreó durante el desarrollo de

la planta, alcanzando un máximo durante el verano, momento en que las poblaciones
de insectos son mayores. Estos resultados, en conjunto con la observada propiedad
tóxica y antialimentaria de los compuestos, sugieren que éstos pueden actuar como
una defensa química que ofrece protección a la planta contra los insectos tófagos
(Mareggiani et al., 2000).
Actividad Antiproliferativa
Como se mencionó anteriormente, el primer w. que se caracterizó fue la Withaferina
A (Figura 6.1), aislada en 1965, casi al mismo tiempo, por Lavie de Withania som-
nífera y por Kupchan de Acnistus arborescens (Lavie et al., 1965), (Kupchan et al.,
1965). Ambas plantas son conocidas por su uso en el tratamiento de cáncer (Kup-
chan et al., 1969), (Sharma y Dandiya, 1991). Withaferina A mostró citotoxicidad in
vitro e in vivo contra varios tipos de carcinoma (Ray y Gupta, 1994), (Glotter, 1991).
Con estos antecedentes, se estudió la actividad antiproliferativa sobre una serie de

líneas celulares de cáncer de mama (MCF7, MCF7 / BUS, T-47D, MDA-MB-231,
y SK-BR-3) utilizando 22 w. de origen natural, entre ellos los Salpichrólido A, C,
D y G. Esta serie incluyó líneas celulares ampliamente utilizadas como modelos in
vitro de cáncer de mama con características moleculares distintivas, dependientes e
independientes de estrógenos (Lacroix y Leclercq, 2004) a n de evaluar la quimio-
sensibilidad de los productos naturales investigados (Machin et al., 2010).
En ese trabajo se concluye que w. con un anillo adicional de seis miembros entre las
posiciones 12 y 17 del esqueleto ergostano, la actividad es independiente a la cadena
lateral que estos pudieran tener. Además indican que la actividad antiproliferativa
depende principalmente del patrón de sustitución de los anillos A y B, siendo im-
portante para la actividad la presencia de una cetona α ,β insaturada y un sistema
5β ,6β epoxi.
Es de destacar que esta actividad, no depende de una línea de células de tumor en

particular, excepto en el caso de los w. con un anillo D aromático. Fue notable la selec-
tividad del compuesto Salpichrólido A (Figura 6.3) que mostró hacia líneas celulares
dependientes de estrógeno en comparación con las líneas celulares no dependientes.
Figura 6.3: Salpichrólido A.
Estos compuestos, y ciertos análogos con una cadena lateral simplicada, exhiben
efectos antagonistas hacia el receptor humano de estrógeno (ER), un receptor nu-
clear cuyo ligando endógeno tiene un anillo aromático A (estradiol). Los resultados
anteriores sugieren que el anillo D aromático es un arreglo estructural clave para la
actividad observada, por lo que este núcleo esteroide modicado puede proporcionar
un nuevo andamio para el diseño de nuevos antiestrógenos.
Recientemente Avarez y colegas (Alvarez et al., 2015), han llevado a cabo el uso de
simulación de dinámica molecular para modelar el modo de unión ligando-receptor,
utilizando como ligandos, un compuesto natural (Salpichrólido A) y un análogo sin-
tético con el anillo D aromático dentro del receptor ERα. Sus resultados indican que
los modos de unión son consistentes con una orientación en el cual el anillo D aromá-
tico ocupa una posición similar a la observada para el anillo A del ligando estradiol.
Este potencial efecto antiestrogénico sugiere la necesidad de realizar más bioensayos
orientados para dilucidar la actividad antiestrogénica intrínseca de los w. con el anillo
D aromático y además abre las puertas a preguntarnos cómo será el comportamiento
de estos compuestos contra líneas celulares de cáncer de próstata, que al igual que
en el cáncer de mama también depende de una hormona esteroidal, en este caso:
andrógeno.

A partir de lo anteriormente expuesto se plantea como objetivo ampliar el estudio de
actividad biológica de los w. aislados. Esto implica,
Probar actividad totóxica de los compuestos mayoritarios aislados y caracterizados

de S. lehmannii y S. origanifolia, sobre especies Monocotiledóneas y Dicotiledóneas
para evaluar su selectividad.
Medir la capacidad citotóxica de todos los compuestos Salpichrólidos disponibles,

naturales y semisintéticos, sobre líneas celulares de cáncer de próstata dependientes
y no dependientes de andrógenos.

6.4.1. Resultados del Ensayo de Fitotoxicidad
Este bioensayo se conoce como el proceso global de caracterización de la actividad her-
bicida de un producto alelopático, cuya metodología incluye el uso de material biológico
como sustrato de la acción de las totoxinas aisladas de organismos vegetales y la evalua-
ción de los efectos producidos respecto a un control.
Varios w. aislados de especies de los géneros Iochroma y Jaborosa han mostrado activi-
dad totóxica selectiva sobre especies dicotiledóneas, incluyendo w. con esqueleto normal,
w. tipo norbornano, sativólido, w. espiránicos en C-22 y derivados trechonólidos (Vaccarini
y Bonetto, 2000), (Nicotra et al., 2003), (Nicotra et al., 2006), (Nicotra et al., 2007) y
(Ramacciotti y Nicotra, 2007). En base a estos antecedentes fue atractiva la idea de probar
la actividad totóxica de los principales compuestos obtenidos de Salpichroa origanifolia y
Salpichroa lehmannii contra Lactuca sativa (lechuga) y Avena sativa (avena).
6.4.1.1. Sustratos
Para ello, se prepararon soluciones en un rango de concentración creciente de 15 a 400
ppm de los Salpichrólidos A, C, D, O, Q, S y 2,3-dihidro Salpichrólido B. Estos compuestos
fueron aislados de S. lehmannii (Figura 6.4, Salpichrólidos A, C, S y 2,3-dihidro Salpichró-
lido B, Capítulo 4) y S. origanifolia (Figura 6.5, Salpichrólidos D, O y Q, disponibles en
el labororatorio por trabajos anteriores) (Nicotra et al., 2013).
(a) Salpichrólido A (b) Salpichrólido C
(c) Salpichrólido S (d) 2,3-dihidro Salpichrólido B
Figura 6.4: Sustratos de Salpichroa lehmannii estudiados en el Ensayo de Fitotoxicidad.

(a) Salpichrólido D (b) Salpichrólido O
(c) Salpichrólido Q
Figura 6.5: Sustratos de Salpichroa origanifolia estudiados en el Ensayo de Fitotoxicidad.
6.4.1.2. Resultados
Se analizó el efecto de estos compuestos en la germinación de las semillas y la longitud
radicular sobre una especie dicotiledónea Lactuca sativa L. (lechuga) y sobre una especie
monocotiledónea Avena sativa L. (avena) como especies estándares. Se estudió el intervalo
de concentraciones de 15-400 ppm. Se siguió el protocolo ya reportado para este tipo de
ensayo (Vaccarini y Bonetto, 2000).
El efecto producido por los compuestos de ensayo sobre la germinación no fue signi-
cativa sobre las especies ensayadas. Por otro lado, todos los compuestos evaluados, con la
excepción de Salpichrólido S, causaron fuerte inhibición de la elongación radicular de L.
sativa a 150 y 400 ppm y además se observó un efecto dependiente de la dosis. Los valores
de inhibición observados a 400 ppm fueron entre 86,0 % para Salpichrólido A y 42,4 % para
Salpichrólido O. Las respuestas sobre elongación radicular en A. sativa fueron diferentes.
El compuesto 2,3-dihidro Salpichrólido B mostró una inhibición similar con respecto a L.
sativa, mientras que los compuestos Salpichrólidos O, A y C mostraron menores efectos
inhibitorios, y los compuestos Salpichrólido Q, S y D fueron inactivos.
Los compuestos que muestran propiedades totóxicas selectivas sobre lechuga y avena
son los Salpichrólidos O, Q, D, A y C, por lo tanto estos compuestos pueden actuar co-
mo controladores de creciemiento selectivo sobre especies monocotiledóneas consideradas
maleza. Un efecto similar sobre especies dicotiledóneas se informó para w. con diferentes
arreglos en la cadena lateral: w. esqueleto de tipo normal, por ejemplo; 4,7,20-trihidroxi w.
de Iochroma australe (Vaccarini y Bonetto, 2000), w. tipo norbornano (jaborosalactol 18

de Jaborosa bergii (Nicotra et al., 2003), w. espiránico en C-22 (jaborosalactonas 29 y 43 de
J. rotacea y J. kurtzii, (Nicotra et al., 2006) y (Ramacciotti y Nicotra, 2007)), sativólidos
(jaborosalactona 38 de J. caulescens var. caulescens (Nicotra et al., 2007)) y trechonólidos
(12-O-etil-jaborosalactona 42 de J. caulescens var. bipinnatida (Nicotra et al., 2007)) y
para w. con diferentes patrones de sustitución en los anillos A/B. Sin embargo, no hay su-
ciente información disponible aún para hacer un análisis de la relación estructura-actividad.
Los resultados se presentan en la Tabla 6.1 y Tabla 6.2. Los datos se indican como
diferencias de porcentaje con el control. Por lo tanto, el cero representa el control, los
valores positivos representan estimulación del parámetro estudiado, y los valores negativos
representan la inhibición. Los porcentajes fueron calculados de 3 x 20 réplicas.
Tabla 6.1: Efecto de los Salpichrólidos sobre la longitud radicular de Lactuca sativa
Efecto en la longitud radicular %

Sustrato
15 ppm 150 ppm 400 ppm
Salpichrólido O 2,00 ± 0,1 -30,2 ± 3,6 -42,4 ± 4,5
Salpichrólido Q -9,60 ± 3,1 -10,4 ± 3,0 -62,4 ± 25,0
Salpichrólido S -10,70 ± 3,8 -14,9 ± 5,3 -4,7 ± 1,2
Salpichrólido D -29,20 ± 10,4 -50,7 ± 15,9 -61,9 ± 23,2
2,3-dihidro Salpichrólido B -0,14 ± 0,04 -29,0 ± 8,5 -68,8 ± 24,2
Salpichrólido A 1,80 ± 0,1 -50,0 ± 7,0 -86,0 ± 14,0
Salpichrólido C -4,40 ± 1,2 -33,8 ± 8,4 -78,3 ± 16,3
Tabla 6.2: Efecto de los Salpichrólidos sobre la longitud radicular de Avena sativa
Efecto en la longitud radicular %

Sustrato
15 ppm 150 ppm 400 ppm
Salpichrólido O -12,0 ± 5,7 -6,4 ± 2,7 -26,9 ± 3,6
Salpichrólido Q 9,9 ± 3,5 1,6 ± 0,6 -14,2 ± 6,0
Salpichrólido S 22,0 ± 7,1 11,3 ± 3,8 9,5 ± 2,9
Salpichrólido D 8,8 ± 3,8 0,8 ± 0,3 -10,4 ± 4,8
2,3-dihidro Salpichrólido B -1,7 ± 0,5 -36,7 ± 13,7 -65,0 ± 32,0
Salpichrólido A -5,6 ± 0,7 -23,0 ± 2,0 -31,0 ± 4,0
Salpichrólido C -11,5 ± 5,5 -18,5 ± 3,8 -42,4 ± 9,9
6.4.2. Resultados del Ensayo de Citotoxicidad

6.4.2.1. Sustratos
Se estudiaron compuestos semisintéticos (Figura 6.6) y naturales (Figura 6.7).
(c) Derivado 3 (d) Derivado 4
(e) Derivado 5a (f) Derivado 5b
(g) Derivado 6b (h) Derivado 7
(i) Derivado 8 (j) Derivado 8a
Figura 6.6: Sustratos semisintéticos estudiados en el Ensayo de Citotoxicidad.

(a) Salpichrólido A (b) 2,3-dihidro Salpichrólido B
(c) Salpichrólido C (d) Salpichrólido D
(e) Salpichrólido G (f) Salpichrólido M
(g) Salpichrólido S (h) Salpichrólido T
(i) Salpichrólido V
Figura 6.7: Sustratos naturales estudiados para el Ensayo de Citotoxicidad.

6.4.2.2. Resultados
Se denió el valor IC50 como la concentración de compuesto que produce la supervi-
vencia celular del 50 %. En la Tabla 6.3 se muestran los resultados de la actividad antipro-
liferativa de w. sobre las líneas celulares de cáncer de próstata dependiente (LNCaP) y no
dependiente (PC3) de andrógeno.
Tabla 6.3: Actividad citotóxica de Salpichrólidos sobre líneas celulares de cáncer de próstata
dependientes (LNCaP) y no dependientes (PC3) de andrógeno.
LNCaP PC3
Sustrato
IC50 (µM) IC50 (µM)
Derivado 1 >60,00 >60,00
Derivado 2 >60,00 >60,00
Derivado 3 >60,00 >60,00
Derivado 4 >60,00 >60,00
Derivado 5a >60,00 >60,00
Derivado 5b >60,00 >60,00
Derivado 6b 64,63 ± 1,05 >60,00
Derivado 7 64,91 ± 1,03 >60,00
Derivado 8 >60,00 >60,00
Derivado 8a 51,45 ± 1,06 >60,00
Salpichrólido A 46,95 ± 1,06 >60,00
2,3-dihidro Salpichrólido B >60,00 47,87 ± 1,03
Salpichrólido C >60,00 >60,00
Salpichrólido D 52,72 ± 1,04 >60,00
Salpichrólido G 48,05 ± 1,08 51,16 ± 1,05
Salpichrólido M 55,69 ± 1,03 61,82 ± 1,04
Salpichrólido S >60,00 >60,00
Salpichrólido T >60,00 >60,00
Salpichrólido V 40,23 ± 1,08 54,16 ± 1,03
Si la presencia, en bajas concentraciones, de un compuesto produce inhibición del creci-

miento celular (valores IC50 <10,00 µM); entonces se considera que éste compuesto presenta
actividad citotóxica. Como se puede observar en la Tabla 6.3 se han encontrado valores
muy superiores a ésto, con lo cual se puede concluir en líneas generales, que este conjunto
de metabolitos ensayados no presenta actividad citotóxica.
Sin embargo, se puede ver un leve comportamiento selectivo sobre líneas celulares de-
pendiente de andrógeno (LNCaP) en los Salpichrólido A, D y 8a. Es de destacar que el
Salichrólido D es el único compuesto que no posee un anillo aromático en su estructura.
Aunque el Salpichrólido V presenta el mejor valor de todo el grupo, éste no posee selecti-
vidad. El Salpichrólido A, por otro lado, sí presenta selectividad sobre líneas dependientes
y por lo tanto se lo propone como el compuesto que presenta mejores resultados de este
grupo de metabolitos. El único compuesto que presenta selectividad en líneas celulares no
dependientes de andrógeno (PC3), es el 2,3-dihidro Salpichrólido B.

6.5.1. Ensayo de Fitotoxicidad
6.5.1.1. Material Vegetal
Las partes aéreas de dos especies S. lehmannii (Capítulo 4) y S. origanifolia (Nicotra
et al., 2013), fueron sometidas a maceración etanólica y posterior puricación con diversas
cromatografías hasta obtener los compuestos puros que se utilizaron para este ensayo.
6.5.1.2. Sustratos
Se prepararon soluciones de tres concentraciones diferentes; 15, 150 y 400 ppm de los
Salpichrólidos A, C, D, O, Q, S y 2,3-dihidro Salpichrólido B. Se utilizó como solvente,
etanol absoluto.
6.5.1.3. Condiciones del Bioensayo

Las semillas de las especies Lactuca sativa (dicotiledónea) y Avena sativa (monocotile-
dónea) fueron obtenidas del Laboratorio de Semillas de la Facultad de Ciencias Agropecua-
rias de la Universidad Nacional de Córdoba. Todas las semillas dañadas fueron descartadas
y sólo fueron seleccionadas aquellas que presentaban uniformidad.
Se siguió el protocolo ya reportado para este tipo de ensayo (Vaccarini y Bonetto, 2000).
Se colocaron 25 semillas de Lactuca sativa y 20 semillas de Avena sativa en cada cápsula
de Petri (60 mm de diámetro) sobre papel de ltro (Whatman N
◦ 1). Se agregaron 4 mL de
la solución de concentración conocida de sustrato y una vez evaporado el solvente, se regó

con 3 mL de agua destilada. Estas cápsulas se colocaron a la oscuridad, en un ambiente
de temperatura controlada (25
◦ C) y humedad constante. Se midió el crecimiento radicu-
lar luego de 5 días del sembrado para Avena sativa y de 7 días para Lactuca sativa. El
número de réplicas por tratamiento fue de 3 veces, incluido el control, para cada compuesto.
La inhibición de la germinación de las semillas se juzgó mediante la comparación de la

planta tratada con la del experimento de control. El largo de la raíz fue tomada como pará-
metro para la prueba. Para la prueba de inhibición de crecimiento, se midió el alargamiento
de las raíces. Estas longitudes se midieron a los 5 días en A. sativa y a los 7 días en L.
sativa. Los datos se presentan como diferencias de porcentaje con el control. Por lo tanto,
el cero representa el control, los valores positivos representan estimulación del parámetro
estudiado, y los valores negativos representan la inhibición. Los valores de germinación y
longitud de raíz de los experimentos de control (LB ) y los tratados (LT ) fueron analizados
mediante la prueba de la t de Student (p <0,05). El porcentaje de Inhibición fue calculado
según la siguiente fórmula:
(LT − LB ) · 100
% Inhibición =
LB
6.5.2. Ensayo de Citotoxicidad

Este ensayo fue llevado a cabo por la Dra. Valeria Pilar Careaga Quiroga, investigadora
de CONICET del Instituto UMYMFOR (Unidad de Microanálisis y Métodos Físicos en
Química Orgánica), en la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales de la Universidad de
Buenos Aires (UBA).
6.5.2.1. Material Vegetal

Las partes aéreas de S. lehmannii fueron sometidas a maceración etanólica y posterior
puricación con diversas cromatografías hasta obtener los compuestos puros que se utiliza-
ron para este ensayo (Capítulo 4). Además, se tuvo acceso a compuestos naturales aislados
de S. origanifolia (Nicotra et al., 2013). Se utilizaron, también, compuestos semisintéticos
los cuales fueron producto de la biotransformción de compuestos naturales a través de
hongos lamentosos (Capítulo 5).
6.5.2.2. Sustratos
Se utilizaron como sustratos de este ensayo, compuestos naturales y semisintéticos. Los
compuestos naturales son; Salpichrólido A, 2,3-dihidro Salpichrólido B, Salpichrólido C,
Salpichrólido D, Salpichrólido G, Salpichrólido M, Salpichrólido S, Salpichrólido T y Sal-
pichrólido V. Los compuestos semisintéticos fueron los obtenidos por biotransformación y
se denominan en esta Tesis como Derivados, estos son; Derivado 1, Derivado 2, Derivado
3, Derivado 4, Derivado 5a, Derivado 5b, Derivado 6b, Derivado 7, Derivado 8 y Derivado
8a. Sólo se utilizaron aquellos que la cantidad y la pureza lo permitieron.
Los procedimientos de extracción, puricación y caracterización de los compuestos na-

turales estan descriptos en el Capítulo 4 y la obtención de los derivados semisintéticos,
están detallados en el Capítulo 5.
6.5.2.3. Cultivo de células y reactivos

Se utilizaron líneas celulares de cáncer de próstata dependiente de andrógeno (LNCaP)
y no dependiente (PC3). Se obtuvieron las células LNCaP y PC3 de la American Type Cul-
ture Collection (Manassas, VA, EE.UU.) y se mantuvieron en medio RPMI 1640 (EMEVE
Medios, Lab MicroVet, Buenos Aires, Argentina) suplementado con suero fetal bovino al
10 % (Natocor, Córdoba, Argentina) y antibióticos (Invitrogen).
PC3: Línea celular establecida a partir de metátasis de médula ósea, proveniente de

adenocarcinoma de próstata humano. No expresa receptor de andrógenos. Esta línea se
utilizó como modelo del fenotipo andrógeno independiente.
LNCaP: Línea celular proveniente de adenocarcinoma de próstata humano, responde-

dor de andrógenos, de un paciente con diagnóstico conrmado de metástasis de próstata.
Expresa receptor de andrógenos. Esta línea se utilizó como modelo del fenotipo andrógeno
dependiente.
6.5.2.4. Evaluación biológica

Se determinó la proliferación de las células utilizando el ensayo de MTS para células
vivientes. Se sembraron 5 · 103 células de la línea PC3 y 1 · 104 células de la línea LNCaP, en
cada pocillo de una placa de 96 pocillos, con 100 µL de medio de cultivo cada uno. Luego
de 24 horas de incubación, el medio fue removido y las células se trataron con medio (sin
suero) con las distintas concentraciones de los compuestos. El volumen nal en todos los
pocillos fue de 100 µL. Todas las concentraciones se realizaron por triplicado. Se utilizaron
como controles negativos los pocillos con medio, sin suero y con concentraciones de dimetil
sulfóxido (DMSO) iguales a las utilizadas con los compuestos.
El análisis de la viabilidad celular MTS, se realizó 48 h post-tratamiento usando The

Cell Titer 96 AQueous One Solution Proliferation Assay System (Promega), en el que las
células viables convierten MTS tetrazolium en formazán, el cual es un producto de color
(λmax 490 nm). Siguiendo las instrucciones del fabricante, se añadieron 20 µL del reactivo
MTS a cada pocillo y las células se incubaron a 37
◦ C durante 1 hora. La absorbancia fue
medida a 490 nm en un lector de placas de Thermo Scientic Multiskan FC. Los datos
fueron procesados con el programa Graph Pad Prism 5, de manera de obtener grácos
de Absorbancia vs. Concentración, relativizando los resultados al control. Se estableció el
control como el 100 % de células vivas. Se denió el valor IC50 como la concentración de
compuesto que produce la supervivencia celular del 50 %.
6.6. Conclusiones
Sobre Actividad Fitotóxica
Se probó esta actividad usando siete compuestos naturales contra cultivos de Monocotiledó-
nea y Dicotiledónea. Se encontró que los compuestos aislados presentan actividad selectiva
sobre especies Dicotiledóneas. Los resultados fueron dependientes de la dosis, siendo a
mayores concentraciones, mayor la inhibición del creciemto radicular. El Salpichrólido A,
compuesto con mayor actividad totóxica, presentó un 36 % mayor poder inhibitorio en
Lactuca sativa (Dicotiledónea) que en Avena sativa (Monocotiledónea). Estos resultados
estan en concordancia con los resultados obtenidos por Vaccarini y colegas (Vaccarini y
Bonetto, 2000), quienes midieron actividad totóxica sobre w. aislados de especies de los
géneros Iochroma y Jaborosa y hallaron que éstos presentan selectividad sobre cultivos
dicotiledónea.
Por último, se comparó a Salpichrólido A, compuesto de mayor actividad totóxica,

con un conocido herbicida comercial llamado Atrazina para relativizar su poder inhibitorio
a un compuesto referencial. Se encontró que para cultivos de Lactuca sativa, el herbicida
Atrazina mostró un valor de CE50 de 119 ppm (Basso, 2006); mientras que el Salpichrólido
A demostró un valor de CE50 de 214 ppm. Esto signica que se necesitaría el doble de
concentración del producto natural que de herbicida comercial para establecer el mismo
porcentaje de inhibición de crecimiento radicular en cultivos de dicotiledóneas.
Sobre Actividad Citotóxica

Se probó esta actividad usando 9 compuestos naturales y 10 semisintéticos contra líneas
celulares de cáncer de próstata dependientes y no dependientes de andrógeno. Este conjun-
to de compuestos, en general, no inhibieron el crecimiento celular de líneas cancerosas de
próstata en forma selectiva. Si se constrasta este resultado con trabajos anteriores (Machin
et al., 2010), (Alvarez et al., 2015), éstos resultados fueron inesperados, ya que según los
autores, los w. con anillo D aromático presentan un arreglo estructural clave para esta la
actividad. Si bien el hecho que el Salpichrólido D presenta un leve comportamiento in-
hibitorio en líneas dependientes de andrógeno contradice esto último. No hay suciente
información disponible aún para hacer un análisis de la relación estructura-actividad.
Capítulo 7
Conclusiones Generales
Resumen: El objetivo principal de este trabajo interdisciplinar fue resolver la ubi-

cación de Salpichroa en la Familia Solanaceae. Para ello se abordó un estudio morfo-
lógico, molecular y toquímico de las especies del mencionado género. En este último
Capítulo se integran los resultados y conclusiones parciales de estos estudios.
247
248 Capítulo 7. Conclusiones Generales
7.1. Conclusiones Generales 249
7.1. Conclusiones Generales
Se pudo acceder a 21 de las 22 especies que conforman el género actualmente, es decir a

todas las especies excepto a N. formosa, gracias a los viajes a campo realizados en los años
2012 y 2013. Con ello se enriquecieron y actualizaron las colecciones de los herbarios de la
Universidad Nacional de Córdoba y de la Universidad Privada Antenor Orrego (Perú). El
estudio morfológico, principalmente de la estructura oral, permitió actualizar el número
de especies que conforman el género, el cual pasó de 16 a 22 (incluida N. formosa ). Como
resultado de esta revisión se propone una clave dicotómica nueva.
En el primer estudio molecular de la Familia Solanaceae se puso en duda la antigua Tri-

bu Jaboroseae, compuesta originalmente por los géneros Jaborosa, Nectouxia y Salpichroa.
Se rearmó su desmembramiento con el estudio molecular del género Jaborosa y ahora con
nuestros resultados de forma contundente.
Otro resultado valioso de la reconstrucción logenética, es que la monolia del género

sólo se sostiene con la inclusión de Nectouxia formosa (única especie del género Nectouxia )
a Salpichroa. Esta propuesta no hubiera sido posible sólo con la información obtenida del
análisis morfológico, por ser insuciente. No se pudieron hacer más consideraciones de las
relaciones interespecícas dado el escaso soporte de los nodos.
Los antecedentes Fitoquímicos disponibles al momento de comenzar la Tesis de los gé-

neros Jaborosa y Salpichroa, presentaban un escenario químico diferente para cada uno.
Para Salpichroa, sólo una especie estudiada, reportó w. con anillo D aromático o derivados;
mientras que para Jaborosa, 14 especies estudiadas de 23, reportaron un alto contenido de
w. con heterociclos adicionales, arreglos exclusivos y sustancialmente diferentes a los repor-
tados en Salpichroa. Los resultados obtenidos en este trabajo sobre el estudio toquímico
de 14 especies Salpichroa de 22, continúa con la tendencia de los antecedentes menciona-
dos y acompaña los resultados moleculares descriptos anteriormente, de ubicarlos distantes.
La evidencia toquímica también sirvió para aportar a la resolución de un problema

taxonómico, como fue en el caso de las especies S. tristis y S. lehmannii. El contenido
químico de estos taxones apoyan la propuesta de considerarlas especies distintas, cuando
originalmente se proponian como variedades. El hecho de que se aislaron ocho Salpichró-
lidos en el extracto etanólico de S. lehmannii, mientras que de S. tristis se ha encontrado
ausencia total de dichos metabolitos, refuerza la propuesta de diferenciarlas como especie
y no como variedad. Cabe destacar que S. tristis ha sido revisada en varias oportunidades,
con muestras de lugares geográcos y épocas de recolección diferentes, siempre con resul-
tado negativo.
En cuanto al análisis quimiotaxonómico proponemos que, si solamente de un 20 % de

las especies estudiadas de Salpichroa presenta w., estos metabolitos son marcadores re-
lativos. En cuanto a su estructura química, los w. aislados de Salpichroa tienen arreglos
estructurales casi excusivos del género, jerarquizando a los Salpichrólidos en marcadores
relativos a nivel genérico.
250 Capítulo 7. Conclusiones Generales
Al integrar los resultados obtenidos a través de la superposición de la información

toquímica sobre la reconstrucción logenética, Figura 7.1, se observó que las tres especies
que presentan w., dos de ellas se encuentran en uno de los clados principales reconocidos
(S. origanifolia y S. scandens ) mientras que la tercera (S. lehmannii ) se encuentra en
el otro (Esta división está fuertemente soportada). Por lo tanto, podemos concluir que la
presencia/ausencia de estos metabolitos secundarios no aportaría evidencia sobre anidades
logenéticas interespecícas.
S. amoena
S. weberbaueri
S. proboscidea
S. dependens
57 S. micrantha
S. ramosissima
S. sp.1
49
S. sp.2 (S. salpoensis)
Salpichroa
53
S. tenuiflora
S. leucantha
S. didierana
S. microphylla
50 75 S. gayi
S. incaica
S. diffusa
40
100 S. glandulosa
S. hirsuta
S. weddellii
100 99 S. lehmannii
S. tristis
100 S. origanifolia
76
100 S. scandens
S. scandens
N. formosa
Grupo Externo
Figura 7.1: Fitoquímica y logenia en Salpichroa. Fragmento del árbol de consenso extricto
basado en Máxima Parsimonia. En violeta se muestran las especies con withanólidos. Con
estrellas se señalan las especies que no se estudiaron químicamente.
Si bien no estaba prevista la obtención de derivados, los amplios antecedentes de acti-

vidad biologica de Salpichrólidos y la obtenición de cantidad suciente de algunos de ellos
en este trabajo, motivó la búsqueda de diversidad estructural a través de biotransforma-
ciones con hongos lamentosos. La conclusión más relevante del análisis de los derivados
obtenidos, es que se pudieron funcionalizar posiciones inactivas del esqueleto esteroidal, lo
cual facilita la obtención de otros derivados por un mecanismo de síntesis muy sencillo,
económico y amigable con el medio-ambiente.
Por último, se realizaron pruebas de actividad biológica. En cuanto a la Fitotoxicidad

se halló que estos PN presentan un efecto inhibidor de la elongación radicular selectivo
sobre cultivos de Dicotiledónea, como otros w. ya reportados. Sobre el Ensayo de Citoto-
xicidad en líneas celulares de cáncer de próstata dependientes de andrógeno, se obtuvieron
resultados inesperadamente bajos dado los antecedentes de Salpichrólidos con actividad
selectiva antiestrogénica en líneas celulares de cáncer de mama.
7.2. Proyecciones 251
Este trabajo interdisciplinar abarcó diferentes aspectos del género Salpichroa, desde
el morfológico, el logenético y el toquímico. Cada disciplina aportó desde su área de
conocimiento una propuesta, la cual fue integrada con el resto para lograr un profundo co-
nocimiento del grupo. La ubicación de Salpichroa en la Familia Solanaceae queda entonces
pendiente a resolverse con un mayor muestreo y mayor cantidad de marcadores molecu-
lares. Podría decirse que este caleidoscopio imaginario queda entonces detenido en esta
propuesta inconclusa para resolver la ubicación de Salpichroa en el sistema de las plantas,
la aquí presentada, pero será sólo hasta que alguien más vuelva a girarlo.
7.2. Proyecciones
La respuesta a una pregunta, siempre abre puertas a otras preguntas
En Filogenia...
Un estudio más amplio permitirá resolver las relaciones interespecícas del género, para lo
cual está previsto la incorporación de otros marcadores moleculares o el estudio del genoma
completo de cada especie (Next Generation Sequencing ) mediante la realización de otra la
Tesis doctoral a cargo de la Biol. Ana Clara Ibañez perteneciente al IMBIV-CONICET.
En Fitoquímica...
El hecho que N. formosa esté incluida en un pequeño clado junto con S. origanifolia y S.
scandens (ambas especies con withanólidos) hace sospechar que este taxón podría tener
w. en su extracto vegetal. Queda entonces, pendiente, el estudio toquímico de esta especie.
En Biotransformación...
Con este trabajo se demuestra que la biotransformación con hongos es una herramienta
útil y versátil sobre este tipo de metabolitos. Ella puede resultar apropiada para explorar
la relación estructura-actividad de compuestos esteroidales con actividad terapéutica pro-
metedora.
En Actividad Biológica...
Ya que los Salichrólidos tienen antecedentes de bioactividad, puede resultar interesante
medir la actividad biológica de todos los compuestos obtenidos en esta Tesis, tanto natura-
les como semisintéticos, en ensayos de actividad antiproliferativos o actividad insecticida,
propiedades demostradas en estos arreglos estructurales.
Capítulo 8
Producción Cientíca
253
254 Capítulo 8. Producción Cientíca
8.1. Artículos publicados en revistas y libros 255
8.1. Artículos publicados en revistas y libros

Los resultados de la presente Tesis están reejados en las siguientes artículos cientícos.
Basso, A. V.; Nicotra, V. E.; Parra, A.; Martínez, A. y Fernández-Vivas, A. Biotran-

formation of Salpichrolides A, C and G with lamentous fungi. Journal of Natural
Products, vol. 79(6), páginas 1658-1667, 2016.
Basso, A. V. & Barboza, G. E. Salpichroa Miers Capítulo del Libro; Flora Argen-
tina. Flora Vascular de la República Argentina. IMBIV CONICET, vol(13), páginas
311-315, 2013.
Nicotra, V.; Basso, A. V.; Ramacciotti, N. y Misico, R. I. Withanolides with phyto-

toxic activity from two species of the genus Salpichroa: S. origanifolia and S. tristis
var. lehmannii . Journal of Natural Products, vol. 76(12), páginas 2219-2225, 2013.
Gonzáles Arce, P.; Leiva González, S.; Basso, A. V.; Cano, A.; Carrizo García, C. y
Barboza, G. E. Phylogenetic relationships of Salpichroa (Solanaceae), taxonomical
novelties and an updated key to the species. Enviado a Botany, 2016.
Basso, A. V.; Leiva González, S.; Barboza, G. E. y Nicotra, V. E. Phytochemical

study in the genus Salpichroa (Solanaceae). Chemotaxonomic considerations. A ser
enviado a Phytochemistry, 2016.
8.2. Resúmenes Publicados en Eventos Cientícos

Los resultados de la presente Tesis fueron presentados en los siguientes eventos.
Basso, A. V.; Nicotra, V. E.; Martínez, A. y Parra, A. Biotransformación de Sal-

pichrólidos con hongos lamentosos Noviembre 2015, Mar del Plata. XX Simposio
Nacional de Química Orgánica. Sociedad Argentina de Investigación en Química Or-
gánica.
Basso, A. V.; Nicotra, V. E.; Martínez, A. y Parra, A. Biotransformation of Salpi-

chrolides with lamentous fungi Junio 2015; Colorado School of Mines en Golden,
Colorado, USA. 2015 Summer School on Green Chemistry & Sustainable Energy.
ACS American Chemical Society.
Basso, A. V.; Carrizo García, C.; Nicotra, V. E. y Barboza, G. E. Filogenia prelimi-

nar del género Salpichroa (Solanaceae) Septiembre 2013, La Plata. XXXIV Jornadas
Argentinas de Botánica. Sociedad Argentina de Botánica.
Basso, A. V.; Barboza, G. E.; Oberti, J. C y Nicotra, V. E. Estudio preliminar

químico y taxonómico de las especies pertenecientes al género Salpichroa (Solaneceae)
de Argentina Octubre 2012, La Laguna (Tenerife, España). XVI Semana Cientíca
Antonio González. Universidad de La Laguna.
Basso, A. V.; Nicotra, V. E.; Barboza, G. E. y Oberti, J. C. Estudio toquímico

sobre Salpichroa scandens Noviembre 2011, Carlos Paz. XVIII SINAQO. Sociedad
Argentina de Investigaciones en Química Orgánica.
Apéndice A
Apéndice
Resumen: En esta Sección se muestran, como información adicional, todos los es-
pectros de RMN que se utilizaron para la elucidación de estructuras de los compuestos
nuevos que aquí se reportan,asi como también un pequeño glosario Botánico. Cada
Capítulo tiene, por lo tanto, su sección dentro de este apéndice en pos que el lector
encuentre la información lo más accesible posible.
257
258 Apéndice A. Apéndice
A.1. Glosario de Nomenclatura Botánica

Deniciones acorde al Código Internacional de Nomenclatura Botánica Mc Neill y co-
legas (McNeill et al., 2012).
Basónimo Consiste en el nombre cientíco bajo el cual fue originalmente nombrado o

catalogado un taxón.
Tipo Es un ejemplar de un ser vivo sobre el que se ha realizado la descripción cientíca

del mismo y que, de ese modo, valida la publicación del nombre cientíco de su taxón
(sea la especie, el género, la familia, etc).
Holotipo El espécimen u otro elemento usado por el autor o designado por él como el
tipo nomenclatural.
Isotipo Es un ejemplar copia del tipo. En otras palabras, un duplicado del holotipo, que
forma parte de la colección original.
Lectotipo Espécimen o elemento seleccionado a partir de material original para servir

como tipo nomenclatural cuando no fue asignado un holotipo con la primera publi-
cación o por pérdida del mismo. El lectotipo se debe elegir entre los isotipos, si no
existen isotipos se debe elegir entre los sintipos, si tampoco hay sintipos se elige un
neotipo.
Sintipo Es uno de los especímenes citados originalmente por el autor que no designó
holotipo o que ha enumerado simultáneamente varios ejemplares como tipos.
Neotipo Es un espécimen o cualquier otro elemento elegido para servir de tipo nomen-
clatural cuando falta todo el material sobre el cual está basado el nombre del taxón.
6. 9555
6. 9526
6. 9367
7. 0
6. 8942
140. 6886
140
138. 6403
136. 4302
6. 5
127. 7515
130
126. 1882
125. 8109
6. 0
120
5. 5
110
104. 9766
Figura A.1: Compuesto

4. 9917
4. 3050
4. 2898
100
5. 0
3. 9750
3. 8962
3. 8921

91. 5004 3. 8833
90
3. 8789
3. 8745
4. 5
3. 8691
3. 8591
80. 7733 3. 8349
80
3. 8285
A.2.0.1. RMN de Salpichrólido S (1)
76. 2184 3. 7833

75. 4098
4. 0
3. 7740
73. 4153 3. 7596
( ppm )
69. 8846 3. 7505
( ppm )
67. 7014
70
3. 5413
64. 9792 3. 5234
63. 8203
3. 5073
63. 2004
3. 5
A.2. Espectros de RMN de Compuestos Naturales
3. 4912
61. 8258
3. 4736
60. 2895
60
3. 4327
57. 6751 3. 4168
3. 3995
3. 3447
3. 0
3. 3359
50
3. 3278
3. 3198
3. 3112
43. 2016 2. 9377
2. 9284
2. 5
40. 4255
40
34. 4421 2. 1884
34. 1995 2. 1793
31. 9355 2. 1612
30
2. 0
29. 9141 2. 1529

27. 8657 2. 1346
2. 1263
22. 1518
20
18. 5132
1. 5
17. 6507 1. 3821

16. 5187 1. 3665
15. 7101 1. 2130
1. 1988
10
1. 0621
1. 0
1: RMN-13 C (100,63 MHz, CDCl3 )

1: RMN-1 H (400,13 MHz, CDCl3 :D2 O 95:05)

259
A.2.0.2. RMN de 2-en-Salpichrólido S (2)
0243
9275
9143
8931
6. 0417
5. 7880
5. 7667
4. 9608
4. 3294
4. 3111
9408
9283
9041
8770
3. 7538
5367
5140
4810
4583
4480
4355
4275
4084
2823
2581
0454
0337
1. 9777
1. 9447
1. 3573
1. 1836
1. 1660
1. 0369
7.
6.
6.
6.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
3.
7. 0 6. 5 6. 0 5. 5 5. 0 4. 5 4. 0 3. 5 3. 0 2. 5 2. 0 1. 5 1. 0
( ppm )
Figura A.3: Mezcla de los compuestos 1 y 2: RMN-1 H (400,13 MHz, CDCl3 )
Figura A.4: Mezcla de los compuestos 1 y 2: HSQC (400,13 MHz, CDCl3 )

A.2. Espectros de RMN de Compuestos Naturales 261
Figura A.5: Mezcla de los compuestos 1 y 2: HMBC (400,13 MHz, CDCl3 )

262
7. 0839
7. 0632
7. 0600
7. 5
202. 2461
6. 8161
200
6. 8104
6. 8035
6. 7979
6. 7910
190
7. 0
6. 7853
6. 7784
6. 7728
180
6. 5
170
6. 0340
6. 0283
6. 0089
6. 0033
160
6. 0
150
142. 6488
5. 5
141. 1903
139. 7452
140
137. 2229 4. 9634
4. 9440
128. 7597

4. 9314

127. 2142
4. 9170
130
5. 0
126. 1505
4. 9038
125. 9029
120
A.2.0.3. RMN de Salpichrólido T (3)
4. 5
110
( ppm )
( ppm )
4. 0
100
3. 8991
3. 8935
91. 6752 3. 8828
3. 8765
90
3. 8715
3. 8652
3. 5
3. 8546
80
77. 2108 3. 8489
69. 8113 3. 4250
67. 4630 3. 2450
67. 3559 3. 2324
3. 0
70
64. 9340 3. 1779
64. 5126 3. 1716
63. 6830 3. 1653
60. 3846 3. 1289
60
58. 7790 3. 1227
3. 1164
2. 5
48. 2551
50
43. 1905
38. 3467
36. 0854
2. 0
34. 1787
40
33. 6970
33. 6234
33. 5431
33. 4360
30
30. 1845
1. 5
18. 7709 1. 4011

17. 3057 1. 3842
1. 3672
20
16. 5430
3: RMN-1 H (400,13 MHz, CDCl3 )
3: RMN-13 C (100,63 MHz, CDCl3 )

14. 8838 1. 2487
14. 1947 1. 2305
Apéndice A.
Apéndice
6. 7740
6. 7684
209. 5452 6. 7615
210
6. 7558
6. 7489
202. 5873
6. 8
6. 7433
200
190
6. 4
6. 0246
6. 0195
5. 9995
180
5. 9945
6. 0
170
5. 6
160
150
5. 2
142. 4648
140. 1566
138. 2432
140
137. 4972

128. 8801

4. 8
128. 5455
130
126. 8362
125. 5617
4. 4
120
4. 1901
A.2.0.4. RMN de Salpichrólido U (4)
4. 1819
4. 1738
110
4. 1663
( ppm )
( ppm )
4. 0
4. 1581
4. 1500
100
3. 6426
3. 6
90
3. 2418
80
3. 2 3. 2299
3. 1647
71. 8250 3. 1584
70
3. 1515
3. 1164
64. 6263 3. 1095
2. 8
3. 1026
60
58. 9963
48. 7501
2. 4
50
47. 4589
44. 6322
2. 1606
40
36. 3663
2. 0
33. 5698
33. 2420
30
30. 8836
30. 6261
30. 3785
1. 6
20
25. 3206
17. 1384 1. 3791
14. 8570
1. 2757
4: RMN-1 H (400,13 MHz, CDCl3 )
4: RMN-13 C (100.63 MHz, CDCl3 )

10
1. 2581
1. 2
263
A.2.0.5. RMN de Salpichrólido V (5)
Figura A.10: Compuesto 5: RMN-1 H (400,13 MHz, CDCl3 )
Figura A.11: Compuesto 5: RMN-13 C (100,63 MHz, CDCl3 )

A.2. Espectros de RMN de Compuestos Naturales 265
A.2.0.6. RMN de la mezcla de 5 y 6
Figura A.12: Mezcla de los compuestos 5 y 6: RMN-1 H (400,13 MHz, CDCl3 )
Figura A.13: Mezcla de los compuestos 5 y 6: HSQC (400,13 MHz, CDCl3 )

A.3. Espectros de RMN de Derivados por Biotransformación

A.3.0.1. RMN del Derivado 1
7.851
7.846
7.434
7.429
7.414
7.409
7.289
6.805
6.800
6.793
6.787
6.780
6.774
6.768
6.762
6.046
6.040
6.019
6.015
4.971
4.945
3.866
3.858
3.853
3.846
3.838
3.824
3.547
3.541
3.509
3.502
3.419
3.393
3.267
3.255
3.206
3.200
3.193
3.151
3.144
1.433
1.378
1.346
1.271
8.0 7.5 7.0 6.5 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 ppm
Figura A.14: Derivado 1: RMN-1 H a 400,13 MHz en CDCl3 respecto de TMS (δ ).
ppm
20
40
60
80
100
120
140
160
8.0 7.5 7.0 6.5 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 ppm
Figura A.15: Derivado 1: HSQC a 400,13 MHz en CDCl3 respecto de TMS (δ ).

A.3. Espectros de RMN de Derivados por Biotransformación 267

202.84
143.02
141.81
138.15
137.29
130.08
129.19
128.28
126.70
92.00
68.40
67.71
64.93
63.91
59.07
48.41
43.52
34.39
33.87
33.57
33.20
30.07
29.80
19.07
17.88
16.91
15.49
210 200 190 180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 ppm
Figura A.17: Derivado 2: RMN-13 C a 100,6 MHz en CDCl3 respecto de TMS (δ ).

268
7.789
202.44 7.768
200
7.032
7.5
7.028
7.007
190
6.918
6.787
7.0
6.782
180
6.775
6.769
Figura A.18: Derivado

6.762
170
6.5
6.756
6.750
6.744
160
6.028
6.023
6.0
6.003
150
5.997
142.60
141.31
140
138.04
5.5
137.02
129.26
128.99
130
127.67 5.001
5.0
126.10 4.977
120
4.082
4.071
4.5
110
4.061
3.880
3.874
100
3.866
4.0
3.859
92.05
3.852
90
3.846
3.838
3.5
3.831
80
3.429
70.70 3.403
67.80 3.218
70
65.38 3.212
3.0
65.22 3.205
64.00 3.107
60
63.82
3: RMN-13 C a 100,6 MHz en CDCl3

2.5
3: RMN-1 H a 400,13 MHz en CDCl3
50
48.80
43.34
42.71
40
1.857
2.0
34.06
1.851
33.57
1.821
33.27
1.815
30
31.00
1.426
26.16
1.5
1.387
19.11
1.358
17.53
1.253
16.91
1.235
15.30
ppm
ppm
Apéndice A.
respecto de TMS (δ ).
Apéndice
7.637
7.616
210
7.045
7.5
203.41 7.025
6.983
200
6.809
6.803
6.796
7.0
190
6.790
6.784
6.778
180
6.771

6.5
6.765
170
6.406
6.401
6.392
160
6.388
6.0
6.027
6.021
150
6.002
143.98 5.996
143.60
5.5
140
138.43
131.49
129.67
130
128.20 4.989
5.0
126.18
4.966
124.43
120
114.91
4.5
110
3.974
3.964
3.882
100
3.876
4.0
92.02 3.867
90
3.861
3.854
3.847
80
3.839
3.5
72.98
3.832
3.477
70
67.79
65.13
63.99
3.0
60
50.46
50
4: RMN-13 C a 100,6 MHz en CDCl3

4: RMN-1 H a 400,13 MHz en CDCl3
2.5
43.61
40
37.43
34.31
33.72
1.883
30
30.82
2.0
27.19 1.877
19.09 1.847
1.841
20
17.62
16.89 1.387
1.5
16.42 1.359
1.281
1.259
ppm
ppm
269
270
7.096
6.968
210
6.948
7.0
203.47 6.896
6.584
200
6.578
6.571
6.565
190
6.5
6.558
6.553
6.546
180

6.540
172.97
5.944
170.28
6.0
5.938
170
169.70
5.918
5.912
160
5.610
5.5
150
140.68
140.16 5.071
4.941
140
137.82
A.3.0.5. RMN del Derivado 5b
5.0
137.66 4.934
129.40 4.928
130
129.32
125.90
4.5
125.63
120
110
4.0
3.721
3.708
100
3.700
93.94
3.687
90
89.01 3.672
3.5
77.56
80
76.56
76.26
75.91
3.0
70
73.09
2.420
60
52.70 2.5 2.413
43.31 2.404
40.36 2.384
50
38.34
5b: RMN-13 C a 100,6 MHz en CDCl3

5b: RMN-1 H a 400,13 MHz en CDCl3
2.376
35.59 2.113
33.30 2.106
40
2.0
31.00 2.024
30.82
30.04
30
29.62
26.24
1.415
1.5
24.23
20
1.319
22.15
1.249
21.71
1.231
21.42 1.207
17.26
ppm
ppm
Apéndice A.
Apéndice
204.15 6.580
6.571
200
6.567
6.555
6.5
6.550
6.542
190
6.537
6.008
180
5.887
6.0
170.73 5.881

5.862
170

169.40
5.856
160
5.5
150.03
150
141.81
141.10
5.0
140
140.95
A.3.0.6. RMN del Derivado 6a
130.36
129.34
130
127.00
3.920
4.5
120.47 3.914
120
3.904
3.898
3.891
110
3.886
4.0
3.876
3.870
100
3.677
3.670
91.96
3.660
90
3.5
3.215
3.209
3.202
80
77.90 3.167
75.73 3.160
70.96
3.0 3.154
70
3.093
61.98 3.063
61.06 3.033
60
2.919
2.714
2.5
53.43
2.674
50
42.75 2.527
41.20
6a: RMN-13 C a 100,6 MHz en CDCl3

35.54 6a: RMN-1 H a 400,13 MHz en CDCl3 2.497
40
34.38
1.985
2.0
34.08
32.36
30
31.60
24.71
21.60
20
21.50
1.5
18.53 1.309
17.24 1.296
16.87 1.248
14.85 1.141
ppm
ppm
271
272
210
6.767
7.0
203.39 6.541
6.537
200
6.527
6.520
6.515
6.5
190
6.507
6.502
6.494
180
6.489

170.70 6.008
6.0
170.14 5.903
170
169.13 5.897
5.878
5.871
160
5.5
149.99
150
142.00
140.88
140
5.0
A.3.0.7. RMN del Derivado 6b
140.23
4.807
129.70 4.801
129.43
130
4.793
127.29
4.5
120.49
120
3.912
3.907
110
3.897
4.0
3.891
3.884
100
3.878
91.93 3.869
90
3.864
3.5
77.56
80
76.76
76.65
70.87
3.0
70
61.97
61.06
60
53.18
2.5
42.72
50
40.62
6b: RMN-13 C a 100,6 MHz en CDCl3

6b: RMN-1 H a 400,13 MHz en CDCl3
35.44 2.149
34.39
40
2.094
32.55
2.0
1.987
32.34
30.23
30
24.85
21.69
21.50
20
1.5
21.40 1.294
18.53 1.288
17.23 1.246
16.87 1.134
ppm
14.70
ppm
Apéndice A.
Apéndice
6.934
6.918
6.914
6.832
6.685
6.674
6.660
6.648
5.990
5.988
5.965
5.963
4.931
4.906
3.803
3.797
3.789
3.783
3.775
3.769
3.761
3.754
3.680
3.370
3.345
3.330
3.319
1.467
1.316
1.289
1.177
1.159
7.0 6.5 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 ppm


6.991
6.922
6.918
6.898
6.813
4.917
4.906
4.253
4.071
3.831
3.811
3.805
3.797
3.791
3.783
3.777
3.768
3.763
2.894
2.883
1.313
1.288
1.178
7.0 6.5 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 ppm

A.3.0.10. RMN del Derivado 8a
6.979
6.893
6.877
6.784
6.002
5.219
5.215
5.021
3.947
3.936
3.931
3.925
3.919
3.908
3.903
3.842
3.813
2.852
2.840
2.052
2.026
1.992
1.289
1.244
1.134
1.122
1.117
7.0 6.5 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 ppm
Figura A.32: Derivado 8a: RMN-1 H a 400,13 MHz en CDCl3 respecto de TMS (δ ).
Figura A.33: Derivado 8a: RMN-13 C a 100,6 MHz en CDCl3 respecto de TMS (δ ).
Agradecimientos
Sé que estas conmigo...
Una hoja en blanco puede ser atemorizante al principio pero a medida que las palabras
salen del corazón y la van tiñendo de tinta, se va haciendo cada vez más amigable y hasta
una invitación a expresar lo que es difícil decir verbalmente: Gracias...
Estoy llena de gratitud y sería injusto nombrar sólo a algunas personas ya que conside-
ro que todxs fueron parte de esta aventura, así que simplemente diré que si estás leyendo
estas líneas es porque de alguna forma has contribuido en la realización de este trabajo y
te lo agradezco.
Sin embargo, quiero mencionar especialmente a quienes regalan sonrisas, tararean can-
ciones, son generosos y aman lo que hacen, en n, a quienes contagian con su pasión las
ganas de hacer cosas nuevas. Estxs verdaderxs maestrxs muchas veces son compañerxs, son
secretarixs, son no-docentes y ellxs son lxs indispensables.
A recordar que la vida es eso que te pasa mientras haces una Tesis, que la brújula
interior no pierda el rumbo de lo que es lo importante. ½Viva la vida!
Gracias educación pública y gracias a todxs nosotrxs por defenderla.
A na ∼
277
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Lista de acrónimos
Ac2 O . . . . . . . . . Anhídrido Acético
AcOEt ....... Acetato de Etilo
CC . . . . . . . . . . . . Cromatografía en Columna
CCAR . . . . . . . . Cromatografía en Capa Delgada de Alta Resolución
CCD . . . . . . . . . . Cromatografía en Capa Delgada
CCFR ........ Cromatografía en Columna Fase Reversa
CDCl3 ....... Cloroformo Deuterado
CE50 .......... Concentración Efectiva Media
CEM . . . . . . . . . . Cromatografía de Exclusión Molecular
cm ............ Centímetro
COSY ........ Correlation Spectroscopy
δ .............. Desplazamiento Químico
DMSO . . . . . . . . Dimetil sulfóxido
Dpto. . . . . . . . . . Departamento
Est. . . . . . . . . . . . Estado
EtOH . . . . . . . . . Etanol
HMBC . . . . . . . . Heteronuclear Multiple Bond Correlation Spectroscopy
HSQC . . . . . . . . . Heteronuclear Single-Quantum Correlation
Hx . . . . . . . . . . . . Hexano
Hz ............ Hertz
IC50 . . . . . . . . . . . Concentración Inhibidora Media
IR . . . . . . . . . . . . . Infrarrojo
J . . . . . . . . . . . . . . Constante de Acomplamiento
293
294 Bibliografía
λ.............. Longitud de Onda
m.s.m. . . . . . . . . . Metros sobre el Nivel del Mar
MeOH . . . . . . . . Metanol
mL . . . . . . . . . . . . Mililitro
nm . . . . . . . . . . . . Nanometro
NOESY . . . . . . . Nuclear Overhauser Eect SpectroscopY
Obs. Pers. . . . . Observación Personal
Pdo. . . . . . . . . . . Partido
Pf . . . . . . . . . . . . . Punto de Fusión
PN . . . . . . . . . . . . Productos Naturales
ppm . . . . . . . . . . . Partes por Millón
Prov. . . . . . . . . . Provincia
Py ............ Piridina
RMN . . . . . . . . . . Resonancia Magnética Nuclear
RMN-13 C . . . . . Resonancia Magnética Nuclear de Carbono 13
RMN-1 H . . . . . . Resonancia Magnética Nuclear de Proton
[α]21 D ......... Rotación Óptica Especíca
S. . . . . . . . . . . . . . Salpichroa
TMS . . . . . . . . . . Tetrametilsilano
UNC . . . . . . . . . . Universidad Nacional de Córdoba
UV . . . . . . . . . . . . Ultravioleta
w. . . . . . . . . . . . . . Withanólidos

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Estudio químico y sistemático de

especies pertenecientes al género

ANA VALENTINA BASSO

Tesis para optar por el título de

Departamento de Química Orgánica

El análisis de logenia molecular se basó en el estudio de secuencias de un marcador

El estudio quimiotaxonómico fue enfocado hacia la búsqueda de los metabolitos secun-

El estudio toquímico no solamente incluyó el estudio de los componentes naturales,

1.2. Objetivo General . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4

2.1.1. La Familia Solanaceae . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7

2.1.2. Descripción breve de la Familia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8

2.1.3. Fitoquímica de Solanáceas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8

2.1.4. Clasicación y taxonomía . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10

2.2.1. Historia Taxonómica de Salpichroa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13

2.2.2. Salpichroa Miers . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 14

2.3. Objetivos especícos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 15

2.4. Materiales y Métodos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 16

2.4.1. Herbarios consultados . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 16

2.4.2. Viajes a Campo y Material Vegetal . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 17

2.4.3. Caracteres Morfológicos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 20

2.4.4. Tratamiento Taxonómico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 22

2.5. Resultados y Discusión . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 23

2.5.1. Descripción del género . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 23

2.5.2. Especies que mantienen su nomenclatura original . . . . . . . . . . . 24

2.5.3. Cambios nomenclaturales . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 43

2.5.4. Especie nueva . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 59

2.5.5. Inclusión de Nectouxia formosa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 61

2.5.6. Clave diferencial de las especies . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 63

3.1.1. Historia Evolutiva . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 73

3.1.2. Variación morfológica y variación molecular . . . . . . . . . . . . . . 74

3.1.3. Métodos Filogenéticos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 75

3.1.4. Contraste de hipótesis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 76

3.3. Objetivos especícos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 79

3.4. Materiales y Métodos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 80

3.4.1. Material estudiado . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 80

3.4.2. Extracción de ADN . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 81

3.4.3. Análisis molecular . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 81

3.4.4. Análisis logenético . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 82

3.5.1. Maxima Parsimonia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 83

3.5.2. Inferencia Bayesiana . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 85

4.1.1. Productos Naturales . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 95

4.1.3. Clasicación de los Withanólidos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 95

4.1.4. Withanólidos en el Reino Vegetal . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 99

4.1.5. Rol de los Metabolitos Secundarios como

4.2. Antecedentes . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 102

4.2.1. Withanólidos en Salpichroa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 102

4.3. Objetivos especícos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 106

4.4. Resultados y Discusión . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 107

4.4.2. Especies Salpichroa con ausencia de withanólidos . . . . . . . . . . . 109

4.4.3. Salpichrólidos aislados de Salpichroa lehmannii . . . . . . . . . . . . 111

4.4.4. Salpichrólidos aislados de Salpichroa scandens argentina . . . . . . . 119

4.4.5. Salpichrólidos aislados de Salpichroa scandens boliviana . . . . . . . 124

4.5. Conclusiones . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 127

4.6. Parte Experimental . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 128

4.6.1. Materiales y Métodos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 128

4.6.2. Material Vegetal . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 130

4.6.3. Extracción y Puricación . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 130

4.6.4. Caracterización de los Compuestos Nuevos . . . . . . . . . . . . . . . 139

5.1.1. Los productos naturales y la búsqueda de nuevos fármacos . . . . . . 155

El análisis de logenia molecular se basó en el estudio de secuencias de un marcador

El estudio toquímico no solamente incluyó el estudio de los componentes naturales,

2.1.4. Clasicación y taxonomía . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10

2.3. Objetivos especícos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 15

3.3. Objetivos especícos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 79

3.4.4. Análisis logenético . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 82

4.1.3. Clasicación de los Withanólidos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 95

4.3. Objetivos especícos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 106

4.6.3. Extracción y Puricación . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 130

5.3. Objetivos especícos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 168

5.6.3. Extracción y Puricación de los Sustratos . . . . . . . . . . . . . . . 207

5.6.7. Extracción y Puricación de los Productos obtenidos de las Biotrans-

6.3. Objetivos especícos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 237

8. Producción Cientíca 255

8.2. Resúmenes Publicados en Eventos Cientícos . . . . . . . . . . . . . . . . . 257

2.3. Corte longitudinal de or y fruto de un representante de Solanaceae (Sola-

2.7. Clasicación de la Fam. Solanaceae propuesta por Hunziker (2001). . . . . . 11

2.8. Fragmento de la propuesta logenética de la Fam. Solanaceae según Olms-

2.16. Salpichroa diusa. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 28