Practica de Staphylococcus.1

PRIMERA UNIDAD Guía
de laboratorio N° 2:
ESTUDIO DE STAPHYLOCOCCUS
Sección : ………………………..………………..Docente: Mg. Milagritos S. Holgado Gonzales

Fecha: .…../……/....... Duración: 180 minutos
Instrucciones: Leer detenidamente la guía práctica.
1. Propósito /Objetivo_:
a. Identificar a los staphylococcus.
b. Conocer las técnicas de identificación de staphylococcus.
c. Diferenciar las especies de staphylococcus.
2. Fundamento Teórico
Los estafilococos constituyen un grupo de microrganismos esféricos, Gram positivos,

agrupados típicamente en forma de racimo, pero se les encuentra también formando
tétradas o aisladas, son inmóviles y no esporuladas.
Este microorganismo puede formar parte de la flora normal de las fosas nasales y del
perine el ser humano y es causante de diversos procesos infecciosos purulentos, de
infecciones alimentarias y de infecciones particularmente graves como bacteriemias.
3. Equipos, Materiales y Reactivos

3.1. Equipos
Ítem Equipo Característica Cantidad
1 Microscopio Analítica 1
3.2. Materiales
Ítem Material Característica Cantidad
1 Lamina porta objeto 1
2 Asa de siembra de aro y Plástico 1
punta
3 Mechero De alcohol 1
4 Guantes Látex 1
5 Placa de agar sangre y Fresca 1
manitol salado
6 Pinzas. De metal 1
7 Disco de Novobiocina Vigente 1
8 Placa de agar DNAsa. Fresca 1
9 Placa de agar Mueller – Fresca 1
Hinton.
10 Cepa de S. aureus en Fresca 1
caldo nutritivo
11 Cepa de S. epidermis en 1
caldo nutritivo.
12 Cepa de S. saprophyticus Vigente 1
en caldo nutritivo.
13 Hisopos estériles. 1
3.2. Reactivos
Íte Reactivo Característica Cantidad
m
1 Set de colorantes Gram 1
2 Agua destilada 100 ml
3 Aceite de inmersión 1
4 Reactivo de catalasa
5 Tubos en caldo nutritivo 1
con las tres cepas de
estafilococos con la
turbidez equivalente al
tubo de N° 0.5 de la escala
de Mac Farland.
6 Tubos con caldo nutritivo. 1

7 Tubo con caldo plasma. 1
4. Indicaciones/instrucciones:
1. Prepara los materiales necesarios.
2. Recuerda el procedimiento de la coloración, del cultivo, de los exámenes de identificación
y mantén la bioseguridad.
3. Anota los resultados e interpreta los resultados, además desarrolla el cuestionario.
5. Procedimientos:
Morfología microscópica y colonial

1. Inocular las tres cepas de estafilococos por dispersión agotamiento en
la placa de agar sangre.
2. Incubar a 37°C por 24 horas.
Lecturas: morfología microscópica y colonial.
1. Observar las características típicas de las colonias de los estafilococos.
2. Hacer frotices en capa fina a partir de las colonias crecidas en el agar
sangre, colorear por Gram y observar al microscopio a 100X.
3. Anotar los resultados en el protocolo.
Prueba de catalasa
1. Colocar con el asa de siembra una pequeña parte de la colonia de cada
una de las cepas sobre la lámina.
2. Añadir una gota de peróxido de hidrógeno.
3. Observar la aparición de burbujas, lo que indica la presencia de la
enzima catalasa. Todos los estafilococos son catalasa positivos.
Crecimiento en el agar Manitol salado

1. Inocular las tres cepas de estafilococos en la placa de agar manitol
salado
3. Observar las colonias manita positiva de S. aureus y S. saprophyticus
que presentan un halo de color amarillo por viraje del indicador rojo de fenol, y
las colonias manita negativas de S. epidermis.
Prueba de coagulasa
1. Inocular las tres cepas de estafilococos en tubos con caldo plasma.
3. Observar cada hora la aparición de coágulos, por espacio de 4 horas.
De ser negativo el resultado, dejar incubando y hacer una lectura final a las 24
horas.
4. Si aparece un coágulo, la bacteria posee la enzima coagulasa y se trata
de la especie S. aureus.
Prueba de la DNAsa
1. Inocular las tres cepas bacterianas en una placa de agar DNAsa en
forma tupida en un área circular de1 cm. de diámetro.
3. Gotear una gota de HCl 1N al borde del crecimiento bacteriano de cada
una de las especies y esperar unos minutos.
4. El HCl 1N precipita el DNA contenido en el medio de cultivo,
enturbiándolo. Alrededor del crecimiento de S. aureus se observa un halo
transparente como resultado de la producción de DNAsa de parte de la
bacteria, que metabolizó el DNA contenido en el medio circundante.
5. Alrededor del crecimiento de las otras dos especies, no se encontrará
dicho halo, sino turbidez; son DNAsa negativas.
Prueba de sensibilidad a la Novobiocina

1. Inocular un cuadrante de la placa de agar Müller Hinton con hisopo
embebida en el caldo nutritivo inoculando con cada una de las cepas de
estafilococos, cuya turbidez equivale al tubo 0.5 de la escala de Mac Farland.
2. Colocar con una pinza previamente esterilizada al calor, un disco de
Novobiocina en cada uno de los cuadrantes inoculados.
3. Incubar la placa a 37°C por 24 horas.
4. Observar la aparición de un halo de inhibición alrededor del disco
colocado en los cuadrantes inoculados con S. aureus y S: epidermis, lo que
indica sensibilidad a la Novobiocina.
5. Observar que no aparece dicho halo de inhibición alrededor del disco en
el cuadrante inoculado con S. saprophyticus lo que indica esta es resistente a
la Novobiocina.
6. Esta prueba ayuda para diferenciar las tres especies patógenas de
estafilococos.
RESULTADOS:
AISLAMIENTO
MEDIO COLONIAS
DE
CULTIVO Tamaño Forma Pigmento Hemólisis Gram
COLONIAS CREMOSA BLANQUESINO B- COCOS

GRANDES
GRICASEO HEMOLITICA GRAM
ELEVACION POSITIVOS
CONVEXA
DISPUESTOS EN RACIMO
AGAR
SANGRE
TIPIFICACIÓN
CEPA Hemolisis Manitol Coagulasa Catalasa DNAsa Novobiocina
S. aureus PRESENTA POSITIVO POSITIVO POSITIVO POSITIVO SENSIBLE
S. epidermis NO NEGATIVO NEGATIVO POSITIVO SOLO SENSIBLE

PRESENTA PARA S.
aureus
S. NO POSITIVO NEGATIVO POSITIVO SOLO RESISTENCIA

saprophyticus PRESENTA PARA S.
aureus
6. Cuestionario
• Señala características que consideres más importantes de los Staphylococcus.
Son coco gran positivos dispuestos en racimos
✓ Presentan catalasa positiva
✓ Anaerobios facultativos
✓ Presentes en piel y mucosas
✓ Principal colonizador nasofaríngeo
• Desarrolle el caso clínico
Un grupo de 6 niños menores de 8 años de edad, vive en un país semitropical.
Todos los niños tienen varias lesiones cutáneas exudativas y encostradas de
impétigo, las lesiones predominan en los brazos y la cara. ¿Cuál es el
microorganismo probable causante de estas lesiones?
Probable bacteria es Staphylococcus aureus
• La resistencia a antimicrobianos se ha convertido en un problema de salud

pública. ¿Qué mecanismo de resistencia frente a Staphylococcus representa
un problema principal en todo el mundo?
El mecanismo de resistencia a la penicilina
7. Conclusiones
7.1. Los Staphylococcus presentan catalasa positiva.

7.2 para diferenciar especie realizamos coagulasa,
Pruebas diferenciales para identificar S. aureus será coagulasa positiva y pba. DNAsa
7.3 pruebas de sensibilidad a la novobiocina para diferenciar Staphylococcus
epidermidis (SENSIBLE) y Staphylococcus saprophyticus (RESISTENTE).
7.4 Manitol positivo :S. aureus y S. saprophyticus.
Manitol negativo:S.epidermidis
8. Sugerencias y /o recomendaciones
Lavado correcto de manos
Evitar la automedicación
Realizar una buena asepsia y antisepsia para la toma de alguna muestra.
Referencias bibliográficas consultadas y/o enlaces recomendados
Koneman E., (2017) Diagnóstico microbiológico. – séptima edición. Argentina.

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PRIMERA UNIDAD Guía

Sección : ………………………..………………..Docente: Mg. Milagritos S. Holgado Gonzales

Instrucciones: Leer detenidamente la guía práctica.

Los estafilococos constituyen un grupo de microrganismos esféricos, Gram positivos,

3. Equipos, Materiales y Reactivos

6 Tubos con caldo nutritivo. 1

1. Prepara los materiales necesarios.

2. Recuerda el procedimiento de la coloración, del cultivo, de los exámenes de identificación

3. Anota los resultados e interpreta los resultados, además desarrolla el cuestionario.

Morfología microscópica y colonial

Crecimiento en el agar Manitol salado

Prueba de sensibilidad a la Novobiocina

CULTIVO Tamaño Forma Pigmento Hemólisis Gram

COLONIAS CREMOSA BLANQUESINO B- COCOS

CEPA Hemolisis Manitol Coagulasa Catalasa DNAsa Novobiocina

S. aureus PRESENTA POSITIVO POSITIVO POSITIVO POSITIVO SENSIBLE

S. epidermis NO NEGATIVO NEGATIVO POSITIVO SOLO SENSIBLE

S. NO POSITIVO NEGATIVO POSITIVO SOLO RESISTENCIA

Probable bacteria es Staphylococcus aureus

• La resistencia a antimicrobianos se ha convertido en un problema de salud

El mecanismo de resistencia a la penicilina

7.1. Los Staphylococcus presentan catalasa positiva.

Referencias bibliográficas consultadas y/o enlaces recomendados

Koneman E., (2017) Diagnóstico microbiológico. – séptima edición. Argentina.

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