Informe - Cromatografia MESA 5

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UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA

MOLINA

FACULTAD DE CIENCIAS
CURSO: QUIMICA ORGANICA

INFORME DE LA PRÁCTICA : Cromatografía

INTEGRANTES:
NOMBRE APELLIDO CÓDIGO CARRERA

Lourdes Luque Apaza 20211928 Zootecnia

Angie Gabriela Paz Haro 20220879 Zootecnia

Alexandro Solis Carbajal 2021330 Ing. Ambiental

HORARIO DE LABORATORIO: Martes 11:00am - 1:00pm

PROFESOR DE LABORATORIO: Gaby Espinoza

FECHA REALIZACIÓN DE LA PRÁCTICA: 19/09/2023


1. INTRODUCCIÓN
Alguna vez se ha preguntado si es posible separar una mezcla de varios
componentes solo basándose en la velocidad con la que se desplazan los
componentes dentro de ella? Pues esto es muy posible , e incluso en compuestos
que forman un color de mezcla( como por ejemplo el verde) podemos claramente la
diferencia ( entre amarillo y azul). La cromatografía es un método que se utiliza para
separar y purificar mezclas basándose en la velocidad con la que se mueven los
componentes dentro de ella, esto puede hacerse usando una fase llamada móvil
(líquido o gas) y una fase estacionaria(sólido). Existen tres técnicas básicas de
inyección de muestras (líquidas o gaseosas) en columnas capilares: split, splitless y
en columna. (1)
Las dos primeras consisten en inyectar y vaporizar la muestra en una cámara de
vaporización. El sistema split desvía la mayor parte de la muestra fuera del sistema
cromatográfico y envía sólo una pequeña fracción a la columna. El método split-less
dirige toda la muestra a la columna, por lo que resulta más adecuado para el análisis
de trazas o de componentes muy volátiles. La inyección on column se lleva a cabo
en frío, eliminando la etapa de vaporización que podría producir la descomposición
de los compuestos termolábiles. En ocasiones, por ejemplo en el caso de muestras
de tejidos, se desean analizar los componentes volátiles contenidos en muestras
sólidas. En tal caso, es necesario efectuar una extracción previa con un disolvente
adecuado e inyectar el extracto en la columna. (1)
La extracción de espacio en cabeza (HS: “headspace”) es una alternativa más
rápida a la extracción en Soxhlet, que además evita la pérdida de los componentes
más volátiles. En este método, la muestra sólida se coloca en un vial sellado con un
septum y se calienta durante un tiempo determinado a la temperatura fijada. Durante
esta operación, la mayor parte de los compuestos volátiles se transfieren al aire del
vial, denominado espacio de cabeza. Se calienta el tiempo suficiente para que se
alcance el equilibrio. Seguidamente, con una jeringa se toma una alícuota del aire
del vial y se inyecta en el cromatógrafo. La aguja de la jeringa debe calentarse a la
misma temperatura que la muestra para evitar condensaciones sobre la misma. (1)

2. OBJETIVOS
- Determinar el Rf de las manchas de acuerdo a la polaridad que se obtuvieron
en la separación de cromatografía.
- Separar una mezcla por colores de azul de metileno y anaranjado de metilo
con un solvente que sea más afín a uno de ellos.
3. METODOLOGÍA

4. RESULTADOS
Tabla N°1. Cromatografía sobre papel (Whatman Nº1)

Tabla N°2. Cromatografía en capa fina (c.c.f.)

Tabla N°3. Características de la cromatografía en capa fina y en papel

Tabla N°4. Cromatografía en Columna: separación de 2 colorantes.


DISCUSIONES DE LOS RESULTADOS

Cromatografía en capa fina: Tabla 1-2

Se puede observar que lo importante en la polaridad; la retención y la selectividad en


la separación dependen de los valores respectivos de las constantes de los
diferentes equilibrios químicos que tienen lugar, que están en función de la
polaridad, la cual se encuentra determinada por el número y naturaleza de los
grupos funcionales presentes. Los solutos más polares quedarán más retenidos
puesto que se absorben más firmemente a los centros activos de la fase
estacionaria, mientras que los no polares se eluyen con mayor facilidad. (2). Sin
embargo, esta vez se usa una placa cromatográfica donde se va a evaluar el
desplazamiento de los compuestos. Se usó el naranja de metilo y el azul de
metileno, en este caso el disolvente fue una mezcla de alcoholes que son
compuestos polares. Desde una perspectiva general, el azul de metileno es un
colorante que se presenta en polvo cristalino, generalmente se da en color verde
oscuro. Es de carácter inodoro y tiene alta estabilidad en el aire, cuando se disuelve
en agua o alcohol, tiñe la solución de color azul. Se disuelve fácilmente en el agua y
también en cloroformo; es poco o menos soluble en alcohol. (3) Por su parte, el
naranja de metilo o anaranjado de metilo es un compuesto azoderivado, utilizado
como colorante e indicador de pH. Ahora bien, el primer compuesto que se desplazó
fue el naranja de metilo con una mayor distancia gracias a la afinidad de este con el
disolvente y en el caso del azul de metileno hubo mayor resistencia.

Cromatografía en columna: Tabla 3


En este proceso se puede explicar la razón por la cual el color amarillo (menos
polar) fue el primero en desplazarse hacia abajo, debido a la poca afinidad con el
eluyente (etanol) que es la fase movil, pasando por el filtro de algodón y almacenado
en el beaker por el proceso llamado elución en el cual interactúan las fuerzas
intermoleculares entre el eluyente (etanol) y la sustancia. Cuando se cambia al
etanol por el Agua acidulada (agua con gotas de vinagre o zumo de limón) arrastra
el colorante azul, se mantiene en la superficie debido a que resiste más por su
similitud en cuanto a su polaridad.

5. CONCLUSIONES
● La velocidad de movimiento de los componentes de la mezcla se analizó
mediante cromatografía en columna. Se requiere agua acidificada para
absorber el azul de metileno debido a la polaridad de ambos compuestos. De
manera similar, la absorción de naranja de metilo requería etanol debido a su
baja polaridad.
● Debido a que la fase sólida (gel de sílice) es muy polar, retiene los
componentes polares en el naranja de metilo y recorre menos distancia que
la mezcla.
● Comparando el valor de Rf del naranja de metilo en papel, vemos que el
naranja de metilo tiene un Rf más alto, lo que indica un mayor
desplazamiento debido a su alta afinidad por la fase móvil. Aunque el azul
tiene un Rf más bajo (menos movilidad) porque se absorbe en la fase
estacionaria.

6. CUESTIONARIO

CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA Y CROMATOGRAFÍA EN PAPEL

1. ¿Qué entiende por Rf?

Indica el desplazamiento de una sustancia respecto al desplazamiento del


disolvente, tomando en cuenta que esto es constante y características a esta
sustancia (siempre que todas las condiciones permanezcan constantes) nos pueden
servir para intentar la identificación de ella. (4)

2. ¿Cuales son las diferencias entre lac.c.f. y la de papel?

La cromatografía en capa fina permite el uso de absorbentes eficientes, los que se


aplican formando una capa delgada y uniforme que se adhiere sobre la superficie de
un soporte inerte rígidos por el uso de un agente aglomerante o por las amplias
cualidades del material. El espesor de la capa adsorbente varía entre 0,1 y 2 mm.
Las sustancias se depositan en solución en la base de la plancha, la que se coloca
verticalmente en la Cuba cromatográfica que contiene el solvente escogido. Cuando
este llega a la altura deseada, se saca el cromatograma, se seca, se revela y se
determina el fo Rx de cada sustancia En cambié, la cromatografía sobre papel es un
tipo de partición que utiliza el papel fitra como soporte inerte de la fase fija que
puede ser el agua u otro líquido, Las separaciones se realizan por la partición
continua de las sustancias entre la fase acuosa y la fase orgánica que fluye por el
papel por capilaridad. La muestra se siembra cerca del borde inferior del papel filtro.
Luego de que la siembra está seca se sumerge el extremo del papel en un
recipiente, herméticamente sellado, que contiene el solvente de desarrollo, éste
asciende por capilaridad y los componentes de la muestra se van desplazando a
diferente velocidad del lugar en que fueron sembrados. La identificación de los
distintos componentes de la mezcla se hace por comparación con sustancias patrón
o midiendo su desplazamiento respecto al de la fase móvil (5)

3. Cite algunas de las aplicaciones de la cromatografía en su especialidad.


Análisis de Alimentos por Cromatografía: El análisis de los alimentos mediante la
cromatografía de columna, de capa delgada, de papel y cromatografía de gas son de
mucha utilidad en el campo de la nutrición, la investigación de nuevos productos, el
control de la calidad de los alimentos, etc. Asimismo, colabora con la identificación
de aquellas plantas y animales que merecen consideración como alimentos para el
hombre. Tareas todas estas en las que está involucrado el Ingeniero en industrias
Alimentarias.(6)

4. Interprete los valores de Rf 0.05, 0.6y 0.58

R es la Relación de frentes o también conocido como factor de retención y se define


distancia requerida por of soluto distancia recorrida por el solvente

Las 3 valores pueden ser interpretadas con 3 diferentes sustancias de las cuales, la
Jera (-0.05) tiene un desplazamiento menor con respecto al desplazamiento del
veinte, la 2da (-0,6) un desplazamiento algo más amplio, y la 3era (0,0) un
desplazamiento mayor a las demás.

El valor de depende del tipo de solvente empleado, del soporte utilizado y otros
Conocer este valor permite saber qué tan rápido se mueve el soluto que se analiza
en

el sistema cromatográfico mientras mayor sea ese valor la sustancia habrá recorrido
5. Introduciría algún cambio cuando se tiene un Rf de 0.05, ¿Por qué?
Al ser un If de 0.05 si introduciría a un cambio, ya que es una distancia baja lo cual
dificulta la identificación de alguna sustancia

6. Explique algún método para localizar las bandas de aserción cuando se


trabaja con sustancias incoloras en una columna

Si la detección tiene que ser óptica y la sustancia es incolora, se podría detectar en


la región ultravioleta si tiene absorción ahí. Si no es así tienes que hacer un método
de modificación post-columna, a través del cual la sustancia a deseas (o buscas)
toma cator al reaccionar contra, de preferencia una fluorescente porque son más
sensibles a la detección. (7)
7. ¿Qué es la "electroforesis y cuál es su principal aplicación en los
compuestos

La electroforesis es una técnica para la separación de moléculas según la movilidad


de estas en un campo eléctrico.1 La separación puede realizarse sobre la superficie
hidratada de un soporte sólido (p. ej, electroforesis en papel o en acetato de
celulosa), o bien a través de una matriz porosa (electroforesis en gel, o bien en
disolución (electroforesis libre). Dependiendo de la técnica que se use, la separación
obedece en distinta medida a la carga eléctrica de las moléculas y a su masa La
electroforesis se usa en una gran mayoría en la materia del ADN recombinante ya
que nos permite saber la carga que poseen los polipéptidos, y separar las diferentes
polipéptidos resultantes de las variaciones del experimento del ADN recombinante
(8)
7. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. UniversidadAutonomadeMadrid.http://www.qfa.uam.es/qb/practicas/P6-guion.pdf.CR
OMATOGRAFÍA EN PLACA FINA .
2. Ramos.F,Blanco.B.https://repository.unilibre.edu.co/bitstream/handle/10901/11182/T
RABAJO%20DE%20GRADO_Fernando%20Ramos%20y%20Brayan%20Banco_Cor
reccionesJunio.pdf?sequence=1. 2017. Decoloración y degradación del azul de
metileno presente en agua.
3. Gennaro, A. (2003). Cromatografía. En Remington Farmacia. 20 a ed. Buenos
Aires,Argentina: Editorial Médica Panamericana, pp.686.
4. Holger J, Maldonado García,Enrique G.& Guzmán L.,&, Sabino M. Cabeza.A &
5. Tupayachi, J.. (Septiembre 2012). Estudio de sapogeninas esteroidales de especies
peruanas del género dioscorea. Revista Sociedad Química del Perú, pps. 2-3,8
6. Lamarque, A., Zygadlo, L., Labuckas, D., López, L. Torres, M. y Maestri, D. (2008).
7. Cromatografía. Fundamentos teórico- prácticos de química orgánica. 1a ed.
Córdoba,Argentina: El encuentro, pp. 62.
8. Molina Buendía, P., Gomez, A., Velasco, M., Tarraga, A., Ceron, M., Espinoza, J. and
Guirado, A. (1991). Cromatografía de Adsorción. Prácticas de química orgánica.
Murcia:Universidad de Murcia, Secretariado de Publicaciones, pp.22

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