Dicroismo Circular

Dicroismo Circular
Dicroismo Circular
Dicroismo Circular (CD) es un tipo de spectroscopía de
absorción que entrega información de la estructura de
macromoleculas biológicas.
La técnica se basa en la absorción diferencial de la luz
polarizada a la derecha y a la izquierda debido a la asimetria
estructural de las macromoleculas. Si la estructura de la
macromolecula es regular se observa un espectro con señal
positiva y negativa.
Jasco J-1700 Circular Dichroism System

Moléculas quirales pueden ser detectadas y
caracterizadas por la luz polarizada
Rotación óptica: la rotación de la luz polarizada

linealmente por la interacción con las móleculas
Dicroismo Circular :la diferencia de absorción de
la luz polarizada circularmente a la derecha y a la
izquierda
Las moléculas quirales presentan actividad
óptica
Luz polarizada en un plano
La interacción de una molécula quiral con la luz polarizada es muy específica y ha
demostrado ser un método importante para la caracterización estructural tanto de
moléculas pequeñas como de macromoléculas
• Dos haces de luz polarizados en un plano (una perpendicular a
la otra) que están en la misma fase y poseen igual magnitud y
longitud de onda.
Luz polarizada verticalmente
Luz polarizada horizontalmente
Resultante, Luz polarizada a 45°
Luz polarizada en un plano y luz
polarizada circularmente
• Una fuente de luz por lo general consiste en un conjunto de
emisores orientadas al azar, la luz emitida es una colección de las
ondas de todas las orientaciones posibles del vector E.
La luz polarizada en un plano se obtiene al pasar a través de un
polarizador que transmite la luz con un único plano de
polarización. es decir, que sólo deja pasar a aquellos
componentes del vector E que son paralelos al eje del
polarizador.
• Un haz de luz polarizado circularmente, se obtiene girando el

plano de polarización de forma continua y en un solo sentido
alrededor del eje de propagación de la fase luminosa.
Luz Circularmente polarizada
Luz Circularmente polarizada
La luz polarizada circularmente se puede producir por la
superposición de dos haces de luz que están oscilando
perpendicularmente entre sí y propagándose con una diferencia de
fase de 90 grados.
Dicroismo Circular
• Medida de como un compuesto ópticamente activo absorbe
lus polarizada a la izquierda y a la derecha
• Todos los compuestos ópticamente activos presentan CD
en una región apropiada del espectro electromagnético
• CD es graficado como l-r vs 
• Para CD, la radiación transmitida resultante no es
polarizada en un plano , pero es elípticamente polarizada
kl − k r
molar circular dichroism =  l −  r =
c
k from I = I o10 − kd
• Elipticidad
tan    (radianes)
ER − EL
tan  =
ER + EL
De la ley de Beer:
Reemplazando en la formula de eliptisidad:

DA <<1, esta expresión se puede aproximar mediante la ampliación de las exponenciales en serie de
Taylor de primer orden y luego descartar términos de DA en comparación con la unidad y convirtiendo
de radianes a grados:
2.303( AL − A R )
(
 rad cm -1
) =
4l
Se define la elipiticidad molar como:
Combinando las dos últimas expresiones con la ley de Beer, se obtiene:

El enlace peptídico es de por sí asimétrico y ópticamente activo.
Cualquier actividad óptica de cromóforos de las cadenas laterales es

inducida y resulta de la interacción con grupos vecinos asimétricos
Espectro CD para diferentes
estructuras secundarias
Alfa hélice máximo a 192 nm y dos mínimos a 209 y 222 nm
Hojas beta máximo a 196 nm y mínimo a 218
Random coil máximo a 212 nm y mínimo a 195 nm
MÉTODOS DE ANALISIS DE ESPECTROS DE DC
- MÉTODO EMPIRICO (cualitativo)

• Ajustar la curva desconocida de
CD, curva d , a una
conbinación de curvas estandard
• En el caso más sencillo utilizar
el espectro estándar para
estructuras secundarias
t = xaa + xbb + xcc
• Variar xa, xb y xc para obtener
el mejor ajuste de t para d
donde xa+ xb + xc = 1,0
• Mejor ajuste con:
xa= 80%; xb=0%; xc= 20%
concuerda bien con la estructura:
78% helice, 22% otro
5
Proteína de membrana Pre-PsbW 4
Molar Residue ellipticity

2
0
190 200 210 220 230 240 250 260
-1
No presenta estructura en -2
cloruro de guanidinio -3
Wavelength / nm
Alguna estructura en
tampón tris (multímeros)
En micelas de SDS (2
hélices)
Métodos Ab initio: Se basan en cálculos a partir de la ecuación de Rosenfeld. Estos cálculos
requieren mucho trabajo para asegurar que sean confiables, y generalmente solo sirven para
un determinado sistema.
Método de Análisis R = Im  0 μ f  •  f m 0 
Cromofórico
Requiere que el momento dipolar magnético sea  0

Requiere que el momento dipolar eléctrico sea  0

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Rotación óptica: la rotación de la luz polarizada

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Reemplazando en la formula de eliptisidad:

Se define la elipiticidad molar como:

Combinando las dos últimas expresiones con la ley de Beer, se obtiene:

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