Práctica 8 Oficial

PRÁCTICA 8.
Respuesta Biológica a
Bacterias y Hongos
Estudiante: Rocio Canaza Mamani
Semestre II “A”
OBJETIVO
 La respuesta biológica a bacterias y hongos es explicada a través de
técnicas de diagnóstico
FUNDAMENTO
Las Salmonellas se consideran patógenos entéricos obligados. Los alimentos y
el agua contaminados son los mecanismos de transmisión. La enfermedad
puede presentarse como gastroenteritis, septicemia con lesiones en diversos
órganos o fiebre tifoidea.
La Brucelosis se presenta en la mayoría de los casos con anorexia, fiebre,
decaimiento y escalofríos, pudiendo aparecer luego complicaciones importantes
como son las óseas y neuropsíquicas.
A pesar de que el método definitivo para establecer la etiología de estas
enfermedades es a través del aislamiento del agente patógeno, esto resulta difícil
debido a que la investigación se realiza frecuentemente en períodos tardíos de
la enfermedad y luego de una terapia antibiótica. Por este motivo es de gran
importancia diagnóstica la detección de los anticuerpos específicos producidos
en el curso de cada una de estas patologías. Una prueba aislada es de escaso
valor, siendo necesarias 2 o más pruebas seriadas a fin de poner en evidencia
cambios en el título de anticuerpos.
El Género Candida comprende más de 150 especies, cuya principal
característica es la ausencia de forma sexual, con excepción de algunas
especies micóticas. Son clasificadas como levaduras, las cuales corresponden
a hongos con un modo de desarrollo predominantemente unicelular7.
Solamente una docena de las especies pertenecientes al Género Candida
poseen la facultad de adaptarse a una temperatura de 37°C. y pueden ser
ocasionalmente patógenas para el hombre, estas son entre otras: C. albicans,
C. tropicalis, C. kefyr (pseudotropicalis), C. krusei, C. guillermondi, C. parakrusei,
C. zeylanvides, C. stellatoidea y C. brumptii.
C. albicans suele presentarse como una célula oval levaduriforme de 2 a 4
micras, con paredes finas; sin embargo, en tejidos infectados también se han
identificado formas filamentosas de longitud variable, con extremos redondos de
3 a 5 micras de diámetro y seudohifas, que son células alargadas de levadura
que permanecen unidas entre sí.
MATERIALES
 Kit Antígenos Febriles Wiener
 Placa de vidrio
 Micropipetas
 Tubos de hemólisis
 Varilla
 Reloj o timer
 Candida
PROCEDIMIENTO
Determinación de salmonelosis
I. TECNICA RAPIDA EN PLACA
 Colocar en una placa una gota (50 ul) de suero y agregar una gota (50 ul)
de suspensión de Antígeno.
 Mezclar y agitar la placa en forma circular durante 2 minutos.
 Observar la presencia o ausencia de aglutinación utilizando una luz
indirecta sobre fondo oscuro.
II. TITULACION RAPIDA EN PLACA
 Dividir una placa de vidrio en sectores de 4 cm2 aproximadamente.
 Empleando las micropipetas apropiadas colocar en estos sectores 80 ul,
40 ul, 20 ul, 10 ul y 5 ul de suero límpido. Repetir el procedimiento para
un control negativo y uno positivo.
 Colocar 1 gota de Antígeno previamente agitado sobre cada gota de
suero.
 Mezclar el suero y el Antígeno utilizando una varilla abarcando un área de
2 cm de diámetro aproximadamente. Debe emplearse una varilla distinta
para cada dilución de suero o la misma varilla mezclando a partir de la
muestra más diluida.
 Agitar la placa durante 2 minutos en forma circular.
 Observar la aglutinación utilizando luz indirecta sobre fondo oscuro.
INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS
4+: todos los microorganismos aglutinan.
3+: aglutinan aproximadamente el 75%.
Negativo: no aparece aglutinación.
Técnica I: se indica solamente positivo o negativo.
Técnica II: el título se considerará la última dilución que da aglutinación del 50%
(++).
A continuación, se muestra la interpretación de los resultados obtenidos en la
titulación en placa:
Volumen de Suero Dilución aproximada en (ml) la prueba en tubo

0,08 1:20
0,04 1:40
0,02 1:80
0,01 1:160
0,005 1:320
Figura 1. Titulación en placa de la reacción de Widal para Salmonelosis.
(1/80 a 1/360)
Determinación de Candida albicans
El medio de cultivo que se emplea para el aislamiento primario es el agar
Sabouraud Dextrosa (ASD) con antibiótico. Las colonias de levaduras son
ligeramente abombadas o planas, de consistencia mantecosa, lisa o rugosa, con
olor agradable, tornándose pastosas a medida que envejecen, cremosas de
color blanco amarillento, lustrosas, poco elevadas y de bordes bien definidos.
a) Examen microscópico
Se observan células redondas u ovaladas de tres a siete micras de diámetro,
que se reproducen por blastoconidias y forman pseudomicelio en la mayoría de
las especies.
b) Pruebas fisiológicas para identificación Tubo germinativo
Permite diferenciar las especies de Candida albicans de las no albicans.
Procedimiento
Suspender un inóculo de la cepa pura de Candida con 24 horas de desarrollo en
0,5 mL de suero humano o de conejo.
Incubar a 35 – 37 ºC por 2h y 30 min.
Colocar 2 ó 3 gotas de la suspensión en una lámina portaobjeto y cubrir con
lámina cubreobjeto y observar al microscopio con objetivo de 40X
Interpretación: La prueba es positiva al visualizar una estructura elongada que
se origina a partir de la levadura.
Realizar esta prueba empleando cepas controles en paralelo a la cepa en
estudio.
Control positivo: C. albicans.
Control negativo: C. glabrata
Figura 2. Candida albicans. A. Coloración Gram, B. Desarrollo tubo germinativo,
C. crecimiento en Agar Sabouraud Dextrosa
Revisión especializada
En el artículo Salmonella enterica Serovar Typhi and the Pathogenesis of
Typhoid Fever que esta ubicado en el enlace
https://www.annualreviews.org/doi/10.1146/annurev-micro-091313-
103739?url_ver=Z39.88-
2003&rfr_id=ori%3Arid%3Acrossref.org&rfr_dat=cr_pub++0pubmed encontrar
las respuestas a los siguientes enunciados
Resultados
1. ¿Qué pasa si no se trata la temperatura en la fiebre tifoidea y qué síntomas

están asociados?
La fiebre tifoidea es una enfermedad bacteriana causada por la bacteria Salmonella

enterica serotipo Typhi. Si no se trata adecuadamente, la fiebre tifoidea puede tener
consecuencias graves, es fundamental buscar atención médica si se sospecha de fiebre
tifoidea. El tratamiento generalmente implica antibióticos específicos para combatir la
infección bacteriana. La vacunación también es una medida preventiva eficaz contra la
fiebre tifoidea, especialmente para aquellos que viajan a áreas donde la enfermedad es
endémica.
2. ¿Hay evidencia de que la infección por Salmonella typhi ofrece protección
contra una reinfección?
La evidencia sugiere que la infección por Salmonella Typhi, la bacteria que causa la fiebre
tifoidea, puede ofrecer cierta inmunidad temporal contra una reinfección. Sin embargo,
esta inmunidad no es completa ni duradera, y las personas aún pueden contraer la
enfermedad más de una vez a lo largo de sus vidas.
Algunos estudios indican que la infección previa por Salmonella Typhi puede conferir
una cierta respuesta inmunitaria y reducir el riesgo de enfermedad grave en caso de una
exposición posterior. Además, la vacunación contra la fiebre tifoidea también puede
proporcionar protección contra la enfermedad y reducir la gravedad de los síntomas en
caso de infección.
Es importante destacar que la inmunidad después de la infección o la vacunación no es
permanente, y la duración de la protección puede variar entre individuos. Además, existen
diferentes serotipos de Salmonella que pueden causar infecciones distintas, y la
inmunidad adquirida contra un serotipo específico puede no ofrecer protección completa
contra otros serotipos.
En el artículo Adaptive immune responses to Candida albicans infection que esta ubicado
en el enlace https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4601188/ encontrar las
respuestas a los siguientes enunciados
¿Cuál es el papel de las células dendríricas en la respuesta inmune a Candida

albicans?
Las células dendríticas (DC) son células presentadoras de antígenos (APC) especializadas
que desempeñan un papel central en la defensa inmune contra patógenos, sirviendo como
un conducto crítico entre las respuestas inmunes innata y adaptativa. "Las CD son vitales
para el inicio de la protección inmune adaptativa mediada por células T contra C. albicans
". Las CD inmaduras patrullan los tejidos periféricos debajo de las superficies mucosas y
son reclutadas en el sitio de la infección en respuesta a quimiocinas y péptidos
antimicrobianos,secretados por células epiteliales en respuesta a bacterias microbianas.
infección. Una vez reclutado, el reconocimiento de C. albicans por las CD se produce a
través de interacciones entre los receptores de reconocimiento de patrones (PRR)
expresados en la superficie de las CD y los patrones moleculares asociados a patógenos
(PAMP) presentes en la pared celular del hongo.

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Volumen de Suero Dilución aproximada en (ml) la prueba en tubo

1. ¿Qué pasa si no se trata la temperatura en la fiebre tifoidea y qué síntomas

La fiebre tifoidea es una enfermedad bacteriana causada por la bacteria Salmonella

¿Cuál es el papel de las células dendríricas en la respuesta inmune a Candida

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