MECANISMOS MOLECULARES QUE PARTICIPAN EN EL

MANTENIMIENTO DEL ADN NUCLEAR

REPLICACIÓN DEL ADN

Características

 Semiconservativa: cada hebra del ADN sirve como molde para la síntesis de una
nueva cadena complementaria.
 Es posible gracias al principio de complementariedad de las bases.
 Las cadenas se separan en forma reversible (desnaturalización-renaturalización)
 Requiere de un primer o cebador para iniciar la replicación, ya que su extremo
3’OH sirve de anclaje para la nueva cadena.
 Bidireccional: las cadenas se sintetizan hacia sentidos contrarios porque el ADN
molde tiene cadenas antiparalelas y la síntesis es siempre en sentido 5’ 3’ (es
decir, la lectura del ADN es en sentido 3’5’)
 Cadena líder:
o Sintetizada en forma continua
o Solo necesita un primer.
o Corre 5’ a 3’ hacia la horquilla.
 Cadena retrasada:
o Sintetizada en forma discontinua
o Se forma en fragmentos Okazaki
o A medida que se abre la cadena, se agrega otro primer.
o Corre 5’ a 3’ en sentido opuesto a la horquilla.
 Origen de replicación: donde se inicia la separación de las hebras de ADN. Cada
origen genera dos horquillas en distintas direcciones.
 Burbuja de replicación: la mitad de ella es una horquilla de replicación.
 Durante la replicación, las histonas tienen una unión lábil al ADN y pueden
desplazarse para facilitar el movimiento de las polimerasas. Se sintetizan nuevas
histonas para formar nucleosomas.
Participantes

 ADN polimerasa: sintetiza ADN en sentido 5’3’, agregando

desoxirribonucleótidos trifosfatados (dATP, dTTP, dCTP y dGTP), que liberan
energía para las uniones fosfodiéster.
 ADNpol ε: polimeriza la cadena líder. Tiene proofreading.
 ADNpol δ: polimeriza la cadena retrasada. Tiene proofreading.
 ADNpol α: polimeriza el primer segmento de ADN a continuación del
cebador. No tiene proofreading. Tiene una ARN primasa asociada.
 ADNpol β: repara el ADN. No tiene proofreading.
 ADNpol γ: polimeriza ADN mitocondrial. No tiene proofreading.
 Helicasa: rompe los puentes de hidrógeno entre las bases complementarias del
ADN para iniciar la replicación.
  ADN ligasa: cataliza la formación de un enlace fosfodiéster entre dos nucleótidos
adyacentes. Utiliza ATP para sellar los fragmentos de Okazaki y en la reparación
del ADN.
 Proteínas accesorias a la polimerasa: sirven de anclaje
 RPC (proteína de enganche de carga): permite la unión inicial de la
polimerasa al ADN.
 PCNA (antígeno nuclear de células proliferativas): permite que siga
avanzando la polimerasa sin RPC.
 Topoisomerasas: a medida que avanza la helicasa y separa las hebras, estás se
enrollan sobre sí mismas. Las topoisomerasas las desenrollan.
 Topoisomerasa I: libera la tensión entre las dos hebras de ADN. Corta una
cadena y luego la sella.
 Topoisomerasa II: libera la tensión entre dos moléculas de ADN. Corta las
dos cadenas y las vuelve a sellar.

Pasos de la replicación de ADN

 Iniciación:
 Enzima helicasa separa las hebras de ADN.
 SSBP (proteínas de unión a cadenas sencillas) evitan la renaturalización
del ADN.
 ARN primasa provee un cebador o primer, secuencia corta de
ribonucleótidos, para comenzar la polimerización.
 Elongación:
 ADNpol se une al cebador
 ADNpol sintetiza ADN en dirección 5’3’.
 Cadena líder:
o ADNpol corre hacia la apertura de la horquilla
o Se extiende a partir de un solo cebador.
 Cadena rezagada:
o ADNpol corre opuesto a la apertura de la horquilla, formando
fragmentos de Okazaki.
o Necesita de un cebador para cada fragmento.
o Forma un bucle que permite que el complejo de replicación siga a
la horquilla.
 Topoisomerasa elimina las tensiones creadas por la helicasa a medida que
se abre el ADN.
 Terminación:
 Exonucleasa elimina los cebadores y ADNpol rellena los huecos con los
desoxirribonucleótidos correspondientes.
 ADN ligasa sella las brechas que permanecen después de reemplazar los
cebadores, para formar una cadena continua.

El problema de la replicación de telómeros

  Cuando la cadena rezagada llega al final de la cadena molde y el último cebador
es eliminado, queda un hueco que no puede ser rellenado por ADN, ya que no hay
un extremo 3’ OH disponible para ser elongado.
 Telomerasa: ribonucleoproteína que realiza transcripción inversa. Posee un
segmento de ARN que es complementario al telómero y que es utilizado como
molde para elongarlo por su extremo 3’.
 La telomerasa fabrica una cadena de ADN complementaria a su segmento
ARN. Es decir, elonga la cadena parental de ADN.
 Permite que se forme un nuevo fragmento de Okazaki.
 De esta forma, no se pierde información del ADN.
 Las células somáticas expresan baja cantidad de telomerasa y no alcanza para
mantener la longitud de los cromosomas hasta un determinado número de ciclos
de replicación del ADN.
 Proceso de senescencia proliferativa: cuando el ADN llega a un acortamiento
crítico, esto imite una señal semejante a una de daño del ADN. La célula muere
por apoptosis.
 Las células germinales y las células madres mantienen la expresión de la
telomerasa, por tanto, son consideradas células inmortales porque pueden
proliferar en forma indefinida. Muchas células tumorales tienen una
sobreexpresión de telomerasa.

REPARACIÓN DEL ADN

Características

 Los mecanismos de reparación de ADN se activan cuando se reconocen cambios

en la secuencia de ADN. Por tanto, la célula emite señales que hace que se detenga
el ciclo celular para que se realice la reparación.
 Causas de los cambios de secuencias:
 Errores de copiado del ADN durante la replicación
 Cambios espontáneos o inducidos por productos químicos y/o radiación
(que se dan en cualquier etapa de la célula).
 Si se lleva a cabo la reparación correctamente, la proliferación celular continúa de
forma normal. Si hay errores en la reparación o hay daños severos en el ADN,
sucede apoptosis o proliferación anormal.

Mecanismos de reparación durante la replicación

 Proofreading de la polimerasa: exonucleasa acoplada a la ADNpol que permite

eliminar un nucleótido mal colocado y reemplazarlo por otro.
 Reparación por mal apareamiento de bases: complejo proteico que detecta si hay
un mal apareamiento de bases. El mismo corta el segmento de nucleótidos que
contiene el daño y es reemplazado por uno nuevo.

Mecanismos fuera del contexto de replicación

 Sistema de reparación en cadena simple:
 Reparación por escisión de bases: se reconocen formas específicas de
bases dañadas y son eliminadas.
o Ejemplo: Surgimiento de uracilo (se incorpora uracilo en vez de
timina, o la desaminación de una citosina la transforma en uracilo).
 ADN glicosilasa rompe la unión de la base de uracilo.
 Se forma un sitio AP (apirimidínico o apurinico)
 AP endonucleasa rompe el sitio AP para que una ADNpol
rellene el ADN y una ligasa selle la cadena.
 Reparación por escisión de nucleótidos: se elimina un segmento de
nucleótidos (aprox. 30) que contiene el error, el cual produce una
modificación tridimensional. Puede estar acoplado a zonas de alta
transcripción (genes transcriptos activamente). En este caso, proteínas
reconocen a la ARNpol detenida en una lesión y reclutan a TFIIH.
o Ejemplo: dímeros de pirimidina  la luz UV induce un daño que
lleva a la formación de un enlace covalente entre dos pirimidinas
adyacentes entre sí y, en consecuencia, una deformación local de
la cadena.
 Reparación por inversión directa de grupos alquilos: un agente alquilante
le agrega un grupo alquilo a una base, lo cual altera su estructura química.
Esta lesión es reparada directamente por metilguanina metiltransferasa,
que restaura la base.
 Sistema de reparación de doble cadena:
 Reparación recombinatoria: si no hay una secuencia homologa cercana,
las roturas de hebra doble se reparan mediante la fusión de los extremos
rotos. Produce deleción de bases.
 Reparación por recombinación homóloga: si el error se detecta en G2 y
las cromátides hermanas siguen unidas. En las roturas, nucleasas digieren
ADN produciendo extremos 3’ colgantes. Las hebras se emparejan con su
homóloga y se rellenan los huecos de ADN, utilizando a la cromátide
hermana como molde.
MECANISMOS MOLECULARES QUE PARTICIPAN EN LA VARIABILIDAD
DEL ADN NUCLEAR

MUTACIONES

 Clasificación de mutaciones:
 Mutación génica o puntual: se altera uno o unos pocos nucleótidos, por lo
tanto, afecta a un solo gen.
 Mutación cromosómica estructural: afecta a un segmento cromosómico,
lo cual incide en varios genes.
 Mutación genómica o cromosómica numérica: afecta a cromosomas
completos; puede faltar o sobrar un cromosoma. Se da por una separación
anormal de los cromosomas durante la meiosis.
 Causas de las mutaciones:
 Por errores en la duplicación y reparación del ADN
 Por separación anormal de los cromosomas durante la meiosis
 Por agentes mutagénicos externos
 Tipos de mutaciones génicas:
 Sustitución:
o Mutación silenciosa
 El codón mutado informa para el mismo aminoácido
 No hay efecto
o Mutación de sentido alterado
 El codón mutado informa para un aminoácido diferente
 La proteína puede no funcionar, funcionar
defectuosamente o mejorar su función
o Mutación sin sentido
 El codón mutado actúa como señal stop
 La traducción se acorta prematuramente
 Inserción:
 Mutación por cambio en el marco de lectura
 Deleción:
 Mutación por cambio en el marco de lectura
 Mutaciones en la meiosis:
 No disyunción de cromosomas homólogos:
o En anafase I de la meiosis
o Fracaso en la segregación de los cromosomas homólogos
o Genera que una célula tenga un cromosoma más y la otra uno
menos. Al finalizar la meiosis, se obtienen dos células con un
cromosoma demás y otras dos con un cromosoma menos.
 No disyunción de cromátides hermanas:
o En anafase II de la meiosis
o Fracaso en la segregación de las cromátides hermanas
o Al finalizar la meiosis, se obtienen dos células normales, una célula
 con un cromosoma demás y otra célula con un cromosoma menos.
 Anomalías de cromosomas sexuales:
o Un espermatozoide defectuoso aporta los cromosomas O, XX, YY
o XY
o Un óvulo defectuoso aporta cromosomas O o XX.

REORGANIZACIÓN DEL ADN

 Características:
 Permite la aparición de nuevas combinaciones genéticas incluso en
ausencia de mutación.
 Recombinación homóloga:
 Los cromosomas homólogos se aparean durante la profase I meiótica.
 Mediante un complejo proceso enzimático, se realiza un intercambio físico
de segmentos de ADN.
 Se intercambian alelos. No se altera el orden de genes
 Recombinación sitio específica:
 Consiste en el movimiento de secuencias entre distintos sitios de un mismo
cromosoma o diferentes cromosomas.
 Está mediada por enzimas que reconocen secuencias específicas y cortas
de nucleótidos presentes en las moléculas de ADN entre las que se produce
la recombinación.
 Puede alterar el orden de los genes y también agregar nueva información
en el genoma.
 No requiere de homología
 Se utiliza durante la diferenciación de los anticuerpos. Cada anticuerpo
está codificado por genes únicos formados por recombinación sitio
específica, para poder reconocer a antígenos únicos.
 Transposición:
 Consiste en segmentos de ADN (transposones) que tienen capacidad de
moverse de un lugar a otro en el genoma.
 Mediada por ARN:
o El retrotransposon es ARN viral, y este es transcripto
inversamente, formando un ADN complementario.
o El ADNc se inserta en el genoma
 Mediada por ADN:
o Clase 1: el transposon es replicado y esa nueva copia se inserta en
otra parte del genoma
o Clase 2: el transposon es cortado y empalmado en otra parte del
genoma por la enzima transposasa.
 Amplificación génica:
 Es el resultado de la repetición de la replicación del ADN, produciendo
múltiples copias de un gen en particular dentro de una célula. Produce un
aumento de la expresión de ese gen.
 Es infrecuente y ocurre en células altamente especializadas
 Ocurre en células cancerígenas, en las que, a menudo, se amplifican los
oncogenes (genes que dirigen la proliferación celular). Esto da lugar al
desarrollo de tumores.