Caso 2 IBCM

Grupo 24

Integrantes:

Agustina Alfaro
Micaela Cacho
Romina Calero
Pilar Esteves
Lautaro Ferraro

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OBJETIVOS:

● Comprender el concepto y funcionalidad de las soluciones amortiguadoras.

● Lograr determinar y elegir la solución amortiguadora adecuada para trabajar
con la proteína hemoglobina.
● Aplicar los conceptos adquiridos en el curso para identificar soluciones
desconocidas.

MARCO TEÓRICO:

Las soluciones amortiguadoras o Buffer son aquellas que se componen de

un par ácido débil y su base conjugada (o en su defecto, una base débil con un
ácido conjugado). Se les otorga este nombre debido a que son soluciones que
resisten a los cambios drásticos de pH cuando se agrega pequeñas cantidades de
ácido o base fuerte.

Este tipo de soluciones son implementadas para mantener constante el pH en

mezclas a las que se le han añadido ácidos o bases fuertes y así amortiguar los
cambios producidos por estas adiciones, para asegurar el éxito de la reacción.

Al tratarse de soluciones buffer o amortiguadoras, es necesario conocer los

conceptos de ácidos y bases para comprender su estructura y funcionalidad.

Según Arrhenius, los ácidos son sustancias químicas capaces de ceder protones
H+(Hidrogeniones), mientras que las bases son especies capaces de aceptar
protones H+ (Hidrogeniones) o ceder OH- (Hidroxilos).

Los ácidos y bases pueden clasificarse en fuertes o débiles, que pueden ionizarse
completamente en una solución acuosa o que no se disocian totalmente en una
solución acuosa; respectivamente.

La acidez o alcalinidad de una sustancia se ve determinada por su pH. El pH

es la medida del grado de acidez o alcalinidad de una sustancia o solución. Este, se
mide en una escala del 0 al 14, siendo el 7 un pH neutro; los valores menores a 7
pertenecen a un pH ácido, y los mayores a un pH básico o alcalino. El pH está
determinado por la concentración de Hidrogeniones en una sustancia o solución, y
se calcula de la siguiente manera: pH= -log [H+].

En soluciones amortiguadoras, cuando el valor del pH (explicado

anteriormente) y el del pKa (-log de la constante de acidez de la reacción) se
igualan, el buffer alcanza su mayor capacidad amortiguadora. Esta, es definida
como la cantidad de ácido o base que un sistema puede neutralizar antes que el ph
pueda cambiar apreciablemente. Sumado al pKa y el pH, la capacidad
amortiguadora de un buffer se puede ver influenciada por la concentración de este.
A mayor concentración del buffer, mayor resistencia a los cambios.

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DISCUSIÓN:

Con el propósito de poder trabajar con la proteína hemoglobina in vitro, se

busca utilizar una solución que sea amortiguadora para los cambios de pH. Ya que,
de no utilizarse una, se provocaría cambios en la estructura de la proteína, debido a
que su pH fisiológico se encuentra entre 7,38 y 7,42. Se comienza midiendo el pH
en las 3 sustancias, para así poder diferenciarlas entre sí y encontrar la adecuada
para el experimento, ya que ningún frasco contiene etiqueta. Rápidamente se pudo
observar que la sustancia 3 posee un pH de 4,0, evidenciando que la misma se
trataba del buffer acetato y por eso la descartamos para trabajar con esta proteína.
Posteriormente se mide el pH en las otras dos soluciones, dando un valor de 7,2 en
la primera y un valor de 7,0 en la segunda. Para lograr diferenciar el cloruro de sodio
del buffer fosfato, procedimos a agregar cinco gotas a cada uno de la base NaOH
(que proporciona hidroxilos). En principio, se aprecia que para la solución 2 el pH se
eleva rápidamente, mientras que el pH de la solución 1 aumenta mínimamente a
7,3. A partir de estos resultados se evidencia que la solución 2 se trata de la sal
neutra NaCl, ya que su pH aumentó en gran cantidad, por lo que no funciona como
sustancia amortiguadora; a diferencia del buffer fosfato que obtuvo gran resistencia
ante el cambio de pH. Esto se debe a que su pKa varía entre 6,2 y 8,2, siendo un
valor muy próximo al pH fisiológico que oscila entre 7,38 y 7,42.

La solución que utilizaremos entonces para trabajar con la hemoglobina es la

1: el buffer fosfato. De ella podemos sacar su relación ácido/base y la concentración
de hidroxilos e hidrogeniones, puesto que se nos da como dato que la concentración
total del buffer fosfato es de 150 mM, es decir 0,15 M. Tomando como referencia
este dato, nos queda la primer ecuación: 0,15= [HA]+ [A-]. Donde [HA] refiere a la
concentración de ácido y [A-] a la concentración de base conjugada.
Posteriormente, utilizando la ecuación de Henderson-Hasselbalch: ph= pka+log
A-/HA, sustituimos el pH por el valor inicial de pH que es 7,2 y el pka (que es un
valor tabulado) que también es 7,2. Por lo tanto nos queda: 7,2= 7,2 +log [A-]/[HA],
que al pasar el 7,2 restando me queda 0, y el logaritmo inverso de 0 nos da 1, lo que
significa que la relación de base conjugada y ácido es de 1: 1=[A-]/[HA]. Esto quiere
decir que hay igual concentración de base que de ácido, lo cual era deducible ya
que el ph=pka, y esto indica que en ese punto las concentraciones van a ser
iguales. Sin embargo, si seguimos utilizando las ecuaciones, podemos trabajar así:
1=[A-]/[HA], entonces si pasamos él [HA] para el otro lado nos queda [HA]=[A-]. Esto
podemos sustituirlo en la otra ecuación para así poder despejar la concentración de
cada especie: 0,15= [HA]+ [A-], y si pasamos él [HA] restando nos queda:
0,15-[HA]= [A-]. Si volvemos a la ecuación anterior vemos que [HA]=[A-], entonces
sustituyendo en la segunda ecuación nos queda que: 0,15-[HA]=[HA] . Aquí
pasamos él [HA] sumando: 0,15=2[HA]; luego ese 2 que está multiplicando lo
pasamos dividiendo, y queda: 0,15/2= 0,075 [HA]. La concentración de [A-] será
igual, ya que como se expresó anteriormente, las concentraciones de ácido y base

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conjugada son iguales cuando pH=pka, por lo tanto, no será necesario sustituir el
valor de [HA] en alguna de las ecuaciones para despejar el [A-].

Podríamos agregar, para realizar una comparación, que, en el segundo pH

medido del buffer fosfato, que cambió debido al agregado de gotas de NaOH, éste
queda con un valor de 7,3. Por lo cual al realizar la ecuación de Henderson y
Hasselbach y la de concentración del buffer total, podemos apreciar que lentamente
comienza a aumentar mínimamente la concentración de base conjugada, ya que
estamos por encima del pka. O sea, ya no estamos en el punto donde las
concentraciones son iguales. Además, siempre que el pH sea mayor al pka habrá
mayor concentración de base conjugada que de ácido. Para demostrar esto
utilizando las ecuaciones, planteamos: 0,15=[HA]+ [A-], entonces si pasamos
restando la concentración de ácido nos queda: 0,15-[HA]=[A-]. Luego empleando la
ecuación de H-H: ph= pka+log [A-]/[HA], sustituimos el valor de pH y de pka: 7,3=
7,2 +log [A-]/[HA]. Al pasar restando el 7,2, nos queda 0,1, y para despejar el
logaritmo debemos hacer el inverso del logaritmo al 0,1, lo que nos da 1,26. Ese
resultado es la relación de base conjugada/ácido: 1,26=[A-]/[HA], y podemos pasar
el HA multiplicando para quedar así: 1,26 [HA]=[A-]. Volviendo a la primera ecuación
que nos había quedado: 0,15-[HA]=[A-], podemos sustituirla en la de H-H en el valor
de [A-], quedando: 1,26 [HA]= 0,15-[HA]. En primer lugar pasamos el [HA] sumando:
2,26 [HA]= 0,15, y posteriormente pasamos el 2,26 dividiendo, resultando así
0,15/2,26= [HA], [HA]= 0,066. Por último, sustituimos el [HA] en cualquiera de las
dos ecuaciones para obtener la concentración de base conjugada: 0,15= 0,066+[A-].
Pasamos restando el 0,066, y nos queda que [A-]=0,084. Por lo tanto, evidenciamos
que a pesar de que el pH haya aumentado mínimamente, hay una pequeña
diferencia entre las concentraciones, siendo mayor la de la base conjugada ya que
estamos por encima del pka.

CONCLUSIÓN:

El hecho de comprender el concepto de soluciones amortiguadoras, su

composición y funcionalidad fue esencial para poder llevar a cabo el experimento.
Entender cómo actúa una solución Buffer y cómo son sus características, nos
permitió elegir de inmediato la solución correcta para trabajar.

Los conocimientos previos relacionados a ácidos, bases, pH y pKa, nos

permitieron desarrollar la actividad práctica de manera exitosa, colaborando a la
hora de cumplir los objetivos planteados.

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BIBLIOGRAFÍA:

1. Química, la ciencia Central. Brown [Internet]. Capítulo 17 (pág. 661 - 664)

Edu.uy. [citado el 1 de mayo de 2022]. Disponible en:
https://eva.fmed.edu.uy/pluginfile.php/244115/mod_folder/content/0/Aspectos%20del
%20equilibrio%20acuoso-%20Brown%20-%20P%C3%A1gina%20699%20-%20704.
pdf?forcedownload=1

2. Química, la ciencia Central. Brown [Internet]. Soluciones amortiguadoras

(pág. 704 - 711). Edu.uy. [citado el 1 de mayo de 2022]. Disponible en:
https://eva.fmed.edu.uy/pluginfile.php/256535/mod_folder/content/0/Soluciones%20a
mortiguadoras%20-%20Brown%20-%20p%C3%A1ginas%20704-711.pdf?forcedown
load=1

3. Bioquímica de Voet [Internet]. Capítulo 2-2 Ácidos, bases y tampones.

Edu.uy. [citado el 1 de mayo de 2022]. Disponible en:
https://eva.fmed.edu.uy/pluginfile.php/244115/mod_folder/content/0/Capitulo%20de
%20%C3%A1cidos%20y%20bases%20del%20libro%20Bioquimica%20de%20Voet.
pdf?forcedownload=1

4. Cox M, Lehninger AL. Principios de Bioquímica. Omega; 2006. Capítulos 2.2

Ionización del agua, ácidos débiles y bases débiles; 2.3 Tamponamiento contra
cambios de pH.

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APORTES DE AUTORES AL TRABAJO:

Diseño del documento Romina Calero.

Búsqueda de la bibliografía Agustina Alfaro, Micaela Cacho,

Romina Calero, Pilar Esteves, Lautaro
Ferraro.

Organización de los aportes realizados Agustina Alfaro, Micaela Cacho,

en el foro de EVA Romina Calero, Pilar Esteves, Lautaro
Ferraro.

Organización de los aportes efectuados Agustina Alfaro, Romina Calero.

en los distintos subgrupos e instancia
plenaria

Redacción de alguna o todas las Objetivos y Marco Teórico: Lautaro

secciones (especificar cual/es) Ferraro y Pilar Esteves.

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 Discusión: Agustina Alfaro y Romina
Calero.
Conclusión: Micaela Cacho.
Bibliografía: Lautaro Ferraro.

Revisión y corrección del informe Agustina Alfaro, Micaela Cacho,

Romina Calero, Pilar Esteves, Lautaro
Ferraro.