Compendio 2023 2023-09-21

COMPENDIO DE DOCUMENTOS TÉCNICOS DE
REFERENCIA ANALÍTICA
Tercera revisión, septiembre 2023.

Queda prohibida la reproducción total o parcial del presente documento.
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Índice
A. Introducción………………………………………………………………………………………………………………… 1
B. Objetivo………………………………………………………………………………………………………………………………………………2
C. Alcance……………………………………………………………………………………………………………………………………………….2
Verificación o validación interna de métodos de prueba (conforme al documento
CCAYAC-MA-08)…………………………………………………………………………………………………………………….……………3
Verificación o validación interna de métodos fisicoquímicos para agua, alimentos
y otros productos (conforme al anexo 5.2 del documento CCAYAC-MA-08)………….29
Verificación y validación interna de métodos para medicamentos (conforme al
anexo 5.1 del documento CCAYAC-MA-08)………………………………………………………………………. 45
Verificación, Control de Calidad Interno y expresión de resultados para la
determinación de Clenbuterol por ensayo inmunoenzimático (conforme al
documento CCAYAC-CR-07)……………………………………………………………………………………………………….62
Verificación del método de prueba para la detección de Brucella spp. por PCR
(conforme al documento CCAYAC-CR-08)…………………………………………………………………………..74
Validez para el aislamiento e identificación de amebas de vida libre en aguas de
uso recreativo (conforme al documento CCAYAC-CR-12)……………………………………………….81
Verificación metrológica de balanzas(conforme al documento CCAYAC-CR-13)…85
Verificación metrológica de material volumétrico de vidrio (conforme al
documento CCAYAC-CR-14)……………………………………………………………………………………………………….94
Verificación metrológica de aparatos volumétricos operados por pistón(conforme
al documento CCAYAC-CR-15)…….……………………………………………………………………………………………106
Verificación y validación interna de métodos de prueba microbiológicos
(conforme al anexo 5.3 del documento CCAYAC-MA-
08)………………………….……………………………………………………………………………………………………………………………….118
Estimación de la incertidumbre de la medición (conforme al documento
CCAYAC-CR-19)……………………….……………………………………………………….………………………………………………..131
Validez para la determinación de Toxina estafilocócica en alimentos por método
inmunoenzimático con Kit Ridascreen Set Total (conforme al documento
CCAYAC-CR-22)…………………….…………………………………………………………………………………………………….….143
Verificación metrológica de espectrómetros uv-visible (conforme al documento
CCAYAC-CR-23)…………………………………………………………………………………………........................................... 149

Verificación metrológica de termómetros (conforme el documento CCAYAC-IT-
090)……………………………………………………..……………………………………………….…................................................. 149

A. Introducción
De conformidad con lo dispuesto en los artículos 3, fracción ,I, 4, fracción II, letra e y 16,
fracciones I, II, III y VIII, del Reglamento de la Comisión Federal para la Protección Contra
Riesgos Sanitarios (COFEPRIS) la Comisión de Control Analítico y Ampliación de Cobertura
(CCAYAC) es la responsable de realizar las pruebas analíticas de los productos sujetos a
control sanitario, específicamente en el artículo 16 del citado ordenamiento se establecen,
entre otras, las siguientes atribuciones:
“…
ARTÍCULO 16. Corresponde a la Comisión de Control Analítico y Ampliación de Cobertura:
I. Establecer los lineamientos, criterios y procedimientos de operación aplicables al
control analítico de la condición sanitaria en las materias a que se refiere el artículo 3,
fracción I, del presente Reglamento;
II. Proponer las políticas, criterios, procedimientos y requisitos de operación para los
laboratorios de control fisicoquímico, microbiológico, biológico, farmacéutico o
toxicológico integrantes de la Red Nacional de Laboratorios, del Sistema Federal Sanitario
(SFS) y, en general, para los Terceros Autorizados;
III. Definir y coordinar la aplicación de las políticas para la ampliación de cobertura a
través de laboratorios de prueba y unidades de verificación de Terceros Autorizados;
…
VIII. Coordinar las actividades de capacitación e investigación de laboratorios y unidades
de verificación a Terceros Autorizados y de la Red Nacional de Laboratorios de Salud
Pública que constituyen la ampliación de cobertura;…” (Sic)
Por lo anterior la CCAYAC establece Documentos Técnicos de Referencia Analítica como
políticas, lineamientos, criterios, procedimientos y requisitos de operación aplicables al
control analítico para coordinar, armonizar y fortalecer a la Red Nacional de Laboratorios
de Salud Pública
El presente documento reúne los documentos técnicos que sirven como base para la
elaboración de las verificaciones de métodos de prueba y verificaciones metrológicas de
instrumentos en cumplimiento con la normatividad vigente.
La CCAYAC establece como política que estos documentos técnicos deben ser
establecidos en los laboratorios auxiliares de la autoridad como los Laboratorios Estatales
de Salud Pública (LESP) y Laboratorios de Prueba Terceros Autorizados.

Revisión 3
B. Objetivo
Establecer los Documentos Técnicos de Referencia Analítica aplicables a métodos

fisicoquímicos, microbiológicos e inmunológicos para armonizar a la Red Nacional de
Laboratorios de Salud Pública y Laboratorios de Prueba Terceros Autorizados, con la
finalidad de asegurar la validez de los resultados analíticos.
C. Alcance
Los documentos técnicos del presente compendio deben ser aplicados por la Red
Nacional de Laboratorios de Salud Pública y Laboratorios de Prueba Terceros Autorizados
que realizan determinaciones analíticas, establecidas en las normativas vigentes,
utilizando métodos fisicoquímicos, microbiológicos, inmunológicos y de biología
molecular.
D. Documentos Técnicos de Referencia Analítica
A continuación se describen los documentos técnicos de referencia analítica establecidos

por la CCAYAC para ser aplicados a los métodos fisicoquímicos, microbiológicos e
inmunológicos.

Revisión 3
Documento Técnico de verificación o validación interna de
métodos de prueba
(Conforme al documento CCAYAC-MA-08).

Revisión 3
Documento Técnico de verificación o validación interna de métodos de prueba
(Conforme al documento CCAYAC-MA-08)
1. OBJETIVO
Establecer las directrices para realizar la verificación o validación interna de los

procedimientos analíticos por medio de la aplicación de las características de desempeño
y su evaluación frente a los criterios de aceptación previamente establecidos, a fin de
demostrar que son apropiados para el uso previsto
2. ALCANCE
Aplica para:
 Métodos fisicoquímicos para el análisis de agua, alimentos y otros productos

 Métodos fisicoquímicos para el análisis de medicamentos
 Métodos microbiológicos para el análisis de agua y alimentos
3. DEFINICIONES.
3.1 Analito: Componente específico de una muestra a medir en un análisis ya sea

químico, físico o biológico.
3.2 Alcance de la validación: Son los analitos, matrices y concentraciones para las
cuales un método validado de análisis puede ser usado satisfactoriamente.
3.3 Buenas Prácticas de Laboratorio: Son un conjunto de reglas, procedimientos
operativos y prácticos establecidos por una determinada organización para
asegurar la calidad y la validez de los resultados generados por un laboratorio.
3.4 Blanco de reactivos: Reactivos usados durante el proceso analítico (incluyendo los
solventes usados en la extracción o disolución) los cuales son analizados para
garantizar que la medición no es influenciada por los materiales utilizados durante
el análisis.
3.5 Blanco de muestra: Son matrices que no contienen el analito de interés. Son
difíciles de obtener pero son necesarios para estimar las interferencias que
pudieran encontrarse durante el análisis de las muestras de prueba.
3.6 Característica de desempeño: Característica específica a evaluar en una
verificación o validación interna del método. Es el proceso que se realizará en el
laboratorio para demostrar que un método produce consistentemente resultados
confiables en las condiciones particulares del laboratorio.

Revisión 3
3.7 Cepas de referencia: Son las obtenidas pos distribuidores autorizados con
trazabilidad a una colección internacionalmente reconocida, las cuales deben
contar con certificado de cepas de referencia certificadas
3.8 Criterios de aceptación: Indicador predefinido y documentado mediante el cual
un resultado se considera que está dentro de los límites o que no alcanza o excede
los límites indicados en la especificación.
3.9 Curva de calibración: Es la representación gráfica de la señal medida como una
función de cantidad del analito.
3.10Desviación estándar: Una medida de cómo se dispersan los valores sobre una
media en una distribución de valores.
3.11 Desviación negativa: Se produce cuando el método a validar da un resultado
negativo y el valor de referencia es positivo. Una desviación positiva se convierte en
un falso negativo cuando se puede demostrar que el resultado verdadero es
positivo
3.12 Desviación positiva: Se produce cuando el método a validar da un resultado
positivo y el valor de referencia es negativo. Una desviación positiva se convierte en
un falso positivo cuando se puede demostrar que el resultado verdadero es
negativo.
3.13 Especificidad: La capacidad de un método para medir solo lo que se pretende
medir.
3.14 Exclusividad: Estudio que implica cepas puras no objetivo, que pueden ser
potencialmente de reacción cruzada. En términos microbiológicos son los
diferentes microorganismos que no pertenecen al mismo género y los cuales no
deben ser detectados por el método.
3.15 Homogeneidad de varianzas: La homogeneidad de varianzas del conjunto de
datos, tales como ésos que resultan de análisis replicados a diferentes niveles,
puede confirmarse si estas variaciones no se correlacionan perceptiblemente a sus
concentraciones correspondientes.
3.16 Incertidumbre: Parámetro no negativo que caracteriza la dispersión de los valores
atribuidos a un mensurando, a partir de la información que se utiliza.
3.17 Inclusividad: Estudio que involucra a las cepas de interés puro para ser detectadas
o separadas. En términos microbiológicos es la capacidad para detectar diferentes
microorganismos pertenecientes a un mismo género y son detectadas por el
método.
3.18Informe de verificación o de validación: Es un documento que contiene registros,
resultados y la evaluación completa del proceso de verificación o validación interna
que están ensamblados y resumidos.
3.19 Intervalo de confianza: Intervalo en torno al valor estimado que contiene el valor
real con una probabilidad determinada.
3.20 Intervalo de trabajo (de un método analítico): Es el intervalo establecido
experimentalmente y evaluado estadísticamente por medio de la calibración del
método, entre la cantidad o concentración de masa más baja y más alta.

Revisión 3
3.21 Linealidad del método: Es la capacidad de un método para dar una respuesta
analítica que es directamente proporcional a la concentración del analito en la
muestra dentro de un intervalo dado.
3.22 Linealidad del sistema: Es la capacidad de un instrumento de medición
para dar una respuesta analítica que es directamente proporcional a la
concentración del analito.
3.23 Límite de cuantificación: Es el nivel mínimo de analito que puede ser
determinado con precisión y veracidad o incertidumbre de medición aceptables.
3.24 Límite de detección: Concentración mínima de un analito, sustancia o
microorganismo en una muestra, la cual puede ser detectada pero no cuantificada
bajo las condiciones en que se lleva a cabo el método.
3.25 Material de referencia interno: Material no certificado o sustancia
producida por un laboratorio, donde uno o más de cuyos valores de propiedad son
suficientemente homogéneos y bien establecidos para ser utilizados para la
validación.
3.26 Método analítico: Descripción de la secuencia de actividades, materiales,
equipos y parámetros que se deben cumplir para llevar a cabo el análisis de un
componente específico o para determinar la concentración de un compuesto o
un elemento químico de una muestra.
3.27 Método Compendiado: Son métodos oficiales establecidos en la
Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos (FEUM)o en Farmacopeas
Internacionales, AOAC, EPA, Standard Methods, Codex Alimentarius, BAM, PAM,
entre otros
3.28 Método compendiado modificado: Métodos que han sido ampliados en su
alcance o a los cuales se han realizado modificaciones por ejemplo cambio de un
reactivo crítico, plataforma de detección, fundamento técnico, etc. que presenten
diferencia significativa.
3.29 Método No compendiado: Se considerarán como tales los métodos de
ensayo no oficiales como los generados por el laboratorio o por el usuario, Journals,
publicaciones técnico-científicas (por ejemplo Journals, reviews, American Science,
libros académicos técnicos), notas técnicas, tesis, entre otros y pueden comprender
también métodos alternativos a los métodos compendiados.
3.30 Muestra adicionada: Porción representativa del material a evaluar, a la que
se le adicionan cantidades conocidas del analito de interés.
3.31 Protocolo de verificación o validación interna: Documento que describe las
actividades (conjunto de instrucciones escritas) para llevar a cabo la verificación o
validación interna, incluyendo los criterios de aceptación para la aprobación del
método de prueba.
3.32 Precisión intermedia: Variación en los resultados cuando las mediciones se
realizan en un solo laboratorio pero en condiciones que son más variables que las
condiciones de repetibilidad.

Revisión 3
3.33 Prueba interlaboratorio: Son las que se llevan a cabo en diferentes
laboratorios que incluyen los ensayos de aptitud. El prefijo inter significa “entre”.
3.34 Prueba intralaboratorio: Son los ensayos analíticos que se llevan a cabo
dentro de un mismo laboratorio pudiendo incluir diferentes analistas, equipos, días,
etc. El prefijo intra significa “dentro”.
3.35 Recuperación o recobro: Cantidad del analito recuperada en la porción de
muestra o muestra adicionada cuando esta es conducida a través del método
analítico completo, y que permite evaluar la eficiencia de la extracción, proceso de
preparación e interferencias que puedan existir al aplicarlo. Se expresa en términos
de porcentaje.
3.36 Repetibilidad: Es el grado de concordancia entre los resultados analíticos
individuales obtenidos por la aplicación de un mismo procedimiento analítico, a
diferentes porciones de la misma matriz, realizadas bajo distintas condiciones de
medición (personal) y en diferentes tiempos (o a intervalos de tiempos más largos).
3.37 Respuesta analítica: Lectura obtenida al aplicar un método analítico, como
pueden ser el área o altura del pico en un cromatograma, tamaño del inóculo,
potencia de vacunas, entre otros.
3.38 Resultado de ensayo: Valor de un mensurando obtenido tras la realización
de un método de ensayo específico.
3.39 Re-validacióno re-verificación: Confirmación de que un método
originalmente validado o verificado por el laboratorio sigue siendo adecuado para
su uso después de una modificación/ mejora o cambio.
3.40 Robustez: Es la medida de la capacidad del método analítico de permanecer
no afectado por pequeñas variaciones premeditadas de los parámetros del
método.
3.41 Selectividad: Grado en el que un método puede ser utilizado para
determinar analitos particulares (o microorganismos) en mezclas o matrices sin
interferencia de otros componentes de comportamiento similar.
3.42 Sensibilidad analítica: Es la pendiente de la función de la calibración del
método analítico completo, incluyendo todos los pasos del procedimiento, dentro
del intervalo de trabajo en cuestión, generalmente aplicado para métodos
cuantitativos donde aplica curvas de calibración. Desde otra perspectiva es el
cambio en la respuesta de un instrumento de medición dividido por el cambio
correspondiente en el estímulo. No debe confundirse con el Límite de detección
(LD).
Para métodos cualitativos la sensibilidad es la habilidad de un método para
detectar muestras verdaderamente positivas como positivas. Debido a esto el
índice de sensibilidad “es la probabilidad, para una concentración dada, que el
método clasifique a la muestra como positiva, sabiendo que es en realidad
positiva”.
3.43 Sesgo: Es una expresión de la proximidad de la media de un número infinito
de resultados (producidos con el método) a un valor de referencia.

Revisión 3
3.44 Validación interna: Proceso documentado por el cual un procedimiento
analítico (o método) demuestra ser adecuado para el uso al que está destinado a
través de la aportación de evidencias objetivas. Aplica para métodos no
compendiados de estudios intralaboratorio.
Nota: En términos de los requisitos de la ema se entenderá la validación de
métodos como validación interna de métodos y también los referidos bajo el
mismo término en la NMX-EC 17025- IMNC-2018 numeral 7.2.2
3.45 Verificación: Proceso por el cual un método compendiado o procedimiento
analítico validado (método del fabricante) demuestra ser apropiado para un
producto en particular.
4. RESPONSABILIDADES.
Los presentes criterios deben ser aplicados por los integrantes de la Red Nacional de
Laboratorios de Salud Pública, los Laboratorios de Prueba Terceros Autorizados ante la
COFEPRIS y verificadores.
Estos criterios aplican para métodos que hayan sido verificados posteriores a la fecha de
publicación de este documento.
5. CRITERIOS.
5.1 Criterio No. 1.- Políticas generales
5.1.1 La verificación o validación interna de los métodos se lleva a cabo bajo las
siguientes modalidades:
 Validación interna
 Verificación
5.1.2 Las características de desempeño consideradas para métodos cuantitativos o

cualitativos debe realizarse de acuerdo al tipo de prueba teniendo las siguientes
categorías:
 Compendiados
 No compendiados
 Compendiados modificados
5.1.3 Las condiciones específicas para cada tipo de método de prueba y los criterios de
validez, están descritos en los propios métodos de prueba
5.1.4 Las características de desempeño consideradas en la verificación o en la validación
interna de métodos de prueba cuantitativos o cualitativos se citan a continuación:
 Linealidad del sistema

Revisión 3
 Linealidad del método
 Intervalo de trabajo
 Límite de detección
 Límite de cuantificación
 Recuperación
 Sesgo
 Repetibilidad
 Precisión intermedia
 Sensibilidad analítica
 Selectividad
 Robustez
 Incertidumbre (incluida como anexo en el informe de resultados), conforme
aplique.
5.1.5 La verificación o la validación interna se lleva a cabo con base al protocolo

establecido, el cual debe incluir las características de desempeño de acuerdo al
tipo de prueba para los diferentes métodos y los criterios de aceptación
predeterminados, cualquier desviación al protocolo debe ser documentada.
5.1.6 Cada protocolo deberá ser planteado considerando la naturaleza del método, la
complejidad de la matriz, la disponibilidad de material de referencia e insumos, así
como de los criterios de aceptación inherentes al método analítico y a la
disponibilidad del personal que lo ejecute a fin de alcanzar los criterios de
aceptación establecidos en este documento o aquellos que hayan sido planteados
con antelación durante la estandarización del método.
5.1.7 Los resultados de la verificación o la validación interna deben presentarse en un
informe. La información generada debe ser evaluada, analizada y comparada
contra los criterios de aceptación preestablecidos en el protocolo. De existir
cambios con respecto al protocolo, se debe justificar a detalle el motivo de dichos
cambios.
5.1.8 La conclusión del informe debe indicar si las características de desempeño fueron
acordes y por tanto el método puede utilizarse para el fin previsto.
5.1.9 Previo a la validación interna o verificación del método se deberá tener: método
documentado, instrumentos calibrados, equipos calificados, estándares de
referencia vigentes, analista calificado, reactivos y materiales de calidad
garantizada y muestras suficientes.

Revisión 3
5.2 Criterio No. 2.- Políticas específicas
5.2.1 Se excluyen del alcance de este documento:
 Aquellos métodos en los que únicamente se ha actualizado la edición o
referencia bibliográfica y que no han presentado cambios en el fundamento del
método analítico.
 Todos aquellos para los cuales exista una justificación técnica y de causa que
amerite su exclusión. Esta exclusión deberá ser técnicamente justificada,
documentada y autorizada.
5.2.2 Los métodos de prueba excluidos deben ser evaluados a través del cumplimiento
de los criterios de validez establecidos en el método de prueba respectivo y
asegurar su desempeño a través de medidas de control de calidad.
5.2.3 Para los métodos de prueba, cuando no sea posible técnicamente preparar
muestras adicionadas debido a la naturaleza o concentración del analito, la
verificación o validación interna del método se podrá realizar con pruebas de
repetibilidad y precisión intermedia en las muestras originales.
5.2.4 Se realiza una re-verificación o re-validación interna (actualización) de métodos de
prueba tomando en cuenta las siguientes consideraciones:
 Paso del tiempo (cada tres años, excepto si se demuestra que el método
cumple con lo establecido en el numeral 5.2.5).
 Cambios sustanciales en la naturaleza de la muestra o aplicación a otro tipo de
matriz.
 Sustitución o cambio del equipo que presente una diferencia estadísticamente
significativa que impacte directamente sobre el resultado o que no se cumplan los
requisitos metrológicos.
 Modificación de parámetros analíticos que impacten en el resultado (tiempo
de agitación, proceso de extracción, concentración, etc.).
 Uso de un método de prueba después de un tiempo sin uso (dos años).
Requiere al menos una demostración del desempeño (repetibilidad) antes de su
uso rutinario.
 Cambio de especificaciones del producto
En cualquiera de los casos debe realizarse un “Reporte de re-verificación o re-validación

interna” el cual debe contener como mínimo, la justificación de los cambios realizados, las
características de desempeño por aplicar, los resultados obtenidos y conclusiones que
confirmen la aplicabilidad del método. Con las firmas de elaboración, supervisión y
autorización correspondientes.

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Revisión 3
Toda la documentación generada debe ser anexada al informe de verificación o
validación interna inicial.
5.2.5 Se mantiene vigente la verificación o la validación interna del método de prueba a

través de la elaboración de registros de control de calidad interno como:
 Gráficos de control de la información obtenida de los análisis de muestras, que
dependiendo de los requerimientos de cada método será de promedios,
repetibilidad, o de intervalos, entre otros.
 El tipo de control seleccionado se podrá elaborar de muestras fortificadas con
el analito de interés, muestras control o controles internos propios del método,
estándares, de la pendiente en caso de curvas de calibración o los controles
internos especificados en el método de prueba, entre otros.
 Pruebas de desempeño del químico o los químicos analistas que ejecuten el
método.
 Resultados de participación de ensayos de aptitud.
5.2.6 Si el laboratorio modifica o mejora la metodología, incluyendo cambios del método

de preparación de las muestras más allá de los cambios menores permitidos por el
método original, se requiere realizar una nueva validación.
5.3 Criterio No. 3.-Clasificación de métodos
Se consideran métodos compendiados los publicados en:
 Normas Oficiales Mexicanas (NOM)

 Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos y sus suplementos
 Farmacopea de los Estados Unidos de América (USP)
 Farmacopea Internacional (IP)
 Farmacopea Británica (BP)
 Farmacopea Europea (EP)
 Farmacopea Japonesa (JP)
 Farmacopea China
 Normas Mexicanas (NMX)
 Association of Official Analytical Chemists (AOAC)
 Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater (SMWW)
 Environmental Protection Agency (EPA)
 Pesticide Analytical Manual (PAM)

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Revisión 3
 American Society for Testing Materials (ASTM)
 International Organization for Standarization (ISO)
 European Standards (EN)
 British Standards (BS)
 Food and Drug Administration (FDA)
 Food and Agriculture Organization (FAO)
 European Commission (CE)
 United States Department of Agriculture (USDA)
 Nordic Committee on Food Analysis (NKML)
 American Oil Chemists Society (AOCS)
 International Association for Cereal Science and Technology (ICC)
 International Dairy Federation (IDF)
 Standard Methods for the Examination of Dairy Products
 Bacteriological Analytical Manual (BAM)
Este listado es informativo más no limitativo por lo que podrán ser considerados otras
referencias que estén dentro del concepto.
5.4 Criterio No. 4.- Verificación de métodos de prueba
Se verifican:
 Los métodos compendiados, considerando la matriz o matrices sobre la cual se

debe aplicar el método de prueba.
 Los métodos compendiados que han sido ampliados o se les han hecho
modificaciones no significativas.
 Kit comerciales empleados en métodos analíticos que cuenten con la
validación analítica.
 Métodos alternativos validados y/o reconocidos y/o desarrollados por una
entidad especializada en el tipo de método.
5.5 Criterio No. 5.-Validación interna de métodos de prueba
Se deben validar internamente:
 Los métodos de prueba no compendiados, obtenidos de una nota técnica,

artículo científico, tesis, entre otros.

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Revisión 3
 Los métodos de prueba compendiados que han sido ampliados en su alcance
o modificados substancialmente (por ejemplo: cambio de un reactivo o insumo
crítico, fundamento técnico o método de prueba, etc.) que presenten diferencia
significativa.
5.6 Criterio No. 6.- Evaluación de las características de desempeño
5.6.1
Linealidad del sistema
 Aplica solo para métodos que emplean curva de calibración.
 Se realiza utilizando disoluciones del material de referencia sin componente de
la matriz
5.6.2
Linealidad del método
Se aplica para:
 Calibración de todo el proceso analítico: Incluye todos los pasos de la

preparación de la muestra, las disoluciones de calibración se preparan con una
matriz representativa. Es conveniente determinar si los componentes de la matriz
o los pasos de la preparación de la muestra cambian o no la pendiente y la
ordenada al origen en comparación con la calibración básica.
 Calibración interna: Se emplea material de referencia interno similar a las del
analito de interés para minimizar los posibles errores generados tanto en las
inyecciones como durante la medición por pérdidas durante pasos del tratamiento
previo a la muestra, por las diferencias en el volumen final del extracto y por
cambios en la recuperación causados por los efectos de matriz.
5.6.3
Intervalo de trabajo
 Aplica para métodos cuantitativos donde se ha realizado una fortificación de la
muestra a diferentes niveles de concentración del analito de interés.
 En métodos cualitativos se conoce como rango dinámico.

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Revisión 3
5.6.4
Límite de cuantificación (LC)
 Se aplica para métodos en determinaciones cuantitativas de trazas para
determinar cuáles son las cantidades mínimas del analito que se puede cuantificar.
 Una vez establecidos el LD y LC como en otras características de desempeño,
es necesario recalcularlos o establecer un intervalo de confianza siempre que se
presenten variaciones en el método que afecten el valor, o se cambie el equipo
empleado en el análisis.
 Es importante considerar el no confundir los términos de LC y LD con otro al
que normalmente se asocian como es la sensibilidad ya que, ésta es la capacidad
del método para discriminar pequeñas diferencias en concentración o masa del
analito. En este caso una alta sensibilidad del método no siempre supone límites
de cuantificación y detección inferiores, ya que lo que define estos límites es la
relación entre el ruido y la señal debida al analito por lo que es preferible un
sistema con bajo ruido de fondo a costa de una menor sensibilidad.
5.6.5
Límite de detección (LD)
 Se determina a partir del análisis de una muestra con concentraciones

conocidas y decrecientes estableciéndose visualmente (métodos cualitativos) o
numéricamente (cuantitativos) la concentración mínima detectable pero no
necesariamente repetible.
 El LD es aplicable sobre todo a métodos no instrumentales donde no es posible
obtener una respuesta numérica por lo que es considerado como una
característica de desempeño cualitativa.
 En caso de conocer el valor teórico el ensayo consistirá solo en la confirmación
del mismo. En verificación de métodos de prueba microbiológicos se conoce como
estimación del límite de detección o como límite de detección relativo

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Revisión 3
5.6.6
Recuperación y sesgo
 Aplica para verificaciones o validaciones internas donde se ha realizado

fortificación a muestras.
 El intervalo de confianza del porciento de recuperación debe incluir el valor de
100 % para establecer que el método no presenta sesgo.
 Deberá tomarse en consideración que si se encuentra sesgo significativo en los
resultados del análisis de la linealidad, es probable que también ocurra en los
resultados de la recuperación de una muestra fortificada. En este caso la
implicación será una causa de sesgo de la muestra real, y esto dará generalmente
una interferencia proporcional a la concentración del mensurando.
5.6.7
Repetibilidad y precisión intermedia
 Si no se cuenta con un segundo analista para la evaluación de la precisión

intermedia, se debe realizar la prueba en días diferentes.
5.6.8
Sensibilidad analítica
 En un método analítico sensible, ligeros incrementos de concentración,

coincidirán con aumentos notables en la señal o respuesta
 Aplica para métodos cuantitativos que impliquen curva de calibración.
 Aplica para métodos microbiológicos
 Para kits comerciales (relacionada con el valor superior de la Zona 2 región de
error). Para detectar muestras positivas cuando realmente son positivas.
5.6.9
Selectividad (especificidad para métodos microbiológicos)
 Aplica para métodos fisicoquímicos cualitativos de pruebas límite y

fisicoquímicos compendiados.
 Aplica para validación interna de métodos fisicoquímicos de contenido y trazas.
 Aplica para métodos cualitativos no compendiados.

15
Revisión 3
 En métodos de microbiología se conoce como pruebas de inclusividad y
exclusividad.
 Para kits comerciales (relacionada con el valor inferior de la Zona 2 región de
error). Para detectar muestras negativas cuando realmente son negativas.
5.6.10
Robustez
 Consiste en identificar los factores que pueden tener un efecto significativo en

el desempeño del método, como por ejemplo: peso de muestra, volumen de
solvente, tipo de solvente, diferentes columnas, medios de cultivo, tiempo de
extracción, tipo de agitación, temperatura de incubación, variaciones de pH, entre
otros.
 Aplica para métodos cuantitativos.
5.6.11
Incertidumbre
 La incertidumbre es un parámetro asociado al resultado de una medida, que

caracteriza la dispersión de los valores que pudiera ser atribuida razonablemente al
analito.
 De acuerdo a lo establecido NMX-EC-17025-IMNC-2018 numeral 7.6 “Evaluación
de la incertidumbre” se deben tomar en consideración lo siguiente:
“Un laboratorio que realiza ensayos debe evaluar la incertidumbre de medición.
Cuando el método de ensayo no permite una evaluación rigurosa de la
incertidumbre de medición, se debe realizar una estimación basada en la
comprensión de los principios teóricos o la experiencia práctica de la realización
del método”.
 En el caso de presentarse esta situación y debido a que no puedan ser
evaluadas las incertidumbres a partir de una distribución estadística de los
resultados de una serie de mediciones, se deberán declarar las fuentes de
incertidumbre e incluirse como anexo al informe de verificación o validación
interna del método de prueba.
5.7 Criterio No. 7.- Protocolo de verificación o validación interna de métodos de

prueba

16
Revisión 3
Los protocolos generados deben cumplir con los siguientes rubros:
Rubro Descripción
 Debe expresar el método, tipo de muestra que aplica, el

analito o las características que deben ser determinadas y el
principio de la determinación.
Título
 Cumplir preferentemente el siguiente formato:
Determinación de A {analito o mesurando} en presencia de

B {interferencia si aplica} en C {matriz} usando D {método}.
 Debe indicar la característica de desempeño que se

debe aplicar durante la validación interna o verificación del
método de prueba del que se trate, las cuales esta referidas
en el inciso 5.1.4 de este documento:
 Linealidad del sistema

 Linealidad del método
 Intervalo de trabajo
 Límite de detección
 Límite de cuantificación
Objetivo  Recuperación
 Sesgo
 Repetibilidad
 Precisión intermedia
 Sensibilidad analítica
 Selectividad
 Robustez
 Incertidumbre de medida
 El principio de la medición (Cromatografía de gases o

Líquidos, Absorción Atómica, UV, etc.)
Debe ser la manera rápida y resumida que permita delimitar la

Alcance o campo
aplicabilidad y las limitaciones del estudio, el cual incluye algunas
de aplicación de las siguientes consideraciones:
 Una descripción del problema subyacente (por qué la

17
Revisión 3
validación es necesaria).
 El analito (s) o el mesurando (s) el cual debe ser

determinado.
 La forma en la cual debe ser determinado.
 La matriz en la cual el analito debe ser determinado.
 El intervalo de trabajo (intervalo de medición) sobre el

cual el método de prueba puede ser realizado (cuando
aplique)
 Conocimiento de las interferencias que prevén o limitan

el uso del método.
 Nombre y clave del método.
 Describir los pasos esenciales del método de prueba

mediante un diagrama de flujo.
Método de
ensayo  En caso de fortificación de muestras indicar el punto del
método de prueba donde se debe llevar a cabo.
 Indicar si el método de prueba consta de varios pasos y

se puede citar la referencia del mismo.
 Elaborar una lista de los materiales críticos si los hubiese

o referirlos como contenidos en el método de prueba.
Considerar las características propias de cada material
como por ejemplo guantes libres de polvo, puntas con filtro,
etc.
Materiales
 Elaborar una tabla con material volumétrico que
indique la fecha de verificación y los valores obtenidos
 Considerar los registros pertinentes para la

rastreabilidad de los datos.
 Elaborar una tabla con todos los reactivos requeridos

Reactivos
para el método de prueba, con sus características esenciales

18
Revisión 3
(por ejemplo: concentración, densidad, grado, número de
referencia CAS, lote, marca, caducidad, pureza, material de
referencia, condiciones de almacenamiento).
 En el caso de reactivos, incluir si se requiere la

preparación de soluciones necesarias para la ejecución del
método de prueba o en caso contrario indicar que las
soluciones se encuentran referidas en el método
correspondiente.
 Incluir la preparación y cálculos de disoluciones críticas

como disoluciones patrón para la fortificación e incluir
cálculos y niveles de fortificación cuando aplique.
 Incluir la preparación de estándares y controles positivos

y negativos así como controles internos.

Equipos e  Elaborar una tabla que indique el nombre del equipo,

instrumentos condiciones de operación, clave de identificación, modelo,
fecha de calibración, calificación o verificación.
 Describir detalladamente la muestra incluyendo

presentación, condiciones generales almacenamiento,
acondicionamiento / pre-tratamiento, lote, fabricante,
marca, presentación, número de unidades o cantidades
necesarias para las pruebas, fecha de caducidad, etc.
Muestra o matriz
 Para la fortificación de muestras (cuando aplique),
detallar perfectamente los cálculos necesarios para este fin,
así como para el uso de estándares internos o el uso de
controles positivos y negativos.
 Describir detalladamente las actividades que se deben

llevar a cabo en cada característica de desempeño,
Desarrollo
especificando los cálculos estadísticos, así como los gráficos
experimental
correspondientes.
 Especificar que las características de desempeño debe

19
Revisión 3
cumplir con los criterios de validez de los métodos de
prueba además de lo siguiente cuando aplique:
 Blancos de prueba (condiciones y limitaciones)
 Pruebas preliminares o pruebas de comprobación (por
ejemplo para verificar el desempeño del instrumento de
medición)
 Número de mediciones o pruebas (por ejemplo:
duplicados, sextuplicados, etc.) y la descripción detallada
en cada prueba de desempeño indicando a su vez la
inclusión de el o los químicos analistas involucrados.
 Describir como se deben realizar los cálculos
matemáticos que incluyen la información acerca de las
unidades en las cuales el resultado debe ser expresados.
La ecuación empleada para los cálculos, el significado
de los símbolos algebraicos citados en la ecuación así
como el número de decimales considerados en los
resultados.
 Registrar los cálculos adicionales como por ejemplo
para la fortificación de la muestra en el caso de la
prueba de desempeño de recobro o las diluciones para
el límite de detección en los métodos de prueba
cualitativos.
 Describir detalladamente los cálculos adicionales como
los empleados para la fortificación de la muestra en el
caso de la prueba de desempeño de recobro.
 Describir las pruebas estadísticas tanto de tendencia
central como de inferencia estadística que soporten la
validación interna o verificación del método.
 Se deben incluir los formatos de los resultados, tal y

como se obtendrán de cada característica de desempeño
(tablas, gráficos, hojas de trabajo, imágenes etc.), así como
las tablas finales donde se concentra un resumen de los
resultados obtenidos.
 Establecer para cada característica de desempeño la
Resultados herramienta estadística a utilizar para su evaluación como:
promedio, desviación estándar, desviación estándar relativa,
índice de regresión o distribución, entre otros, para pruebas
cuantitativas y semi cuantitativas. Utilizar proporciones o
porcentajes para métodos cualitativos.
 Describir las pruebas estadísticas tanto de tendencia
central como de inferencia estadística que soporten la

20
Revisión 3
validación interna o verificación del método.
 Indicar en forma de tabla iniciando con el nombre de la

Criterios de característica de desempeño, enseguida el criterio de
aceptación aceptación y finalmente la fuente bibliográfica.
 Citar los criterios de validez del ensayo especificados en

la normativa correspondiente para cada método de prueba
Medidas de
donde se especifique de acuerdo a los resultados los
control de calidad
criterios de aceptación o rechazo.
 Si se consideran necesarias referencias informativas,

éstas se pueden citar en el punto del texto en el cual se
refieren a ellas o, si hay varias, en una bibliografía al final del
documento.
Bibliografía
 Citar la fuente bibliográfica de los criterios de
aceptación, de la guía de evaluación o documentos afines
consultados.
 Cualquier cambio con respecto al protocolo planteado o

Control de
alcance deberá ser documentado.
cambios
5.8 Criterio No. 8.-Informe de verificación o validación interna de métodos de prueba
Los informes generados deben cumplir con los rubros establecidos en el protocolo
previamente elaborado para cada verificación o validación interna de métodos.
Rubro Descripción
 Debe expresar el método, tipo de muestra que aplica, el

analito o las características que deben ser determinadas y el
principio de la determinación.
Título
 Cumplir preferentemente el siguiente formato:
Determinación de A {analito o mesurando} en presencia de

B {interferencia si aplica} en C {matriz} usando D {método}.

21
Revisión 3
 Debe indicar las pruebas de desempeño que se
Objetivo aplicaron durante la validación, verificación o confirmación
del método de prueba.
Alcance o campo
 Debe ser la expresión resumida que permita delimitar la
de aplicación aplicabilidad y las limitaciones del estudio.
 Lista de documentos necesarios para la aplicación del
método de prueba, tales como: bitácoras, registros,
Referencias
instructivo de equipos, lavado de material, hojas de trabajo,
etc.
 Delinear los pasos esenciales del método de prueba

mediante un diagrama de flujo.
 En caso de fortificación de muestras indicar el punto del
Método de ensayo
método de prueba donde se llevó a cabo.
 Si el método de prueba consta de varios pasos, puede
citarse la referencia del mismo.
 Elaborar una lista de los materiales utilizados

considerados como críticos si los hubiese o referirlos como
contenidos en el método de prueba. Considerar las
características propias de cada material como por ejemplo
Materiales guantes libres de polvo, puntas con filtro, etc.
 Elaborar una tabla con material volumétrico utilizado
que indique la fecha de verificación y los valores obtenidos
 Incluir los registros pertinentes para la rastreabilidad de
los datos.
 Elaborar una tabla que indique el nombre de los

reactivos utilizados, con sus características esenciales (por
ejemplo: concentración, densidad, grado, número de
referencia CAS, lote, marca, caducidad, pureza, material de
referencia, condiciones de almacenamiento).
Reactivos  Incluir la preparación y cálculos de disoluciones críticas
como es disoluciones patrón para la fortificación e incluir
cálculos y niveles de fortificación cuando aplique.
 Incluir el registro del uso de estándares internos o el uso
de controles positivos, negativos.
 Incluir los registros pertinentes para la rastreabilidad de
los datos.

22
Revisión 3
 Elaborar una tabla de los equipos o instrumentos
Equipos e utilizados que indique el nombre, modelo, identificación
instrumentos (ID), condiciones de operación así como la fecha de
calibración, calificación o verificación.
 Describir detalladamente la muestra utilizada en el

estudio incluyendo presentación, condiciones generales de
almacenamiento, acondicionamiento/pre-tratamiento, lote,
caducidad, fabricante, marca, presentación, número de
Muestra o matriz unidades o cantidades empleadas para las pruebas,
registros, etc.
 Para la fortificación de muestras (cuando aplique),
detallar perfectamente los cálculos realizados para ese fin,
así como para el uso de estándares internos o el uso de
controles positivos y negativos.
 Describir detalladamente las actividades que se llevaron
Desarrollo
a cabo en cada característica de desempeño de acuerdo a lo
experimental establecido previamente en el protocolo.
 Se deben incluir los resultados obtenidos, tal y como se

obtienen de cada método de prueba de desempeño (tablas,
Resultados gráficos, hojas de trabajo, imágenes, etc.).
 Incluir el tratamiento estadístico de los datos obtenidos

Análisis de que permita conocer de manera inequívoca el resultado de
resultados la verificación o validación interna de método a través de la
interpretación de la hipótesis planteada.
 Indicar en forma de tabla iniciando con el nombre de la

Criterios de característica de desempeño, el criterio de aceptación, los
aceptación resultados obtenidos y el cumplimiento/no cumplimiento
del criterio establecido.
 Deben analizarse los resultados obtenidos de manera

resumida de cada característica de desempeño, con la
Discusión
finalidad de comprobar si se cumplen los criterios de
validez, o de lo contrario, la justificación del porqué de las
desviaciones encontradas.

23
Revisión 3
 Concluir si el método de prueba verificado o validado
internamente es apto para el fin al que fue diseñado y por
Conclusión tanto puede ser utilizado.
 Incluir control de cambios o desviaciones al protocolo
cuando aplique.
 Si se consideran necesarias referencias informativas,

éstas se pueden citar en el punto del texto en el cual se
refieren a ellas o, si hay varias, en una bibliografía al final del
Bibliografía documento.
 Citar la fuente bibliográfica de los criterios de
aceptación, de la guía de evaluación o documentos afines
consultados.
Control de
 Cualquier cambio con respecto al protocolo planteado o
cambios alcance deberá ser documentado.
 Se deben incluir hojas de cálculo, copias de certificados
de reactivos y materiales, certificados de equipos e
Anexos instrumentos, bitácoras electrónicas etc., es decir, todos los
documentos necesarios para la trazabilidad del estudio
realizado.
5.9 Criterio No. 9.- Aseguramiento de la calidad de la verificación o validación

interna de métodos
5.9.1 Documentación de los resultados:
 Todos los datos primarios serán trazables y auditables a la documentación

referida en el informe de verificación o validación interna.
 El no cumplimiento de los criterios establecidos para una característica de
desempeño no necesariamente invalidará el uso del método en cuestión. En tal
caso, el método debe ser definido para ser utilizado para cierto tipo de muestras o
en su caso establecer el criterio de aceptación obtenido durante la verificación o
validación interna bajo las condiciones propias del laboratorio, siempre y cuando
no impacten en la confiabilidad de los resultados durante su aplicación rutinaria.
Esto debe ser documentado y técnicamente justificado junto con un análisis de las

24
Revisión 3
causas que originaron tal desviación y un análisis de riesgo. Esto deberá ser
revisado y autorizado.
5.9.2 Durante la aplicación rutinaria de los métodos verificados o validados
internamente se debe incluir controles internos para mantener su vigencia como:
 Muestras control (ejemplo: material de referencia, disoluciones de referencia,

blancos de muestra positivas y negativas y de muestras adicionadas, según
corresponda)
 Blanco de reactivos.
 Cartas o gráficos de control (ejemplo: de medias, repetibilidad, material de
referencia, % recuperación, pendiente, intervalos, diferencias, muestras control,
etc.), u otras herramientas estadísticas que permitan mantener bajo control los
métodos analíticos.
 Realizar evaluaciones de desempeño de analistas que aplican el método.
 Ensayos de aptitud.
5.9.3 Para todos los métodos que apliquen controles internos, deberán incluir los
resultados en el informe de verificación o validación interna del método y declarar
el cumplimiento de los mismos.
5.9.4 Citar los criterios de validez del ensayo especificados en la normativa
correspondiente para cada método de prueba.
5.9.5 Pueden presentarse casos especiales, donde sea necesaria cualquier modificación
al método de prueba por la presencia o ausencia de componentes específicos del
producto a analizar y deben estar referidas en el alcance.
5.9.6 Para demostrar que la verificación o validación interna del método continua
vigente, se deberá revisar el cumplimiento a 5.2.5.
6. DOCUMENTOS DE REFERENCIA.
Documentos Clave
Documento Técnico de estimación de la incertidumbre de la
6.1 No aplica
medición (conforme al documento CCAYAC-CR-19)
7. BIBLIOGRAFÍA.
Documentos
7.1 AOAC (2013) Appendix K: Guidelines for Dietary Supplements and Botanicals. Part

25
Revisión 3
Documentos
I. Guidelines for Single Laboratory Validation of Chemical Methods for Dietary
Supplements and Botanicals
http://www.eoma.aoac.org/app_k.pdf
Colegio Nacional de Químicos Farmacéuticos Biólogos de México, A.C (2001) Guía

7.2
de validación de métodos analíticos
Codex Alimentarius Commission (2023). Procedure Manual. Twenty eight edition
7.3 https://www.fao.org/3/cc5042en/cc5042en.pdf
Directiva 2002/657/CE. Funcionamiento de los Métodos Analíticos y la

Interpretación de los Resultados. Diario Oficial de las Comunidades Europeas
7.4 https://eur-lex.europa.eu/legal-
content/ES/TXT/PDF/?uri=CELEX:32002D0657&from=ES
Entidad Mexicana de Acreditación (2018). Manual de Procedimientos. Criterios de

Aplicación de la Norma ISO/IEC-17025 (vigente). MP-FE005-13.
7.5 http://consultaema.mx:75/pqtinformativo/GENERAL/PMR/11_MP-
FE005_Criterios_EC-17025.pdf
Eurachem (2016). La Adecuación al Uso de los Métodos Analíticos. Una Guía de

Laboratorio para Validación de Métodos y Temas Relacionados. Primera Edición
7.6 Española.
https://www.eurachem.org/images/stories/Guides/pdf/MV_guide_2nd_ed_ES.pdf
European Commission. Guidance document on analytical quality control and

validation procedures for pesticide residues analysis in food and feed.
SANTE/11813/2017.
7.7
https://ec.europa.eu/food/sites/food/files/plant/docs/pesticides_mrl_guidelines_wr
kdoc_2017-11813.pdf
Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos (2021) Volumen I Apéndice III.

7.8 Validación de métodos analíticos. Recomendaciones para su presentación ante
la FEUM. Edición 13.0
FDA (2015). Guidelines for the validation of analytical methods for the detection of
7.9
microbiological pathogens in food and feeds. 2da. Edition
FDA-OFVM-3 (2014) Methods development, validation and implementation
7.10
program.
Feldsine Philip, Abeyta Carlos, Wallace H. Andrews. (2002) AOAC. International
7.11 Methods Committee. Guidelines for Validation of Qualitative and Quantitative
Food Microbiological. Official Methods of Analysis.

26
Revisión 3
Documentos
Food  Drug Administration (2015). Guidelines for the Validation of Chemical
7.12
Methods for the FDA FVM Program. Second edition
7.13 García Pérez A. (1978). Elementos de método estadístico. 7° Ed. UNAM. México.
Instituto de Salud Pública de Chile (2010). Validación de métodos y determinación
7.14 de la incertidumbre de la medición: “Aspectos generales sobre la validación de
métodos”.
International Conference on Harmonization Q2R1 (1996). Validation of analytical
procedures: Text and Methodology.
7.15
https://database.ich.org/sites/default/files/Q2%28R1%29%20Guideline.pdf
ISO 16140:2003 (E). Microbiology of food and animal teeding stuffs- Protocol for the
7.16
validation of alternative methods. First Edition
ISO 17994:2004 Water Quality – Criteria for establishing equivalence between
7.17
microbiological methods. First edition.
ISO/TR 13843:2000 – Water Quality – Guidance on validation of microbiological
7.18
methods. First Edition
Miller N. James and Miller C. Jane (2010). Statistics and Chemometrics for
7.19
Analytical Chemistry. Sixth Edition.
7.20 NMKL (2009). Validación de métodos de análisis químicos. Procedimiento No. 4
NMX-EC-17025-IMNC-2018. Requisitos generales para la competencia de los
7.21
laboratorios de ensayo y calibración
Guía CG 4 EURACHEM / CITAC (2012) Cuantificación de la Incertidumbre en
7.22 Medidas Analíticas. Tercera Edición Inglesa Primera Edición Española.
EuroLab.
Organización de las Naciones Unidas para la Agricultura y la Alimentación (FAO)
2005. Proyecto TCP/RLA/3013 (A). “Desarrollo de un sistema integral de
7.23 aseguramiento de calidad para laboratorios de análisis de alimentos en América
del Sur”. Taller subregional sobre aseguramiento de calidad y validación de
metodología para análisis químicos
Thompson M., Ellison L.R. and Wood R. (2002). Harmonized Guidelines for Single
Laboratory Validation of Methods of Analysis (IUPAC Technical Report). Appl.
7.24 Chem., Vol. 74, No.5, pp. 835-855.
http://www.nifdc.org.cn/directory/web/WS02/images/SVVQQUMgbWV0aG9kIHZh
bGlkYXRpb24ucGRm.pdf
Toccheto S. Dulce (2007) Curso teórico práctico. Validación de métodos
7.25 microbiológicos bajo un sistema de aseguramiento de la calidad. Santa Cruz de
la Sierra Bolivia. Proyecto TCC/ Bolivia-México.
7.26 USP 46, <1223> Validation of alternative microbiological methods.
7.27 USP 46, <1225> Validation of compendial procedures
7.28 USP 46, <1226> Verification of compendial procedures

27
Revisión 3
Documentos
USP 46, <1227> Validation of microbiological recovery from pharmacopeical
7.29
articles
8. ANEXOS
Planificación de Verificación/Validación Interna de métodos analíticos
Definición del método a validar

Cualitativo o cuantitativo-analito-matriz-concentración-producto
Tipo de método
SI NO
Se trata de un método compendiado
Compendiado Compendiado No compendiado

modificado Nuevo o desarrollado por el laboratorio
NO
¿Tiene alguna modificación
significativa?
SI
Verificación Validación
interna
Establecer características de desempeño a evaluar / PROTOCOLO
Establecer pruebas experimentales
Establecer criterios de aceptación
Resultados
vs Desarrollar pruebas experimentales
Criterios
Evaluar resultados
Calzada de Tlalpan 4492, Col. Toriello Guerra, INFORME www.gob.mx/cofepris,

28
Revisión del informe
Revisión 3
Documento Técnico de Verificación o Validación Interna
de métodos fisicoquímicos para agua, alimentos y otros
productos
(Conforme al Anexo 5.2 del documento CCAYAC-MA-08).

29
Revisión 3
Documento Técnico de Verificación o Validación Interna de métodos fisicoquímicos
para agua, alimentos y otros productos
1. OBJETIVO
Establecer las directrices para realizar la verificación o validación interna de los métodos
analíticos fisicoquímicos por medio de la aplicación de las características de desempeño y
su evaluación frente a los criterios de aceptación previamente establecidos, a fin de
demostrar que es apropiado para el uso previsto
2. ALCANCE
Aplica a los siguientes productos y métodos de prueba
Tipo de método de prueba Productos

I. Contenido
Agua, alimentos, juguetes, cerámica vidriada, loza
II. Trazas
vidriada, bebidas no alcohólicas y bebidas no alcohólicas
III. Límite
entre otros
IV. Físicas
3. DEFINICIONES
Las establecidas en los criterios generales para la verificación o validación interna

de métodos
4. RESPONSABILIDADES
5. CRITERIOS
5.1.1 Se excluyen del alcance de este documento los métodos de prueba
compendiados para materia extraña, debido a que no permiten la posibilidad de

30
Revisión 3
realizar adiciones a las matrices sin alterar la naturaleza de la muestra con la
finalidad de poder llevar a cabo una verificación.
5.1.2 Toda la documentación generada debe ser anexada al informe de verificación o
validación interna inicial.
5.2 Criterio No. 2.-Clasificación de métodos
Los métodos fisicoquímicos para propósitos de verificación o validación interna se

clasifican como:
Categoría Tipo de prueba Tipo de Prueba / Analito (ejemplo)

Aditivos
Cuantificación del Nutrientes (Vitaminas y minerales)
I analito Yodo de yodato
Yodo de yoduro
Metales pesados
Residuos orgánicos
Micotoxinas
Toxinas marinas
Plaguicidas
II Trazas Inorgánicos no metálicos (sulfatos,
nitritos, nitratos, fluoruros, cloruros, etc.)
Sustancias activas al azul de metileno.
Aldehídos, alcoholes superiores, metanol
y furfural
BTEX
Formaldehído
Presencia del analito a Sales cuaternarias
III
un límite (prueba límite) Oxidantes
Derivados clorados
Grado alcohólico
Color
Turbiedad
IV Física cuantitativa
Conductividad
Gravimétricos (humedad, sólidos
disueltos totales, etc.

31
Revisión 3
Las características de desempeño (dependiendo del tipo de prueba) para la verificación

de métodos compendiados son:
Categoría
Característica de
I II III IV
desempeño
Contenido Trazas Límite Física
Linealidad del sistema SI SI NO NO
Linealidad del método SI SI NO NO
Intervalo de trabajo SI SI NO NO
Límite de cuantificación NO SI NO NO
Límite de detección NO NO* SI NO
Recuperación SI SI NO NO
Sesgo SI SI NO NO
Repetibilidad SI SI NO SI
Precisión intermedia SI SI NO SI
Selectividad NO NO SI NO
Incertidumbre SI SI NO SI
* Se podrá evaluar el límite de detección cuando el método así lo quiera
5.4 Criterio No. 4.-Validación interna de métodos de prueba
Las características de desempeño (dependiendo del tipo de prueba) para la validación

interna de métodos no compendiados son:
Categoría
Característica de
I II III IV
desempeño
Contenido Trazas Límite Física
Linealidad del sistema SI* SI* NO NO
Linealidad del método SI SI NO NO
Intervalo de trabajo SI SI NO NO
Límite de cuantificación NO SI NO NO
Límite de detección NO NO SI NO
Recuperación SI SI NO NO
Sesgo SI SI NO NO
Repetibilidad SI SI NO SI
Precisión intermedia SI SI NO SI

32
Revisión 3
Sensibilidad analítica SI SI NO NO
Selectividad SI SI SI NO
Robustez SI SI NO SI
Incertidumbre SI SI NO SI
*Solo para aquellos métodos que emplean curva de calibración
5.5 Criterio No. 5.-Selección de la matriz
Característica de la matriz
a) Usar la matriz más representativa que puede ser la más compleja o la que se
recibe con mayor frecuencia.
b) Para métodos de multiresiduos como contaminantes orgánicos, plaguicidas, etc. y
que apliquen a diferentes matrices, seleccionar una matriz representativa por
grupo de producto.
c) Para multiresiduos si se consideran más de 20 analitos, elegir un número de
analitos representativos con base en la probabilidad de detectarlos como residuos
en las muestras y a sus propiedades fisicoquímicas, por ejemplo los que den la
respuesta menos sensible
5.6 Criterio No. 6.- Preparación de la muestra
Preparación de la muestra
a) Preparar blancos de muestra o muestras en una cantidad equivalente a la
indicada por el método.
b) Cuando no se dispone de un blanco de muestra, determinar el contenido
promedio del analito en una muestra comercial analizada como mínimo 6
veces. Preparar estas muestras utilizando una cantidad equivalente a la mitad
de la muestra original establecida por el método y adicionar diferentes niveles
de concentración de estándar hasta obtener la concentración deseada.
c) Cuando no sea posible adicionar de manera directa el analito a la muestra, la
adición puede ser llevada a cabo en alguna etapa del método, de preferencia en
las primeras etapas.
d) Los blancos de muestras o muestras adicionadas deben ser preparados por un
mismo analista.
e) Para la evaluación de las pruebas físicas cuantitativas no se utilizan muestras
adicionadas, estas se utilizan con el contenido original de analito (muestras
reales).
5.7 Criterio No. 8.- Evaluación de las características de desempeño

33
Revisión 3
5.7.1
Linealidad del sistema
Característica
Condiciones Cálculos
metrológica
a)
Graficar los valores de
a) Aplica solo para
respuesta analítica obtenida
métodos que
(eje y) en función de cada uno
emplean curva de
de los valores de
calibración.
concentración (eje x). Verificar
b) Se realiza
de manera visual la existencia
utilizando
de linealidad de los datos.
disoluciones del
b) Mediante análisis de
material de
regresión calcular la pendiente
referencia (sin
(m), la ordenada al origen (b) y
componente de la
los intervalos de confianza de
Linealidad del matriz).
la pendiente y ordenada al
sistema c) Preparar de
origen.
forma
c) Calcular para cada nivel de
independiente, tres
concentración, los valores
curvas de
residuales y obtener el gráfico.
calibración con un
d) Verificar la dispersión de
mínimo de 5 niveles
los datos.
diferentes de
e) Calcular el valor estadístico
concentración del
de t de las tres curvas de
analito de interés
calibración considerando el
coeficiente de correlación y el
de determinación.
Criterio de aceptación para linealidad del sistema
Prueba Criterio de aceptación
Verificación visual de comportamiento
Gráfico de linealidad lineal en el gráfico de respuesta analítica en
función de la concentración
Distribución aleatoria de los puntos
Gráfico de residuales
alrededor de la recta
≥ 0.997 para análisis individuales
Coeficiente de correlación (r)
≥ 0.995 para análisis multiresiduos
Coeficiente de determinación(r2)
Valor estadístico de t de la linealidad t cal > t tab
*Intervalo de confianza del intercepto Debe incluir el valor del 0

34
Revisión 3
5.7.2
Característica
metrológica
a) Preparar por triplicado a) Graficar los valores de

y de forma independiente, respuesta analítica obtenida (eje
blancos de muestra o y) en función de cada uno de los
muestras adicionadas con 5 valores de concentración añadida
niveles diferentes de (eje x). Verificar de manera visual
concentración del analito la existencia de linealidad de los
de interés. Para establecer datos.
el intervalo de
concentraciones apropiado,
considerar alguna de las b) Calcular la pendiente (m) y la
siguientes opciones ordenada al origen (b) y con estos
dependiendo de la datos determinar el valor de la
metodología: respuesta analítica ajustada (y´)
para cada valor de concentración,
empleando la siguiente ecuación:
 El valor de la especificación
Linealidad del
(en la medida de lo posible y´ = mx + b
método
como nivel medio de dicho
intervalo) c) Calcular para cada nivel de
 El intervalo de la curva de concentración, los valores
calibración, aun cuando los residuales y obtener el gráfico.
niveles de concentración no
coincidan con las
concentraciones puntuales. d) Verificar la dispersión de los
datos.
b) Analizar las muestras
preparadas aplicando el
método de ensayo e) Reportar el intervalo lineal
específico bajo las mismas obtenido considerando las
condiciones y determinar la unidades de concentración
respuesta analítica para establecidas por el método.
cada nivel de
concentración añadido.

35
Revisión 3
Criterio de aceptación de la linealidad del método
Verificación visual de comportamiento lineal en el
Gráfico de linealidad gráfico de respuesta analítica en función de la
concentración.
Distribución aleatoria de los puntos alrededor de la
recta
5.7.3
Característica
metrológica
a) Obtener el % de
recuperación aplicando la
siguiente fórmula:
a) Con los datos de
respuesta analítica Cf
% Re cobro  *100
obtenidos en la prueba Ca
de linealidad del Dónde:
método, calcular la
cantidad del analito para Cf = Concentración recuperada en el
cada uno de los niveles blanco de muestra o muestra
añadidos. adicionadas.
b) Verificar que todos Ca= Concentración adicionada al
los niveles de blanco de muestra o muestra
concentración cumplan
Intervalo de con los criterios de b) Calcular para cada nivel de
trabajo aceptación establecidos concentración, el promedio, la
para recuperación y desviación estándar, la
repetibilidad. desviación estándar relativa de
c) Reportar el intervalo cada uno de los valores de
de trabajo obtenido recuperación.
considerando las c) Graficar los datos de
unidades de concentración recuperada (eje
concentración y) en función de la
establecidas por el concentración adicionada (eje
método. x).
d) Calcular el coeficiente de
correlación o el coeficiente de

36
Revisión 3
Característica
metrológica
determinación y el intervalo
de confianza de la pendiente.
Criterio de aceptación para intervalo de trabajo

Coeficiente de correlación
Intervalo de confianza de la
Debe incluir el valor de la unidad
pendiente
5.7.4
Límite de cuantificación (LC)
Característica
metrológica
Reportar en las unidades de Considerar como límite de
Límite de
concentración establecidas cuantificación práctico (LCP) el nivel
cuantificación
en el método inferior del intervalo de trabajo.
Criterio de aceptación para límite de cuantificación

El límite de cuantificación debe ser menor al valor de la especificación.
5.7.5
Límite de detección (LD)
Característica
metrológica
Preparar 10 réplicas
independientes de muestras
Establecer como límite de detección
Límite de adicionadas a 5 diferentes
la concentración mínima en la cual
detección niveles de concentración por
los 10 resultados son positivos.
debajo de la concentración
de la solución estándar
indicada en el método

37
Revisión 3
Criterio de aceptación para límite de detección
El límite de detección debe ser menor al valor de la especificación
5.7.6
Característica
metrológica
Con los datos de Reportar el intervalo de % de
recuperación obtenidos recuperación obtenido de
en la determinación del acuerdo a la siguiente fórmula:
intervalo de trabajo,
Recuperación
determinar el intervalo
de confianza del % de
recuperación.
Criterio de aceptación de % de recuperación,
Considerar el intervalo establecido en la referencia original del método o utilizar como

guía la siguiente tabla:
Concentración Unidades Recuperación (%)

100% 100 g/100 g o mL 98-102
10% 10 g /100 g o mL 95-102
1% 1 g /100 g o mL 92-105
0.10% 1 mg/g o mL 90-108
100 ppm 100 mg/kg o L 85-110
10 ppm 10 mg/kg o L 80-115
1 ppm 1 mg/g o L 75-120
100 ppb 100 µg/kg o L 75-120
10 ppb 10 µg/kg o L 60-120
1 ppb 1 µg/kg o L 40-120

38
Revisión 3
Característica
Condiciones
metrológica
a) Deberá tomarse en consideración que si se encuentra
sesgo significativo en los resultados del análisis de la
linealidad, es probable que también ocurra en los
resultados de la recuperación de una muestra fortificada.
Sesgo b) En este caso la implicación será una causa de sesgo de
la muestra real y esto dará generalmente una
interferencia proporcional a la concentración del
mensurando. En tal caso deberá declararse la razón por la
cual no pudiera estar incluido el 100%.
Criterio de aceptación para Sesgo

El intervalo de confianza del % de recuperación debe
incluir el valor de 100 % para establecer que el método
Sesgo
no presenta sesgo.
5.7.7
Característica
metrológica
a) Verificar la homogeneidad
a) Preparar por un solo de varianzas mediante la
analista (analista 1) nueve prueba de Cochran.
muestras adicionadas a la b) Efectuar el análisis de
concentración equivalente ANOVA de un factor y
del nivel medio del intervalo verificar la significancia
de trabajo obtenido. estadística o realizar
Repetibilidad
b) Analista 1: Utilizar los tres algunas otras inferencias
y
resultados de concentración estadísticas basadas en la
precisión
obtenidos en la prueba de naturaleza de cada
intermedia
intervalo de trabajo para el método y previamente
nivel medio, como los datos establecidas en el
para el analista 1 en el día 1. protocolo de acuerdo a los
Analizar tres muestras supuestos hipotéticos
adicionadas en el día 2. planteados.
c) Calcular la media de los
Analista 2: Analizar tres

39
Revisión 3
Característica
metrológica
muestras en el día 1 y tres todos los datos y la
muestras en el día 2.
desviación estándar de la
c) Obtener la concentración repetibilidad (sr)
de las muestras o el
porciento de recuperación. s r  MSd
d) Para evaluar las pruebas
físicas utilizar una muestra Dónde:
con el contenido original del
analito. MSd = cuadrado medio dentro
e) En caso de que la del grupo
metodología la realice un
solo analista, efectuar la La contribución a la variación
prueba en cuatro días total del factor de
diferentes. agrupamiento (si)
si 
MS  MS
e d
Dónde
MSe= cuadrado medio entre

grupos
n= número de datos
Y la desviación estándar de la
precisión intermedia (spi):
s pi  s s
2 2
r i
d) Calcular el porciento
relativo de la desviación
estándar de la
repetibilidad (RSDr)
sr
RSDr  _
*100
x

40
Revisión 3
Característica
metrológica
Y el porciento relativo de la
precisión intermedia (RSDpi)
s pi
RSD pi  _
*100
x
Criterios de aceptación de la repetibilidad y precisión intermedia
Los establecidos en la referencia original del método. En caso de no disponer de esta

información utilizar como guía lo siguiente:
Concentración Unidades %RSD máximo

100% 100 g/100 g o mL 2
10% 10 g /100 g o mL 2
1% 1 g /100 g o mL 4
0.10% 1 mg/g o mL 6
100 ppm 100 mg/kg o L 8
10 ppm 10 mg/kg o L 12
1 ppm 1 mg/kg o L 16
100 ppb 100 µg/kg o L 22
10 ppb 10 µg/kg o L 22
1 ppb 1 µg/kg o L 22
5.7.8
Sensibilidad analítica
Característica
metrológica
Considerar el valor de la a) Calcular el valor de la
Sensibilidad pendiente.
pendiente obtenida en
analítica b) Reportar la relación entre el
la linealidad del
cambio en la unidad de respuesta

41
Revisión 3
método. analítica que corresponde a un
cambio en la concentración del
analito.
5.7.9
Selectividad
Característica
metrológica
Analizar muestras del
producto, la sustancia
Verificar que la respuesta analítica del
de referencia y blancos
método es debida únicamente al
Selectividad de reactivos conforme
analito.
a lo establecido en el
método
Criterio de aceptación para selectividad

Técnica analítica Criterio de aceptación
El valor de Rf de la mancha principal de la solución de prueba
Cromatografía en
debe corresponder con el obtenido en la solución de
Capa Fina
referencia.
El pico de interés (analito):
Cromatografía de a) Debe eluir al mismo tiempo de retención en la
Líquidos (HPLC) y muestra de prueba y sustancia de referencia.
Gases (GC) b) No debe aparecer en el cromatograma del blanco de
reactivos.
Los espectros de absorción UV de la solución de prueba y de

Espectroscopia UV-
la solución estándar deben exhibir máximos y mínimos en la
Visible
misma longitud de onda.
Espectroscopia de
Absorción Atómica Demostrada a través del cumplimiento del criterio de
Plasma Acoplado recuperación (exactitud)
Inductivamente (ICP
a) Muestra de prueba: positivo
Prueba límite b) Solución de referencia: positivo
c) Blanco de reactivos: negativo

42
Revisión 3
5.7.10
Robustez
Característica
metrológica
a) Identificar los factores
que pueden tener un efecto
significativo en el desempeño
del método, como por ejemplo:
peso de muestra, volumen de
solvente, tipo de solvente,
diferentes columnas, diferentes
reactivos, tiempo de extracción,
tipo de agitación, temperatura
a) Calcular las
de extracción, variaciones de
diferencias de las
pH, temperatura, velocidad de
mediciones de los
flujo, composición de la fase
subgrupos.
móvil, entre otros.
b) Graficar en una
b) Elegir de 4 a 7 factores
Robustez línea los valores de las
que se consideren críticos y
diferencias de menor a
variar ligeramente cada uno
mayor
ellos.
c) Calcular la
c) Preparar 8 muestras o
desviación estándar de
blancos de muestras
las diferencias (sDi).
adicionados con una
concentración equivalente al
nivel medio del intervalo de
trabajo obtenido.
d) Analizar por duplicado
las muestras para cada serie de
combinaciones y registrar el
promedio de la concentración
obtenida para cada una.

43
Revisión 3
Criterio de aceptación para la robustez
Si sDi < spi el conjunto de los factores no influye en el resultado y por tanto el método
es robusto.
5.7.11
Incertidumbre
Se realiza conforme a lo establecido en el Documento Técnico de estimación de la

incertidumbre de la medición (conforme al documento CCAYAC-CR-19)
6. DOCUMENTOS DE REFERENCIA
Documentos Clave
6.1 No aplica
7. BIBLIOGRAFÍA.
La establecida en el Documento Técnico de verificación o validación interna de métodos

de prueba (conforme al documento CCAYAC-MA-08)
8. ANEXOS
No aplica

44
Revisión 3
Documento Técnico de verificación o validación interna de
métodos fisicoquímicos para medicamentos
(Conforme al Anexo 5.1 del documento CCAYAC-MA-08)

45
Revisión 3
Documento Técnico de verificación o validación interna de métodos fisicoquímicos
para medicamentos
1. OBJETIVO
analíticos fisicoquímicos por medio de la aplicación de las características de desempeño y
su evaluación frente a los criterios de aceptación previamente establecidos, a fin de
demostrar que es apropiado para el uso previsto
2. ALCANCE
Aplica a los siguientes productos y métodos de prueba:

I. Valoración
II. Impurezas (sustancias
Aditivos farmacéuticos, fármacos (ingredientes
relacionadas, productos
farmacéuticos activos), preparados farmacéuticos y
de degradación)
productos biológicos.
III. Disolución
IV. Identidad
3. DEFINICIONES
Las establecidas en los criterios generales para la verificación o validación interna de

métodos
5. CRITERIOS
Se excluyen del alcance de este documento los métodos de prueba compendiados

básicos tales como pH, pérdida por secado, residuo de ignición, Karl-Fischer, dureza,

46
Revisión 3
friabilidad, descripción, desintegración y partículas por conteo microscópico, debido a
que algunas metodologías no permiten la posibilidad de realizar adiciones a las matrices
sin alterar la naturaleza de la muestra con la finalidad de poder llevar a cabo una
verificación.
5.2 Criterio No. 2.- Clasificación de métodos
Los métodos para propósitos de verificación o validación interna se clasifican como:
Categoría Tipo de prueba Tipo de Prueba / Analito (ejemplo)
Cuantificación de un
I Valoración
componente específico
Determinación Impurezas
II cuantitativa de Productos de degradación
impurezas Isómeros ópticos
III Disolución Disolución

Identificación de un Identidad
IV
analito (Infrarrojo, HPLC, UV-VIS, TLC)
Las características de desempeño (dependiendo del tipo de prueba) para la verificación

de métodos compendiados son:
Categoría
II
Característica de Impurezas y
desempeño I productos de III IV
Valoración degradación Disolución Identidad
IIa IIb
Cuantitativo Límite
Linealidad e intervalo
SI SI NO NO NO
del método
Límite de
NO SI NO NO NO
cuantificación
Límite de detección NO NO SI NO NO

47
Revisión 3
Exactitud
SI SI NO NO NO
(Recuperación y sesgo)
Precisión
(Repetibilidad y SI SI NO SI NO
precisión intermedia)
Especificidad SI SI SI NO SI
Incertidumbre SI SI NO SI NO
5.4 Criterio No. 4.- Validación interna de métodos de prueba
Las características de desempeño (dependiendo del tipo de prueba) para la validación

interna de métodos no compendiados son:
Categoría
II
Característica de Impurezas y
desempeño I productos de III IV
Valoración degradación Disolución Identidad
IIa IIb
Cuantitativo Límite
Linealidad del sistema SI* SI* NO SI* NO
Linealidad del método SI SI NO SI NO
Intervalo de trabajo SI SI NO SI NO
Límite de
NO SI NO NO NO
cuantificación
Límite de detección NO NO SI NO NO
Recuperación SI SI NO SI NO
Sesgo SI SI NO SI NO
Repetibilidad SI SI NO SI NO
Precisión intermedia SI SI NO SI NO
Especificidad SI SI SI NO SI
Robustez SI SI NO SI NO
*Solo para aquellos métodos que emplean curva de calibración
5.5 Criterio No. 5.- Selección de matriz
a) Seleccionar una matriz por tipo de producto y por cada analito específico de
cada monografía.

48
Revisión 3
b) En el caso de productos biológicos usar la matriz más representativa que puede
ser la más compleja o la que se recibe con mayor frecuencia.
5.6 Criterio No. 6.- de muestras
Preparación de la muestra
a) Utilizar placebos o productos farmacéuticos en una cantidad equivalente a
la indicada por la monografía del producto.
b) Cuando no se dispone de un placebo, determinar el contenido del analito
en un producto farmacéutico por sextuplicado. Preparar estas muestras
utilizando una cantidad equivalente a la mitad de la muestra original
establecida por el método y adicionar diferentes niveles de concentración
de estándar hasta alcanzar los niveles de concentración establecidos
conforme al protocolo.
5.7 Criterio No. 7.-Evaluación de las características de desempeño
5.7.1 Linealidad del sistema
Característica
metrológica
a) Aplica solo para a) Graficar los valores de
métodos que respuesta analítica obtenida
emplean curva de (eje y) en función de cada
calibración. uno de los valores de
b) Se realiza concentración (eje x).
utilizando Verificar de manera visual la
disoluciones del existencia de linealidad de los
material de datos.
referencia (sin b) Mediante análisis de
Linealidad del
componente de la regresión calcular la
sistema
matriz). pendiente (m), la ordenada al
c) Preparar de origen (b) y los intervalos de
forma confianza de la pendiente y
independiente, tres ordenada al origen.
curvas de c) Calcular para cada nivel
calibración con un de concentración, los valores
mínimo de 5 niveles residuales y obtener el
diferentes de gráfico.
concentración del d) Verificar la dispersión de

49
Revisión 3
Característica
metrológica
analito de interés los datos.
e) Calcular el valor
estadístico de t de las tres
curvas de calibración
considerando el coeficiente
de correlación y el de
determinación.
Criterio de aceptación para linealidad del sistema

Verificación visual de comportamiento
Gráfico de linealidad lineal en el gráfico de respuesta analítica en
función de la concentración
Distribución aleatoria de los puntos
alrededor de la recta
Coeficiente de correlación (r)
Coeficiente de determinación(r2)
Valor estadístico de t de la
t cal > t tab
linealidad
*Intervalo de confianza del
Debe incluir el valor del 0
intercepto

50
Revisión 3
5.7.2
Característica
metrológica
a) Preparar placebos o a) Graficar los valores de
muestras respuesta analítica obtenida
independientes del (eje y) en función de cada
producto farmacéutico a uno de los valores de
3 niveles diferentes de concentración añadida (eje
concentración del x). Verificar de manera visual
analito de interés, y la existencia de linealidad de
analizar por triplicado, los datos.
conforme a los b) Calcular la pendiente (m) y
siguientes criterios: la ordenada al origen (b) y
con estos datos determinar
el valor de la respuesta
 Cuantificación de analítica ajustada (y´) para
componente mayoritario cada valor de concentración,
Linealidad del (categoría I) niveles 80,100 y empleando la siguiente
método 120 % del valor de la ecuación:
especificación.
 Cuantificación de y´ = mx + b
impurezas (categoría II a)
niveles de 50-120% del valor c) Calcular para cada nivel de
de la especificación. concentración, los valores
residuales y obtener el
gráfico.
b) Determinar la d) Verificar la dispersión de
concentración por los datos.
valoración por un mismo e) Reportar el intervalo lineal
analista, utilizando el obtenido considerando las
mismo equipo y mismas unidades de concentración
condiciones establecidas por el método.
experimentales.
Criterio de aceptación de la linealidad del método

Verificación visual de comportamiento lineal en el
Gráfico de linealidad gráfico de respuesta analítica en función de la
concentración.

51
Revisión 3
Distribución aleatoria de los puntos alrededor de la
recta
5.7.3
Característica
metrológica
a) Obtener el % de
recuperación aplicando la
siguiente fórmula:
a) Con los datos de
respuesta analítica Cf
% Re cobro  *100
obtenidos en la prueba Ca
de linealidad del
Dónde:
método, calcular la
cantidad del analito para
Cf = Concentración recuperada en el
cada uno de los niveles
blanco de muestra o muestra
añadidos.
adicionadas.
b) Verificar que todos
Ca= Concentración adicionada al
los niveles de
blanco de muestra o muestra
concentración cumplan
Intervalo de con los criterios de
b) Calcular para cada nivel de
trabajo aceptación establecidos
concentración, el promedio, la
para recuperación y
desviación estándar, la
repetibilidad.
desviación estándar relativa de
c) Reportar el intervalo
cada uno de los valores de
de trabajo obtenido
recuperación.
considerando las
c) Graficar los datos de
unidades de
concentración recuperada (eje
concentración
y) en función de la
establecidas por el
concentración adicionada (eje
método.
x).
d) Calcular el coeficiente de
correlación o el coeficiente de
determinación y el intervalo
de confianza de la pendiente.

52
Revisión 3
Criterio de aceptación para intervalo de trabajo

Coeficiente de determinación r2 ≥ 0.98
Intervalo de confianza de la
Debe incluir el valor de la unidad
pendiente
5.7.4 Límite de cuantificación (LC)
Característica
metrológica
A partir de los datos
obtenidos en la prueba de
Calcular el límite de cuantificación
linealidad del método
aplicando la siguiente ecuación:
(concentración en función
Límite de
de la respuesta analítica)
cuantificación
calcular la pendiente (b) y la
regresión (sy/x).
Criterio de aceptación para límite de cuantificación
El límite de cuantificación debe ser menor al valor de la especificación
5.7.5 Límite de detección (LD)
Característica
metrológica
Preparar 10 réplicas
independientes de muestras
Establecer como límite de detección
Límite de adicionadas a 5 diferentes
la concentración mínima en la cual
detección niveles de concentración por
los 10 resultados son positivos.
debajo de la concentración
de la solución estándar
indicada en el método.

53
Revisión 3
Criterio de aceptación para límite de detección
El límite de detección debe ser menor al valor de la especificación
5.7.6
Característica
metrológica
Con los datos de Reportar el intervalo de % de
recuperación obtenidos recuperación obtenido de
en la determinación del acuerdo a la siguiente fórmula:
intervalo de trabajo,
Recuperación
determinar el intervalo
de confianza del % de
recuperación.
Criterio de aceptación de % de recuperación,

Impurezas o
Preparado
Ingrediente productos de
farmacéutico o
Técnica analítica farmacéutico degradación,
producto
activo sustancias
biológico
relacionadas
Espectroscopia Ultravioleta-
Visible (UV-Vis)
Espectrometría de Masas
(MS) 80.0 % a 120.0 %
Cromatografía de Líquidos
98.0 % a 102.0 %
(HPLC) 95.0 % a 105.0 %
Cromatografía de Gases (GC)
Espectroscopia de Infrarrojo
(IR)
70.0 % a 150.0 %
Métodos volumétricos
Absorción Atómica (AA) 95.0 % a 105.0 %

54
Revisión 3
Plasma acoplado
inductivamente (ICP)
Característica
Condiciones
metrológica
a) Deberá tomarse en consideración que si se encuentra
sesgo significativo en los resultados del análisis de la
linealidad, es probable que también ocurra en los resultados
de la recuperación de una muestra fortificada.
Sesgo b) En este caso la implicación será una causa de sesgo de la
muestra real y esto dará generalmente una interferencia
proporcional a la concentración del mensurando. En tal caso
deberá declararse la razón por la cual no pudiera estar
incluido el 100%.
Criterio de aceptación para Sesgo

El intervalo de confianza del % de recuperación debe
incluir el valor de 100 % para establecer que el método
Sesgo
no presenta sesgo.
5.7.7
Característica
metrológica
a) Para determinar la a) Verificar la
repetibilidad considerar el homogeneidad de
RSD total de los porcentajes varianzas mediante la
Repetibilidad de recobro obtenidos en la prueba de Cochran.
y prueba de exactitud (% de b) Efectuar el análisis de
precisión recuperación) ANOVA de un factor y
intermedia b) Para determinar la precisión verificar la significancia
intermedia analizar por estadística o realizar
triplicado una muestra del algunas otras
ingrediente activo, inferencias estadísticas

55
Revisión 3
Característica
metrológica
preparado farmacéutico o basadas en la naturaleza
producto biológico a un de cada método y
nivel de concentración del previamente
100 % en cuatro corridas establecidas en el
considerando días y protocolo de acuerdo a
analistas diferentes los supuestos
c) En caso de que la hipotéticos planteados.
metodología la realice un c) Calcular la media de los
solo analista, efectuar la todos los datos y la
prueba en cuatro días
diferentes. desviación estándar de
d) Para la prueba de la repetibilidad (sr)
disolución, analizar el
producto farmacéutico por s r  MSd
sextuplicado por dos
analistas en días diferentes Dónde:
MSd = cuadrado medio dentro

del grupo
La contribución a la variación
total del factor de
agrupamiento (si)
si 
MS  MS
e d
Dónde
MSe= cuadrado medio entre

grupos
n= número de datos

56
Revisión 3
Característica
metrológica
Y la desviación estándar de la
precisión intermedia (spi):
s pi  s s
2 2
r i
d) Calcular el porciento
relativo de la desviación
estándar de la
repetibilidad (RSDr)
sr
RSDr  _
*100
x
Y el porciento relativo de la
precisión intermedia (RSDpi)
s pi
RSD pi  _
*100
x
Criterios de aceptación para la repetibilidad

% RSDr máximo
Impurezas o
Preparado
Técnica analítica farmacéutico o
farmacéutico degradación,
producto
activo sustancias
biológico
relacionadas
Espectroscopia Ultravioleta-Visible
(UV-Vis)
1.0 % 3.0 % 20.0 %
Espectrometría de Masas (MS)
Espectroscopia de Infrarrojo (IR)

57
Revisión 3
Cromatografía de Líquidos (HPLC)
Métodos volumétricos 2.0 %
Absorción Atómica (AA) 5.0 % 5.0 %
Plasma acoplado inductivamente
15.0 % 15.0 %
(ICP)
Criterios de aceptación de precisión intermedia

% RSDpi máximo
Impurezas o
Preparado
Técnica analítica farmacéutico o
farmacéutico degradación,
producto
activo sustancias
biológico
relacionadas
Espectroscopia Ultravioleta-Visible
(UV-Vis)
1.5 %
Cromatografía de Líquidos (HPLC)
3.0 %
Espectrometría de Masas (MS)
1.0 %
Espectroscopia Infrarrojo (IR) 25.0 %
Métodos volumétricos 2.0 % 2.0 %
Absorción Atómica (AA) 8.0 % 8.0 %
Plasma acoplado inductivamente 15.0 %
15.0 %
(ICP)
5.7.8 Especificidad
Característica
metrológica
Analizar muestras del
producto, la sustancia
de referencia y blancos Verificar que la respuesta analítica del
Especificidad
de reactivos conforme método es debida únicamente al analito.
a lo establecido en el
método o en la

58
Revisión 3
monografía del
ingrediente
farmacéutico activo o
producto farmacéutico.
Criterios de aceptación para selectividad
Técnica analítica Criterio de aceptación

El valor de Rf de la mancha principal de la solución de prueba
Cromatografía en
debe corresponder con el obtenido en la solución de
Capa Fina
referencia.
El pico de interés (analito):
Cromatografía de a) Debe eluir al mismo tiempo de retención en la muestra
Líquidos (HPLC) y de prueba y sustancia de referencia.
Gases (GC) b) No debe aparecer en el cromatograma del blanco de
reactivos.
Los espectros de absorción UV de la solución de prueba y de la

Espectroscopia
solución estándar deben exhibir máximos y mínimos en la
UV-Visible
misma longitud de onda.
Espectroscopia de
Absorción
Atómica Demostrada a través del cumplimiento del criterio de
Plasma Acoplado recuperación (exactitud)
Inductivamente
(ICP
a) Muestra de prueba: positivo
Prueba límite b) Solución de referencia: positivo
c) Blanco de reactivos: negativo
5.7.9
Robustez
Característica
metrológica
a) Identificar los factores a) Calcular las
Robustez que pueden tener un efecto diferencias de las
significativo en el mediciones de los

59
Revisión 3
Característica
metrológica
desempeño del método, subgrupos.
como por ejemplo: peso de b) Graficar en una
muestra, volumen de línea los valores de las
solvente, tipo de solvente, diferencias de menor
diferentes columnas, a mayor
diferentes reactivos, tiempo c) Calcular la
de extracción, tipo de desviación estándar
agitación, temperatura de de las diferencias (sDi).
extracción, variaciones de
pH, temperatura, velocidad
de flujo, composición de la
fase móvil, entre otros.
b) Elegir de 4 a 7 factores
que se consideren críticos y
variar ligeramente cada uno
ellos.
c) Preparar 8 muestras o
blancos de muestras
adicionados con una
concentración equivalente
al nivel medio del intervalo
de trabajo obtenido.
d) Analizar por duplicado
las muestras para cada serie
de combinaciones y
registrar el promedio de la
concentración obtenida
para cada una.
Criterio de aceptación para la robustez

Si sDi < spi el conjunto de los factores no influye en el resultado y por tanto el método
es robusto.
5.7.10 Incertidumbre
Se realiza conforme a lo establecido en el Documento Técnico de estimación de la

incertidumbre de la medición (conforme al documento CCAYAC-CR-19).
6 DOCUMENTOS DE REFERENCIA

60
Revisión 3
Documentos Clave
6.1 No aplica
7 BIBLIOGRAFÍA
La establecida en el Documento Técnico de verificación o validación interna de

métodos de prueba (conforme al documento CCAYAC-MA-08)
8 ANEXOS
No aplica

61
Revisión 3
Documento Técnico de verificación, control de calidad interno y
expresión de resultados para la determinación de Clenbuterol por
ensayo inmunoenzimático
(Conforme al documento CCAYAC-CR-07).

62
Revisión 3
Documento Técnico de verificación, control de calidad interno y expresión de
resultados para la determinación de Clenbuterol por ensayo inmunoenzimático.
(Conforme al documento CCAYAC-CR-07)
1. OBJETIVO
Establecer los criterios de verificación, control de calidad interno y expresión de

resultados para el método de prueba de Clenbuterol.
2. ALCANCE

Inmunoenzimático Crudos como: carne, hígado, para el abasto
con el Kit R1711 R-Biopharm y, orina y sangre (suero o plasma) de bovinos.
(ELISA)
3. DEFINICIONES
3.1. Analito: Componente específico de una muestra, a medir en un análisis.

3.2. Blanco de Muestra: Son matrices que no contienen el analito de interés.
3.3. Blanco de Muestra Fortificada: Muestra blanco a la que se le adicionan
cantidades conocidas del analito de interés.
3.4. Blanco de Reactivos: Reactivos utilizados durante el proceso analítico
(incluyendo disolventes usados en la extracción o disolución) los cuales son
analizados para garantizar que la medición no es influenciada por los materiales
utilizados durante el análisis.
3.5. Criterios de Aceptación: Parámetros bajo los cuales el resultado de una prueba
será considerado aceptable.
3.6. Informe de Verificación: Es el documento en el que los registros, los resultados y
la evaluación completa del proceso de verificación están ensamblados y resumidos.
3.7. Característica de Desempeño: Parámetro específico a evaluar en una
verificación o validación interna del método.
3.8. Precisión Intermedia: Variación en los resultados cuando las mediciones se
realizan en un solo laboratorio pero en condiciones que son más variables que las
condiciones de repetibilidad.
3.9. Protocolo de Verificación: Documento que describe el objetivo, alcance y las
actividades que se planean llevar a cabo, incluyendo los criterios de aceptación
para la aprobación del método de prueba.

63
Revisión 3
3.10. Recobro: Cantidad del analito recuperado en la porción de muestra o muestra
adicionada cuando esta es conducida a través del método analítico completo y que
permite evaluar la eficiencia de la extracción, proceso de preparación e
interferencias que puedan existir al aplicarlo. Se expresa en términos de porcentaje.
3.11. Repetibilidad: Es una característica cuantitativa que permite conocer la medida
de dispersión de los resultados. Es decir, es el grado de concordancia entre
resultados analíticos individuales, cuando el procedimiento se aplica
repetidamente a diferentes porciones de una muestra homogénea por un solo
analista, usando los mismos instrumentos y método. En intervalos cortos de
tiempo.
3.12. Selectividad: Grado en el que un método puede ser utilizado para determinar
analitos particulares en mezclas o matrices sin interferencia de otros componentes
de comportamiento similar.
3.13. Verificación del Método: Aportación de evidencias objetivas de que se cumplen
los requisitos especificados.
5. CRITERIOS
5.1. Criterio 1.- Disposiciones generales

El método debió ser implementado en apego a la aplicación al instructivo del fabricante
del método inmunoenzimático por Ridascreen Clenbuterol Art N° R1711 incluyendo la
etapa de extracción de la muestra y documentar con las evidencias generadas.
5.2. Criterio 2.- Características y criterios de validez, verificación y control de

calidad
5.2.1. Criterios de validez de la curva de calibración del sistema
En la tabla 1 se enumeran los criterios de validez de la curva de calibración de ELISA.
Se menciona el parámetro, especificación y medida de control que se lleva a cabo.
Tabla 1.-Criterios de validez de curva de calibración de ELISA

Criterio o característica Especificación Medida de Control
Absorbancia del estándar 1 Mayor que 0.8 UA
Registro en bitácora.
[Clenbuterol] = 0 ng/L
Repetibilidad de curva de %DSR ≤ 10
Registro en bitácora.
calibración

64
Revisión 3
<5% para estándar 2
Porciento relativo de
<5% para estándar 4 Registro internos
desviación estándar
DSR= Desviación estándar relativa
Nota 1: Cuando la lectura en absorbancia del estándar 1 (sin Clenbuterol) sea menor de 0.8 UA, la
prueba no tendrá validez y se debe repetir el análisis completo. Si continúa el valor bajo, repetir a
prueba con un kit nuevo.
Si la DSR es mayor al 10% o no se cumple con el porcentaje de desviación de alguno de los
estándares, pero los demás criterios y controles cumplen, analizar el comportamiento de la curva
de calibración para decidir si el ensayo es susceptible de repetición.
5.2.2. Características de desempeño y criterios estadísticos de aceptación para pruebas de

ELISA
Tabla 2. Característica de desempeño y criterios de aceptación

Características de
Criterio de aceptación Bibliografía
desempeño
Regulación N° 41-2007. Validación
Repetibilidad %DSR ≤ 20% de métodos analíticos. República
de Cuba. Ministerio de Salud
Pública. Centro para el Control
Estatal de la Calidad de los
Medicamentos establece dichos
Precisión intermedia % DSR ≤ 20% criterios para el coeficiente de
variación de la repetibilidad y
reproducibilidad para métodos
inmunológicos
Application note, compliance
criteria for manual testing of
Porciento de recobro 70 a 130% RIDASCREEN antibiotic/hormone
tests (competitive).
5.2.3. Controles de calidad en el proceso analítico
Tabla 3. Control de calidad
Control Criterio de aceptación Registro

65
Revisión 3
Estándar 4 [Clenbuterol]= Dentro de la media ± dos Utilizar al menos dos veces
300 ng/L en la placa de ELISA desviaciones estándar de en cada corrida. Revisión
analizado como muestra. acuerdo al gráfico control. de supervisión
Gráfico de control.
Considerar un control
Control positivo de
positivo de preferencia con
proceso (matriz negativa
valores de 500 ppt a 1500
Control positivo del proceso fortificada y caracterizada)
ppt. (Matriz negativa
dentro de la media ± dos
fortificada o una matriz que
desviaciones estándar de
contenga Clenbuterol de
acuerdo al gráfico control
manera nativa en esas
concentraciones).
Control negativo de
proceso (matriz negativa
Control negativo del proceso
caracterizada) Menor o Registro de bitácora
(Blanco de muestra)
igual a 75 ppt en curva
estándar
Blanco de reactivos (placa de
Menor o igual a 75 ppt en
ELISA, generalmente es agua Registro de bitácora
curva estándar
o buffer)*
*= Esto es dependiendo de la matriz, si se trata de orina (matriz sin extracción, indicar su
preparación) o de carne o hígado que llevan extracción.
Nota 2: Considerar cada uno de los parámetros por corrida.
5.3. Criterio 3.-Proceso de verificación
5.3.1. Selección de matriz

Se debe validar cada matriz por separado orina, suero, hígado o carne (músculo) en
el orden de las necesidades de cada laboratorio. Tomando en cuenta lo siguiente:
 La de naturaleza más compleja.
 La que se analiza con más frecuencia en el laboratorio.
 Que sea de reciente adquisición (fresca).
 De preferencia que haya sido procesada con buenas prácticas pecuarias (por
ejemplo “TIF”, tipo inspección federal o equivalente).
 Considerar incluir por lo menos 10 réplicas independientes para la caracterización
de las muestras y utilizarla como blanco en la fortificación y/o como control
negativo.
 Indicar los niveles de fortificación de la muestra (por lo menos 3 niveles).
Tabla 4.- Condiciones por tipo de muestra para análisis de Clenbuterol por ELISA

66
Revisión 3
Cantidad
Tipo de
necesaria para la Condiciones Específicas
Muestra
verificación
Hígado Empaque: Contenido en bolsa doble íntegra de plástico.
crudo de El cierre debe asegurar el contenido y la información
bovino documental.
La necesaria
según las
Etiqueta comercial y de muestreo: Que no se
características de
encuentre mojada, esté íntegra y en buenas
Carne desempeño y
condiciones. La etiqueta de muestreo debe contener
(músculo) replicas que se
todos los datos del muestreo correspondiente. En los
cruda de vayan a realizar
dos casos, sin tachaduras ni enmendaduras.
bovino
Condiciones de temperatura: Refrigerado (4°C a 8°C) o
congelado. No se acepta en estado de descomposición.
Empaque: Contenido un recipiente de cierre hermético
que no permita derrames, dentro de una bolsa de
La necesaria plástico. El cierre debe asegurar el contenido y la
según las información documental.
Orina de características de
bovino desempeño y Etiqueta: La muestra debe contener una etiqueta con
replicas que se todos los datos del muestreo correspondiente. En los
vayan a realizar dos casos, sin tachaduras ni enmendaduras.
Condiciones de temperatura: Refrigeración (4-8°C).
5.4. Criterio 4. Características de desempeño analítico
5.4.1. Verificación del método de prueba
Tabla 5.-Características de desempeño analítico para evaluar la verificación del

método
Réplicas
Característica Muestras indepen Calcular/determinar Observaciones
-dientes
Matriz libre a) Porciento de recobro:
de
Clenbutero  Disolución
Recobro 6
ly fortificante 100
fortificada ng/mL. (comercial).
por lo  Sal de

67
Revisión 3
menos en clorhidrato de
tres niveles Clenbuterol de alta
b) Promedio, desviación pureza.
estándar y %DSR  Los niveles de
fortificación deben
incluir la
concentración del
límite de corte y de
preferencia
concentraciones
en la parte lineal
de la curva.
 Determinacione
s efectuadas en las
mismas
condiciones.
(muestra, analista,
Matriz libre laboratorio,
de equipos y
a) Media
Repetibilidad Clenbutero 6 reactivos.
b) Desviación estándar.
ly
c)%DSR.
fortificada  Puede
elegirse uno de
los 3 niveles o
realizarse en los
3.
 Medida de
a) Media precisión en un
b) Desviación estándar. laboratorio cuando
c)%DSR. se efectúa el
Matriz libre análisis con una o
de d)ANOVA o algún otro varias condiciones
Precisión estadístico que
Clenbutero 6 diferentes.
intermedia
ly demuestre si hay (analista, días,etc.)
fortificada diferencia significativa  Debe elegirse el
ante los cambios mismo nivel o
realizados. niveles de
fortificación que en
repetibilidad.

68
Revisión 3
 Generalmente se
utiliza ANOVA de
una vía para
demostrar que no
hay diferencia
significativa por el
(los) cambio (s)
realizado (s).
Adecuabilida Tres curvas estándar.  Repetible y

d de curva Sin matriz 3 %DSR reproducible
estándar
5.5. Criterio 5.- Expresión de resultados

5.5.1. Reportar el resultado como Clenbuterol en vez de clorhidrato de Clenbuterol, ya que
este último, corresponde al nombre del ingrediente en formulaciones.
5.5.2. Las muestras con un resultado mayor o igual al límite de corte de 2000 ppt se
reportan como DETECTADAS. Colocar el valor numérico en el informe de resultados.
5.5.3. Las muestras con un resultado menor al límite de corte de 2000 ppt se reportan
como NO DETECTADAS. Colocar el valor numérico en el informe de resultados.
5.5.4. En ambos casos reportar el límite de corte en (ng/Kg o ng/L) según la naturaleza
física de la muestra.
5.6. Criterio 6.- Protocolo de verificación

Elaborar un protocolo que incluya lo siguiente:
Índice Descripción
Protocolo de verificación de método (clave interna). Debe indicar
1. Título
el analito a detectar, el método de prueba y la matriz.
Considerar las características de desempeño a evaluar y el analito
2. Objetivo
a determinar.
Indicar el nombre de la metodología y la matriz o matrices en las
3. Alcance
que se aplicaran.
Elaborar un diagrama de flujo con la metodología empleada para
4.Método de cuantificar el analito indicando el punto o etapa en la que se
ensayo fortifica. Considerar la extracción a realizar en la matriz en
cuestión.
Nombre del equipo crucial y/o instrumento a utilizar; clave interna
5.Equipo e
de identificación, e indicar los servicios de calibración, verificación
Instrumentos
y/o calificación, mantenimiento preventivo según sea el caso.
6.Materiales Nombre del material crucial especificando características o fechas

69
Revisión 3
de caducidad cuando aplique.
Indicar: Nombre, pureza, lote, caducidad, características generales.
Incluir reactivos biológicos (kit), tipo de agua, sustancias de
7.Reactivos referencia y de control entre otros. Incluir la preparación detallada
de las disoluciones y estándares de referencia y preparación de
controles inclusive los cálculos.
Indicar la cantidad, lote o procedencia en su caso, forma de
almacenamiento.
8.Muestras Describir la fortificación de blanco de muestra y el paso analítico
en que se llevará a cabo. Incluyendo los cálculos detallados para la
fortificación.
Describir paso a paso las instrucciones para ejecutar los ensayos
de evaluación de las características de desempeño.
9.Desarrollo
Incluir como se va a realizar la caracterización de las muestras
experimental
control negativas y positivas, los niveles de fortificación, las réplicas
y controles en la prueba de ELISA
Propuesta de formato de registro para vaciado de resultados de
10.Resultados
cada parámetro de verificación a ensayar.
11.Análisis Establecer y describir para cada característica de desempeño la
estadístico herramienta estadística que se utilizará para su evaluación.
Presentar en forma de tabla los criterios de aceptación que se
12.Criterios de
busca satisfacer. Indicar la referencia bibliográfica utilizada cuando
aceptación
aplique.
Documentos en los que se basó para elaborar el protocolo de
verificación. Deberá anotar la referencia oficial nacional o
13.Bibliografía
internacional de donde proviene la información descrita en el
protocolo.
Otra información que se quiera incluir como por ejemplo, formatos
14.Anexos
o información adicional.
Nota 3: El protocolo debe incluir firmas de quien elaboró, revisó y aprobó. Asimismo un
índice o contenido y paginación.
5.7. Criterio 7.- Informe de verificación
Elaborar un informe de resultados que incluya lo siguiente:
Informe de verificación de método (clave interna). Debe indicar
Título
el analito que se detectó, el método de prueba y la matriz.
Considerar las características de desempeño utilizadas en la
1. Objetivo
evaluación y el analito que se determinó.

70
Revisión 3
2.Alcance
que se aplicó.
Elaborar un diagrama de flujo con la metodología empleada
3.Método de ensayo para cuantificar el analito indicando el punto o etapa en la que se
fortificó.
Nombre del equipo crucial y/o instrumento a utilizar; Clave
4.Equipo e interna de identificación, fecha de calibración, verificación y/o
Instrumentos calificación según sea el caso, fecha de mantenimiento
preventivo.
Nombre del material crítico especificando características o
5.Materiales
fechas de caducidad cuando aplique.
Indicar: Nombre, pureza, lote, caducidad, características
generales de todos los reactivos que se utilizaron incluyendo
reactivos biológicos (kit), sustancias de referencia y de control.
6.Reactivos
Incluir la preparación detallada y cálculos de las soluciones,
diluciones y estándares de referencia. Incluir la fecha y al analista
que los preparó.
Indicar la cantidad, lote o procedencia en su caso, forma de
almacenamiento.
7.Muestras Describir como se realizó la fortificación de blanco de muestra,
fecha, analista y el paso analítico en que se llevó a cabo. Incluir
los cálculos detallados para la fortificación.
Describir paso a paso las instrucciones para ejecutar los ensayos
de evaluación de cada una de las características de desempeño.
Incluir las réplicas, analistas que intervinieron, fechas y controles
8.Desarrollo
en la extracción y en la placa de ELISA.
experimental
Describir como se realizó la caracterización de las muestras
control negativo y positivo, y cuando, como y quien efectuó la
fortificación de la muestra.
Presentar en forma de tabla los resultados obtenidos. Analizar los
datos con una prueba de tipificación como por ejemplo Grubbs.
9.Resultados Utilizar los formatos, tablas, gráficos u otra estrategia de
presentación de los resultados. Registrar los resultados de cada
característica de verificación a ensayar.
Establecer y describir para cada característica de desempeño la
herramienta estadística que se utilizó para su evaluación.
10.Análisis Generalmente es la media, la desviación estándar muestral y el
estadístico coeficiente de variación ó Desviación estándar relativa. Si es
necesario, utilizar los anexos para describir el desarrollo de la
prueba estadística empleada.

71
Revisión 3
En caso de utilizar estadística inferencial para comparar cambios
o diferencias, considerar:
1) La transformación de los datos para considerarlos normales y
que para dos series se puede utilizar t de student, ANOVA u otro
estadístico.
2) Contar con el criterio de aceptación al estadístico empleado.
En todos los casos, justificar el uso y reportar la interpretación del
resultado.
Registrar en una tabla los resultados obtenidos y los criterios de
aceptación que se busca satisfacer. Comentar sobre el
11.Criterios de
comparativo entre los criterios de evaluación teóricos y los
aceptación
resultados estadísticos obtenidos de los ensayos resaltando las
observaciones críticas.
Revisar las actividades realizadas, la revisión bibliográfica en
relación al tema y los resultados obtenidos. Explicar valores
anómalos o de significancia estadística e incorporar
12.Discusión
observaciones relevantes que apoyen la autocrítica de los datos
obtenidos y la eficacia de las decisiones tomadas. Evidenciar las
acciones realizadas.
Enunciar si se alcanzaron los objetivos esperados y se acepta el
13.Conclusiones
uso previsto del método de prueba.
Registrar la referencia oficial nacional o internacional de donde
14.Bibliografía proviene la información descrita o alguna otra fuente de
información adicional.
Los que apliquen para dar evidencia en su ejecución: datos
crudos obtenidos, impresos de las corridas del lector de ELISA,
15.Anexos copias de certificados de análisis de reactivos, de servicio a
equipos, evidencias de acciones o de eficacia tomadas, anexos a
la validación, etc.
Nota 4: El informe de resultados debe incluir firmas de quien elaboró, revisó y aprobó.
Asimismo un índice o contenido con paginación.
Documentos Clave
6.1. Método de prueba para la determinación de Clenbuterol por
CCAYAC-M-265
ensayo inmunoenzimático

72
Revisión 3
7. BIBLIOGRAFÍA
Documentos
NOM-194-SSA1-2004. Productos y servicios. Especificaciones sanitarias en los
7.1. establecimientos dedicados al sacrificio y faenado de animales para abasto,
almacenamiento, transporte y expendio. Especificaciones sanitarias de productos
7.2. NMX-EC-17025-IMNC-2018. Requisitos generales para la competencia de los
laboratorios de ensayo y calibración
7.3. Estadística y quimiometría para Química analítica, James N. Miller & Jane C. Miller,
Cuarta edición, Prentice Hall, 2002, Capítulo 3 p.p. 55 -58; Anexo 2 Tabla 6, p.p. 266.
7.4. Application note, Compliance criteria for manual testing of RIDASCREEN®
antibiotic/hormone tests (competitive). R-biopharm.
7.5. Declaration Product: Ridascreen Clenbuterol (Art. No R1711). Addendum:
Compliance Criteria. R-biopharm.
7.6. Inserto del kit RIDASCREEN® Clenbuterol (R1711). R-biopharm y sofware
Regulación N° 41-2007. Validación de métodos analíticos. República de Cuba.

Ministerio de Salud Pública. Centro para el Control Estatal de la Calidad de los
7.7. Medicamentos. Actualización 2012 en la publicación: “Técnicas
inmunoenzimáticas para ensayos de vacunas y estudios inmunoepidemiológicos”
La Habana,Cuba.
8. ANEXOS. No Aplica

73
Revisión 3
Documento Técnico de verificación del método de prueba
para la detección de Brucella spp. por PCR

74
Revisión 3
Documento Técnico de verificación del método de prueba para la detección de
Brucella spp. por PCR.
1. OBJETIVO
Establecer los requisitos técnicos mínimos para la verificación de la metodología de

detección del género Brucella spp. por PCR.
2. ALCANCE
Aplica a los siguientes productos y método de prueba:

PCR para la
Leche, sus productos y derivados.
detección de
Brucella spp
3. DEFINICIONES.
3.1 Confirmación del Método: Evidencia objetiva para demostrar que al aplicar un
método normalizado (compendiado), se cumple con las especificaciones del mismo
y se cuenta con la competencia técnica para realizarlo adecuadamente tomando en
consideración sus propias instalaciones, equipo y personal. Tiene como objetivo, el
comprobar que el laboratorio domina el método normalizado y lo utiliza
correctamente
3.2 Exclusividad: Diferentes cepas no pertenecientes al género Brucella no
deben ser detectadas por el método.
3.3 Inclusividad: Diferentes cepas pertenecientes al género Brucella deben ser
detectadas por el método.
3.4 Límite de Detección: Concentración en la que una muestra positiva arroja
resultados positivos en al menos un 95 % de las ocasiones. Por lo tanto, el porcentaje
de resultados falsos negativos debe ser del 5 % o menos
3.5 Reacción en cadena Polimerasa (PCR): Técnica analítica que se basa en la
replicación de fragmentos de ADN por síntesis enzimática, a partir de pequeñas
cantidades de ADN, de un gran número de copias de un segmento de ADN,
mediante una serie repetitiva de tres pasos: alineación de iniciadores o primers,
desnaturalización de ADN y replicación del material genético.

75
Revisión 3
Los presentes criterios deben ser aplicados por los integrantes de la Red Nacional
de Laboratorios de Salud Pública, los Laboratorios de Prueba Terceros Autorizados
ante la COFEPRIS y verificadores.
5. CRITERIOS.
5.1 Criterio No. 1.- Disposiciones generales
a) Los laboratorios que implementen la metodología de PCR en punto final deben

seguir lo establecido en el documento CCAYAC-M-201 “Método de prueba para la
detección de Brucella spp. en leche y sus productos por PCR”.
b) Los laboratorios que implementen la metodología de PCR en tiempo real deben

seguir lo establecido en el documento CCAYAC-M-353 “Método de prueba para la
detección de Brucella spp. en leche y sus productos por PCR en tiempo real”.
c) Para manipular el género Brucella, se deben adoptar las directrices en materia de

bioseguridad consideradas para un laboratorio de nivel 3, conforme a lo
establecido en el Manual de Bioseguridad en el Laboratorio publicado por la OMS.
d) Las áreas para extracción de ADN genómico, preparación de la mezcla maestra de

PCR y adición de templados deben ser independientes, para evitar la
contaminación cruzada de muestras con el material genético extraído o los
productos de amplificación de PCR obtenidos previamente.
e) La metodología de PCR en tiempo real debe ser capaz de detectar el género

Brucella, en un único evento de amplificación, mediante el uso de sondas
específicas para el género.
5.2 Criterio No. 2.- Método analítico
Establecer y adaptar los métodos analíticos mencionados para punto final y/o tiempo real
según corresponda a la capacidad analítica con que se cuente, en los cuales se detalle
como mínimo cada uno de los siguientes rubros:
a) El alcance del método.

b) Proceso de homogeneización y/o pre-enriquecimiento de la porción analítica para
cada tipo de muestra.
c) Proceso de extracción de ADN genómico.
d) Composición de la mezcla maestra de amplificación. Indicar el blanco genético de
amplificación tal como la secuencia de inserción IS711 para PCR en tiempo real o

76
Revisión 3
genes Omp-2 para punto final, secuencias de los iniciadores y sondas, tamaño del
fragmento obtenido.
e) Proceso de amplificación y plataforma analítica (equipo) utilizada.
Intercambiabilidad con otros equipos utilizados y los parámetros que se ajustan a
esos equipos.
f) Medidas de control de calidad implementadas.
g) Interpretación de resultados.
h) Medidas de bioseguridad.
5.3 Criterio No.3.- Parámetros de desempeño
Parámetro Muestras Calcular/determinar

ADN genómico de mínimo 10 cepas Determinar resultado de
Inclusividad
de Brucella. detección por PCR
ADN genómico de cepas de
lactobacilos, enterobacterias u otras Determinar resultado de
Exclusividad
especies relevantes de la biota detección por PCR
normal del alimento.
Muestras inoculadas al medio de
cultivo, con al menos 1 UFC de
Brucella ó trabajar con ADN de
Límite de Determinar resultado de
concentración conocida (ng/µL) y
detección detección por PCR
realizar diluciones decimales. Ensayos
independientes realizados por
sextuplicado
Análisis por PCR de 6 Muestras
independientes para caracterizarlas
como negativas. Fortificar el ADN
Determinar resultado de
Repetibilidad genómico con el ADN de referencia y
repetibilidad por PCR
correr la PCR. Ensayos
independientes realizados por
sextuplicado.
Mismas indicaciones del parámetro
Precisión anterior únicamente se cambia un Determinar resultado de
intermedia factor (diferente analista o diferente precisión intermedia por PCR
día o diferente termociclador etc.
5.4 Criterio 4.-Criterio de aceptación
Parámetro Resultado esperado

Inclusividad 100 % de cepas detectada para el género Brucella

77
Revisión 3
Parámetro Resultado esperado
Exclusividad 100 % de cepas no detectadas para el género Brucella
Límite de El nivel menor donde se obtiene un porcentaje de al menos 95% de
detección resultados detectados para el género Brucella
Resultados positivos en al menos un 95 % de las ocasiones. Por lo tanto,
Repetibilidad
el porcentaje de resultados falsos negativos debe ser del 5 % o menos.
Resultados positivos en al menos un 95 % de las ocasiones. Por lo
Precisión
tanto, el porcentaje de resultados falsos negativos debe ser del 5 % o
intermedia
menos.
5.5 Criterio 5.-Expresión de resultados

Reportar el resultado de detección de Brucella spp. en leche y sus productos y derivados
por PCR punto final o tiempo real como detectada o no detectado con base al límite de
detección determinado.
5.6 Criterio 6.- Protocolo de confirmación
Elaborar un protocolo que incluya lo siguiente:
Título Protocolo de confirmación de método… (clave interna).
Considerar los parámetros de desempeño a evaluar y el analito a
Objetivo
determinar.
Alcance
que este aplicará.
Elaborar un diagrama de flujo con la metodología empleada para
Método de ensayo cuantificar el analito. Debe indicar el paso analítico donde se
realice la fortificación.
Indicar la cantidad, lote o procedencia, forma de
Muestras almacenamiento. Describir la fortificación de blanco de muestra y
el paso analítico en que se llevará a cabo.
Equipo Descripción general del equipo a utilizar
Indicar nombre y características generales de todos los reactivos a
Reactivos utilizar incluyendo sustancias de referencia y de control. Describir
de manera general la preparación de disoluciones de trabajo.
Desarrollo Describir paso a paso las instrucciones para ejecutar los
experimental experimentos de evaluación de los parámetros de verificación
Propuesta de formato de registro para vaciado de resultados de
Resultados
cada parámetro de verificación a ensayar.
Criterios de Presentar en forma de tabla los criterios de aceptación que se

78
Revisión 3
aceptación busca satisfacer. Indicar la referencia bibliográfica utilizada, si
aplica
Nota: El protocolo debe incluir firmas de quien elaboró, revisó y aprobó.
5.7 Criterio No.7.- Informe de verificación
Elaborar un informe de resultados que incluya lo siguiente:

Título Informe de confirmación de método (clave interna).
Considerar los parámetros de desempeño a evaluar y el analito a
Objetivo
determinar.
Indicar el nombre de la metodología y la matriz o matrices en las que
Alcance
este aplicará.
Método de Elaborar un diagrama de flujo con la metodología empleada para
ensayo cuantificar el analito
Indicar la cantidad, lote o procedencia, forma de almacenamiento.
Muestras Describir la fortificación de blanco de muestra y el paso analítico en que
se llevó a cabo
Equipo Descripción detallada de las características del equipo utilizado
Indicar nombre y características detalladas de todos los reactivos
Reactivos utilizados incluyendo sustancias de referencia y de control. Describir de
manera detallada la preparación de disoluciones de trabajo.
Desarrollo Describir paso a paso las instrucciones de los experimentos ejecutados
experimental para la evaluación de los parámetros de confirmación
Formato de registro con los resultados obtenidos incluyendo fechas de
Resultados
análisis, analista (s), matriz, etc.
Análisis de Presentar en forma de tabla los criterios de evaluación considerados y los
resultados resultados obtenidos para los mismos con observaciones
Revisar las actividades realizadas, la revisión bibliográfica en relación al
tema y los resultados obtenidos. Explicar resultados anómalos e
Discusión
incorporar observaciones relevantes que apoyen la autocrítica de los
datos obtenidos o las decisiones tomadas.
Conclusiones Enunciar si se alcanzaron los objetivos esperados
Bibliografía Citar los documentos revisados y utilizados en el protocolo e informe
Los que apliquen para dar evidencia en su ejecución: datos crudos
Anexos obtenidos, copias de certificados de análisis de reactivos, de servicio a
equipos, etc.
Nota 4: El informe de resultados debe incluir firmas de quien elaboró, revisó y aprobó. Asimismo,
un índice o contenido con paginación.

79
Revisión 3
Documentos Clave
Método de prueba para la detección de Brucella spp. en leche y
6.1 CCAYAC-M-201
sus productos y derivados por PCR
Método de prueba para la detección de Brucella spp. en leche y
6.2 CCAYAC-M-353
sus productos y derivados por PCR en tiempo real
7. BIBLIOGRAFÍA.
Documentos
Guidelines on performance criteria and validation of methods for detection,
7.1 identification and quantification of specific DNA sequences and specific proteins in
foods. Codex alimentarius. CAC/GL 74-2010.
Manual de Bioseguridad en el Laboratorio. Organización Mundial de la Salud.
7.2
Tercera edición. 2005.
8. ANEXOS.
No aplica.

80
Revisión 3
Documento Técnico de validez para el aislamiento e
identificación de amebas de vida libre en aguas de uso
recreativo

81
Revisión 3
Documento Técnico de validez para el aislamiento e identificación de amebas de vida
libre en aguas de uso recreativo
1. OBJETIVO
Establecer los requisitos técnicos mínimos para dar validez al aislamiento e

identificación de amebas del género Acanthamoeba spp y Naegleria spp en aguas
de uso recreativo.
2. ALCANCE
Aplica a los siguientes productos y método de prueba:

Aislamiento e identificación de
amebas del género Agua provenientes de albercas o balnearios.
Acanthamoeba spp y
Naegleria spp
3. DEFINICIONES
3.1 Acanthamoeba spp, a uno de los protistas del género Amoebozoa, más comunes
del suelo y también frecuentes en agua dulce y otros hábitats. Las células son
pequeñas, usualmente de 15 a 35 μm de longitud y de forma oval o triangular
cuando se mueven. Presentan un trofozoíto con capacidad de alimentarse y
replicarse, que, en condiciones desfavorables, como en un medio anaerobio, se
transforma en un quiste latente que puede soportar temperaturas extremas (de -
20 a 56 °C), la desinfección y la desecación
3.2 Naegleria spp, al género formado por ameboflagelados de vida libre ampliamente
distribuidos en el medio ambiente. Tienen tres estadios: trofozoíto, flagelado y
quiste. El trofozoíto (de 10 a 20 μm) se desplaza gracias a la emisión explosiva de
seudópodos, se alimenta de bacterias y se reproduce mediante fisión binaria.
Puede transformarse en flagelado, un estadio que presenta dos flagelos anteriores.
El flagelado no se divide, sino que revierte al estado de trofozoíto. En condiciones
adversas, el trofozoíto se transforma en un quiste circular (de 7 a 15 μm de
diámetro) resistente a tales condiciones.
3.3 Verificación de la prueba, a la evidencia objetiva que demuestre que este
método ha sido realizado en condiciones óptimas y en concordancia con la
normativa vigente.

82
Revisión 3
5. CRITERIOS
5.1 Criterio No. 1.- Disposiciones generales
Los laboratorios que implementen el método para el aislamiento e identificación de los

géneros Acanthamoeba spp y Naegleria spp en muestras de agua para uso recreativo,
deberán aplicar las siguientes consideraciones:
 Los equipos empleados para esta determinación deberán estar incluidos en el

programa de mantenimiento correctivo y preventivo del laboratorio.
 La campana de flujo laminar e incubadoras deben ser calificadas
operacionalmente.
 Los termómetros utilizados deben estar calibrados y verificados
 Revisar la fecha de caducidad de los medios de cultivo utilizados. Evitar el uso de
medios de cultivo caducos.
 La cepa de E. coli deberá estar pura y fenotípicamente caracterizada.
 Mostrar evidencia objetiva de todos los puntos anteriores.
5.2 Criterio No. 2.- Método analítico
La prueba tendrá validez si y sólo si,
 Se cumple en su totalidad con el Criterio No.1

 El analista ha sido capacitado en el método y se muestran evidencias objetivas
de este entrenamiento.
 El analista posee dominio del método y habilidad para diferenciar entre los
trofozoitos de Acanthamoeba spp y Naegleria spp.
5.3 Criterio No. 3.- Expresión de resultados
Dependiendo de las características del trofozoito encontrado en las placas de agar

NN/E. coli reportar como:
 Positivas al género Acanthamoeba spp

 Positivas al género Naegleria spp

83
Revisión 3
 Cuando no hubo desarrollo de trofozoitos informar como ausente
No aplica
7. BIBLIOGRAFÍA.
Documentos
Requisitos Generales para la Competencia de los laboratorios de ensayo y calibración
7.1
NMX-EC-17025-IMNC-2018.
Manual de Bioseguridad en el Laboratorio. Organización Mundial de la Salud. Tercera
7.2
edición. 2005.
Standard Methods for the Examination of Water and Waste Water. 9-168. 21st
7.3
Edition. 2005.
8. ANEXOS.
No aplica

84
Revisión 3
Documento Técnico de verificación metrológica de
balanzas

85
Revisión 3
Documento Técnico de verificación metrológica de balanzas
1. OBJETIVO
Establecer los criterios para llevar a cabo la verificación metrológica de balanzas a

través de la estimación del error de medición.
2. ALCANCE
Aplica a las siguientes balanzas:
Tipo de balanza Resolución

Microbalanza 0.000001 g
Semi-micro balanza 0.00001 g
Balanza analítica 0.0001 g
A 0.001 g
Balanza granataria B 0.01 g
C 0.1 g
3. DEFINICIONES
3.1 Clase de exactitud, a la designación de clase de una pesa o serie de pesas las cuales
cumplen con ciertas características metrológicas tales como forma, dimensiones,
calidad de la superficie, valor nominal, propiedades magnéticas y error máximo
permisible.
3.2 Excentricidad, al error relacionado con las variaciones en la posición de las pesas en
el platillo de la balanza.
3.3 Linealidad, a la capacidad que tiene una balanza de seguir una relación lineal entre
la carga depositada y el valor de medida indicado.
3.4 Masa nominal, a la masa especificada por el fabricante y usada para la identificación
de la pesa.
3.5 Repetibilidad, a la capacidad de la balanza de proporcionar el mismo resultado en
distintos pesajes con una misma carga en las mismas condiciones de medición
3.6 Sesgo de medida, a la diferencia entre la masa registrada por la balanza y la masa
nominal de la pesa patrón.
3.7 Verificación metrológica, al procedimiento de prueba aplicado a un instrumento
de medición para demostrar consistencia en su respuesta.

86
Revisión 3
Los presentes criterios deben ser aplicados por los integrantes de la Red Nacional
de Laboratorios de Salud Pública, los Laboratorios de Prueba Terceros Autorizados
ante la COFEPRIS y verificadores.
5. CRITERIOS
5.1 Criterio No. 1.- Consideraciones generales
5.1.1 Para el uso de la balanza se deben seguir las instrucciones establecidas por el
fabricante en el manual de operación.
5.1.2 La verificación metrológica de la balanza debe ser llevada a cabo en el área donde
se encuentra instalado el instrumento para su uso.
5.1.3 La verificación metrológica se lleva a cabo conforme a lo siguiente:
Tipo de verificación Frecuencia Característica metrológica

Error de medición contra
En uso El día de uso de la balanza
una pesa patrón
Intermedia Cada 6 meses Repetibilidad
Excentricidad, repetibilidad
Completa Anual
y linealidad.
5.1.4 En la verificación metrológica intermedia se lleva a cabo la prueba de repetibilidad

efectuando 5 pesadas de una masa aproximada al 50 % de la capacidad máxima de
la balanza, empleando siempre la misma pesa y de preferencia el mismo analista.
5.1.5 La verificación metrológica intermedia se utiliza como un criterio para prolongar
los intervalos de calibración de la balanza a un máximo de 3 años. Para ello se lleva
a cabo una prueba de F, con el fin de contrastar diferencias significativas en los
datos obtenidos.
5.1.6 La comprobación de la prueba se establece para constatar la veracidad de las
hipótesis establecidas:
 Hipótesis nula, Ho= no existe diferencia significativa en la varianza del peso
obtenido en la balanza en la masa patrón seleccionada a través del tiempo.
 Hipótesis alterna, H1= Existe diferencia significativa en la varianza del peso
obtenido en la balanza en la masa patrón seleccionada a través del tiempo.
5.1.7 Si no se cumplen con los criterios de aceptación establecidos, proceder como
sigue:

87
Revisión 3
Tipo de verificación Acción
Evaluar las causas y repetir la prueba. De prevalecer la
En uso
desviación realizar la verificación completa
Intermedia Efectuar la verificación completa
Completa Considerar la calibración con un organismo externo
5.2 Criterio No. 2.- Pesas patrón

Las pesas patrón utilizadas en la verificación deben:
5.2.1 Cumplir con las especificaciones establecidas en el anexo 8.1 Errores máximos
permisibles para pesas.
5.2.2 Ser calibradas anualmente y contar con informe de calibración vigente y trazable a
patrones nacionales o internacionales.
5.2.3 Ser claramente identificadas y almacenadas en un ambiente libre de polvo.
5.2.4 Ser manipuladas con cuidado y con el uso de guantes o pinzas.
5.3 Criterio No. 3.- Preparación de la balanza

5.3.1Colocar las pesas patrón cerca de la balanza a verificar por un tiempo mínimo de 30
minutos, con el fin de exponerlas a las mismas condiciones ambientales y alcanzar
el equilibrio térmico
5.3.2 Encender la balanza y dejar estabilizar por un tiempo no menor de 30 minutos.
Ajustar a una lectura de cero.
5.3.3 Si la balanza dispone del modo de calibración interna, llevarla a cabo de forma
periódica conforme a lo establecido en las instrucciones del fabricante.
5.4 Criterio No. 4.- Verificación metrológica en uso

5.4.1 Realizar el día de uso de la balanza y antes de efectuar las pesadas de rutina (solo
aplica para balanzas que son empleadas durante el desarrollo del método
analítico).
5.4.2 Seleccionar una pesa patrón cuya masa este dentro del intervalo normal de uso de
la balanza.
5.4.3 Efectuar una sola pesada en el centro del plato de la balanza. Registrar las masas
en g.
5.5 Criterio No. 5.- Excentricidad

5.5.1 Seleccionar una pesa patrón cuya masa sea aproximadamente el 30 % del valor de
la capacidad máxima de la balanza.

88
Revisión 3
5.5.2 Efectuar 5 pesadas en diferentes posiciones del plato de la balanza como se
muestra en la siguiente figura:
5.5.3 No se debe tarar la balanza antes o durante las pesadas. Registrar las masas
individuales en g
5.5.4 Obtener la masa promedio ( y la desviación estándar ( de las masas registradas.
5.5.5 Calcular la de desviación estándar relativa (RSDr).
5.6 Criterio No. 6.- Sesgo de medida

5.6.1 Tarar la balanza.
5.6.2 Seleccionar 3 pesas patrón cuyas masas sean aproximadamente el 5%, 50% y 100 %
del valor de la capacidad máxima de la misma.
5.6.3 Efectuar 10 mediciones de cada pesa patrón en el centro de la balanza, sin tarar
entre cada pesada. Registrar las masas individuales en g.
5.6.4 Calcular la masa promedio de cada una de las pesas.
5.6.5 Comparar el valor obtenido contra el error máximo permisible.
5.7 Criterio No. 7.- Repetibilidad

5.7.1 Con los datos registrados en la prueba de sesgo de medida, obtener la desviación
estándar (
5.7.2 Calcular el %RSDr de cada una de las series de 10 datos.
5.8 Criterio No. 8.- Linealidad

5.8.1 Tarar la balanza.
5.8.2 Seleccionar una serie de 5 pesas patrón cuyas masas cubran el intervalo de uso de
la balanza. Considerar como nivel inferior un valor cercano al peso mínimo y como
nivel superior un valor cercano a la capacidad máxima de la balanza

89
Revisión 3
5.8.3 Efectuar una pesada de cada una de ellas en el centro de la balanza.
5.8.4 Con los datos obtenidos y mediante un análisis de mínimos cuadrados elaborar un
gráfico de linealidad utilizando cada una de las masas obtenidas en el eje de las Y
vs las masas nominales en el eje de las X.
5.8.5 Calcular el coeficiente de correlación (r).
5.9 Criterio No. 9.- Informe de resultados

Los resultados obtenidos en la verificación metrológica deben ser reportados en g
conforme a los siguientes formatos:
Tipo de verificación Formato

CCAYAC-F-381 “Verificación metrológica en uso de
En uso
balanzas”.
CCAYAC-F-753 “Verificación metrológica intermedia de
Intermedia
balanzas”.
CCAYAC-F-754 “Verificación metrológica completa de
Completa
balanzas”.
5.10 Criterio No. 10.- Requerimientos metrológicos
Característica metrológica Criterio de aceptación

a) Error de ± 0.10 % con respecto a la masa
nominal de la pesa patrón utilizada (para masas
mayores a 500 mg)
Verificación metrológica en uso
b) Error de ± 0.50 % con respecto a la masa
nominal de la pesa patrón utilizada (para masas
menores a 500 mg)
Excentricidad %RSDr ≤ 0.05%
Repetibilidad %RSDr ≤ 0.10%
Linealidad r ≥ 0.99
5.10.1 La veracidad de la hipótesis nula (Ho) en la verificación metrológica intermedia se

demuestra si:
 El valor de Fcalculada ≤ Ftablas
 El valor de probabilidad (p)  0.05

90
Revisión 3
Documentos Clave
6.1 Verificación metrológica en uso de balanzas CCAYAC-F-381
6.2 Verificación metrológica intermedia de balanzas CCAYAC-F-753
6.3 Verificación metrológica completa de balanzas CCAYAC-F-754
7. BIBLIOGRAFÍA.
Documentos
Davidson S., Perkin M., Buckley M., 2004. The Measurement of Mass and Weight.
7.1 Measurement Good Practice Guide No. 71.
http://publications.npl.co.uk/npl_web/pdf/mgpg71.pdf
International Accreditation New Zealand, 2002. Laboratory Balances-Calibration
7.2 Requirements. Technical Guide. First edition
http://www.ianz.govt.nz/resources/documents-2/technical-guides/
International Laboratory Accreditation Cooperation, 2007. Guidelines for the
determination of calibration intervals of measuring instruments. Guidance
7.3
ILAC-G24
http://www.iec-ilac-iaf.org/doc/1007a.pdf
Morris C.E. Fen M.K. 2010. Monograph 4: NMI The Calibration of Weights and
7.4
Balances. Third edition.
National Association of Testing Authorities. General Accreditation Guidance 2018.
User checks and maintenance of laboratory balances.
7.5
https://www.nata.com.au/phocadownload/gen-accreditation-guidance/User-
Checks-and-Maintenance-of-Laboratory-Balances.pdf
OIML-R-111-1, 2004 (E). Weight of clases E1, E2, F1, F2, M1, M1-2, M2, M2-3 and M3.
7.6 Part 1: Metrological and technical requirements
https://www.oiml.org/en/files/pdf_r/r111-1-e04.pdf
OMCL Network of the Council of Europe, 2013. Quality Management Document.
Qualification of equipment. Annex 8: Qualification of Balances. PA/PH/OMCL (12)
7.7
77 7R
https://www.edqm.eu/medias/fichiers/annex_8_qualification_of_balances.pdf
Scorer T., Perkin M. and Buckley M., 2004. Weighing in the Pharmaceutical
Industry. Measurement Good Practice Guide No. 70
7.8
http://resource.npl.co.uk/docs/science_technology/mass_force_pressure/clubs_grou
ps/instmc_weighing_panel/pharmaweigh.pdf
Sutton C.M., Robinson J.E. Reid G.F and Clarkson M.T., 2018. Assuring the Quality of
7.9
Weighing Results. MSL Technical Guide 12. Version 6
Sutton C.M., Robinson J.E. Reid G.F and Clarkson M.T., 2018. Calibrating Balances.
7.10
MSL Technical Guide 25. Version 6

91
Revisión 3
Documentos
The United States Pharmacopoeia, 2019. 41 Balances, 1251 Weighing on an
7.11
Analytical Balance. Ed. 42.
United Kingdom Accreditation Service (UKAS), 2015. In-house Calibration and Use
of Weighing Machines. LAB 14
7.12
https://www.ukas.com/download/publications/publications-relating-to-laboratory-
accreditation/LAB%2014%20-%20Edition%205%20-%20July%202015.pdf
8. ANEXOS.
Anexo 1.- Error máximo permisible para pesas (± en mg)

Anexo 2.- Fórmulas estadísticas
Anexo 1
Error máximo permisible para pesas (± en mg)
Masa nominal
Clase E2 Clase F1 Clase F2
5 kg 8.0 25 80
2 kg 3.0 10 30
1 kg 1.6 5.0 16
500 g 0.8 2.5 8.0
200 g 0.3 1.0 3.0
100 g 0.16 0.5 1.6
50 g 0.10 0.3 1.0
20 g 0.08 0.25 0.8
10 g 0.06 0.20 0.6
5g 0.05 0.16 0.5
2g 0.04 0.12 0.4
1g 0.03 0.10 0.3
500 mg 0.025 0.08 0.25
200 mg 0.020 0.06 0.20
100 mg 0.016 0.05 0.16
50 mg 0.012 0.04 0.12
20 mg 0.010 0.03 0.10
10 mg 0.008 0.025 0.08
5 mg 0.006 0.020 0.06
2 mg 0.006 0.020 0.06
1 mg 0.006 0.020 0.06

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Revisión 3
OIML-R-111-1, 2004 (E). Weight of clases E1, E2, F1, F2, M1, M1-2, M2, M2-3 and M3. Part 1:
Metrological and technical requirements
Anexo 2
Fórmulas estadísticas
Media
Desviación estándar
Varianza
Desviación estándar relativa
Coeficiente de correlación
Dónde:
Fcalculada X1= Semestre 1
X2= Semestre 2
n= número de mediciones= 5
m= número de grupos= 2
L= Grados de libertad del numerador
(semestre)=1
J= Grados de libertad del denominador
(repeticiones)= 8

93
Revisión 3
material volumétrico de vidrio

94
Revisión 3
Documento Técnico de verificación metrológica de material volumétrico de vidrio
1 OBJETIVO.
Establecer los criterios para llevar a cabo la verificación metrológica de material

volumétrico por método gravimétrico, a través de la estimación del error de medición del
volumen calculado en uno o más puntos.
2 ALCANCE.
Material Volumen
Matraz volumétrico 1 a 5000 mL
Probeta graduada 5 a 2000 mL
Pipeta volumétrica 0.5 a 100 mL
Bureta 1 a 100 mL
Cuyos volúmenes tengan un efecto significativo en la exactitud de la prueba.
3 DEFINICIONES.
3.1 Error máximo permisible, al valor extremo superior o inferior permitido para la
desviación del volumen contenido o vaciado con respecto al volumen nominal del
instrumento volumétrico.
3.2 Verificación metrológica, a la aportación de evidencia objetiva de que un elemento
satisface los requisitos especificados.
3.3 Volumen nominal, al volumen máximo especificado por el fabricante y usado para
identificación del intervalo de medición.
3.4 Volumen vaciado, al volumen de líquido descargado por un instrumento
volumétrico.
4 RESPONSABILIDADES.
5 CRITERIOS
5.1 Criterio No. 1.- Clasificación del material volumétrico

95
Revisión 3
Matraz volumétrico
Contenido (In) Probeta graduada
Picnómetro con termómetro
Pipeta volumétrica
Vaciado (Ex)
Bureta
5.2 Criterio No. 2.- Características del material volumétrico
5.2.1 La superficie del vidrio debe estar limpia.

5.2.2 No debe presentar estrellamiento o roturas.
5.2.3 Las graduaciones e inscripciones deben ser legibles.
5.2.4 Las puntas de las pipetas y buretas no deben estar dañadas.
5.2.5 La llave de la bureta debe tener cierre hermético.
5.3 Criterio No. 3 Consideraciones generales
5.3.1 El instrumento volumétrico y el agua de prueba deben ser previamente

atemperados por un periodo mínimo de 1 h en el área donde se lleva a cabo la
verificación.
5.3.2 La temperatura del agua y presión del aire deben ser registradas.
5.3.3 Si no se dispone de un barómetro para la medición de la presión del aire local, el
valor puede obtenerse llamando al centro meteorológico de la región o por consulta
en su sitio web. Debe expresarse en hPa.
5.3.4 La verificación del material volumétrico se lleva a cabo por triplicado y con respecto
a su volumen nominal
5.3.5 El volumen del material volumétrico es expresado a 20 °C.
5.3.6 El error calculado en los volúmenes de contenido o vaciado según corresponda,
debe ser menor o igual al error máximo permisible establecido en el numeral 5.11.
5.3.7 Se recomienda que el material volumétrico no se someta a una temperatura por
encima de 180 ° C.
5.3.8 La verificación metrológica del material volumétrico de vidrio debe ser programada
utilizando el formato CCAYAC-F-484 vigente. Los intervalos iniciales de verificación
no deben exceder de un año.
5.3.9 La frecuencia de la verificación puede extenderse hasta por tres años, si en tres años
consecutivos se cumplen con los criterios de aceptación establecidos.
5.3.10 Si se cuenta con un certificado de calibración emitido por el fabricante, considerarlo
como la verificación inicial.

96
Revisión 3
5.4 Criterio No. 4.- Equipo y materiales requeridos
Equipo Volumen de prueba Resolución

100 µL  V ≤ 10 mL 0.0001 g
10 mL  V  1000 mL 0.001
Balanza verificada y calibrada
1000 mL ≤ V ≤ 2000 mL 0.01
V  2000 mL 0.1
5.4.1 Termómetro verificado y calibrado que cumpla con un error máximo de 0.2 °C.
5.4.2 Matraz volumétrico de vidrio con tapón, utilizado como reservorio. El volumen
nominal depende del volumen de líquido a ser medido.
5.4.3 Agua mínimo grado 3.
5.5 Criterio No. 5.- Método gravimétrico
Para la verificación metrológica se deben seguir estos pasos generales:
5.5.1 Identificar el material.

5.5.2 Medir la temperatura inicial del agua (Ti).
5.5.3 Pesar el material volumétrico o el reservorio vacíos (P1) según corresponda y tarar la
balanza. Llenar el instrumento volumétrico o dispensar el líquido de prueba
lentamente hacia el reservorio, según corresponda. Registrar la masa (P2).
5.5.4 Alternativamente, se pueden efectuar dos pesadas, una referida al material
volumétrico o reservorio vacío (P1) y otra al material volumétrico o reservorio lleno
(P2).
5.5.5 Repetir el llenado o dispensado del líquido de prueba dos veces más para cada
volumen de prueba.
5.5.6 Medir la temperatura del agua nuevamente (Tf).
5.5.7 Calcular la temperatura promedio del agua y redondear a 1°C.
Ti  Tf
Tprom 
2
5.5.8 Registrar los tres pesos individuales.

5.5.9 Seleccionar el factor de Z correspondiente a la temperatura promedio calculada
utilizando la tabla del Anexo 8.1.
5.6 Criterio No. 6.-Cálculo del volumen a 20 °C
V20C  (P2 - P1 ) * Z

97
Revisión 3
Dónde:
Z= Factor de Z (µL/mg) a la presión del aire registrada y a la temperatura promedio
del agua calculada.
P2= Peso del material o reservorio llenos
P1= Peso del material o reservorio vacío. Si se emplea la tara de la balanza, este valor
es igual a cero.
5.7 Criterio No. 7.- Cálculo del error

Error  V20C  Vn
Dónde:
V20°C= Volumen promedio a 20°C
Vn = Volumen verificado
Expresar el resultado conforme al número de decimales establecidos en las tablas

de errores máximos permisibles
5.8 Criterio No. 8.- Consideraciones para matraces volumétricos y probetas
5.8.1 Deben ser llenados a una distancia aproximada de 5 mm por encima de la marca
del volumen nominal.
5.8.2 Las paredes del material por arriba de la marca no deben estar humedecidas. Secar
de ser necesario.
5.8.3 El aforo final debe ser hecho con la ayuda de una pipeta Pasteur de preferencia de
plástico.
5.9 Criterio No. 9.- Consideraciones para pipetas volumétricas.
5.9.1 Deben ser sujetadas en posición vertical y llenada a una distancia aproximada de 5
mm por arriba de la marca del volumen nominal. El líquido remanente de las
paredes exteriores debe ser removido.
5.9.2 El ajuste final del menisco debe hacerse por liberación del líquido hasta la marca.
5.9.3 La liberación del volumen de prueba al reservorio debe hacerse con un flujo
continuo, con la punta de la pipeta en contacto con las paredes internas del
reservorio.
5.10 Criterio No. 10.- Consideraciones para buretas
5.10.1 Deben ser sujetadas en posición vertical y llenada a una distancia

aproximada de 5 mm por encima de la marca del volumen nominal. El líquido
remanente de las paredes exteriores debe ser removido.

98
Revisión 3
5.10.2 La llave de paso y el interior de la bureta debe estar libres de burbujas de
aire.
5.10.3 El ajuste del menisco debe hacerse por liberación del líquido hasta la
marca.
5.10.4 La liberación del volumen de prueba seleccionado, debe hacerse con un
flujo continuo sin tocar las paredes internas del reservorio, hasta que el menisco
esté aproximadamente 5 mm por arriba de la línea de graduación a ser verificada.
Finalmente, fijar el menisco a la línea que corresponde al volumen de prueba.
Eliminar cualquier gota adherida tocando la punta de la bureta con las paredes del
reservorio en un ángulo aproximado de 30 °.
5.10.5 La verificación debe llevarse a cabo a 20%, 40%, 60%, 80% y 100% de su
volumen nominal, cada nivel por triplicado. El error máximo permisible que aplica
para todos los niveles es el correspondiente al del volumen nominal (100%).
5.11 Criterio No. 11.- Evaluación de la conformidad
Los valores obtenidos en los cálculos del error de medición deben ser comparados, según
corresponda, contra los errores máximos permisibles establecidos en las siguientes tablas
y éstos, no deben exceder los valores especificados.
5.11.1 Matraces volumétricos

Error máximo permisible
Volumen nominal
(± mL)
mL
Vidrio Polipropileno
1 0.025 0.050
2 0.025 0.050
5 0.025 0.050
10 0.025 0.050
20 0.040 0.080
25 0.040 0.080
50 0.060 0.120
100 0.100 0.200
250 0.150 0.300
500 0.250 0.500
1000 0.400 0.800
2000 0.600 1.200
5000 1.200 2.400
ISO 1042:1998 Laboratory glassware-One Mark Volumetric flasks

99
Revisión 3
5.11.2 Probetas graduadas
Volumen nominal Error máximo permisible

mL (± mL)
5 0.05
10 0.1
25 0.25
50 0.5
100 0.5
250 1
500 2.5
1000 5
2000 10
ISO 4788:2005 Laboratory glassware-Graduated measuring cylinders
5.11.3 Pipetas volumétricas

mL (± mL)
0.5 0.005
1 0.008
2 0.010
5 0.015
10 0.02
20 0.03
25 0.03
50 0.05
100 0.08
ISO 648-2008 Laboratory glassware-Single-volume pipettes
5.11.4 Buretas

mL (± mL)
1 0.006
2 0.01
5 0.01
10 0.02
25 0.03
50 0.05
100 0.10

100
Revisión 3
ISO 385:2005 Laboratory glassware-Burettes
Los resultados obtenidos en la verificación deben ser reportados en el CCAYAC-F-146

“Verificación metrológica matraces, pipetas y probetas” o CCAYAC-F-147 “Verificación
metrológica de buretas” según corresponda.
6 DOCUMENTOS DE REFERENCIA.
Documentos Clave
Instructivo de operación para manejo y uso de las balanzas
6.1 CCAYAC-I-004
analíticas
6.2 Cronograma de verificación de material volumétrico CCAYAC-F-484
7 BIBLIOGRAFÍA.
Documentos
Blaubrand, 2015. Aparatos volumétricos y picnómetros. Instrucciones de calibrado
7.1 (SOP)
http://www.brand.de/fileadmin/user/pdf/SOPs/SOP_BLAUBRAND_ES.pdf
ISO 1042: 1998. Laboratory glassware – One Mark volumetric flasks. Confirmed in
7.2
2017
7.3 ISO 385:2005. Laboratory glassware- Burettes. Confirmed in 2014
ISO 3696:1987. Water for analytical laboratory use-Specification and test methods.
7.4
Confirmed in 2018
ISO 4787:2010. Laboratory glassware- Volumetric instruments- Methods for testing
7.5
of capacity and for use. Confirmed in 2017
ISO 4788:2005 Laboratory glassware – Graduated measuring cylinders. Confirmed
7.6
in 2014
7.7 ISO 648: 2008. Laboratory glassware- Single – volume pipettes. Confirmed in 2017
OMCL Network of the Council of Europe, 2016. Quality Management Document.
Management of Volumetric Glassware. PA/PH/OMCL (15) 16 3R.
7.8
https://www.edqm.eu/sites/default/files/quality_management_guideline_on_manage
ment_of_volumetric_glassware_2016.pdf
United Kingdom Accreditation (UKAS), 2019. Traceability: Volumetric Apparatus.
LAB 15. Edition 3.
7.9
https://www.ukas.com/download/publications/publications-relating-to-laboratory-
accreditation/LAB-15-Edition-3-April-2019.pdf

101
Revisión 3
8 ANEXOS
8.1 Factor de Z (µL/mg)
Presión del aire

Temperatura hPa
°C
850 880 910 940 970 1000 1030 1060
15.0 1.00185 1.00188 1.00191 1.00195 1.00198 1.00201 1.00204 1.00207
15.2 1.00188 1.00191 1.00194 1.00197 1.00201 1.00204 1.00207 1.00210
15.4 1.00191 1.00194 1.00197 1.00200 1.00203 1.00207 1.00210 1.00213
15.6 1.00194 1.00197 1.00200 1.00203 1.00206 1.00209 1.00213 1.00216
15.8 1.00196 1.00200 1.00203 1.00206 1.00209 1.00212 1.00216 1.00219
16.0 1.00199 1.00203 1.00206 1.00209 1.00212 1.00215 1.00218 1.00222
16.2 1.00202 1.00206 1.00209 1.00212 1.00215 1.00218 1.00221 1.00225
16.4 1.00205 1.00209 1.00212 1.00215 1.00218 1.00221 1.00225 1.00228
16.6 1.00209 1.00212 1.00215 1.00218 1.00221 1.00224 1.00228 1.00231
16.8 1.00212 1.00215 1.00218 1.00221 1.00224 1.00228 1.00231 1.00234
17.0 1.00215 1.00218 1.00221 1.00224 1.00228 1.00231 1.00234 1.00237
17.2 1.00218 1.00221 1.00225 1.00228 1.00231 1.00234 1.00237 1.00240
17.4 1.00222 1.00225 1.00228 1.00231 1.00234 1.00237 1.00241 1.00244
17.6 1.00225 1.00228 1.00231 1.00234 1.00238 1.00241 1.00244 1.00247
17.8 1.00228 1.00231 1.00235 1.00238 1.00241 1.00244 1.00247 1.00250
18.0 1.00232 1.00235 1.00238 1.00241 1.00244 1.00247 1.00251 1.00254
18.2 1.00235 1.00238 1.00241 1.00245 1.00248 1.00251 1.00254 1.00257
18.4 1.00239 1.00242 1.00245 1.00248 1.00251 1.00254 1.00258 1.00261
18.6 1.00242 1.00245 1.00249 1.00252 1.00255 1.00258 1.00261 1.00264
18.8 1.00246 1.00249 1.00252 1.00255 1.00258 1.00262 1.00265 1.00268
19.0 1.00249 1.00253 1.00256 1.00259 1.00262 1.00265 1.00268 1.00272
19.2 1.00253 1.00256 1.00259 1.00263 1.00266 1.00269 1.00272 1.00275
19.4 1.00257 1.00260 1.00263 1.00266 1.00270 1.00273 1.00276 1.00279

102
Revisión 3
Presión del aire
Temperatura hPa
°C
850 880 910 940 970 1000 1030 1060
19.6 1.00261 1.00264 1.00267 1.00270 1.00273 1.00276 1.00280 1.00283
19.8 1.00265 1.00268 1.00271 1.00274 1.00277 1.00280 1.00283 1.00287
20.0 1.00268 1.00272 1.00275 1.00278 1.00281 1.00284 1.00287 1.00290
20.2 1.00272 1.00275 1.00279 1.00282 1.00285 1.00288 1.00291 1.00294
20.4 1.00276 1.00279 1.00283 1.00286 1.00289 1.00292 1.00295 1.00298
20.6 1.00280 1.00283 1.00287 1.00290 1.00293 1.00296 1.00299 1.00302
20.8 1.00284 1.00287 1.00291 1.00294 1.00297 1.00300 1.00303 1.00306
21.0 1.00288 1.00292 1.00295 1.00298 1.00301 1.00304 1.00307 1.00310
21.2 1.00292 1.00296 1.00299 1.00302 1.00305 1.00308 1.00311 1.00314
21.4 1.00297 1.00300 1.00303 1.00306 1.00309 1.00312 1.00315 1.00319
21.6 1.00301 1.00304 1.00307 1.00310 1.00313 1.00316 1.00320 1.00323
21.8 1.00305 1.00308 1.00311 1.00314 1.00318 1.00321 1.00324 1.00327
22.0 1.00309 1.00313 1.00316 1.00319 1.00322 1.00325 1.00328 1.00331
22.2 1.00314 1.00317 1.00320 1.00323 1.00326 1.00329 1.00332 1.00336
22.4 1.00318 1.00321 1.00324 1.00327 1.00331 1.00334 1.00337 1.00340
22.6 1.00322 1.00326 1.00329 1.00332 1.00335 1.00338 1.00341 1.00344
22.8 1.00327 1.00330 1.00333 1.00336 1.00339 1.00343 1.00346 1.00349
23.0 1.00331 1.00335 1.00338 1.00341 1.00344 1.00347 1.00350 1.00353
23.2 1.00336 1.00339 1.00342 1.00345 1.00348 1.00352 1.00355 1.00358
23.4 1.00341 1.00344 1.00347 1.00350 1.00353 1.00356 1.00359 1.00362
23.6 1.00345 1.00348 1.00351 1.00354 1.00358 1.00361 1.00364 1.00367
23.8 1.00350 1.00353 1.00356 1.00359 1.00362 1.00365 1.00368 1.00372
24.0 1.00354 1.00358 1.00361 1.00364 1.00367 1.00370 1.00373 1.00376
24.2 1.00359 1.00362 1.00365 1.00369 1.00372 1.00375 1.00378 1.00381
24.4 1.00364 1.00367 1.00370 1.00373 1.00376 1.00379 1.00383 1.00386
24.6 1.00369 1.00372 1.00375 1.00378 1.00381 1.00384 1.00387 1.00390
24.8 1.00374 1.00377 1.00380 1.00383 1.00386 1.00389 1.00392 1.00395

103
Revisión 3
Presión del aire
Temperatura
°C
hPa
850 880 910 940 970 1000 1030 1060
25.0 1.00379 1.00382 1.00385 1.00388 1.00391 1.00394 1.00397 1.00400
25.2 1.00383 1.00387 1.00390 1.00393 1.00396 1.00399 1.00402 1.00405
25.4 1.00388 1.00392 1.00395 1.00398 1.00401 1.00404 1.00407 1.00410
25.6 1.00393 1.00397 1.00400 1.00403 1.00406 1.00409 1.00412 1.00415
25.8 1.00398 1.00402 1.00405 1.00408 1.00411 1.00414 1.00417 1.00420
26.0 1.00404 1.00407 1.00410 1.00413 1.00416 1.00419 1.00422 1.00425
26.2 1.00409 1.00412 1.00415 1.00418 1.00421 1.00424 1.00427 1.00430
26.4 1.00414 1.00417 1.00420 1.00423 1.00426 1.00429 1.00432 1.00435
26.6 1.00419 1.00422 1.00425 1.00428 1.00431 1.00434 1.00438 1.00441
26.8 1.00424 1.00427 1.00430 1.00433 1.00437 1.00440 1.00443 1.00446
27.0 1.00430 1.00433 1.00436 1.00439 1.00442 1.00445 1.00448 1.00451
27.2 1.00435 1.00438 1.00441 1.00444 1.00447 1.00450 1.00453 1.00456
27.4 1.00440 1.00443 1.00446 1.00449 1.00452 1.00456 1.00459 1.00462
27.6 1.00446 1.00449 1.00452 1.00455 1.00458 1.00461 1.00464 1.00467
27.8 1.00451 1.00454 1.00457 1.00460 1.00463 1.00466 1.00469 1.00472
28.0 1.00456 1.00460 1.00463 1.00466 1.00469 1.00472 1.00475 1.00478
28.2 1.00462 1.00465 1.00468 1.00471 1.00474 1.00477 1.00480 1.00483
28.4 1.00467 1.00471 1.00474 1.00477 1.00480 1.00483 1.00486 1.00489
28.6 1.00473 1.00476 1.00479 1.00482 1.00485 1.00488 1.00491 1.00494
28.8 1.00479 1.00482 1.00485 1.00488 1.00491 1.00494 1.00497 1.00500
29.0 1.00484 1.00487 1.00490 1.00493 1.00497 1.00500 1.00503 1.00506
29.2 1.00490 1.00493 1.00496 1.00499 1.00502 1.00505 1.00508 1.00511
29.4 1.00496 1.00499 1.00502 1.00505 1.00508 1.00511 1.00514 1.00517
29.6 1.00501 1.00504 1.00508 1.00511 1.00514 1.00517 1.00520 1.00523
29.8 1.00507 1.00510 1.00513 1.00516 1.00519 1.00522 1.00526 1.00529
30.0 1.00513 1.00516 1.00519 1.00522 1.00525 1.00528 1.00531 1.00534
ISO 4787:2010 Laboratory glassware-Volumetric instruments-Methods for testing of capacity and
for use

104
Revisión 3
8.2 Requisitos para el agua grado 3
Parámetro Grado 3
pH a 25°C 5 a 7.5
Conductividad eléctrica máxima ≤ 0.5 mS/m
ISO 3696:1987. Water for analytical laboratory use-Specification and test methods

105
Revisión 3
aparatos volumétricos operados por pistón

106
Revisión 3
Documento Técnico de verificación metrológica de aparatos volumétricos operados
por pistón
1 OBJETIVO
Establecer los criterios para llevar a cabo la verificación metrológica de aparatos

volumétricos operados por pistón, a través de la determinación de los errores aleatorio y
sistemático del volumen calculado por método gravimétrico en uno o más volúmenes
2 ALCANCE
Aplica a los siguientes aparatos operados por pistón en modo manual y electrónico:
Aparato Volumen
Pipetas de pistón unicanal y multicanal 10 µL a 10000 L
Bureta de pistón 1 a 100 mL
Dispensador simple y de liberación múltiple 0.01 mL a 200 mL
Cuyos volúmenes tengan un efecto significativo en la exactitud o en la validez del

resultado de la prueba.
3 DEFINICIONES
3.1 Aparatos volumétricos operados por pistón, a los dispositivos destinados para
aspirar o liberar volúmenes específicos de líquidos; pueden ser operados manual o
automáticamente y son controlados por medios mecánicos, electromecánicos o
electrónicos.
3.2 Bureta de pistón, al aparato diseñado para liberar líquido progresivamente hasta
que el volumen liberado es suficiente para satisfacer criterios analíticos tales
cambio de color, pH, conductividad o polarización.
3.3 Dispensador, al aparato usado para el suministro repetitivo (dispensación) de un
volumen medido del líquido.
3.4 Error aleatorio, a la dispersión de los volúmenes dispensados alrededor de la
media de estos volúmenes. Es expresado como el coeficiente de variación de seis
mediciones.
3.5 Error sistemático, a la diferencia entre el volumen dispensado y el volumen
nominal o volumen seleccionado del aparato volumétrico operado por pistón. Es
expresado como la desviación de la media de seis mediciones con respecto al
volumen nominal o volumen seleccionado.

107
Revisión 3
3.6 Pipeta de pistón, al aparato utilizado para recolectar y liberar líquidos. Pueden ser
de un solo canal o canales múltiples.
3.7 Verificación metrológica, a la aportación de evidencia objetiva de que un
elemento satisface los requisitos especificados.
3.8 Volumen fijo, al que es diseñado y suministrado por el fabricante, para dispensar
un volumen específico y fijo del líquido (definido como el volumen nominal).
3.9 Volumen nominal, al volumen especificado por el fabricante y usado para la
identificación del intervalo de medición. Corresponde al volumen máximo que
puede ser fijado por el usuario y que es especificado por el fabricante.
3.10 Volumen variable, al volumen del líquido que el usuario pueda ajustar para ser
dispensado sobre un intervalo especificado por el fabricante. Para este caso el
volumen nominal es definido como el límite superior del intervalo del volumen
designado por el fabricante.
4 RESPONSABILIDADES
5 CRITERIOS.
5.1 Criterio No. 1.- Clasificación de los aparatos volumétricos operados por pistón
5.1.1 Pipetas de pistón unicanal de volumen fijo

5.1.2 Pipetas de pistón unicanal de volumen variable
5.1.3 Pipetas de pistón multicanal de volumen fijo
5.1.4 Pipetas de pistón multicanal de volumen variable
5.1.5 Buretas de pistón
5.1.6 Dispensadores simples
5.1.7 Dispensadores de liberación múltiple

5.2.1 El personal que realice la actividad descrita en estos criterios debe tener la
competencia para realizarlo y aplicar las Buenas Prácticas de Laboratorio.
5.2.2 Verificar que el aparato operado por pistón se encuentre en condiciones óptimas
de operación (retenga el líquido o no gotee).
5.2.3 La conformidad de los errores máximos permisibles debe ser verificada cada 6
meses ± 20 días hábiles como parte de la rutina de Aseguramiento de Calidad.
5.2.4 Todo el material que se utilice durante la verificación debe ser previamente
atemperado como mínimo durante 2 h en el área donde se realizará la verificación.

108
Revisión 3
5.2.5 Los errores sistemáticos y aleatorios de los aparatos volumétricos de volumen fijo
deben ser verificados en su volumen nominal.
5.2.6 Los errores sistemáticos y aleatorios de los aparatos volumétricos de volumen
variable deben ser verificados a dos volúmenes diferentes:
 En el volumen nominal
 En el volumen mínimo o al 10 % del valor del volumen nominal (el que sea
mayor)
5.2.7 Se deben efectuar 6 mediciones para cada volumen evaluado.
5.2.8 En las pipetas de pistón multicanal, se debe considerar cada canal de forma
independiente.
5.2.9 Expresar los resultados calculados para los errores sistemático y aleatorio conforme
a las cifras significativas establecidos en las tablas de errores máximos permitidos.
5.2.10 Las puntas usadas para la verificación de las pipetas de pistón, deben ser las
mismas que son utilizadas durante el trabajo de rutina del laboratorio.
5.2.11 Los aparatos de pistón de volúmenes nominales menores a 10 µL no se verifican,
éstos deben ser calibrados por una compañía externa acreditada en la norma
NMX/EC/17025 vigente de conformidad con las especificaciones establecidas en la
norma ISO-8655 vigente.
5.2.12 Para la aplicación de estos criterios se deben tomar en cuenta las instrucciones y
las especificaciones técnicas del fabricante.
5.3 Criterio No. 3.- Instrumentos y material requerido

5.3.1 Balanza analítica calibrada y verificada de una resolución apropiada al volumen a
verificar:
Volumen de prueba Resolución

10 µL  V ≤ 100 µL 0.00001 g
100 µL  V ≤ 1000 µL 0.0001 g
1 mL  V ≤ 10 mL 0.0001 g
10 mL  V ≤ 200 mL 0.001 g
5.3.2 Termómetro calibrado y verificado con un error máximo de 1 °C

5.3.3 Recipiente de vidrio con tapa (pesafiltro o matraz).
5.3.4 Agua destilada o desionizada (mínimo grado 3) ver anexo 8.2.
5.4 Criterio No. 4.- Método gravimétrico
5.4.1 Medir la temperatura inicial del agua (Ti).

5.4.2 Pesar el recipiente de vidrio y tarar la balanza.
5.4.3 Dispensar el líquido de prueba lentamente hacia el recipiente de vidrio. Registrar la
masa.

109
Revisión 3
5.4.4 Repetir el dispensado del líquido de prueba 5 veces más para cada volumen de
prueba.
5.4.5 Medir la temperatura del agua nuevamente (Tf).
5.4.6 Calcular la temperatura promedio del agua y redondear a 1°C.
Ti  Tf
Tprom 
2
5.4.7 Registrar los seis pesos individuales y obtener el peso promedio y la desviación
estándar de los valores (sr).
5.4.8 Seleccionar el factor de Z correspondiente a la temperatura promedio calculada,
utilizando la tabla del Anexo 8.1.
5.5 Criterio No. 5.-Cálculo del volumen a 20 °C
Dónde:
Volumen a 20 °C
Peso promedio
Z=Factor de Z a la temperatura promedio calculada.
Sólo para el caso de pipetas de pistón, multiplicar por un factor de 1000 para expresar el
volumen en µL.
5.6 Criterio No. 6.- Cálculo del error sistemático
Dónde:
= error sistemático
= Volumen promedio a 20°C
Vs = Volumen seleccionado
Sólo para el caso de dispensadores y buretas de pistón, multiplicar por un factor de 1000
para expresar el volumen en µL.
5.7 Criterio No. 7.- Cálculo del error aleatorio
Dónde:
= error aleatorio

110
Revisión 3
= desviación estándar de los pesos individuales
= Factor a la temperatura promedio calculada.
Sólo para dispensadores y buretas de pistón, multiplicar por un factor de 1000 para
expresar el error en µL.
5.8 Criterio No. 8.- Consideraciones para pipetas de pistón unicanal
5.8.1 Seleccionar el volumen de prueba.

5.8.2 Colocar la punta seleccionada en la pipeta.
5.8.3 Llenar la punta con el agua y expulsar el líquido a los desechos cinco veces para
alcanzar el equilibrio en la humedad
5.8.4 Reemplazar la punta. Llenarla con agua soltando el pistón lentamente. Retirar la
pipeta del agua de forma vertical. Tocar la punta con las paredes del recipiente de
vidrio.
5.8.5 Expulsar el agua a los desechos para prehumedecer la punta y rellenar como se
explicó anteriormente.
5.8.6 Liberar el contenido de la pipeta hacia el recipiente de vidrio tarado, tocando la
punta con las paredes del recipiente por encima de la superficie del líquido, en un
ángulo aproximado de 30° a 45 ° para eliminar las gotas alrededor del orificio de la
punta.
5.9 Criterio No. 9.- Consideraciones para pipetas de pistón multicanal
5.9.1 Aplican los mismos que para las pipetas unicanal.

5.9.2 Cada canal debe ser considerado como un canal individual y debe ser evaluado y
reportado como tal.
5.10 Criterio No. 10.- Consideraciones para buretas de pistón
5.10.1Cargar la bureta con agua de acuerdo con las especificaciones del fabricante. Esta
debe estar libre de burbujas.
5.10.2 Liberar el agua hacia el reservorio tarado, hasta que el volumen seleccionado es
alcanzado.
5.10.3 Asegurar que el pesado se lleva a cabo hasta que la última gota ha sido liberada.
5.10.4 Cuando se evalúa el volumen inferior, no es necesario reajustar a cero previo a la
siguiente medición.

111
Revisión 3
5.11 Criterio No. 11.- Consideraciones para dispensadores
5.11.1 Efectuar una primera liberación del agua hacia los desechos y limpiar las gotas que
se hayan formado en la boquilla del dispensador. Rellenar el dispensador conforme
a las instrucciones del fabricante.
5.11.2 Para los dispensadores de liberación múltiple, no llevar el pistón a su posición
inicial entre cada uno de los 6 ciclos de prueba si queda suficiente líquido para
liberar la siguiente dosis.
5.11.3 Utilizar Utilizar los 6 volúmenes liberados subsecuentemente dentro del recipiente
de vidrio con tapa para determinar los errores sistemáticos y aleatorios de la
medición.
5.12 Criterio No. 12.- Requisitos metrológicos
5.12.1 Los valores obtenidos en los cálculos de los errores sistemático (numeral 5.6) y
aleatorio (numeral 5.7) deben ser comparados según corresponda, contra los
errores máximos permisibles establecidos en las siguientes tablas y éstos no deben
exceder los valores especificados.
5.12.2 Para los aparatos cuyo valor de volumen no esté considerado en las tablas de
los límites máximos permisibles, se debe aplicar el criterio establecido para el
volumen inmediato superior.
5.12.3 En los aparatos de volumen variable, los límites máximos permisibles para los
errores sistemático y aleatorio del volumen nominal aplican al intervalo completo.
5.12.4 Requisitos metrológicos para pipetas de pistón unicanal de volumen fijo y

variable
Error sistemático Error aleatorio máximo
Volumen nominal (µL)
máximo permisible ( ± µL) Permisible (µL)
10 0.12 0.8
20 0.2 0.1
50 0.5 0.2
100 0.8 0.3
200 1.6 0.6
500 4.0 1.5
1000 8.0 3.0
2000 16.0 6.0
5000 40 15.0
10000 60 30.0
ISO 8655-2:2002. Piston- Operated volumetric apparatus-Part 2: Piston pipettes.

112
Revisión 3
5.12.5 Requisitos metrológicos para pipetas de pistón multicanal de volumen fijo y
variable

Volumen nominal
máximo permisible permisible
(µL)
(± µL) (µL)
10 0.24 0.16
20 0.40 0.2
50 1.0 0.4
100 1.6 0.6
200 3.2 1.2
500 8.0 3.0
1000 16.0 6.0
2000 32 12.0
5000 80 30.0
10000 120 60.0
ISO 8655-2:2002. Piston- Operated volumetric apparatus-Part 2: Piston pipettes.
5.12.6 Requisitos metrológicos para buretas de pistón automáticas

Volumen nominal
(mL)
(±µL) (µL)
≤1 6.0 1.0
2 10 2.0
5 15 5.0
10 20 7.0
20 40 14
25 50 17.5
50 100 25
100 200 30
ISO 8655-3:2002. Piston- Operated volumetric apparatus-Part 3: Piston burettes.
5.12.7 Requisitos metrológicos para buretas de pistón manuales

Volumen nominal
(mL)
(± µL) (µL)
≤1 6.0 1.0
2 10 2.0
5 15 5.0
10 30 10

113
Revisión 3
Volumen nominal
(mL)
(± µL) (µL)
20 40 20
25 50 25
50 100 50
100 200 100
ISO 8655-3:2002. Piston- Operated volumetric apparatus-Part 3: Piston burettes.
5.12.8 Requisitos metrológicos para dispensadores simples

Volumen nominal
(mL)
(± µL) (µL)
0.01 0.2 0.1
0.02 0.4 0.1
0.05 0.75 0.2
0.1 1.5 0.3
0.2 2.0 0.6
0.5 5.0 1.0
1 6.0 2.0
2 12.0 4.0
5 30.0 10.0
10 60.0 20.0
25 150.0 50.0
50 300.0 100
100 600.0 200
200 1200 400
ISO 8655-5:2002. Piston- Operated volumetric apparatus- Part 5: Dispensers
5.12.9 Requisitos metrológicos para dispensadores de liberación múltiple

Volumen nominal
(mL)
(± µL) (µL)
0.01 0.2 0.25
0.02 0.3 0.4
0.05 0.5 0.75
0.1 1.0 1.0
0.2 2.0 2.0
0.5 5.0 3.0

114
Revisión 3
Volumen nominal
(mL)
(± µL) (µL)
1 10 4.0
2 16 8.0
5 30 15
10 50 30
25 125 75
50 250 125
100 500 250
200 1000 500
ISO 8655-5:2002. Piston- Operated volumetric apparatus- Part 5: Dispensers

5.13.1 Los resultados obtenidos de la verificación deben ser reportados en los formatos
“Verificación metrológica de pipeta de pistón unicanal”, “Verificación metrológica
de dispensador y bureta de pistón” o “Verificación metrológica de pipeta de
pistón multicanal” según sea el caso.
5.13.2 Si se obtienen resultados no aprobados en el ensayo de verificación, para los
errores sistemáticos o aleatorios, se debe proceder como sigue:
 Cambiar la punta y verificar que se encuentre suficientemente ajustada.
 Verificar que la rosca del soporte se encuentre ajustada.
 Repetir el ensayo.
5.13.3 Si las correcciones anteriores no solucionan el problema, solicitar la reparación y
posterior recalibración del aparato.
6 DOCUMENTOS DE REFERENCIA.
Documentos Clave
6.1 Verificación metrológica de pipeta de pistón unicanal. CCAYAC-F-152
6.2 Verificación metrológica de pipeta de pistón multicanal CCAYAC-F-158
6.3 Cronograma de verificación de aparatos de pistón CCAYAC-F-483
6.4 Verificación metrológica de dispensadores y buretas de pistón CCAYAC-F-848
7 BIBLIOGRAFÍA
Documentos
Blues J., Bayliss D. and Buckley M. (2004). Measurement Good Practice Guide No. 69:
The Calibration and Use of Piston Pipettes. ISSN 1368-6550. National Physical
7.1
Laboratory, United Kingdom.
http://www.medlabstats.com/QualSysAssist/UKAS-MGP-Guide%2069.pdf

115
Revisión 3
Documentos
Centre Suisse de Contróle de Qualité (2016). Fiche Technique. Vérification des
7.2 pipettes
http://www.cscq.ch/SiteCSCQ/FichierPDF_FR/FT-Pipettes_verification.pdf
General European OMCL Network (NEON) (2018). Quality Management Document.
PA/PH/OMCLL(09) 64 R5. Qualification of Equipment. Annex 6. Qualification of
7.3 piston pipettes.
https://www.edqm.eu/sites/default/files/qualification_of_equipment_annex_6_-
_qualification_of_piston_pipette_paphomcl_09_64_r5.pdf
ISO 3696:1987. Water for analytical laboratory use-Specification and test methods.
7.4
Confirmed in 2018
ISO 8655-1:2002. Piston-operated volumetric apparatus-Part 1: Terminology, general
7.5
requirements and user recommendations
7.6 ISO 8655-2:2002. Piston- Operated volumetric apparatus- Part 2: Piston pipettes
7.7 ISO 8655-3:2002. Piston- Operated volumetric apparatus- Part 3: Piston burettes.
7.8 ISO 8655-5:2002. Piston- Operated volumetric apparatus- Part 5: Dispensers
ISO 8655-6:2002. Piston-operated volumetric apparatus- Part 6: Gravimetric
7.9
methods for the determination of measurement error. Confirmed in 2014
Sutton CM and Reid GF. (2018). Calibrating Piston Pipettes. MSL Technical Guide 30
7.10
www.measurement.govt.nz
8 ANEXOS.
8.1 Factor de corrección de Z (µL/mg)

8.2 Requisitos para el agua grado 3

116
Revisión 3
Anexo 8.1
Factor de corrección de Z (µL/mg)
Temperatura Valor de Z
(°C) (µL/mg)
15 1.0020
16 1.0021
17 1.0023
18 1.0025
19 1.0027
20 1.0029
21 1.0031
22 1.0033
23 1.0035
24 1.0038
25 1.0040
26 1.0043
27 1.0045
28 1.0048
29 1.0051
30 1.0054
ISO 8655-6:2002. Piston-operated volumetric apparatus
Part 6: Gravimetric methods for the determination of measurement error
Anexo 8.2
Requisitos metrológicos del agua grado 3
Característica metrológica Requisito metrológico

pH a 25°C 5 a 7.5
Conductividad eléctrica máxima ≤ 0.5 mS/m
ISO 3696:1987. Water for analytical laboratory use-Specification and test methods

117
Revisión 3
Documento Técnico de verificación o validación interna
de métodos de prueba microbiológicos
(Conforme al Anexo 5.3. del documento CCAYAC-MA-08)

118
Revisión 3
Documento Técnico de verificación o validación interna de métodos de prueba
microbiológicos
(Conforme al Anexo 5.3 del documento CCAYAC-MA-08)
1. OBJETIVO
de prueba microbiológicos por medio de la aplicación de las características de
desempeño y su evaluación frente a los criterios de aceptación previamente establecidos,
a fin de demostrar que es apropiado para el uso previsto
2. ALCANCE
Tipo de método de
Productos
prueba
Detección de microorganismos (Salmonella spp, Listeria
Cualitativo
monocytogenes, etc) en alimentos y agua.
Estimación de cuenta de microorganismos (S. aureus,
Cuantitativos microorganismos aerobios, hongos y levaduras, etc.) en
alimentos y agua
Probabilidad de detección de microorganismos (E. coli,
Número más Probable
coliformes totales, coliformes fecales, Vibrio parahaemolitycus,
(NMP)
etc.) en alimentos y agua.
3. DEFINICIONES
Las establecidas en los criterios generales para la verificación o validación interna de

métodos
Laboratorios de Salud Pública, los laboratorios de prueba Terceros Autorizados ante la

119
Revisión 3
5. CRITERIOS
5.1 Criterio No. 1.- Consideraciones
El laboratorio de microbiología que va a utilizar un método compendiado deberá verificar

la adecuación de tal forma que pueda garantizar que se cumplen con los requisitos del
mismo en las condiciones reales de uso, considerando de forma particular la influencia
de:
 Matrices habitualmente empleadas por el laboratorio

 Microorganismos diana e interferentes
 Analistas que ejecutan los ensayos
 Equipos y condiciones ambientales
 Medios de cultivo y reactivos
5.2 Criterio No. 2.- Clasificación de métodos
Los métodos para propósitos de verificación o validación interna se clasifican como:
Propósito Tipo de Prueba
Análisis microbiológico cuantitativo en:

Microbiología Sanitaria Agua para uso y consumo humano, alimentos perecederos y
no perecederos
5.3 Criterio No. 3.- Verificación y validación interna de métodos de prueba
5.3.1 Las características mínimas de desempeño que se deben verificar para la

evaluación de los métodos microbiológicos se presentan en las siguientes tablas.
5.3.2 Cuando se realice la validación interna de un método microbiológico, se deberán
considerar realizar todas las características de desempeño según aplique al tipo
de método.
5.3.3 Realizar la caracterización de la muestra seleccionada previo a la ejecución de los
ensayos de verificación o validación interna del método y referir los resultados en
el apartado de muestras.
5.3.4 Considerar en la característica de desempeño de selectividad pruebas de
inclusividad y exclusividad cuando apliquen.

120
Revisión 3
Métodos
Característica de Número más Probable
desempeño Cualitativos Cuantitativos
(NMP)
Límite de detección SI NO NO
Recuperación (eficacia) NO SI NO
Sesgo NO SI NO
Repetibilidad NO SI SI
Precisión intermedia NO SI SI
Selectividad o
Especificidad
SI NO NO
(Inclusividad y
Exclusividad)
Incertidumbre SI SI SI
5.3.5 Además de las características de desempeño anteriormente citadas, se debe

realizar la verificación del tamaño del inóculo en métodos cualitativos,
cuantitativos y por NMP.
5.4 Criterio No. 4.- Selección de la matriz
5.4.1 La selección de la matriz debe estar priorizada por el tipo de producto mayormente
recibida y analizada en el laboratorio.
5.4.2 Los alimentos se sub-dividen en los siguientes grupos:
Grupos de Cárnicos Aves Productos Frutas y Productos

interés de la pesca Vegetales Lácteos
Crudos Crudos Crudos Crudos Crudos
Procesados Procesados Procesados Procesados Procesados
Tipos de
Congelados Congelados Congelados Congelados Congelados
alimentos
Otros Otros Secos Secos Secos
Otros Otros Otros
Carne Pollo Moluscos Mango Leche
molida Nugets Pescado Coctel Queso
Ejemplos de
Guisados Milanesas de Filete Leche en
matriz:
Carne pollo Camarón polvo
congelada congelado

121
Revisión 3
5.5 Criterio No. 5.- Preparación de muestras
Métodos Cualitativos, cuantitativos y NMP.

La matriz seleccionada para llevar a cabo la verificación o validación interna puede
tener dos orígenes:
a) Contaminación natural:
Siempre que sea posible, ocupar para este fin, muestras naturalmente contaminadas, si
el nivel esperado de contaminación natural es ≤ 10 UFC/g en la porción de ensayo, se
utiliza contaminación artificial (véase inciso b.) para cubrir el intervalo de uso del
método.
b) Contaminación artificial
Al inocular la porción de ensayo, los niveles de contaminación utilizados deberán ser

representativos al intervalo de contaminación natural que se encuentra rutinariamente
en el laboratorio del usuario.
Por lo anterior deberá verificar que la muestra a elegir no contenga agentes de

conservación que puedan interferir con la determinación.
5.6 Criterio No. 6.- Evaluación de la muestra
Métodos cualitativos, cuantitativos y NMP.
La homogeneización es esencial para asegurar que los microorganismos estén

uniformemente distribuidos.
a) Para los productos líquidos, la homogeneización debe ser realizada agitando la
muestra de ensayo manualmente (por ejemplo, 25 veces a través de un arco de
25 cm).
b) Para productos sólidos, la homogeneización puede realizarse por medios
mecánicos, que podrían incluir homogeneizadores peristálticos y licuadoras.
Cada muestra sea contaminada naturalmente o artificialmente deberá ser

homogeneizada y de esta se tomaran 3 porciones de ensayo, para verificar las
condiciones necesarias para iniciar con el ensayo.

122
Revisión 3
5.7 Criterio No. 7.- Verificación del tamaño del inóculo
Métodos cualitativos y cuantitativos.
Para muestras artificialmente contaminadas
1. Selección de la cepa
Las cepas utilizadas en la verificación o validación interna del método pueden ser:
 Colecciones de referencia
 Cepas del mismo laboratorio procedentes de fuentes similares a la matriz
elegida para el ensayo. Estas deberán estar debidamente caracterizadas tanto
morfológicamente como bioquímicamente.
2. Inoculación de la porción de ensayo

 Al inocular la porción de ensayo, los niveles de contaminación utilizados deben
ser representativos del intervalo de la contaminación natural que se encuentra en
las muestras de ensayo analizadas rutinariamente en el laboratorio usuario.
 La cepa seleccionada deberá ser cultivada en un medio de cultivo rico en
condiciones que permitan un crecimiento óptimo.
 Enumerar el cultivo en medios no selectivos para determinar la concentración
de la cepa. Preparar diluciones para cubrir el intervalo representativo de
contaminación natural.
3. Debe utilizarse por lo menos una cepa del microorganismo de interés en relación
al método que se verificara.
Debe usarse por lo menos una cepa del microorganismo interferente
 Características de los microorganismos interferentes

 Pueden dar reacción negativa o diferente al microorganismo de interés.
 Cepas pertenecientes a la misma familia que el microorganismo de interés
Ejemplo: Para la verificación de Listeria monocytogenes:

Incluir cepas representativas si es posible la mayoría que pertenecen al género: L.
innocua, L. ivanovii, L. seeligeri, L. welshimeri.
4. La concentración seleccionada para cada método de análisis, deberá estar entre 30

(1,5 log) UFC/g a 3000 (3,5 log) UFC/g.
Tomar en cuenta que el nivel de inoculo para el microorganismo de interés así
como para el interferente debe ser el mismo para ambos.

123
Revisión 3
Métodos cualitativos y cuantitativos.
Realizar 6 repeticiones para verificar el tamaño del inóculo y calcular el promedio
Método de Numero Más Probable (NMP)
Considerar lo siguiente:
 Cepas control positivo: las cuales son aquellas de propósito de interés del método.
 Cepas controles negativos: que serán aquellas indicadas en el método de prueba
o en su defecto las que puedas mencionarse como biota acompañante o que se
puedan considerar como interferentes del microorganismo control positivo.
Criterio de aceptación para muestras de alimentos

Dilución primaria 1:10 (25 g de muestra + 225 mL del diluyente) deberá aproximarse a
1000 UFC / mL. La probabilidad de obtener resultados positivos:
 10-1 entre 10 y 100 UFC / mL (100% de positivos)
 10-2 entre 1 y 10 UFC / mL (10 % de positivos)
 10-3 entre 1 y 0 UFC / mL (1% de positivos)
Para muestras de aguas: Inocular con <10 UFC/mL. La probabilidad de obtener tubos
positivos:
 Entre 1 y 10 UFC / mL (80% de positivos)
5.8 Criterio No. 8.-Evaluación de las características de desempeño
5.8.1
Límite de detección
Métodos cualitativos.
 Realizar 10 réplicas independientes de la muestra con un inóculo ≤ 10 UFC del

microorganismo de interés por un mismo analista.
 Determinar el % de resultados positivos de acuerdo a lo siguiente:
Criterios de aceptación
Resultados positivos ≥ 80%

124
Revisión 3
5.8.2
Recuperación
Métodos cuantitativos.
Solo para muestras no contaminadas

 Realizar 10 repeticiones independientes de la matriz a analizar con el
microorganismo de interés a una concentración aproximada de 100 UFC
 Calcular el %recuperación de acuerdo a la siguiente fórmula:
Cálculos:
De cada repetición calcular el logaritmo del promedio
Repetición Placa 1 Placa 2 Promedio Logaritmo
1 70 90 80 2.903
2 71 91 81 2.908
3 80 80 80 2.903
4 76 82 79 2.897
5 78 82 80 2.903
6 77 88 83 2.919
7 56 80 68 2.832
8 87 80 84 2.924
9 77 86 82 2.913
10 79 83 81 2.908
 Realizar lo mismo para el inoculo inicial
%Recuperación: Del 90% a 110%

125
Revisión 3
5.8.3
Sesgo
Métodos cuantitativos
 Considerar los resultados obtenidos en la recuperación y determinar el sesgo
de la siguiente manera:
Dónde:
Ve = valor esperado
Vo = valor obtenido
La diferencia absoluta de lo recuperado y lo inoculado debe ser < 0.3 log
5.8.4
Repetibilidad
 Realizar 10 réplicas independientes por un mismo analista.

 Para métodos cuantitativos y muestras artificialmente contaminadas calcular
el nivel de inoculación con el valor medio del método por ejemplo: para
coliformes totales deberá estar entre 15 y 150 UFC / mL
Métodos cuantitativos y semicuantitativos.

Calcular la desviación estándar relativa (RSD), como el cociente de la desviación
estándar (s) sobre la media ( ).
Calcular el valor de repetibilidad (r).
Dónde:

126
Revisión 3
n= número de repeticiones
RSDr < 3%
Método de NMP
 Obtener el valor de NMP en las tablas correspondientes tomadas en el

método de prueba a evaluar.
 Calcular el logaritmo del resultado.
 Calcular el promedio que se expresa como la suma de los logaritmos entre el
número total de muestras:
Calcular la desviación estándar (s) para obtener la desviación estándar relativa:
Utilizando los valores anteriores, considerar la aplicación de la siguiente fórmula:
RSDr < 32%.
5.8.5
Precisión intermedia
Cuantitativos
Métodos cuantitativos y NMP

 Realizar 10 réplicas independientes realizadas cambiando una variable (tiempo
o analista) bajo las mismas condiciones del método.
 Considerar los resultados de repetibilidad obtenidos por el primer analista y
combinar los resultados
 Calcular la desviación estándar relativa de la precisión intermedia aplicando la

127
Revisión 3
Cuantitativos
fórmula:
Dónde:
n = total de ensayos
 Calcular la precisión intermedia del método:
Para métodos cuantitativos realizar el análisis de homogeneidad de varianzas

(prueba de Harley o Cochran) y una prueba de inferencia estadística de ANOVA para
más de 2 promedios o prueba de t-Student para muestras relacionadas
Métodos cuantitativos: RSDpi < 3%

NMP: RSDpi < 32%
ANOVA Fcrit > Fcal, p > 0.05 o t crit > t cal
5.8.6
Selectividad o especificidad
Métodos cualitativos
Realizar 10 réplicas de la muestra seleccionada por un analista fortificadas con los
siguientes tamaños de inóculo:
o Nivel bajo para el microorganismo de interés: ≤ 10 UFC en 25 g de la
matriz.
o Nivel alto para el microorganismo interferente: Entre 10 - 50 UFC en 25 g
de la matriz
Resultados positivos: ≥ 80 %

128
Revisión 3
Métodos cualitativos
5.8.7
Incertidumbre
a) Métodos Cualitativos
 Mencionar las fuentes de incertidumbre.

 Distribución de los microorganismos en la muestra;
 Efecto de la matriz;
 Personal operativo;
 Mediciones (pesada o medición de la muestra);
 Diluciones y volúmenes;
 Homogeneización;
 Calidad de los medios;
 Tiempo hasta la inoculación;
 Temperatura de incubación;
b) Métodos Cuantitativos
Estimar la incertidumbre a partir de muestras naturalmente contaminadas o

inoculadas.
Ejemplo: Dos químicos analistas, analizan simultáneamente 10 muestras, y se realiza
el siguiente cálculo.
Log A1 Log B1
REPETICIÓN
1 2.5051 2.5440 0.0007566
2 2.5797 2.4623 0.0068913
3 2.4771 2.5185 0.0008569
4 2.5440 2.5051 0.0007566
5 2.5314 2.5797 0.0011664
6 2.5185 2.5682 0.0012350
7 2.5682 2.5185 0.0012350
8 2.5051 2.4771 0.000392
sR = 9 2.5314 2.5051 0.0003458
10 2.5051 2.4771 0.000392

129
Revisión 3
Dónde: yiA y yiB son los datos transformados a log 10 (UFC/g o ml).
Incertidumbre expandida U = 2sR
U = 2(0.0374)
U = 0.074
No aplica
7. BIBLIOGRAFÍA
La establecida en el Documento Técnico de verificación o validación interna de métodos

de prueba (conforme al documento CCAYAC-MA-08)
8. ANEXOS
No aplica

130
Revisión 3
Documento Técnico de estimación de la incertidumbre de
la medición

131
Revisión 3
Documento Técnico de estimación de la incertidumbre de la medición
1. OBJETIVO
Establecer los criterios para llevar a cabo la estimación de la incertidumbre de métodos

fisicoquímicos y físicos cuantitativos.
2. ALCANCE
Aplica a las pruebas fisicoquímicas y físicas verificadas o validadas internamente

empleadas para el análisis de agua, alimentos, producto farmacéutico, ingrediente
farmacéutico activo, productos biológicos, juguetes, cerámicas, bebidas alcohólicas y no
alcohólicas, mediciones físicas en dispositivos médicos, entre otros.
3. DEFINICIONES
3.1 Evaluación tipo A: Método de evaluación de una componente de la incertidumbre
medida mediante un análisis estadístico de los valores medidos en unas condiciones
definidas.
3.2 Evaluación tipo B: Método de evaluación de una componente de la incertidumbre
de medida por medios distintos al análisis estadístico de los valores medidos.
3.3 Factor de cobertura: Factor numérico empleado para multiplicar la incertidumbre
estándar combinada con el fin de obtener una incertidumbre expandida.
3.4 Incertidumbre: Parámetro no negativo que caracteriza la dispersión de los valores
atribuidos a un mensurando, a partir de la información que se utiliza.
3.5 Incertidumbre estándar: Incertidumbre del resultado de una medición expresada
como una desviación estándar.
3.6 Incertidumbre estándar combinada: Incertidumbre estándar del resultado de una
medición cuando este es obtenido a partir de los valores de un número de otras
magnitudes, igual a la raíz cuadrada positiva de una suma de términos, siendo estos
términos las varianzas o covarianzas de estas otras cantidades ponderadas de
acuerdo a como varían los resultados de la medición con estas cantidades.
3.7 Incertidumbre expandida: Cantidad que define un intervalo sobre el resultado de
una medición que se puede esperar incluya una gran fracción de la distribución de
valores que pueden atribuirse razonablemente al mensurando.
3.8 Mensurando: Magnitud que se desea medir.
3.9 Trazabilidad: Propiedad del resultado de una medida por la cual el resultado puede
relacionarse con una referencia mediante una cadena ininterrumpida y
documentada de calibraciones, cada una de las cuales contribuye a la
incertidumbre de medida.

132
Revisión 3
Laboratorios de Salud Pública, los Laboratorios de Prueba Terceros Autorizados ante
la COFEPRIS y verificadores.
5. CRITERIOS
La estimación de la incertidumbre aplica solo para métodos cuantitativos.

5.1.1 Para métodos fisicoquímicos cuantitativos verificados o validados internamente se
consideran según corresponda al método, tres fuentes generales de
incertidumbre:
 Solución de referencia (uref)
 Sesgo (urec)
 Variabilidad total del método (stot)
5.1.2Para mediciones de pruebas físicas se consideran como fuentes de incertidumbre:

 Instrumentos de medición y equipo (ueq)
 Variabilidad total del método (stot)
5.1.3La incertidumbre de los químicos analistas y equipos analíticos (cromatógrafos,

espectrofotómetros, potenciómetros, etc) se consideran dentro de la estimación
de la incertidumbre del sesgo y de la variabilidad total del método.
5.1.4 Las incertidumbres estándar obtenidas deben transformarse a incertidumbres
relativas para la obtención de la incertidumbre combinada.
5.1.5No es requerida la estimación de la incertidumbre de las mediciones cualitativas,
debido a que no pueden ser evaluadas a partir de una distribución estadística de
los resultados de una serie de mediciones. Por ello, solo se requiere mencionar las
posibles fuentes de incertidumbre.
5.2 Criterio No. 2.- Definición del mensurando
Definir el analito que se va a cuantificar y las unidades en las cuales se reporta conforme
al Sistema Internacional de Unidades. Ejemplo: µg ácido domoico/g
5.3 Criterio No. 3.- Fuentes de incertidumbre
5.3.1 Enlistar los pasos generales del método de medición conforme al procedimiento
de prueba
5.3.2 Mostrar la ecuación que se utiliza para el cálculo final de la concentración del
analito en la muestra de prueba (modelo matemático)

133
Revisión 3
5.3.3 Definir las variables de influencia en el proceso de medición.
5.3.4 Establecer los componentes de incertidumbre (subvariables) de cada una de
éstas.
5.3.5 Elaborar un diagrama de pescado, colocando en la cabeza, el analito o parámetro
sujeto a medición y en las espinas las fuentes de incertidumbre identificadas. Las
subvariables de cada fuente de incertidumbre se colocan en las espinas
perpendiculares a la espina asignada a esa variable (anexo 8.1)
5.4 Criterio No. 4.- Estimación de las incertidumbres estándar

5.4.1 Evaluación tipo A
a) Incertidumbre del sesgo (urec)
 Utilizar el valor de la desviación estándar del % de recuperación (srec) obtenido

en la verificación o validación interna del método y sustituir en la siguiente
ecuación:
 Transformar esta incertidumbre a incertidumbre relativa dividiendo el valor de

Urec obtenido entre el valor de % de recuperación o concentración promedio.
b) Incertidumbre de la variabilidad total del método (ustot)
 Utilizar los valores de las desviaciones estándar de la repetibilidad (sr) y

precisión intermedia (spi) obtenidas en la verificación o validación interna del
método y sustituir en la siguiente ecuación:

Donde n= número de repeticiones
 Transformar esta incertidumbre a incertidumbre relativa dividiendo el valor de
stot obtenido entre el valor de % de recuperación o concentración promedio.
5.4.2 Evaluación tipo B
a) Incertidumbre de los instrumentos y equipos de medición (ueq)
 Utilizar el valor de incertidumbre expandida (Uexp) reportada en el informe o

certificado de calibración y dividir este valor entre el factor de cobertura (k)
empleado.

134
Revisión 3
 Aplica para termómetros, balanzas y equipos de mediciones físicas (reglas,
micrómetros, etc.) que hayan sido calibrados por una empresa prestadora de
servicios y para disoluciones comerciales cuya incertidumbre este expresada
en un certificado de análisis.
b) Incertidumbre de la pureza (upur)
 Considerar el dato de pureza del reactivo reportado en el certificado de análisis

y estimar la incertidumbre aplicando la siguiente ecuación:
c) Incertidumbre del material y aparatos volumétricos (uv).
 Estimar la incertidumbre conforme al valor del error máximo permisible (uemp)

establecido en el CCAYAC-CR-14 “Criterios para la verificación metrológica de
material volumétrico de vidrio” y en el CCAYAC-CR-15 “Criterios para la
verificación metrológica de aparatos volumétricos operados por pistón”,
aplicando la siguiente ecuación:
 Asimismo estimar la incertidumbre asociada a la temperatura de medición

(utemp) considerando las siguientes ecuaciones
Dónde:
= coeficiente de expansión de volumen para el agua = 0.00021 °C-1

t = Diferencia de temperatura (en °C) estimada en el laboratorio de prueba.
V= Volumen del material o aparato volumétrico.
 Para estimar la incertidumbre del material volumétrico (uv) emplear la siguiente

ecuación:

135
Revisión 3
5.5 Criterio No. 5.-Incertidumbre estándar combinada (uc).
Combinar las incertidumbres obtenidas empleando la siguiente ecuación:
Co= Concentración del analito en la muestra
5.6 Criterio No. 6.- Incertidumbre expandida (Uexp)

5.6.1 Multiplicar la incertidumbre combinada por el factor de cobertura (k) a un nivel de
confianza del 95 %.
5.6.2 Para la mayoría de los propósitos es recomendable un valor de k igual a 2
5.7 Criterio No. 7.- Informe de la incertidumbre
(Resultado): x  Uexp (unidades)
“La incertidumbre informada es una incertidumbre expandida calculada empleando un

factor de cobertura de 2, el cual proporciona un nivel de confianza del 95 %
aproximadamente”.
5.8 Criterio No. 8.- Contribución de las incertidumbres
5.8.1 Para mediciones fisicoquímicas
Incertidumbre estándar
Variable Descripción
relativa
ref Solución de referencia
rec Sesgo
Variabilidad total del
stot
método
Total
5.8.2 Para mediciones físicas

136
Revisión 3
Incertidumbre estándar
Variable Descripción
relativa
eq Equipo
Variabilidad total del
stot
método
Total
5.9 Criterio No. 9.- Carta de trazabilidad
Considerar los siguientes elementos:
5.9.1 Referencia a los patrones
 Identificar el patrón, por ejemplo: Juego de pesas ICJE1 001.

 La magnitud a la que se refiere el patrón: ejemplo volumen, masa, temperatura,
etc.
 Las unidades en las que está expresada la magnitud: ejemplo mg, g, mL, mg/mL,
etc.
 El valor de incertidumbre relativa (urel) asignada a dicho patrón.
 La información anterior sobre cada patrón se encierra en un rectángulo. Anotar al
lado derecho del rectángulo la información sobre la clave y fecha del certificado o
informe de calibración que soporta la trazabilidad de dicho patrón y al lado
izquierdo la institución que llevó a cabo la calibración.
5.9.2 Referencia al instrumento de medición

137
Revisión 3
 Señalar el nombre y número de identificación (ID) del instrumento de medición
calibrado, por ejemplo balanza analítica ID 1392
 La resolución del instrumento, por ejemplo 0.0001 g
 Las unidades en que mide el instrumento, por ejemplo: g, mg, °C, etc.
 El valor de incertidumbre relativa (urel) reportada en el informe de calibración.
 La información anterior sobre cada instrumento se encierra en un rectángulo.
Anotar al lado derecho del rectángulo la información sobre la clave y fecha del
informe o certificado de calibración que soporta la trazabilidad del instrumento y
al lado izquierdo la institución que llevó a cabo la calibración.
5.9.3 Material de referencia
 Anotar el nombre de la solución, por ejemplo ácido domoico en solución acuosa de

acetonitrilo al 5%, solución de alprazolam en acetonitrilo, etc.
 La magnitud a la que se refiere, por ejemplo concentración en masa, volumen.

 Las unidades en las que se presenta, por ejemplo µg/mL.
 El valor de incertidumbre relativa (urel) reportada en el informe de análisis si se trata
de una solución comercial o la calcula si esta se preparó en el laboratorio
 La información anterior se encierra en un rectángulo. Anotar al lado derecho del
rectángulo la información sobre la clave y fecha del informe o certificado de
análisis y al lado izquierdo la institución que emite dicho informe si se empleó una
solución comercial. Si la solución se preparó en el laboratorio solo anotar el
nombre de este al lado derecho del rectángulo.
5.9.4 Referencia al método
 Anotar el nombre y clave del método utilizado en la calibración de los patrones e

instrumentos de medición los cuales se reportan en el informe o certificado de
calibración.
 Anotar el nombre y clave de la referencia del método al que aplica la carta de
trazabilidad, por ejemplo Método General MGA 0241 FEUM, Método Oficial AOAC
2000.08, Standard Methods 4000 H, etc.
 El modelo matemático para el cálculo del analito en la muestra final.
 La información anterior se encierra en un óvalo. Anotar al lado derecho del óvalo el
nombre del laboratorio que lleva a cabo la determinación analítica.
5.9.5 Referencia al resultado final
 Anotar el mesurando cuyo valor se obtiene mediante la aplicación del método, por
ejemplo contenido de alprazolam, volumen, etc.

138
Revisión 3
 La magnitud a la que se refiere, por ejemplo concentración en masa, masa,
volumen.
 Las unidades en las que se reporta el analito, por ejemplo, mg, mg/mL, %, etc.
 El valor de incertidumbre relativa (urel) calculada.
 La información anterior se encierra en un rectángulo. Anotar al lado derecho del
rectángulo el nombre del laboratorio que lleva a cabo la determinación analítica.
5.9.6 Diagrama de carta de trazabilidad
 Con la información anterior, presentar de forma esquemática todas las

calibraciones y mediciones necesarias para relacionar las referencias
determinadas con el resultado de la medición o el valor del patrón.
 Ordenar la sucesión de patrones alternados con los respectivos métodos o
procedimientos en forma vertical. En la parte superior situar el patrón del cual se
obtiene la trazabilidad indicado por un rectángulo en doble línea. Debajo
presentar el método o procedimiento de calibración o medición mediante el cual
se establece el valor del siguiente patrón, cuya información a su vez se sitúa
debajo y así sucesivamente hasta llegar al valor del mensurando de interés.
 Cada patrón y cada método (o procedimiento) se unen mediante una flecha en el
sentido del valor del patrón del cual se obtiene la trazabilidad, y se anotan los
datos del informe o certificado de calibración y el nombre de la entidad emisora
como se explicó anteriormente.
 Cuando se cuenta con información sobre la trazabilidad provista por un órgano
externo al laboratorio (trazabilidad externa), se traza una línea horizontal
punteada para separarlos de los elementos de la cadena de trazabilidad que son
responsabilidad de la CCAYAC (trazabilidad interna).
No aplica
7. BIBLIOGRAFÍA.
Documentos
Entidad Mexicana de Acreditación. Manual de procedimientos. Incertidumbre de
mediciones. Política. MP-CA005-09. 2018
7.1
http://consultaema.mx:75/pqtinformativo/GENERAL/PEA/04_MP-
CA005_Pol_Incertidumbre.pdf
Eurachem/CITAC. Quantifying Uncertainty in Analytical Measurement. Third
7.2
Edition. QUAM:2012.P1.

139
Revisión 3
https://www.eurachem.org/images/stories/Guides/pdf/QUAM2012_P1.pdf
Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos. 2012. Duodécima edición.
7.3
Apéndice IV. Estimación de la Incertidumbre de Métodos Analíticos Farmacopeicos
Food and Drug Administration. Estimation of Uncertainty of Measurement. ORA
LABORATORY PROCEDURE. Document No. ORA-LAB. 5.4.6
7.4
https://www.fda.gov/downloads/ScienceResearch/FieldScience/LaboratoryManual/
UCM092149.pdf
NMX-EC-17025-IMNC-2018. Requisitos generales para la competencia de los
7.5
laboratorios de ensayo y calibración.
8. ANEXOS.
Anexo 1.- Diagrama de pescado
Anexo 2.- Carta de trazabilidad

140
Revisión 3
Anexo 1
Diagrama de pescado
Solución de referencia
(uref) m= 10 g
Pureza: 99.95 %
V1= 100 mL
V2= 1 mL
V3= 100 mL
mg furfural/100
mL ABA
Repetibilidad (sr)
Recuperación (srec) Precisión intermedia

(spi)
Sesgo
(urec) Variabilidad total del método
(stot)

141
Revisión 3
Anexo 2.
Carta de trazabilidad
Patrón de
transferencia
Magnitud: masa
Unidad: kg
Método de subdivisión
CENAM CNM-730-AC-P.149
Juego de pesas ICJE 1001 Certificado de calibración

Magnitud: masa CNM-CC-730-227/2012
Unidad: mg 2012-11-06
urel: 0.0033
Balanza analítica ID 249

Exelenza S.A. de Resolución: 0.0001 g Informe de calibración
C.V. Unidad: g LEXEM-120/12
urel: 0.000245 2012-11-10
MRC: Acido domoico

Institute for Marine Magnitud: masa Certified Calibration Solution
Biosciences Unidad: µg/mL for Domoic Acid
National Research urel: 0.0104 NRC CRM-DA-f
Council Canada
TRAZABILIDAD EXTERNA
TRAZABILIDAD INTERNA
Método interno CCAYAC-M-001
CNM-730-AC-P.149
Contenido de ácido domoico

Magnitud: masa
Unidad: µg/g
urel: 0.0327

142
Revisión 3
Documento Técnico de validez para la determinación de
Toxina estafilocócica en alimentos por método
inmunoenzimático con Kit Ridascreen Set Total

143
Revisión 3
Documento Técnico de validez para la determinación de Toxina estafilocócica en
alimentos por método inmunoenzimático con Kit Ridascreen Set Total
1. OBJETIVO
1.1. Establecer los criterios de validez para la detección de la toxina estafilocócica en

alimentos con el empleo del Kit RIDASCREEN SET TOTAL.
1.2. Establecer los criterios de envío a la CCAYAC por parte de los LESP, de muestras a
confirmar para la detección de la toxina estafilocócica.
2. ALCANCE

Detección de la toxina
Extractos de alimentos que se consideren
estafilocócica con el empleo
sospechosos de contaminación con toxina
del Kit RIDASCREEN SET
estafilocócica.
TOTAL.
3. DEFINICIONES
3.1. Validez de la Prueba: Evidencia objetiva que demuestra que el método es

confiable en condiciones adecuadas cuando se sigue a detalle lo indicado en la
metodología de ensayo.
3.2.Control Negativo: Es aquel que no desarrolla color alguno por interacción del
sustrato-cromógeno con el analito en estudio. Debe mostrar densidades ópticas
menores o igual a 0.2.
3.3.Control Positivo: Es aquél que desarrolla control intenso por interacción del
sustrato-cromógeno con el analito de estudio. Debe mostrar densidades ópticas
mayores a 1.0.
4.1. Los Laboratorios Estatales de Salud Pública (LESP) que soliciten autorización
deben cumplir con los criterios establecidos en el presente documento.
4.2. Es responsabilidad del LESP que ejecute la determinación de Toxina Estafilocócica
en alimentos por el método Inmunoenzimático con el Kit RIDASCREEN, enviar a la
Comisión de Control Analítico y Ampliación de Cobertura el extracto de las
muestras que resulten positivas, para su confirmación.

144
Revisión 3
4.3. El laboratorio que lleve a cabo la verificación del método, debe documentar
mediante un protocolo e informe de resultados la verificación realizada, de
acuerdo a lo establecido en el CCAYAC-MA-08 “Manual para la verificación o
validación interna de métodos de prueba, Verificación o validación interna de
métodos microbiológicos”.
4.4. El laboratorio que lleve a cabo la verificación, debe asegurar la calidad de los
resultados con el uso de reactivos y/o soluciones vigentes, equipos calificados,
instrumentos calibrados, materiales con certificado de calidad, etc.
5. CRITERIOS.
5.1. Disposiciones Generales
5.1.1. Los laboratorios que realicen la determinación de la Toxina Estafilocócica en
Alimentos con el Kit RIDASCREEN SET TOTAL deben considerar que
a) El kit en uso no se encuentre caduco
b) No mezclar reactivos de kits diferentes (aun siendo el mismo lote).
c) Los reactivos deben mantenerse en refrigeración (2-8 °C). No se debe congelar.
5.2. Desarrollo del Método Analítico

5.2.1. Para la extracción de la toxina, se puede utilizar agua destilada o buffer de
extracción.
5.2.2. La temperatura ambiente se debe entender como 20 a 25 °C.
5.2.3. En caso de ajustar el pH menor a 3 o mayor a 9, se debe tomar una nueva porción
del alimento y proceder a realizar la extracción de nueva cuenta.
5.2.4. Si el extracto concentrado se analiza dentro de las 48 h, se puede almacenar a 5 ±
3 °C, de lo contrario, se debe almacenar ≤ -18 °C y debe ser utilizado máximo 7 días
después de la extracción.
5.2.5. Las muestras y controles deben colocarse por duplicado cada que se realice un
ensayo.
5.2.6. Los pocillos que no sean utilizados para el ensayo deben regresarse dentro del
paquete que contiene el kit.
5.2.7. La placa debe ser cubierta con una tapa o plástico adherente durante las
incubaciones.
5.2.8. Los lavados de la placa deben realizarse con un volumen de entre 250 y 280 µL.
5.2.9. La incubación del sustrato debe realizarse en condiciones de oscuridad.
5.2.10. No tocar el fondo de los pocillos con las puntas de la micropipeta en ningún
momento del ensayo.
5.2.11. Leer la placa en lo posible inmediatamente sin sobrepasar los 30 minutos después
de agregar la solución de paro. Agitar suavemente antes de la lectura.

145
Revisión 3
5.2.12. La lectura se puede realizar a 450 con filtro de referencia de 600-630 nm en un
lector de microplacas. En caso de no contar con el filtro de referencia, se puede
utilizar solo el filtro de 450 nm.
5.2.13. Las densidades del control positivo deben ser mayor o igual a 1.0.
5.2.14. Las densidades ópticas del control negativo debe ser menor o igual a 0.20.
5.3. Para el envío a la CCAYAC

5.3.1. Elaborar oficio dirigido al Titular de la CCAYAC con copia a la Dirección Ejecutiva de
Control Analítico y a la Dirección Ejecutiva de Innovación en el que se señale el
asunto y se especifique claramente el servicio que solicita.
5.3.2. Incluir en el oficio de solicitud la siguiente información:
Alimento Clave de identificación

Fecha de extracción Fecha de ELISA
involucrado interna
Grupo de interés Categoría y Tipo Referencia de Método de prueba utilizado
5.3.3. Los extractos se deben enviar a la CCAYAC con un tiempo no mayor de 48 h

después de haber obtenido un resultado positivo.
5.3.4. Se debe enviar 5 mL por cada extracto de muestra que haya resultado positivo,
dentro de un tubo de centrifuga etiquetado con los siguientes datos:
Nombre LESP
Fecha de extracción
Fecha de ELISA
Fecha de envío
Clave de identificación interna
5.3.5. Los extractos deben ser enviados en una temperatura no mayor a 10 °C, sin
congelar.
Documentos Clave
Método de prueba para la determinación de toxina estafilocócica
6.1 en alimentos por método inmunoenzimático con kit RIDASCREEN CCAYAC-M-363
SET TOTAL
7. BIBLIOGRAFÍA.

146
Revisión 3
Documentos
Official European Screening Method. Kit RIDASCREEN SET TOTAL Staphylococcal
7.1
Enterotoxins, R4105. r-biopharm.
NORMA ISO 19020. Microbiology of the food chain - Horizontal method for the
7.2
immunoenzymatic detection of Staphylococcal enterotoxins in foodstuffs. Año 2017
Requisitos Generales para la Competencia de los laboratorios de ensayo y calibración
7.3
NMX-EC-17025-IMNC-2018
8. ANEXOS.
Anexo 1.- Estructura del protocolo
Anexo 2.- Estructura del informe
Anexo 1
Estructura del protocolo
La estructura para el protocolo para la verificación de métodos de análisis
microbiológicos:
Descripción
Protocolo para la verificación del método: el nombre y clave del
Título
método que se pretende evaluar.
Considerar los parámetros de verificación a evaluar y el analito a
1.Objetivo
determinar
2.Campo de
Indicar el tipo de producto (s) para los cuales aplica la verificación.
aplicación
Citar el método de prueba interno, el método de referencia y
3. Método de
cuando no esté disponible en otro documento el diagrama de
ensayo
flujo.
Nombre del equipo crucial y/o instrumento a utilizar; clave interna
4.Equipos e
de identificación, e indicar los servicios de calibración, verificación
Instrumentos
y/o calificación, mantenimiento preventivo según sea el caso.
5.Materiales Indicar los materiales a utilizar
6.Reactivos a) Indicar el nombre de los reactivos a utilizar y su grado.
Indicar las características, forma de almacenamiento y cantidades
de muestra estimadas para llevar a cabo la verificación.
7.Muestras
Detallar la preparación de los blancos de muestra o muestras
adicionadas.
8.Desarrollo Detallar las instrucciones para cada uno de los parámetros de
experimental verificación a ensayar.
9.Resultados Formato para el registro de resultados
10.Análisis Establecer para cada parámetro de desempeño la herramienta
estadístico estadística a utilizar para su evaluación.
11.Criterios de Establecer los criterios de aceptación que deben cumplirse con su

147
Revisión 3
aceptación respectiva referencia bibliográfica.
Nota: El protocolo debe incluir firmas de quien elaboró, revisó y aprobó.
Anexo 2
Estructura del informe de verificación
Descripción
Informe de resultados de la verificación del método: el nombre y
Título
clave del método que se evalúo.
Considerar los parámetros de verificación evaluados y el analito
1.Objetivo
determinado.
2.Campo de
Indicar el tipo de producto (s) para los cuales aplicó la verificación
aplicación
Nombre del equipo crucial y/o instrumento a utilizar; clave
3.Equipos e interna de identificación, e indicar los servicios de calibración,
Instrumentos verificación y/o calificación, mantenimiento preventivo según sea
el caso.
4.Materiales Listado de los materiales utilizados.
5.Reactivos Listar los reactivos su estado de calidad.
Indicar las características, forma de almacenamiento, marca,
presentación, caducidad y cantidades de muestra utilizadas para
6.Muestras llevar a cabo la verificación.
Detallar la preparación de los blancos de muestra o muestras
adicionadas utilizadas.
7.Desarrollo Detallar como se llevaron a cabo los ensayos de cada uno de los
experimental parámetros de desempeño.
Presentación de resultados en forma de tablas, señalando fechas
8.Resultados de inicio y término, analistas, laboratorio, microorganismo(s) de
prueba, matriz, unidades y clave de bitácora o registro primario
Presentar en forma de tabla los criterios de aceptación
9.Discusión de los
considerados y los resultados obtenidos y hacer las
resultados
observaciones correspondientes.
Efectuar una conclusión final en donde se señale que el método
10.Conclusión
se ajusta al uso propuesto
11.Bibliografía Referencias utilizadas.
Los que aplique:
 Registros primarios  Formatos de
12.Anexos
 Bases de datos utilizadas verificación,
 Certificados de equipos  Gráficos de control, etc.
Nota: El informe de resultados debe incluir firmas de quien elaboró, revisó y aprobó.

148
Revisión 3
espectrómetros de UV-Visible

149
Revisión 3
Documento Técnico de verificación metrológica de espectrómetros de UV-Visible
1. OBJETIVO
Establecer los lineamientos para llevar a cabo actividades de verificación metrológica de

espectrómetros de UV-Visible.
2. ALCANCE
Equipo Tipo
Espectrómetros que funcionan en las Manuales o automáticos, de haz simple o haz
regiones espectrales ultravioleta (UV) y/o doble, con y sin sistema de barrido espectral y
visible (VIS) con lectura digital.
3. DEFINICIONES.
3.1 Absorción de celda, a la comprobación de la limpieza y las diferencias de grosor o

el paralelismo de las ventanas de las celdas.
3.2 Absorbancia específica, a la absorbancia obtenida (A) de la disolución de
dicromato de potasio dividida entre el producto de la concentración de esta
disolución en mg/100 mL y la longitud de absorción para una celda de 1 cm, a una
longitud de onda específica.
3.3 Linealidad fotométrica, a la habilidad que tiene el espectrómetro de proporcionar
sensibilidad idéntica a través del intervalo de trabajo. Permite establecer el
intervalo de absorbancia en el que el instrumento tiene respuesta proporcional a
los cambios de concentración.
3.4 Luz dispersa, a la cantidad de longitudes de onda no deseadas que están
presentes en el haz de la muestra. Es toda radiación electromagnética de longitud
de onda distinta a la seleccionada por el monocromador, que alcanza el detector y
por lo tanto queda registrada por el instrumento. El efecto es causado por la
dispersión de la luz, difracción o un mal funcionamiento del instrumento. Esto
provoca una disminución en el intervalo de absorbancia medible y reduce la
relación lineal entre la concentración y la absorbancia del instrumento.
3.5 Repetibilidad fotométrica, a la medida de la dispersión de una serie de
mediciones de absorbancia alrededor de la media expresada como desviación
estándar relativa.
3.6 Resolución espectral, a la capacidad que tiene un espectrómetro para diferenciar
entre dos longitudes de onda adyacentes
3.7 Sesgo fotométrico, a la diferencia entre la absorbancia medida en el
espectrómetro y la absorbancia de referencia.

150
Revisión 3
3.8 Sesgo de la longitud de onda, a la diferencia entre la longitud de onda
seleccionada para la absorbancia máxima y la longitud de onda de referencia.
3.9 Verificación metrológica, a la aportación de evidencia objetiva de que un
elemento satisface los requisitos especificados.
5. CRITERIOS.

5.1.1 Asegurar que el espectrómetro se ha estabilizado conforme a las especificaciones
del fabricante antes de comenzar la verificación.
5.1.2 Considerar como referencia el intervalo espectral en dos regiones, la UV de 200 a
400 nm y la VIS de 400 a 800 nm.
5.1.3 La verificación metrológica del instrumento se debe llevar a cabo:
a) En el área donde se encuentra instalado el instrumento para su uso.

b) En la región espectral de uso conforme a la longitud de onda establecida para el
analito en la metodología aplicada.
c) Con el uso de celdas rectangulares de 1 cm de paso óptico, de cuarzo para UV y de
vidrio o cuarzo para VIS.
d) Con el uso de cualquiera de los siguientes materiales de referencia:
 Disoluciones preparadas en el laboratorio.
 Disoluciones comerciales con certificado de análisis o calibración, trazables a
patrones nacionales o internacionales
 Filtros de líquidos o sólidos con certificado de análisis o calibración, trazables a
patrones nacionales o internacionales.
5.1.4 Conforme a la frecuencia establecida en la siguiente tabla:
Característica metrológica Día de uso Intermedia

Absorción de celda X
Sesgo de longitud de onda X
Sesgo y repetibilidad fotométrica X X
Linealidad fotométrica X
Luz dispersa X
Resolución espectral X X

151
Revisión 3
5.1.5 La prueba de sesgo de longitud de onda solo aplica para instrumentos que
cuenten con sistema de barrido espectral.
5.1.6 La prueba de sesgo y repetibilidad fotométrica para el día de uso, sólo se efectúa a
la longitud de onda de 350 nm para UV y 650 nm para VIS según sea el caso.
5.1.7 La prueba de luz dispersa sólo aplica para UV
5.1.8 La prueba de resolución espectral sólo aplica para métodos cualitativos.
5.1.9 La verificación metrológica intermedia se lleva a cabo de manera semestral o 6

meses posteriores a la calibración o calificación del espectrómetro.
5.2 Criterio No. 2.- Materiales de referencia
Región
Material de referencia Característica metrológica
espectral
Disolución o filtro líquido de óxido
de holmio al 4 % en ácido perclórico
UV-VIS Sesgo de la longitud de onda
o
Filtro de vidrio de óxido de holmio
Disolución o filtro líquido de
Sesgo y repetibilidad
dicromato de potasio de 60 mg/L en UV
fotométrica
ácido sulfúrico o perclórico.
Disolución de sulfato de cobre de Sesgo y repetibilidad
VIS
20 mg/L en ácido sulfúrico al 1% fotométrica
Disoluciones o fi|ltros líquidos de
dicromato de potasio de 20, 40, 60,
UV
80 y 100 mg/L en ácido sulfúrico o
perclórico. Linealidad fotométrica
Disoluciones de sulfato de cobre de
20, 40, 60, 80 y 100 g/L en ácido VIS
sulfúrico al 1%
Disolución o filtro líquido de cloruro
UV Luz dispersa
de potasio de 12 g/L.
Disolución o filtro líquido de
UV Resolución espectral
tolueno al 0.02 % en hexano.
5.3 Criterio No. 3.- Absorción de celda

152
Revisión 3
5.3.1 Ajustar el instrumento a 0 de absorbancia con aire.
5.3.2 Llenar la celda con agua destilada y medir la absorbancia a 240 nm para la región
ultravioleta y a 650 nm para la región visible. Registrar los valores.
5.3.3 Rotar la celda 180° y medir la absorbancia nuevamente. Calcular la diferencia de
absorbancias (considerar el valor absoluto).
5.3.4 Comparar contra los valores establecidos en el numeral 5.9.1.
5.4 Criterio No. 4.- Sesgo de longitud de onda
5.4.1 Ajustar el instrumento a 0 de absorbancia con:

 La disolución de ácido perclórico al 10% si se utiliza la disolución preparada
en el laboratorio
 Aire para el caso de filtros de vidrio.
 Para disoluciones comerciales y filtros líquidos conforme a las
especificaciones del fabricante.
5.4.2 Realizar un barrido espectral por triplicado del material de referencia de óxido de
holmio seleccionado.
5.4.3 Obtener las longitudes de onda de máxima absorción y comparar los valores
promedio de longitud de onda obtenidos contra los establecidos en la siguiente
tabla:
Longitud de onda (nm)
Región espectral Disolución o filtro
Filtro sólido
líquido
241.5 241.1
UV 287.5 287.2
360.9 361.3
536.5 536.6
VIS
637.7 640.5
5.4.4 Si se emplean filtros o disoluciones comerciales de óxido de holmio los valores

exactos de esta tabla pueden variar dependiendo del fabricante. Considerar los
valores certificados cercanos a estas longitudes de onda.
5.4.5 Calcular la diferencia aritmética del promedio de los valores de longitud de onda
obtenidos con respecto a los valores de longitud de onda seleccionados o
certificados.

153
Revisión 3
5.4.6 Comparar esta diferencia contra los valores establecidos en el numeral 5.9.2.
5.5 Criterio No. 5.- Sesgo y repetibilidad fotométrica
5.5.1 Ajustar el instrumento a 0 de absorbancia con la solución de ácido sulfúrico o

ácido perclórico, utilizadas en la preparación de las disoluciones o filtros líquidos
de referencia.
5.5.2 Leer por sextuplicado, la absorbancia de la disolución o filtro de líquido de
dicromato de potasio y de la disolución de sulfato de cobre en cada longitud de
onda, como se señala a continuación:
Región espectral Material de referencia Longitud de onda (nm)
235
Dicromato de potasio de 60 257
UV
mg/L 313
350
600
650
VIS Sulfato de cobre de 20 g/L
700
750
5.5.3 Calcular el valor promedio, la desviación estándar y la desviación estándar

relativa (%RSDr) de los 6 valores de absorbancia obtenidos para cada una de las
longitudes de onda.
5.5.4 Sólo para UV, calcular la absorbancia específica a partir del valor promedio de la
absorbancia obtenida para cada longitud de onda de acuerdo a la siguiente
formula:
Dónde:
A= Absorbancia de la disolución de dicromato de potasio obtenida a la longitud
de onda específica
b= Longitud de paso de absorción (1 cm)
c = Concentración de la disolución de dicromato de potasio expresada en
mg/100 mL
5.5.5 Comparar contra los valores establecidos en el numeral 5.9.3.

154
Revisión 3
5.6 Criterio No. 6.- Linealidad fotométrica
5.6.1 Espectro UV
 Ajustar el instrumento a 0 de absorbancia con la disolución de ácido sulfúrico al

0.01 N o la disolución de ácido perclórico establecida por el fabricante.
 Leer la absorbancia de las disoluciones de dicromato de potasio de 20, 40, 60, 80 y
100 mg/L a las longitudes de onda 235, 257, 313 y 350 nm.
5.6.2 Espectro VIS
 Ajustar a 0 de absorbancia del instrumento con la disolución de ácido sulfúrico al

0.01 N
 Leer la absorbancia de las disoluciones de sulfato de cobre de 20, 40, 60, 80 y 100
g/L a las longitudes de onda de 600 y 650nm.
5.6.3 Elaborar un gráfico de linealidad de la absorbancia promedio obtenida (eje y)
contra las concentraciones de dicromato de potasio o sulfato de cobre según
corresponda (eje x), para cada una de las longitudes de onda.
5.6.4 Calcular el coeficiente de determinación (r2) de cada serie y de cada longitud de
onda.
5.6.5 Comparar contra el valor establecido en el numeral 5.9.4.
5.7 Criterio No. 7.- Luz dispersa
5.7.1 Ajustar el instrumento a 0 de absorbancia con:
a) Agua destilada si se utiliza la disolución preparada en el laboratorio

b) Para disoluciones comerciales y filtros líquidos conforme a las especificaciones del
fabricante.
5.7.2 Leer la absorbancia por triplicado de la disolución de cloruro de potasio a una
longitud de onda de 198 nm y obtener el valor promedio.
5.7.3 Comparar contra el valor establecido en el numeral 5.9.5.
5.8 Criterio No. 8.- Resolución espectral
5.8.1 Ajustar el instrumento a 0 de absorbancia con hexano

5.8.2 Leer la absorbancia por triplicado de la disolución de tolueno a las longitudes
de onda de 269 nm y 266 nm.

155
Revisión 3
5.8.3 Obtener los valores promedio y calcular la relación de la absorbancia máxima
contra la absorbancia mínima.
5.8.4 Comparar contra el valor establecido en el numeral 5.9.6
5.9 Criterio No. 9.- Requerimientos metrológicos
5.9.1 Absorción de celda
Región espectral Longitud de onda Requerimiento metrológico

UV 240 nm ≤ 0.093 uA
VIS 650 nm ≤ 0.035 uA
Rotación de celda Diferencia ≤ 0.005 uA
5.9.2 Sesgo de longitud de onda

Región espectral Requerimiento metrológico
UV ± 1 nm
± 2 nm (sólo para arreglo de diodos)

VIS
± 3 nm
5.9.3 Sesgo y repetibilidad fotométrica

Requerimiento metrológico
Longitud de onda
Región espectral )
(nm)
235 122.9 a 126.2
257 142.8 a 146.2
UV
313 47.0 a 50.3
350 105.6 a 109.0
Longitud de onda Requerimiento metrológico

Región espectral
(nm) (uA)
600 0.048 a 0.088
650 0.204 a 0.244
VIS
700 0.507 a 0.547
750 0.797 a 0.837
La desviación estándar relativa (%RSDr) de las 6 lecturas de absorbancia para cada

longitud de onda debe ser ≤ 1%.

156
Revisión 3
5.9.4 Linealidad fotométrica
Longitud de onda
Región espectral Requerimiento metrológico
(nm)
235
257
UV
313
r2 ≥ 0.999
350
600
VIS
650
5.9.5 Luz dispersa

198 nm Absorbancia ≥ 2.0 uA
5.9.6 Resolución espectral

269 nm y 266 nm ≥ 1.3
Los resultados obtenidos de la verificación deben ser reportados en el CCAYAC-F-622

“Verificación metrológica de espectrómetros de UV-Visible”
Documentos Clave
6.1 Verificación metrológica de espectrómetros de UV-Visible CCAYAC-F-622
7. BIBLIOGRAFÍA.
Documentos
ASTM E275-08. Standard Practice for Describing and Measuring Peformance of
7.1
Ultraviolet and Visible Spectrophotometers. Reapproved 2013
European Pharmacopoeia, 9.0. 2.2.25 Absorption spectrophotometry, ultraviolet
7.2
and visible.
IANZ. Technical Guide AS TG4. 2005. UV/Vis Spectrophotometer Calibration
Procedures. Second edition
7.3
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/CalibracionEspectrofotometro_24858.p
df

157
Revisión 3
Documentos
ISO 10012:2003. Measurement management systems-Requirements for
7.4
measurement processes and measuring equipment
MSL Technical Guide 38. 2017 Reference materials for the calibration of UV/visible
7.5 light spectrophotometers. Versión 4.
https://measurement.govt.nz/download/10
OMCL Network of the Council of Europe, 2007. Quality Assurance Document.
Qualification of Equipment. Annex 3. Qualification of UV-Visible
7.6 Spectrophotometers. PA/PH/OMCL (07) 11 DEF CORR
https://www.edqm.eu/medias/fichiers/Annex_3_Qualification_of_UV_Visible_spectro
photometers.pdf
Starna, 2017 Certified Reference Materials for UV and Visible Spectroscopy.
7.7
https://www.anadis.nl/source/Starna/Anadis_reference_material_catalogue2017.pdf
The International Pharmacopoeia, 2018. 1.6 Spectrophotometry in the visible and
7.8
ultraviolet regions. Seventh Edition
The United States Pharmacopoeia, 2018. 857 Ultraviolet-Visible Spectroscopy.
7.9
1857 Ultraviolet-Visible Spectroscopy- Theory and Practice. Ed. 41
Valid Analytical Measurement (VAM) Programme, 2000. Guidance on Equipment
Qualification of Analytical Instruments: UV-Visible Spectro (photo) meters (UV-
7.10
Vis). Version 1.0
http://blpd.dss.go.th/training/dwdocuments/enews/vam_uvvis.pdf
8. ANEXOS.
8.1 Preparación de disoluciones
8.1.1 Disolución de óxido de holmio al 4 % (m/v)

Disolver en un vaso de precipitados 4.0 g de óxido de holmio (III) con una pureza ≥ 99.5%
y llevar a un volumen de 100 mL con ácido perclórico al 10% (v/v). Calentar y agitar para
facilitar su disolución. Dejar en reposo por 24 h a temperatura ambiente.
8.1.2 Disolución de dicromato de potasio de 60 mg/L
Disolver de 57.0 a 63.0 mg de dicromato de potasio con una pureza ≥ 99.9 % y

previamente secado en estufa a 130°C por dos horas, con disolución de ácido sulfúrico
0.01 N y llevar a un volumen de 1 L con la misma disolución ácida.
8.1.3 Disolución de ácido sulfúrico 0.01 N.
Medir 280 µL de ácido al 95-97%, diluir con agua destilada y llevar a un volumen de 1 L.
Homogeneizar

158
Revisión 3
8.1.4 Disolución de dicromato de potasio de 100 mg/L en ácido sulfúrico.
Disolver de 100 mg de dicromato de potasio con una pureza ≥ 99.9 % y previamente

secado en estufa a 130°C por dos horas, con disolución de ácido sulfúrico 0.01 N y llevar a
un volumen de 1 L con la misma disolución ácida.
8.1.5 Disoluciones de dicromato de potasio.
A partir de la disolución de 100 mg/L preparar, las disoluciones como se indica en la

siguiente tabla:
Volumen de disolución de 100
Concentración Volumen de aforo
mg/L
(mg/L) (mL)
(mL)
20 10 50
40 20 50
60 30 50
80 40 50
100 0 50
Llevar al volumen de aforo con disolución de ácido sulfúrico 0.01 N.
8.1 Disolución de cloruro de potasio de 12 g/L
Pesar 1.2 g de cloruro de potasio con una pureza ≥ 99.5 %, disolver en vaso de precipitados
con agua destilada y llevar a un volumen de 100 mL.
8.2 Disolución de tolueno al 0.02 % (v/v)
Medir 20 µL de tolueno grado espectrofotométrico y llevar a un volumen de 100 mL con

hexano grado espectrofotométrico.
8.3 Disolución de sulfato de cobre de 100 g/L
Disolver en un vaso de precipitados 10.0 g de sulfato de cobre pentahidratado, de una

pureza ≥ 99,9%, en suficiente agua destilada. Adicionar con cuidado, 1 mL de ácido
sulfúrico, y trasvasar cuantitativamente la solución a un matraz volumétrico de 100 mL.
Llevar al volumen con agua.

159
Revisión 3
8.4 Disoluciones de sulfato de cobre
A partir de la disolución de 100 g/L preparar, las disoluciones como se indica en la

siguiente tabla:
Volumen de disolución de 100 g/L

Concentración Volumen de aforo
(mL)
(g/L) (mL)
20 5 25
40 10 25
60 15 25
80 20 25
100 0 25
Llevar al volumen de aforo con disolución de ácido sulfúrico al 1%.

160
Revisión 3
termómetros
(Conforme al documento CCAYAC-IT-090).

161
Revisión 3
Documento Técnico de verificación metrológica de termómetros
(Conforme al documento CCAYAC-IT-090)
1. OBJETIVO
Establecer los lineamientos para llevar a cabo el uso, registro de temperatura y

verificación metrológica de termómetros.
2. ALCANCE
2.1 Termómetros de líquido en vidrio de referencia y trabajo
2.2 Termopares de referencia y trabajo
2.3 Termómetros de resistencia de platino de referencia
2.4 Termistores de trabajo
3. DEFINICIONES
3.1 Bulbo, al reservorio para el líquido del termómetro.

3.2 Cámara de contracción, a la ampliación del capilar que se localiza por debajo de la
escala principal o entre la escala principal y la escala auxiliar y que sirve para
reducir la longitud del termómetro o para evitar la contracción de la columna de
líquido en el bulbo.
3.3 Cámara de expansión, a la ampliación en el extremo superior del capilar que
proporciona protección contra la posible distensión o rotura del bulbo como
resultado de presiones excesivas de líquidos y gases cuando un termómetro es
expuesto a una temperatura mayor que su intervalo de trabajo.
3.4 Clase de precisión, a la clase de termómetros de líquido en vidrio que cumplen los
requisitos metrológicos destinados a mantener los errores dentro de los límites
especificados.
3.5 Corrección, a la compensación de una temperatura estimada.
3.6 Error de escala, a la capacidad limitada (resolución), para distinguir dos valores
muy próximos de la magnitud medida.
3.7 Error de medida, a la diferencia entre un valor de temperatura medido y un valor
de temperatura de referencia.
3.8 Error máximo permisible (EMP), a los valores extremos de un error permitido por
las especificaciones, regulaciones, etc.
3.9 Escala principal, a la escala graduada en grados Celsius, y que cubre las
temperaturas del intervalo de trabajo del termómetro.

162
Revisión 3
3.10 Escala auxiliar, a la escala corta opcional, ya sea en el extremo inferior o superior
del termómetro, que contiene un punto de referencia, generalmente el punto de
congelación (0 ° C).
3.11 Intervalo de uso, al conjunto de valores de temperatura para los cuales está
previsto que el error del termómetro se encuentre dentro de los límites
especificados.
3.12 Punto de referencia, a la temperatura en una de fase física de transición, tal como
el punto de congelación o el punto triple del agua, en el cual se verifican cambios
en el volumen de bulbo y la separación del líquido en el capilar.
3.13 Requisito de desempeño metrológico, al requisito que puede ser expresado
como un error máximo permitido, incertidumbre permitida, límites de medición,
estabilidad, resolución, condiciones ambientales, o habilidades del operador. Antes
conocido como criterio de aceptación.
3.14 Termistor, a la resistencia sensible a la temperatura hecha de pequeñas perlas de
varios óxidos semiconductores. En los tipos más comunes de coeficiente de
temperatura negativo (NTC), la resistencia aumenta muy fuertemente a medida
que desciende la temperatura.
3.15 Termómetro de inmersión parcial, al termómetro que tiene una marca en el
vástago y que indica la longitud a la cual debe ser insertado o sumergido en el
equipo que va a ser monitoreado, por ejemplo baño de agua o un bloque de calor.
3.16 Termómetro de inmersión completa, al termómetro que está diseñado para ser
inmerso completamente en el medio a medir, por ejemplo congelador,
refrigerador, estufa.
3.17 Termómetro de inmersión total, al termómetro que está diseñado para que la
columna de líquido completa se sumerja en el medio de manera que la parte
superior de la columna de líquido se encuentre en el mismo plano que la superficie
del medio.
3.18 Termómetro de líquido en vidrio, al termómetro que indica la temperatura según
la distancia que un líquido contenido en un bulbo de vidrio se ha expandido y
viajado hacia un tubo capilar de conexión. Suele utilizarse mercurio o alcoholes
coloreados. El tubo capilar sobre la columna de líquido generalmente contiene un
gas como nitrógeno seco. Hay tres diseños comunes: inmersión completa, parcial y
total.
3.19 Termopar, al par de conductores de distintos materiales unidos por un extremo y
que forman parte de una disposición que utiliza el efecto termoeléctrico para la
medida de la temperatura.
3.20 Termómetro de resistencia de platino, a la resistencia sensible a la temperatura,
hecha de una resistencia termométrica implementada en una vaina de protección
con conductores de tensión internos con salidas externas para permitir la conexión
a un dispositivo de medición eléctrico. Puede incluir un enchufe o un conector
para la conexión.

163
Revisión 3
3.21 Vástago, al tubo que contiene el capilar a través del cual el líquido termométrico
se mueve con un cambio de temperatura.
3.22 Verificación metrológica, al procedimiento de prueba aplicado a un instrumento
de medición para demostrar consistencia en su respuesta
5. CRITERIOS
5.1.1 La escala de los termómetros debe ser establecida en grados Celsius (°C).
5.1.2 La identificación de los termómetros debe ser con el número de identificación
asignado
5.1.3 Previo a la verificación metrológica del termómetro, se debe llevar a cabo una
revisión visual del mismo como se indica en el numeral 5.8
5.1.4 No se debe utilizar un termómetro de inmersión total como inmersión parcial o un
termómetro de inmersión parcial como inmersión completa por producirse
errores de varios grados.
5.1.5 Los termómetros de líquido en vidrio se deben mantener en posición vertical. Se
exceptúa el termómetro ASTM 60C (mercurio-vidrio), que se utiliza en los baños
de agua para la prueba confirmatoria de coliformes fecales. El termómetro debe
permanecer sumergido en el baño de agua y al momento de realizar la lectura se
debe colocar en forma vertical, con el objetivo de evitar errores de paralaje.
5.1.6 El termómetro a verificar y el termómetro de referencia deben ser colocados en la
misma profundidad.
5.1.7 Los periodos de verificación pueden variar conforme a lo señalado en los
programas establecidos para cada caso.
5.1.8 Los termómetros citados en el numeral 2 deben ser calibrados con un organismo
acreditado vigente.
5.1.9 Durante el uso diario de los termómetros, a la lectura observada se debe aplicar el
factor de corrección o error máximo indicado en el certificado de calibración
respectivo de cada termómetro.

164
Revisión 3
5.2 Criterio No. 2.- Consideraciones para termómetros de referencia
5.2.1 Son termómetros de líquido en vidrio, tipo termopar o termómetro de resistencia

de platino.
5.2.2 Estar calibrados en cinco temperaturas distribuidas uniformemente, considerando
los dos extremos y tres puntos en el intervalo de uso común.
5.2.3 Deben contar con un informe de calibración vigente y trazable a un estándar
nacional o internacional de temperatura.
5.2.4 Realizar la verificación metrológica utilizando cualquiera de estas dos formas:
 En tres temperaturas dentro de su intervalo de uso, por comparación contra

otro termómetro de una escala menor o si no es posible de igual escala con
calibración vigente.
 En el punto de congelación (0°C) siendo el error obtenido aplicable a toda la
escala del mismo.
5.2.5 Deben seleccionarse teniendo en cuenta la precisión y el alcance de la medida
requerida del (de los) termómetro (s) de trabajo a verificar.
5.2.6 Deben calibrase anualmente y realizar verificaciones cada 6 meses ± 20 días
hábiles intercaladas entre cada calibración
5.3 Criterio No. 3.- Consideraciones para termómetros de trabajo
5.5.1 Son termómetros de líquido en vidrio, tipo termopar o tipo termistor.

5.5.2 Deben ser calibrados en las temperaturas de uso
5.5.3 Deben verificarse:
 En las temperaturas de uso, por comparación contra otro termómetro de

referencia de una escala menor o si no es posible de igual escala con calibración
vigente. Por ejemplo si se verifica un termómetro con una escala de 0.5 °C, el
termómetro debe tener una escala de 0.2 °C o 0.5 °C.
 A 0 °C solo los termómetros utilizados para medir temperaturas de
congelación
 Cuando se verifiquen termómetros de inmersión total y/o completa y la
temperatura a medir no pueda ser introducida en el medio, solo en este caso
considerar verificar hasta una temperatura que pueda introducirse en el medio
aunque no sea la de trabajo o aplicar la corrección por vástago emergente.
5.5.4 Los termómetros de trabajo que se utilicen para medir temperaturas que no
impactan directamente en el resultado del método de prueba se deben calibrar

165
Revisión 3
cada 3 años y verificar cada 6 meses ± 20 días hábiles. Por ejemplo los termómetros
usados en refrigeradores, congeladores, estufas para secado de reactivos o
estándares, baños de agua para mantenimiento de medios de cultivo y
termómetro de líquido en vidrio para registrar la temperatura ambiental, etc.
5.5.5 Los termómetros de trabajo donde la temperatura impacta en el resultado del
método se deben calibrar cada año y verificar cada 6 meses ± 20 días hábiles
intercala entre cada calibración, por ejemplo: termómetro ASTM 64C
(mercurio/vidrio) o ASTM S64C, termómetros usados en estufas para
determinación de humedad, incubadoras, hornos para esterilización, termistor en
la determinación de pirógenos, etc.
5.4 Criterio No. 4.- Operación de termómetros de líquido en vidrio
Seleccionar el tipo de termómetro, adecuado para el método de prueba:
 Termómetro de inmersión parcial

 Termómetro de inmersión total
 Termómetro de inmersión completa
5.5 Criterio No. 5.- Manejo y almacenamiento de termómetros
5.5.1 Colocar el termómetro de manera vertical. No debe estar inclinado

5.5.2 Evitar tocar el termómetro con las paredes o el fondo de la base del recipiente
5.5.3 Mantener el bulbo del termómetro dentro de la sustancia (agua, etanol,
disoluciones, etc.) o material (estufa, incubadora, etc) mientras se realiza la
medición de temperatura.
5.5.4 No se debe retirar el termómetro del medio para efectuar la lectura de
temperatura.
5.5.5 Golpear ligeramente el termómetro antes de tomar la lectura de temperatura.
5.5.6 Leer la temperatura ubicando la línea de visión a un ángulo recto con respecto a la
escala del termómetro.
5.5.7 Evitar la apreciación del observador durante la lectura de la temperatura, para lo
cual se deberá reportar de la siguiente manera:
 Si la medida se encuentra a la mitad de dos escalas se deberá tomar como

valor la magnitud superior.
 Si la medida se encuentra entre la media de dos magnitudes más cercana a la
magnitud inferior se deberá tomar el valor inferior próximo de la magnitud.
 Si la medida se encuentra entre la media de dos magnitudes más cercana a la
magnitud superior se deberá tomar el valor superior próximo de la magnitud

166
Revisión 3
5.5.8 Almacenar el termómetro de forma vertical o en un ángulo de al menos 15 grados,
no más.
5.6 Criterio No. 6.- Interpretación del certificado de calibración y uso del factor de
corrección o uso del error
5.6.1 Se tienen los siguientes datos para un termómetro de trabajo obtenidos de su

certificado de calibración:
Temperatura Temperatura
Temperatura Error Incertidumbre
promedio promedio IBC
nominal (°C) (°C) (°C)
patrón (°C) (°C)
-10 -9.99 -10.74 -0.75 0.31
4 3.98 3.75 -0.23 0.30
6 6.00 5.75 -0.25 0.30
5.6.2 En este caso como el informe reporta el error para cada una de las tres
temperaturas calibradas, el factor de corrección se obtiene cambiando el signo del
error
5.6.3 Si el informe reporta el factor de corrección o corrección, utilizar este valor
directamente sin cambiar el signo para calcular la temperatura corregida.
5.6.4 Utilizar solo los errores o factores de corrección reportados en el informe de
calibración. No se deben utilizar los obtenidos durante la verificación, ya que estos
valores solo son para demostrar que el estado de la calibración es consistente.

167
Revisión 3
 Ejemplo 1: Error
Lectura del termómetro: 37 ºC
Error reportado: - 0.2 °C
Corrección: 37 °C + 0.2 °C = 37.2 ºC
 Ejemplo 2: Error
Error reportado: 0.2 °C
Corrección: 37 °C - 0.2 °C = 36.8 ºC
 Ejemplo 3: Factor de corrección

Factor de corrección o corrección reportado: - 0.2 °C
Corrección: 37 °C - 0.2 °C = 36.8 ºC
 Ejemplo 4: Factor de corrección

Factor de corrección o corrección reportado: 0.2 °C
Corrección: 37 °C + 0.2 °C = 37.2 ºC
5.7 Criterio No. 7.- Interpolación del factor de corrección de certificados de

calibración
5.7.1 Seleccionar directamente del informe de calibración del termómetro de referencia,

las temperaturas inferior (T°inf) y superior (T°sup) reportadas para el instrumento bajo
calibración con base en la temperatura requerida (T°req) así como sus respectivos
factores de corrección (FCinf y FCsup).
5.7.2 Sustituir los valores en la siguiente ecuación para obtener el factor de corrección
(FCreq) de la temperatura a medir (T°req):
Dónde:
FCreq = Factor de corrección requerido (°C)

168
Revisión 3
FCsup = Factor de corrección superior (°C)
FCinf = Factor de corrección inferior (°C)
T°req= Temperatura requerida
T°sup = Temperatura superior (°C)
T°inf = Temperatura inferior (°C)
Ejemplo:
Se tienen los siguientes datos del informe de calibración de un termómetro de referencia:
Temperatura Temperatura
Temperatura Error Incertidumbre
promedio promedio IBC
nominal (°C) (°C) (°C)
patrón (°C) (°C)
-20 -19.88 -19.83 0.05 0.02
20 20.16 20.13 -0.03 0.02
60 60.00 59.92 -0.08 0.03
100 100.09 100.02 -0.07 0.03
140 139.87 139.84 -0.03 0.04
Se requiere obtener el factor de corrección para una temperatura de 28.5 °C.

Sustituyendo en la ecuación se tiene:
El factor de corrección obtenido para 28.5°C es 0.04°C
5.8 Criterio No. 8.-Revisión visual de los termómetros
5.8.1 Para el termómetro de líquido en vidrio
Característica Verificar que:

No exista presencia de material extraño o ruptura. Debe estar
Bulbo libre de gas y si está presente este deberá removerse conforme
a lo establecido en el anexo 4
No exista ruptura, raspadura y/o presencia del algún material
Capilar
extraño que impida visualizar la columna del líquido
No haya separación del líquido en la columna. En caso de
Líquido haber separación corregir conforme a lo establecido en el
anexo 3
Escala No exista desgaste en la escala que impida una lectura correcta

169
Revisión 3
de la temperatura. Las marcas deben ser claras, rectas y
uniformes. La escala auxiliar, cuando se incluya, tendrá un
mínimo de diez divisiones de escala, cinco por arriba y cinco
por debajo del punto de referencia.
Cámara de expansión
No haya separación del líquido en la columna
y contracción
5.8.2 Los termómetros tipo termopar, termistor y resistencia de platino deben ser
revisados para asegurar que los cables estén libres de abolladuras, aislamiento
y empalmes mal realizados.
5.9 Criterio No. 9.- Verificación metrológica
5.9.1 Verificación metrológica en el punto de congelación
a) Colocar el termómetro en el calibrador de temperatura de bloque seco o

baño de hielo. Seleccionar la temperatura a 0 °C:
 Para termómetros de inmersión total, colocar en el bloque o baño de forma
que el menisco este aproximadamente dos divisiones de la escala por arriba de la
superficie para registrar la lectura.
 Para termómetros de inmersión parcial colocar hasta la línea de inmersión o
en la profundidad especificada.
b) Una vez alcanzada la temperatura de 0 °C dejar estabilizar por 15 a 20
minutos. Comprobar con varias lecturas previas que el equilibrio ha sido
alcanzado.
c) Golpear ligeramente el termómetro antes de realizar la lectura de
temperatura, para eliminar la posibilidad de que el mercurio esté atascado
en la columna.
d) Registrar en el CCAYAC-F-123 ó CCAYAC-F-801 según corresponda.
e) Los termómetros que se verifican en el punto de congelación (0 °C) no
necesitan compararse contra un termómetro de referencia a esta
temperatura.
5.9.2 Verificación metrológica por comparación
a) Insertar el termómetro de referencia y los termómetros de prueba en el

calibrador de temperatura de bloque seco o baño de agua.
b) Seleccionar la temperatura de verificación. Una vez alcanzada la
temperatura dejar estabilizar por 15 a 20 minutos.
c) Cuando la temperatura del bloque seco se haya estabilizado, leer la
temperatura en el orden siguiente (golpeando ligeramente cada

170
Revisión 3
termómetro): TR, TV1, TV2, TV3 y TV4 y TV4, TV3, TV2, TV1, TR y registrar las
lecturas en el orden que se van realizando.
d) Considerar dos temperaturas, una a cada lado de la temperatura requerida
tomando en cuenta la resolución del termómetro. Por ejemplo, si se quiere
verificar un termómetro a 37.0 °C y éste tiene una resolución de ± 0.5 °C, las
temperaturas que deben verificarse son 36.5 °C y 37.5 °C
e) Realizar dos lecturas de cada temperatura de verificación, dejando un
intervalo aproximado de 5 minutos entre cada lectura. Realizar las lecturas
desde la más baja requerida hasta la más alta.
f) Corregir la lectura del termómetro de referencia de acuerdo al error o factor
de corrección reportado en su certificado de calibración. Si la temperatura
seleccionada no se encuentra en el certificado, calcular su error conforme a
la establecido en el numeral 5.7.
g) Registrar en los formatos CCAYAC-F-123 ó CCAYAC-F-801 según
corresponda.
h) No se debe realizar la verificación de más de cuatro termómetros a la vez.
5.9.3 Corrección por vástago emergente
a) Cuando se verifique un termómetro de inmersión total o completa y que el

vástago no pueda introducirse a la temperatura requerida, se debe colocar
otro termómetro de referencia pequeño en el vástago del termómetro
aproximadamente a un tercio de la columna expuesta (ver figura) y aplicar
la corrección por vástago emergente de acuerdo a las indicaciones
siguientes:

171
Revisión 3
b) Realizar una corrección a la lectura del termómetro considerado la siguiente
ecuación:
Corrección por vástago emergente = k N (Tc – Tu)
Dónde:
k= Coeficiente de expansión
N= Número de grados de la escala expuesta
Tc= Temperatura del baño durante la verificación
Tu= Temperatura de la escala expuesta durante la verificación (dada por el termómetro
unido al vástago)
Coeficiente de expansión
Líquido termométrico Intervalo típico °C
típico relativo en vidrio (k)
Mercurio y Mercurio – Talio - 38 ….+600 0.00016
Etanol - 80….+60 0.00104
Tolueno - 80….+100 0.00103
Pentano -200….+30 0.00145
Ejemplo:
Termómetro de inmersión total de líquido en vidrio de mercurio con escala de 0°C a

100°C y una resolución de 0.5°C en un baño con agua a 55°C pero inmerso a la marca de
30°C.
K = 0.00016 °C-1
N = 55°C – 30°C = 25°C
Tc = 55°C
Tu = 25°C
Corrección = k N (Tc – Tu)
Corrección = 0.00016 X 25 (55-25) = + 0.12°C redondeando a la escala = + 0.1°C

172
Revisión 3
c) Estas correcciones se realizan además de las correcciones de escala
requeridas por el certificado de calibración (EM certificado + Corrección)
5.10 Informe de resultados
5.10.1 El termómetro cumple con la verificación metrológica si el error de temperatura

obtenido es menor o igual al valor del error máximo permitido.
5.10.2 Si el error de temperatura es mayor que el error máximo permitido, debe quedar
establecido en el formato en el apartado de observaciones del CCAYAC-F-123 o
CCAYAC-F-801 según corresponda y a juicio del usuario, si se utiliza el termómetro
tomando como base el criterio de temperatura (±) establecido en el método
analítico.
Documentos Clave
6.1 Verificación metrológica de termómetros de líquido en vidrio CCAYAC-F-123
Verificación metrológica de termopares y termómetros de
6.2 CCAYAC-F-801
resistencia
7. BIBLIOGRAFÍA
Documentos
ASTM E77-14. Standard Test Method for Inspection and Verification of
7.1
Thermometers
Enríquez Palma P.A. Estadística y Programación aplicada a la Química.
Introducción al análisis de datos experimentales. Área de Química Física.
7.2 Departamento de Química. Licenciatura en Química, Universidad de La Rioja
https://www.unirioja.es/cu/enriquez/docencia/epaq/AnalisisDatosExperimentales.
pdf
Horrigan C & Bentley E.R. (2004). Liquid-in-Glass Thermometry. Monograph 9:
7.3
NMI Technology Transfer Series. First Edition
International Accreditation New Zealand, (2020). Working Thermometers-
Calibration Requirements. Technical Guide. Fifth edition
7.4 https://assets.website-
files.com/5e447d8550a99c8326ee5ae6/5fc02b81c7b8aba63e3cdc54_AS%20TG%20
3%20Working%20Thermometers%20-%20Calibration%20Requirements.pdf
International Standard. ISO-386:1977. Liquid-in-glass laboratory thermometers –
7.5 Principles of design, construction and use.
This standard was last reviewed and confirmed in 2017. Therefore this version

173
Revisión 3
Documentos
remains current.
Measurement Standards Laboratory of New Zealand. (2020). Interpolating

7.6
Corrections from Calibration Certificates. MSL Technical Guide 40
National Association of Testing Authorities, (2019). General Accreditation
Guidance. Liquid-in-glass thermometers-selection, use and calibration.
7.7
https://www.nata.com.au/phocadownload/gen-accreditation-guidance/Liquid-in-
glass-Thermometers-Selection-Use-and-Calibration.pdf
OIML-R-133-1, 2002 (E). Liquid-in-glass-thermometers
7.8
http://2013.oiml.org/publications/R/R133-e02.pdf
United Kingdom Accreditation Service (UKAS), (2012). Traceability of
Temperature Measurement. Platinum Resistance Thermometers,
Thermocouples, Liquid-in-glass Thermometers and Radiation Thermometers. LAB
7.9
11. Edition 4
https://www.ukas.com/wp-content/uploads/schedule_uploads/759162/LAB-11-
Traceability-of-Temperature-Measurement.pdf
White D.R., (2017). MSL Technical Guide 1. The Ice Point. Version 2
7.10 https://measurement.govt.nz/resources/#collapse-control-1-4
8. ANEXOS
Anexo 1.- Clasificación de termómetros

Anexo 2.- Ejemplo de CCAYAC-F-123 y CCAYAC-F-801
Anexo 3.- Reparación de termómetros con columnas separadas
Anexo 4.- Eliminación de gas en bulbo en termómetro de líquido en vidrio de
mercurio
Anexo 5.- Requisitos de desempeño metrológico

174
Revisión 3
Anexo 1
Clasificación de termómetros
I. Termómetros de líquido en vidrio
Los termómetros de líquido en vidrio son usualmente utilizados para la medición de la

temperatura de fluidos. La elección del tipo de inmersión depende de la medición
requerida, la profundidad del fluido y el tipo de montaje
A) Tipos de
termómetros

175
Revisión 3
B) Partes que
conforman un termómetro de líquido en vidrio
a) Termómetro de
inmersión parcial
Diseñado para indicar la temperatura correctamente cuando el bulbo y una porción

específica de la columna (menisco) están inmersos en el medio a la temperatura que va a
ser medida.
El menisco se usa como indicador. La forma del menisco es para el mercurio, la parte
superior de la curva y para líquidos orgánicos, la parte inferior.
b) Termómetro de
inmersión total
Está diseñado para indicar la temperatura correctamente cuando el bulbo y toda la

columna del líquido (una o dos magnitudes por arriba del nivel del líquido) están
inmersos en el medio a la temperatura que va a ser medida.
c) Termómetro de
inmersión completa

176
Revisión 3
Está diseñado para indicar la temperatura correctamente cuando todo el termómetro,
incluyendo la cámara de expansión están expuestos en el medio a la temperatura que va
a ser medida.
II. Termopares
De resistencia de platino
El termómetro de resistencia eléctrica de platino se fundamenta en el principio de que la

resistencia eléctrica de los materiales depende de la temperatura, y varía de modo casi
lineal al valor de ésta. La sonda de platino ofrece una medición estable y exacta.
Se utiliza con lectores donde se mide la resistencia y se calcula la temperatura a partir de

coeficientes de calibración. Los cálculos de temperatura se realizan internamente y el
lector presenta los datos en unidades de temperatura en tiempo real.

177
Revisión 3
III. Termistor
Un termistor es un sensor que detecta el cambio de temperatura de un producto

basándose en los cambios que sufre una resistencia. Existen dos tipos de termistores, los
termistores PTC, donde la resistencia aumenta a medida que aumenta la temperatura y,
por el contrario, con termistores NTC, la resistencia disminuye a medida que aumenta la
temperatura. Los termistores NTC están diseñados para ser más sensibles a cambios de
temperatura en el extremo inferior (más frío) del rango.

178
Revisión 3
Anexo 2
Ejemplo del CCAYAC-F-123

179
Revisión 3
180
Revisión 3
Ejemplo del CCAYAC-F-801

181
Revisión 3
182
Revisión 3
Anexo 3
Reparación de termómetros con columnas separadas
Método de enfriamiento
a) Utilizando guantes, tomar el termómetro por la parte superior y lentamente

sumergir el bulbo en una disolución de hielo seco y acetona/alcohol en un
contenedor hasta una profundidad de al menos 1 cm por encima del bulbo
b) Permitir que la columna se retraiga lentamente hacia el bulbo, evitando el
enfriamiento del resto del termómetro. Realizar este proceso muy
lentamente.
c) Remover el bulbo según sea necesario para retardar el movimiento del
líquido
d) Continuar hasta que la columna separada y la columna principal se retraigan
dentro del bulbo, en algunos casos puede ser necesario balancear el
termómetro en un arco pequeño para suavemente capturar el líquido
dentro del bulbo.
e) Permitir que el bulbo llegue a temperatura ambiente en la posición vertical,
de tal forma que el gas permanezca en la parte superior.
Precauciones:
a) Nunca tocar el bulbo hasta que haya alcanzado la temperatura ambiente

b) No tocar el bulbo con la mano ya que la temperatura corporal puede
romperlo.
c) La temperatura del hielo seco es de aproximadamente -78 °C y el mercurio
se congela a – 39 °C.
d) Nunca someter la columna de mercurio a la disolución de enfriamiento.
Método de calentamiento
a) Usar este método para termómetros con cámara de expansión por encima
de la escala
b) Introducir tanto como sea posible el bulbo y el cuerpo del termómetro en un
vaso de precipitados o baño de agua que contenga un líquido que no
ebulla aún a las temperaturas más altas indicadas en el termómetro que se
va a corregir.
c) Calentar el líquido y agitarlo con el termómetro hasta que la columna
principal y la columna separada entren a la cámara y dejar enfriar el
termómetro en forma vertical a temperatura ambiente

183
Revisión 3
Precauciones:
a) El método de calentamiento se usa solo para termómetros con cámara de

expansión.
b) Este método solo aplica para termómetros con un máximo de temperatura
de 260 °C.
c) Nunca llenar la cámara de expansión más allá de las dos terceras partes de
su capacidad.
Cuando se realice la reparación de la columna de un termómetro de líquido en vidrio, se

debe realizar la verificación metrológica del instrumento. Si los resultados no son acordes
a la exactitud del instrumento o a los resultados establecidos en el certificado de su
última calibración, el instrumento no puede volver a ser usado hasta que se envíe a
calibrar.
Anexo 4
Eliminación de gas en bulbo en termómetro de líquido en vidrio de mercurio
a) Sumergir el bulbo del termómetro en un baño se agua o en un horno a una

temperatura igual a la temperatura máxima especificada de su rango de
trabajo. Posteriormente de que el termómetro haya alcanzado la
temperatura de equilibrio, observando del nivel cambios en el fluido
termométrico, retire el termómetro del baño u horno y dejar enfriar
lentamente en el aire a una temperatura de 20 ° C, por encima de la
temperatura ambiente o a 50 ° C, la que sea menor. Colocar el termómetro
en un baño de referencia, tal como un baño de hielo y registrar la
temperatura indicada dentro de 1 hora.
b) Colocar el bulbo del termómetro en la parte del baño de agua o en un horno
en las mismas condiciones anteriormente citadas. Después de un periodo
de 24 horas, retirar el termómetro y dejar que se enfríe. Colocar el
termómetro de referencia en el baño y registrar la temperatura indicada.
c) La diferencia entre las temperaturas registradas deberá estar dentro del ±
70% del error máximo permisible del termómetro.

184
Revisión 3
Anexo 5
Requisitos de desempeño metrológico
Termómetros de líquido en vidrio
Clase de exactitud Resolución (°C) Error máximo permisible (°C)

A 0.1 ≤ 0.1
B 0.2 ≤ 0.2
C 0.5 ≤ 0.5
D 1.0 ≤ 1.0
E 2.0 ≤ 2.0
OIML R 133. Organización Internacional de Metrología Legal. Edición 2002E

ISO 386: 1977 Liquid in glass laboratory thermometers-Principle of design, construction and use.
Termopares
Intervalo de
funcionamiento
Tipo de Tolerancias de salida de
Combinación de conductores aproximado de
termopar termopar a IEC 60584-1
temperatura de la
unión de medida
Conductor + Conductor - Continuo Puntual Tipo Clase 1 Clase 2
-40 °C -40 °C
Intervalo de
Niquel-Cromo Niquel-Aluminio a +375 a +333
temperatura
°C °C
K También
0 °C a +1000 -180 °C a
conocido como: También conocido
°C +1350 °C
ChormelTM , como: Ni-Al, AlumelTM,
Tolerancia ± 1.5 °C ± 2.5 °C
Thermokanthal ThermokanthalKNTM,
KP*, NiCr, T1*, T2TM, NI-AlTM
TophelTM
IEC 60584-1 ED. 3.0 B:2013 Thermocouples-Part 1: EMF specifications and tolerances

185
Revisión 3

Compendio 2023 2023-09-21

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COMPENDIO DE DOCUMENTOS TÉCNICOS DE

Tercera revisión, septiembre 2023.

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Establecer los Documentos Técnicos de Referencia Analítica aplicables a métodos

D. Documentos Técnicos de Referencia Analítica

A continuación se describen los documentos técnicos de referencia analítica establecidos

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Establecer las directrices para realizar la verificación o validación interna de los

 Métodos fisicoquímicos para el análisis de agua, alimentos y otros productos

3.1 Analito: Componente específico de una muestra a medir en un análisis ya sea

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5.1.2 Las características de desempeño consideradas para métodos cuantitativos o

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5.1.5 La verificación o la validación interna se lleva a cabo con base al protocolo

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En cualquiera de los casos debe realizarse un “Reporte de re-verificación o re-validación

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5.2.5 Se mantiene vigente la verificación o la validación interna del método de prueba a

5.2.6 Si el laboratorio modifica o mejora la metodología, incluyendo cambios del método

5.3 Criterio No. 3.-Clasificación de métodos

Se consideran métodos compendiados los publicados en:

 Normas Oficiales Mexicanas (NOM)

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5.4 Criterio No. 4.- Verificación de métodos de prueba

 Los métodos compendiados, considerando la matriz o matrices sobre la cual se

5.5 Criterio No. 5.-Validación interna de métodos de prueba

Se deben validar internamente:

 Los métodos de prueba no compendiados, obtenidos de una nota técnica,

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5.6 Criterio No. 6.- Evaluación de las características de desempeño

 Calibración de todo el proceso analítico: Incluye todos los pasos de la

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 Se determina a partir del análisis de una muestra con concentraciones

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 Aplica para verificaciones o validaciones internas donde se ha realizado

 Si no se cuenta con un segundo analista para la evaluación de la precisión

 En un método analítico sensible, ligeros incrementos de concentración,

 Aplica para métodos fisicoquímicos cualitativos de pruebas límite y

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 Consiste en identificar los factores que pueden tener un efecto significativo en

 La incertidumbre es un parámetro asociado al resultado de una medida, que

5.7 Criterio No. 7.- Protocolo de verificación o validación interna de métodos de

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 Debe expresar el método, tipo de muestra que aplica, el

Determinación de A {analito o mesurando} en presencia de

 Debe indicar la característica de desempeño que se

 Linealidad del sistema

 El principio de la medición (Cromatografía de gases o

Debe ser la manera rápida y resumida que permita delimitar la

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 El analito (s) o el mesurando (s) el cual debe ser

 La forma en la cual debe ser determinado.