CÁTEDRA: MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA

DOCENTES: DANIEL MELIGENI, MA. VERONICA LEYES Y MA. DE LOS

ANGELES GAGGINI.

GRUPO Nº 6

INTEGRANTES: AVALOS LISANDRO, GOPAR MILAGROS, MANGIATERRA

AGOSTINA, POCCI MORENA, REGULSKY LUDMILA.

TEÓRICO: TP Nº 3 DESTRUCCIÓN DE MICROORGANISMOS

LICENCIATURA EN NUTRICIÓN

FECHA DE ENTREGA: 3 DE JULIO DE 2023

TEMAS

1) Destrucción de microorganismos.
● Desinfección.
● Pasteurización y tratamiento térmico.
● Filtración.
● Radiaciones ionizantes.
2) Métodos de siembra y aislamiento.

INTRODUCCIÓN

Destrucción de microorganismos:
La contaminación microbiana es una de las causas más importantes de la alteración
de los alimentos y por lo tanto de la pérdida de su vida útil. Los alimentos deben
estar desprovistos de microorganismos patógenos, peligrosos para el consumidor, y
de microorganismos alterantes que hagan los alimentos impropios para el consumo.
Las contaminaciones microbianas proceden del ambiente (aire, agua, etc.), del
equipo, de los materiales de empaquetado, del personal, de las materias primas y
del propio producto alimenticio industrializado.
Los alimentos se degradan por mecanismos diferentes: reacciones químicas,
influencias físicas, parásitos, procesos enzimáticos o por contaminación microbiana.
Los microorganismos como los demás seres vivos, son susceptibles a los cambios
en las condiciones físicas del medio. Aunque pueden crecer en condiciones muy
diversas, existen limitaciones a los cambios que una determinada especie puede
tolerar. Las desviaciones extremas de las condiciones físicas favorables para los
microorganismos, se traducen en la inhibición o la destrucción de los mismos.
Cuando una población bacteriana es expuesta a un agente letal físico o químico, se
produce una progresiva reducción del número de sobrevivientes, de modo que la
curva que representa el número de sobrevivientes en función del tiempo, tiene forma
exponencial decreciente
El efecto letal de un agente cambia en relación a las distintas cepas, incluso dentro
de una misma especie bacteriana. Existen además un conjunto de condiciones
fundamentalmente ambientales que afectan la cinética de destrucción.
Dentro de estos se encuentran:
 ❖ Concentración del agente
❖ Tiempo de exposición
❖ pH del medio
❖ Temperatura
❖ Presencia de materiales extraños
❖ Resistencia propia del microorganismo
❖ Número inicial de la población
Los microorganismos son la causa más frecuente de alteración de los alimentos.
La limpieza y desinfección constituyen las condiciones necesarias para la obtención
de un producto alimenticio de buena calidad higiénica y comercial.
Dentro de las técnicas de esterilización se cuentan con procedimientos físicos y
químicos.
Los procedimientos químicos están dados por los diferentes desinfectantes; como
halógenos, oxidantes, aldehídos, alcoholes, entre otros.
Si bien existen muchas sustancias que afectan la vitalidad de los microorganismos,
no existe un agente antimicrobiano ideal para todos. Los caracteres específicos a
que debe aspirar en la preparación de nuevos productos y que han de considerarse
para evaluar los desinfectantes son:
❖ Toxicidad para los microorganismos a temperatura ambiente o del organismo.
❖ Solubilidad en agua.
❖ Estabilidad.
❖ Inocuidad para el hombre y los animales.
❖ Homogeneidad.
❖ Carencia de afinidad para la materia orgánica extraña.
❖ Capacidad desodorante.
❖ Capacidad de penetración.
❖ No debe ser corrosivo ni manchar.
❖ Capacidad detergente.
❖ Facilidad de adquisición.
Los factores que deben considerarse para la elección y empleo de los agentes
antimicrobianos son los siguientes:
❖ Naturaleza del material que ha de tratarse.
❖ Clase de microorganismos.
❖ Condiciones generales
Los procedimientos físicos se dividen en energéticos y mecánicos. Dentro de los
primeros se encuentran: el calor (donde está presenta la pasteurización) y las
radiaciones, dentro de los segundos, la filtración.

Métodos de siembra y aislamiento:

En la naturaleza, los microorganismos se encuentran formando poblaciones mixtas
con otros tipos de microorganismos. Los cultivos de estas mezclas se llaman por
ello cultivos mixtos. Sin embargo, el conocimiento de los microorganismos se
consigue mediante el estudio de cepas aisladas.
La identificación bacteriana y la caracterización completa solo es posible tras el
aislamiento de la bacteria y la obtención de cultivos puros. Una vez que se ha
logrado el aislamiento es posible obtener la bacteria de interés en cultivo puro.
El aislamiento es la separación de un determinado microorganismo del resto de
microorganismos que le acompañan. El método más usual es la siembra por estrías
sobre un medio de cultivo sólido adecuado dispuesto en una placa de Petri.
ESTA MUY BIEN LA INTRODUCCIÓN PERO DEBE SER MÁS CORTA.

OBJETIVOS
● Destrucción de microorganismos.
❖ Conocer los distintos procesos de destrucción de los microorganismos.
❖ Analizar las ventajas y desventajas de cada uno de los métodos.
● Practicar distintos tipos de siembra de microorganismos y familiarización con
el manejo de material estéril.
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METODOLOGÍA

Método de estriado por cuadrante:

Mediante un ansa en anillo extender la muestra sobre un área pequeña cerca de un
borde de la placa. Deslizar suavemente el ansa sobre la superficie para no romper
el agar. Flamear el ansa y dejar enfriar (5 seg.). Girar la placa y tocando las estrías
anteriores volver a estriar. Repetir el procedimiento dos veces más. (flamear, girar la
placa y estriar). Una vez sembrada la placa se incuba 24 hs. a 37ºC en forma
invertida, para evitar que las gotas de condensación caigan sobre el medio.
Si se ha inoculado bien, la placa mostrará abundante crecimiento en el primer
cuadrante, decreciendo progresivamente hacia el cuarto.

a. Método de placa vertida, utilizado para el recuento de bacterias aerobias

mesófilas.
Desde un inóculo se realizarán sucesivas diluciones; 3 en particular.
1) Primera dilución: 1/10.
Se toma del inóculo 1ml con pipeta estéril, siempre cerca del mechero.
Se flamea un tubo de ensayo con 9ml de solución fisiológica y se coloca
dentro el ml de inóculo.
Se agita hacia los lados para mezclar ambos componentes.
De ese nuevo tubo de ensayo de 1/10, se toma 1ml con la misma pipeta.
Se coloca sobre una placa de Petri previamente estéril. La placa se abre solo
lo suficiente como para permitir la entrada de la pipeta y el descargo de la
muestra.
Se toma agar nutritivo previamente derretido en el baño María. Una vez
derretido y a una temperatura entre 40-45ºC (hasta poder tomar el tubo por
unos segundos con la mano completa sin que queme). Depositarlo en la
placa de Petri, cerrarlo y realizar movimientos circulares sobre la mesa para
la correcta distribución y mezcla de los componentes.
Se dejará solidificar y, posteriormente, en estufa a 37ºC por 48hs para
incubar.
2) Segunda dilución: 1/100.
Se toma del tubo de ensayo 1/10 previamente realizado, 1ml con pipeta
estéril, siempre cerca del mechero.
Se flamea un tubo de ensayo con 9ml de solución fisiológica y se coloca
dentro el ml de inóculo.
Se agita hacia los lados para mezclar ambos componentes.
De ese nuevo tubo de ensayo de 1/100, se toma 1ml con la misma pipeta.
Se coloca sobre una placa de Petri previamente estéril. La placa se abre solo
lo suficiente como para permitir la entrada de la pipeta y el descargo de la
muestra.
Se toma agar nutritivo previamente derretido en el baño María. Una vez
derretido y a una temperatura entre 40-45ºC (hasta poder tomar el tubo por
 unos segundos con la mano completa sin que queme). Depositarlo en la
placa de Petri, cerrarlo y realizar movimientos circulares sobre la mesa para
la correcta distribución y mezcla de los componentes.
Se dejará solidificar y, posteriormente, en estufa a 37ºC por 48hs para
incubar.
3) Tercera dilución: 1/1000.
Se toma del tubo de ensayo 1/100 previamente realizado, 1ml con pipeta
estéril, siempre cerca del mechero.
Se flamea un tubo de ensayo con 9ml de solución fisiológica y se coloca
dentro el ml de inóculo.
Se agita hacia los lados para mezclar ambos componentes.
De ese nuevo tubo de ensayo de 1/1000, se toma 1ml con la misma pipeta.
Se coloca sobre una placa de Petri previamente estéril. La placa se abre solo
lo suficiente como para permitir la entrada de la pipeta y el descargo de la
muestra.
Se toma agar nutritivo previamente derretido en el baño María. Una vez
derretido y a una temperatura entre 40-45ºC (hasta poder tomar el tubo por
unos segundos con la mano completa sin que queme). Depositarlo en la
placa de Petri, cerrarlo y realizar movimientos circulares sobre la mesa para
la correcta distribución y mezcla de los componentes.
Se dejará solidificar y, posteriormente, en estufa a 37ºC por 48hs para
incubar.
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ACTIVIDADES:
Destrucción de microorganismos

1) Recuento de bacterias aerobias mesófilas:

El método que vamos a utilizar consiste en realizar diluciones sucesivas de la
muestra en condiciones de esterilidad con objeto de sembrar después cantidades
conocidas de las mismas en una serie de placas de petri. Considerando que alguna
de las diluciones será tal que al distribuir una parte de ella en la placa, originará
colonias separadas. Contando el número de colonias, el volumen sembrado en la
placa y la dilución correspondiente, podremos calcular el número de unidades
formadoras de colonias presentes en la muestra inicial.

2) Aislamiento por el Método de Agotamiento por estrías:

Se trata de un método rápido y simple de agotamiento progresivo y continuo del
inóculo sobre un medio sólido contenido en una placa de Petri. El objetivo es
obtener, a partir de un elevado número de bacterias, un número reducido de ellas
distribuidas individualmente sobre la superficie de la placa. Cada una de estas
bacterias originará una colonia. Tomar con el ansa en anillo estéril colonias aisladas
a partir de un medio sólido, seguir el esquema indicado para lograr el aislamiento de
las colonias, consultar dudas al docente a cargo. Quemar el ansa. Incubar 24 hs. a
37ºC.

3) Métodos de siembra:
Los microorganismos se encuentran en la naturaleza mezclados con otras formas
de vida. Para poder estudiar las características morfológicas y fisiológicas de una
especie, es necesario, que esté separada de otras especies. Para lograrlo debemos
obtener un cultivo puro o clon (población de células genéticamente idénticas).
El procedimiento más sencillo para separar microorganismos y así obtener cultivos
puros es el método de aislamiento por estría. También se utiliza el aislamiento por
dilución en agar vertido. Para aislar tipos específicos de microorganismos, se
realizan estas técnicas en medios de cultivos selectivos o diferenciales que hacen
más efectivo el aislamiento.
DEBEN JUSTIFICAR LOS TEXTOS QUE COPIAN

RESULTADOS
1) Recuento de bacterias aerobias mesófilas:
La primera dilución (1/10) resultó incontable.
La segunda dilución (1/100) resultó incontable.
La tercera dilución (1/1000) resultó de UFC/ml = 696000
● UFC/ml= 696 colonias x 1/(1/1000) x 1/1ml = 696000

2) Aislamiento por el Método de Agotamiento por estrías:

Se partió de una placa con previo desarrollo de microorganismos que
presentaba color negro.
Luego de las 48hs de incubación; la nueva placa presenta colonias de
bacterias de un color blanco/gris, siendo más abundantes en el primer
 estriado y disminuyendo a medida que se llega al último estriado y a la línea
del medio.
Se distinguen bordes y formas de colonias irregulares, con relieve y algunas
superpuestas entre sí.

Imágen de la dilución 1/10. Incontable Imágen de la dilución 1/100. Incontable

Imágen de la dilución 1/1000. 696000 ufc/ml. Imagen del Método por estrías.
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ANÁLISIS Y DISCUSIÓN
El recuento de bacterias aerobias mesófilas es una medida común utilizada en
microbiología para determinar la cantidad de bacterias presentes en un determinado
producto o muestra. Estas bacterias son organismos que pueden crecer en
condiciones aeróbicas (requieren oxígeno para su desarrollo) y en temperaturas
moderadas (generalmente entre 20°C y 45°C).
El recuento de bacterias aerobias mesófilas se realiza mediante la técnica de
recuento en placa, donde una muestra se diluye en una serie de diluciones
decimales y se siembra en placas de cultivo con un medio de cultivo adecuado.
Luego, las placas se incuban a una temperatura específica durante un período de
tiempo determinado para permitir el crecimiento de las bacterias presentes en la
muestra.
El recuento de bacterias aerobias mesófilas es importante en diversos sectores,
como la industria alimentaria, donde se utiliza como indicador de la calidad e higiene
de los alimentos. Los límites aceptables de recuento de bacterias aerobias mesófilas
varían según el tipo de alimento y las regulaciones locales, pero en general, valores
altos de recuento pueden indicar una posible contaminación y deterioro del
producto. ¿Cuál sería un valor alto de recuento que puede dar indicio de una
calidad e higiene deficiente?
El método de placa vertida permite el crecimiento de colonias individuales en la
superficie del agar, lo que facilita el recuento y aislamiento de bacterias. También es
útil para realizar pruebas de sensibilidad a antibióticos y para obtener cultivos puros
de bacterias para estudios posteriores.
El método de estriado por cuadrante permite obtener colonias puras, ya que cada
cuadrante contiene bacterias que se originan a partir de una sola célula bacteriana.
Esto facilita el estudio y la identificación de las bacterias en un cultivo mixto. Es una
técnica utilizada en microbiología para aislar bacterias individualmente y obtener
colonias puras en medios de cultivo. Este método se utiliza comúnmente en
laboratorios para facilitar la identificación y caracterización de bacterias.
¿Qué conclusión podemos sacar del resultado obtenido en el recuento de la
muestra que hicieron?

CONCLUSIONES
Los distintos procesos de destrucción de los microorganismos fueron leídos,
explicados, caracterizados y ejemplificados en la clase; facilitando su entendimiento
y acercándonos al tema en cuestión. Se analizaron las ventajas y desventajas de los
mismos.
Los distintos tipos de siembra de microorganismos fueron descriptos, y se
desarrollaron los pasos a seguir permitiendo la familiarización con los mismos. Se
realizaron las prácticas de ambos métodos de siembra, pudiendo observar los
resultados esperados.
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BIBLIOGRAFÍA
● ESTERILIZACIÓN Y DESINFECCIÓN. COBITUC ORG [en línea], [sin fecha].
Disponible en: http://www.cobituc.org.ar/wp-
content/uploads/2015/07/esterilizacion.pdf.
● CONTROL DE MICROORGANISMOS: ESTERILIZACIÓN. Facultad de
Ciencias Naturales y Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de la
Patagonia San Juan Bosco [en línea], [sin fecha]. Disponible en:
http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/microgeneral/wp-content/uploads/2017/02/03-
b-ESTERILIZACI%C3%93N-2017.pdf.
● Introducción. [en línea], [sin fecha]. Disponible en:
https://www.ugr.es/~pomif/pom-bac/pb-iv/pb-iv-2-introduccion.htm.
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APROBADO