Tema 8 - Separaciones Difusionales

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Farmacia a Distancia. OPERACIONES BÁSICAS DE LABORATORIO.

UNIDAD DE TRABAJO Nº 8
S E PA R A C I O N E S
DIFUSIONALES.

Autoras:
Elena Santana Marrero.
Francisca Rodríguez Dguez.

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Farmacia a Distancia. OPERACIONES BÁSICAS DE LABORATORIO.

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ÍNDICE:
1. Destilación.
1.1 Destilación simple.
1.2 Destilación fraccionada.
1.2.1 Columna fraccionadora.
1.3 Destilación al vacío.
2. Extracción.
2.1 Extracción mecánica.
2.1.1 Por incisión.
2.1.2 Por compresión.
2.2 Extracción mediante disolventes.
2.2.1 Maceración.
2.2.2 Percolación.
2.2.3 Infusión y decocción.
2.3 Extracción por destilación.
3. Evaporación.
3.1 Tipos de evaporadores.
4. Cristalización.
5. Cromatografía.
5.1 Cromatografía en capa fina.
5.2 Cromatografía en papel.
5.3 Cromatografía en columna.
5.4 Cromatografía de gases.
6. Espectrofotómetro de absorción.
6.1 Manejo del espectrofotómetro.

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EN ESTA UNIDAD APRENDEREMOS A:

Separar a través de diversas técnicas los componentes de mezclas homogé-


neas.
Montar y desmontar los equipos necesarios para purificar sustancias.
Conocer los sistemas para extraer los principios activos de las drogas.
Utilizar el material necesario para separar sustancias.

ESTUDIAREMOS TELEMÁTICAMENTE:

.
Técnicas para separar sustancias.
Equipos empleados en destilación, evaporación, extracción, cromatografía…
Las aplicaciones de estas técnicas.

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INTRODUCCIÓN.
Al trabajar en el laboratorio se presenta muchas veces la necesidad de separar los
componentes de una mezcla en fracciones. Con las separaciones difusionales se
busca aislar uno o varios componentes de una mezcla homogénea, que por
tamización o filtración, no se podrían separar.
Las principales separaciones difusionales son:

Destilación.
Extracción.
Cristalización.
Evaporación.
Cromatografía y electroforesis.

1. DESTILACIÓN.
Es el proceso utilizado para separar los componentes líquidos de una mezcla
homogénea en función de sus distintos puntos de ebullición. También se emplea
para purificar un líquido eliminando sus impurezas.
Este proceso se lleva a cabo con el destilador, dispositivo que se adapta al tipo
de destilación que vaya a realizarse.

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Procedimientos:

Existen diversos tipos de destilación:


Simple.
Fraccionada.
Al vacío entre otras.

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1.1. Destilación simple.

La destilación es la operación de hervir una mezcla líquida,


condensando y recogiendo los vapores producidos de forma
fraccionada. Un sistema de destilación simple consta de dos partes:

Caldera o recipiente de ebullición. Es el recipiente en que se


calienta la mezcla y se producen las evaporaciones de sus
componentes.

Refrigerante, conectado a la caldera. Consta de un tubo de dobles


paredes a través de las cuales se hace circular agua fría en sentido
opuesto al de caída del destilado. En el refrigerante tiene lugar la
condensación de los vapores generados en la caldera.

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Para utilizar el destilador con seguridad hay que tener en cuenta las
siguientes precauciones:

1. Nunca se debe poner en funcionamiento con el depósito donde se


sitúa el agua a destilar vacío o insuficientemente lleno.
2. Cualquier manipulación que se realice (ajuste de roscas, gomas,
etc.) debe hacerse con el aparato desconectado de la red
eléctrica.
3. La recogida del agua destilada debe hacerse en un recipiente
perfectamente limpio y aclarado con agua purificada.

RECUERDA.
Mediante destilación simple po-
demos lograr la separación to-
tal de una mezcla cuando sus
componentes tienen puntos de
ebullición bastante alejados
(mínimo unos 30º C).

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1.2 Destilación fraccionada.

La destilación fraccionada se emplea cuando la diferencia entre los


puntos de ebullición de los líquidos que se desean separar es muy
pequeña y no se puede realizar esta separación a través de la destila-
ción simple. La destilación fraccionada se emplea en la separación
de los componentes del petróleo para obtener gasolina, gasoil, etc.

COLUMNA FRACCIONADORA.

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1.2.1 Columna fraccionadora.

En la destilación fraccionada se usa una columna fraccionadora que


contiene distintos “platos”. En ella el vapor caliente sube y se encuentra
con los platos fríos se condensa y cae para volver a calentarse, y así se
produce un mayor contacto entre los vapores que suben y los líquidos
que bajan facilitándose la separación de líquidos.

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1.3 Destilación al vacío.

El sistema de destilación se conecta a una bomba


de vacío, este sistema permite destilar líquidos a
temperaturas más bajas que en la destilación sim-
ple y en la fraccionada, evitando así alteraciones
en las sustancias termolábiles.

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DESCRIPCIÓN DE LA FIGURA ANTERIOR.

1. Mechero, proporciona calor a la mezcla a destilar.


2. Retorta o matraz de fondo redondo, que deberá contener peque-
ños trozos de material poroso (cerámica, o material similar) pa-
ra evitar sobresaltos repentinos por sobrecalentamientos.

3. Cabeza de destilación: No es necesario si la retorta tiene una


tubuladura lateral.
4. Termómetro: El bulbo del termómetro siempre se ubica a la
misma altura que la salida a la entrada del refrigerador. Para sa-
ber si la temperatura es la real, el bulbo deberá tener al menos
una gota de líquido. Puede ser necesario un tapón de goma para
sostener al termómetro y evitar que se escapen los gases (muy
importante cuando se trabaja con líquidos inflamables).

5. Tubo refrigerante.
6. Entrada de agua: El líquido siempre debe entrar por la parte in-
ferior, para que el tubo permanezca lleno con agua.
7. Salida de agua: Casi siempre puede conectarse la salida de uno
a la entrada de otro, porque no se calienta mucho el líquido.
8. Se recoge en un balón, vaso de precipitados, u otro recipiente.
9. Fuente de vacío: No es necesario para una destilación a presión
atmosférica.
10. Adaptador de vacío: No es necesario para una destilación a pre-
sión atmosférica.

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2. EXTRACCIÓN.

La extracción es la obtención de principios activos de las drogas vegetales


o animales que los contienen, mediante métodos mecánicos, usando disol-
ventes o recurriendo a la destilación. Existen tres tipos de técnicas de
extracción, según el método empleado:
extracción mecánica.
extracción por disolventes.
extracción por destilación.

2.1 Extracción mecánica.

La extracción mecánica consiste en la obtención de princi-


pios activos por incisión o expresión
de drogas animales o vegetales. En es-
te tipo de extracción la droga debe es-
tar fresca y en grandes cantidades. El
calor, las incisiones o la compresión
de los tejidos producen la salida de los
líquidos contenidos en ellos. Si la dro-
ga es de origen vegetal, los líquidos
obtenidos se llaman zumos, mientras
que si es de origen animal obtenemos
jugos.

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2.1.1 Extracción mecánica por incisión.

Es un método usado para la obten-


ción de zumos gomosos de algu-
nos vegetales (opio, sangre de dra-
go); consiste en hacer incisiones en
las plantas que los contienen para
que los zumos salgan al exterior.

EXTRACCIÓN
DE OPIO.

2.1.2 Extracción por compre-


sión. Consiste en la aplicación de
una presión para forzar la salida-
de los líquidos bien por amonto-
namiento (los órganos animales
que contienen los jugos se apilan
y su propio peso produce presión
rompiendo los tejidos producién-
dose la salida de jugos) o por
prensas (se obtienen zumos o ju-
gos de drogas divididas)

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2.2 Extracción mediante disolventes.


En la extracción mediante disolventes los principios activos (p. a.) de una
mezcla se obtienen empleando diferentes disolventes. Se usa generalmente pa-
ra la extracción de p. a. de plantas, cuando la extracción mecánica no sea posi-
ble debido a que los principios activos están en baja proporción o porque la
droga no esté fresca.
Los disolventes más usados son el agua y el etanol y algunos disolventes orgá-
nicos como el éter. Dependiendo de la droga, de la temperatura y del disol-
vente tendremos:
Maceración.
Percolación.
Infusión.
Decocción.

2.2.1 Maceración.
La maceración consiste en poner en contacto la droga con
el disolvente durante un largo periodo que pueden ser va-
rios días a temperatura ambiente y con el recipiente tapa-
do para evitar la evaporación del disolvente siendo el más
usado el agua. El disolvente disuelve los principios acti-
vos hasta alcanzarse una concentración en equilibrio con
el contenido celular sin llegar al agotamiento de la droga.
El líquido filtrado es el producto que se utiliza.

RECUERDA:
Existe una variación de la maceración llamada
digestión en la que la temperatura del agua
está alrededor de 50º C.

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2.2.2 Percolación.
La percolación es una
técnica de extracción
que consiste en hacer
pasar, a través de la
droga previamente pulverizada, un di-
solvente a temperatura ambiente que
va extrayendo las sustancias activas
hasta el total agotamiento de la droga.
El disolvente pasa a través de la droga
gracias a la fuerza de gravedad. El di-
solvente más usado es el alcohol y pa-
ra esta técnica se utiliza un dispositivo
llamado percolador.

2.2.3 Infusión y decocción.


Son extracciones que se realizan con el agua a
alta temperatura para facilitar y acelerar la ex-
tracción. En la infusión se alcanza la temperatu-
ra de ebullición del disolvente durante un solo
instante, se añade la droga y se deja reposar
unos minutos. En la decocción la droga se man-
tiene en ebullición con el disolvente durante 15
– 30 minutos. No hay agotamiento de la droga.

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2.3 Extracción por destilación.


La extracción por destilación es un proceso que consiste en someter a
destilación una droga vegetal para obtener las esencias que contiene. La
destilación es necesaria para obtener las esencias porque se encuentran en
pequeñas proporciones en la planta, no pudiéndose obtener por otros mé-
todos.

La obtención de esencias se lleva a cabo mediante la destilación por


arrastre de vapor en la que el calor de la caldera es suministrado por una
corriente de vapor de agua recalentado, de forma que los vapores atravie-
san la droga arrastrando los principios volátiles que son condensados re-
cogiéndose en un recipiente adecuado.

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3. EVAPORACIÓN.

La evaporación es una operación de concentración de una disolución por el


paso de una parte del disolvente presente al estado de vapor. En la mayor parte
de las evaporaciones el disolvente es el agua; la evaporación se lleva a cabo
evaporando parte del agua, aumentándose así la cantidad relativa del soluto
para producir una disolución más concentrada.
Podemos hacer diferencias entre la evaporación, la desecación y la destilación:
en la desecación secamos sólidos eliminando la pequeña cantidad de líquido
que contienen, mientras que en la evaporación eliminamos una considerable
cantidad de disolvente para obtener líquidos más concentrados. En la destila-
ción se consigue una separación según el punto de ebullición y el producto
que nos interesa es el vapor, que más tarde se condensa, mientras que en la
evaporación el vapor no nos interesa sino el líquido concentrado.
Para concentrar disoluciones a pequeña escala las colocamos en un recipiente
a escala, las colocamos en un recipiente de poco fondo y mucha superficie
(cristalizador), las dejamos al aire para que el disolvente se evapore lentamen-
te a temperatura ambiente.

3.1 Tipos de evaporadores.


Los equipos utilizados para concentrar disoluciones mediante evaporación re-
ciben el nombre de evaporadores; existen diferentes tipos:
Discontinuos. Los evaporadores discontinuos consisten en un recipiente
calentado externamente por vapor, abierto o cerrado a la atmósfera y co-
nectado a un condensador; no son aptos para concentrar líquidos sensi-
bles al calor ya que el líquido entra en contacto con la superficie caliente.
Tubulares. Son evaporadores continuos en los que se produce una entrada
continua de la disolución diluida por un extremo y una salida continua
de la disolución concentrada por el otro.
Al vacío son evaporadores cuyos recipientes en los que se introduce
la disolución, se aplica vacío, para conseguir una buena evaporación
del disolvente a bajas temperaturas. Son útiles en caso de disoluciones
con sustancias termolábiles.

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4. CRISTALIZACIÓN.

La operación de cristalización es aquella por medio de la cual se separa un


componente de una solución líquida transfiriéndolo a la fase sólida en for-
ma de cristales que precipitan. Si se prepara una disolución concentrada a
alta temperatura y se enfría, se forma una disolución sobresaturada, que es
aquella que tiene, momentáneamente, más soluto disuelto que el admisible
por la disolución a esa temperatura en condiciones de equilibrio.
Posteriormente, se puede conseguir que la disolución cristalice mediante
un enfriamiento controlado. Esencialmente cristaliza el compuesto princi-
pal.
Evaporación del disolvente. De manera análoga, evaporando el disolvente
de una disolución se puede conseguir que empiecen a cristalizar los sóli-
dos que estaban disueltos cuando se alcanzan los límites de sus solubilida-
des. Este método ha sido utilizado durante milenios en la fabricación de
sal a partir de salmuera o agua marina.

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El método de cristalización es separar un soluto sólido para separarlo de un di-


solvente haciendo que cristalice el soluto, (inverso al proceso de la disolución).

Este método se utiliza para separar una mezcla de sólidos que sean solubles en
el mismo disolvente pero con curvas de solubilidad diferentes.
Una vez que la mezcla esté disuelta, puede calentarse para evaporar parte de di-
solvente y así concentrar la disolución.
Para el compuesto menos soluble la disolución llegará a la saturación debido a
la eliminación de partes de disolvente y precipitará.
Todo esto puede irse precediendo sucesivamente e ir disolviendo de nuevo los
distintos precipitados (esto recibiría el nombre de cristalización fraccionada) ob-
tenidos para irlos purificando hasta conseguir separar totalmente de dos sólidos.
Cada nueva cristalización tiene un rendimiento menor, pero con este método
puede alcanzarse el grado de pureza que se desee.
Normalmente, cuando se quieren separar impurezas de un material, como su
concentración es baja la única sustancia que llega a saturación es la deseada y el
precipitado es prácticamente puro.

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RECUERDA
La cristalización es el proceso inverso de la disolución.
Una forma simple de explicación seria la siguiente.
Técnica que consiste en hacer que se cristalice un soluto sólido con objeto
de ser separado del disolvente en el que este disuelto. Para ello conviene
evaporar parte del disolvente o dejar que el proceso ocurra a temperatura
ambiente.
Si hay un enfriamiento rápido se obtiene pequeños cristales, cuando es len-
to los cristales son de mayor tamaño.

5. CROMATOGRAFÍA.
La cromatografía es una técnica de análisis que se emplea para sepa-
rar los componentes de una mezcla según su distribución entre una
fase fija y otra móvil.
Además de separar sus componentes, con la cromatografía se pueden
identificar cualitativamente los mismos y en algunos casos es posible
determinar también su cantidad.
La fase móvil o eluyente consiste en un fluido, gas o líquido, que
arrastra a la muestra cuyos componentes queremos separar a través
de una fase fija.
La fase fija o estacionaria es una sustancia sólida o líquida que retie-
ne en distinta proporción cada componente de la muestra. La capaci-
dad de la cromatografía para separar los componentes de una mezcla
se denomina poder de resolución.
Posteriormente, será posible identificar las sustancias separadas a tra-
vés de diversos métodos: espectrofotometría, aplicación de luz ultra-
violeta sobre las manchas, etc.

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Los principales tipos de cromatografía son: la cromatografía en


capa fina y la cromatografía en papel; además también están la
cromatografía en columna y la cromatografía de gases.
5.1 Cromatografía en capa fina: es una técnica más rápida y
más sensible que la cromatografía en papel y se utiliza pa-
ra la separación de sustancias de bajo peso molecular (aa,
lípidos, HC, etc.). en la cromatografía en capa fina la fase
estacionaria está compuesta por una sustancia adherida a
un soporte en forma de capa muy fina, el soporte empleado
puede ser de vidrio, plástico o metal.
Por su parte, la sustancia sólida adherida al soporte puede
ser almidón, silica – gel, celulosa, etc. y la fase móvil suele
ser una mezcla de disolventes, que asciende por capilari-
dad por la placa arrastrando los componentes de la mezcla
que aparecen como manchas. Los líquidos más usados para
la fase móvil son el etanol, el metanol, el ácido acético, to-
lueno, etc.
Las sustancias separadas se presentan en forma de man-
chas que pueden ser coloreadas o incoloras.
Factores que influyen en el desarrollo de la cromato-
grafía en capa fina:
- Temperatura: cuanto menor es la temperatura del proceso,
más se adsorben las sustancias a la fase fija y más difícil es
su separación.
- Estado de las placas: las placas deben estar perfectamente
limpias y sin restos de grasa, adhesivos, etc., ya que altera-
rían la migración de los componentes de la mezcla.
- Pureza de disolventes: es imprescindible utilizar reactivos
de alta pureza para no interferir en el resultado final de la
cromatografía.

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Técnica de realización:

1. Aplicación de la muestra: la muestra se aplica en pequeñas cantidades ( 10-


15 microlitros ) disuelta en un disolvente adecuado, sobre la placa y se deja
secar.
2. Introducción de la placa en la cubeta: la placa se coloca en la cubeta que tie-
ne en el fondo el solvente o fase móvil. El solvente sube a través de la placa
por capilaridad, arrastrando los componentes de la muestra a partir del pun-
to de aplicación.
3. Separación: a medida que el solvente va ascendiendo por la placa, se produ-
ce el arrastre de los componentes que van siendo separados entre sí en vir-
tud del proceso de adsorción sobre la fase estacionaria. Cuando el frente del
solvente llega al final de la placa, ésta se saca de la cámara y se deja secar.
4. Detección: las sustancias separadas se detectan por mecanismos físicos y
químicos ( luz U.V., colorantes, etc.). El cromatograma queda como man-
chas que corresponden a los componentes separados de la mezcla.
CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA.

RECUERDA
La cromatografía en capa fina solo permite reali-
zar el estudio cualitativo de una mezcla, sin posi-
bilidad de cuantificar las sustancias separadas.

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5.2 Cromatografía en papel.

Es la más antigua de todas las técnicas cromatográficas. El soporte es plano al


igual que en la cromatografía en capa fina, y la separación de sustancias se lleva
a cabo en papel de celulosa de elevada pureza. La hoja de papel se encuentra re-
cubierta de una capa de agua asociada a las fibras de celulosa, que es la que cons-
tituye la fase estacionaria, además tenemos otros componentes necesarios como
son:
Una cubeta para poner la fase móvil.
La fase móvil, en la que irá disuelta la muestra, es líquida también y está
formada por solventes cuya naturaleza se elige en función de los componen-
tes que se pretenden separar.
Técnica de realización:
1. Aplicación de la muestra: se hace sobre papel sobre un extremo de éste y se
espera a que se seque.
2. Introducción del soporte en la cámara: la cámara consiste en una cubeta que
contiene el solvente. El soporte se introduce en ella, en posición vertical, de
manera que el solvente pueda atravesarlo por capilaridad, arrastrando a su
paso los componentes de la mezcla.
3. Separación: los componentes de la mezcla se irán separando en función de
su reparto entre las dos fases, de manera que los más retenidos por la fase
estacionaria se quedarán más cerca del punto de aplicación y los menos rete-
nidos llegarán más lejos. Cuando el solvente casi ha alcanzado el frente del
papel, se quita el papel de la cámara y se deja secar.
4. Detección: las sustancias separadas se detectan mediante procedimientos fí-
sicos o químicos, según la naturaleza de las mismas. El resultado es la hoja
de papel con unas manchas consecutivas separadas entre sí.

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5.3 Cromatografía en columna

Se utilizan columnas de vidrio que están rellenas de óxido de


magnesio o de óxido de aluminio, estas sustancias constituyen
la fase fija que va situada dentro de la columna.
La muestra, cuyos componentes se desean separar, se aplica en
la superficie de la columna; a continuación se hace pasar lenta-
mente el solvente adecuado por la columna y se recoge en tu-
bos separados al final del proceso. La separación de las sustan-
cias se realiza según la polaridad de las mismas, su masa mole-
cular, etc. la HPLC o cromatografía líquida de alta eficacia es
un tipo especial de cromatografía en columna, es el tipo de cro-
matografía elegido por la mayoría de los laboratorios porque se
requiere un volumen de muestra pequeño, es rápida y se obtie-
nen los resultados en poco tiempo.

5.4 Cromatografía de gases: en la cromatografía de gases, la


fase móvil es un gas y la fase fija un líquido. El gas usado debe
ser inerte (helio, argón, nitrógeno). Este tipo de cromatografía
se utiliza para sustancias volátiles, siendo las aplicaciones más
importantes: estudio de la composición de gasolina, gas natural,
pesticidas, desechos industriales en ríos, gases de combustión
en automóviles, etc.

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6. ESPECTROFOTÓMETRO DE ABSOR-
CIÓN.
El espectrofotómetro puede identificar y determinar cuantitativa-
mente sustancias basándose en la cantidad de luz que pueden ab-
sorber. Es un instrumento que sirve para determinar concentracio-
nes desconocidas de distintas sustancias que se encuentran en dis-
tintas muestras químicas o biológicas como el suero, el plasma o la
sangre.
La espectrofotometría es una técnica basada en la capacidad de los
átomos y las moléculas para absorber radiaciones electromagnéti-
cas. El espectrofotómetro es capaz de medir esas radiaciones.

Toda radiación electromagnética (REM) se propa-


ga en forma de ondas sinusoidales y está caracteri-
zada por una longitud de onda λ (lambda), que es
la distancia que hay entre dos máximos o dos mí-
nimos de esa onda y se mide en nanómetros.

Un espectrofotómetro consta de un foco luminoso que emite luz a


través de un monocromador que selecciona la longitud de onda,
éstas llegan a una cubeta con la muestra a medir; cuando llega la
radiación a la muestra, una parte de la luz será absorbida con ma-
yor o menor intensidad y otra parte saldrá de ella.

El espectrofotómetro dispone de un detector que recoge el haz de


luz que no ha sido absorbido por la muestra y
transforma dicho impulso luminoso en mecá-
nico, activando un sistema de lectura, que es
el lector.
.

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6.1 Manejo del espectrofotómetro


1. Enchufarlo, encenderlo y esperar unos minutos a que se esta-
bilice.
2. Seleccionar la longitud de onda y pulsar enter para registrar
la longitud de onda seleccionada.
3. Calibrar el aparato a 0 de absorbancia: para ello introducir la
cubeta con el blanco (agua destilada u otro disolvente), y pul-
sar blanco.
4. Sacar el blanco e introducir la cubeta con la muestra proble-
ma o patrón y pulsar el botón analize para leer la absorbancia.
5. Anotar el valor de la absorbancia que aparece en la pantalla.

Cubetas de vidrio

Precauciones

Antes de introducir las cubetas, éstas deben estar perfectamente


secas y limpias.
Coger las cubetas sin tocar las caras por donde va a pasar el foco
luminoso.
Las cubetas pueden ser desechables o reutilizables. En este caso,
no se pueden lavar con detergente ni con escobillas, sólo pasarles
abundante agua destilada.

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