Presentación Tema 14

i z a c ió n
n m ov i l
1 4 : I
Tema a s
e n z i m
de
1
Concepto de inmovilización
Métodos de inmovilización
Características de enzimas inmovilizadas
Aplicaciones de enzimas inmovilizadas
2
Una enzima inmovilizada es aquella que ha sido

físicamente confinada o localizada en una región definida
del espacio
Es aquella que tiene restringida la movilidad
Una enzima inmovilizada no está en solución, sino unida a

una superficie o enclaustrada en una matriz, pero
dispuesta para adquirir el sustrato y transformarlo en
producto (sistema de dos fases)
3
El uso de enzimas en forma soluble incapacita a que la
enzima pueda recuperarse tras la catálisis
L a i n mov i l i z a c i ó n e n z i má t i c a e n
superficies o polímeros insolubles
permite que el producto sea fácilmente
separable de la enzima
4
Inmovilización en una Confinamiento en una

superficie matriz
5
Ventajas de la inmovilización:
Permite la reutilización de las enzimas (aumento
de productividad)
Ideal para operaciones continuas
Los productos están libres de enzima
Aumenta la facilidad de operación y

control del proceso.
6
Ventajas de la inmovilización:
Mejora la estabilidad de las enzimas
Permite el desarrollo de sistemas de
reacción multienzimáticos
Ofrece un potencial considerable en uso

médico e industrial
Reduce los problemas de tratamiento de

efluentes
7
Inconvenientes de la inmovilización:
La actividad enzimática es menor
Necesidad de realizar el proceso de
inmovilización
Costos adicionales de reactivos para

realizar la inmovilización
8
Se pueden clasificar en dos grandes grupos:
- Métodos de retención física
- Atrapamiento
- Microencapsulación
- Métodos de unión química
- Unión a soportes { Adsorción

Unión covalente
- Entrecruzamiento
9
- Atrapamiento: consiste en la retención física de la enzima
en las cavidades interiores de una matriz sólida porosa
- Suele realizarse con polímeros tipo

poliacrilamida, colágeno, o alginato
- El proceso se lleva a cabo mediante la suspensión de la

enzima en una solución de monómeros e inducción de la
polimerización por Tª, o agente químico
10
Inmovilización enzimática (Atrapamiento)
- Microencapsulación: consiste en rodear a la enzima de
una fina capa de un material semipermeable
- Se realizan en sistemas como

micelas y liposomas, aunque hay
muchos materiales para la
microencapsulación
- Las microcapsulas son

esféricas de tamaños
comprendidos entre 1-100 µm
de diámetro
12
Unión a soportes:
-  Consiste en la unión entre la enzima y un material inerte

-  Son los métodos de inmovilización más utilizados.
-  Existen numerosos tipos de soporte tanto orgánicos
como inorgánicos
-  La unión entre la enzima y el soporte puede ser por:
- Adsorción
- Unión covalente
13
Inmovilización por Adsorción:
- La unión entre la enzima y el soporte se
produce mediante interacciones iónicas, fuerzas
de Van der Waals, puentes de H.
- La enzima inmovilizada se prepara poniendo en contacto
el soporte con la enzima y lavando el material no unido
- Ventajas: preparación sencilla, bajo coste, no hay

cambios en la enzima
- Inconvenientes: costes de optimización, poco estables

mecánicamente (unión débil al soporte)
14
Inmovilización por unión covalente:
- La unión entre la enzima y el soporte se
realiza a través de un enlace covalente entre
un aminoácido de la enzima y un grupo
funcional del soporte
- Grupos como Lys, Cys, Tyr en la enzima suelen suelen ser
los más reactivos
- Ventajas: la unión es mas duradera, alta resistencia

mecánica
- Inconvenientes: la unión entre la enzima y el soporte
puede afectar a la flexibilidad de la enzima y a la catálisis15
- Unión directa al soporte funcionalizado
Soporte M o l é c u l a Enzima Enzima inmovilizada

funcionalizadora
-  Ej: penicilina acilasa de Kluyvera citrophila

óxido de sílice
triclorotriazina
16
- Unión a través de un espaciador bifuncional
Espaciador
Soporte Enzima Enzima inmovilizada
bifuncional
-  Ej: espaciadores: dialdheidos, carbodiimidas
-  Este tipo de unión dota de flexibilidad a la enzima
17
Inmovilización por entrecruzamiento (o cross-linking):
- Consiste en la formación de enlaces

covalentes entre las enzimas entre sí o a
través de moléculas bifuncionales
- Al aumentar el tamaño molecular aparente de la enzima

aumenta su insolubilidad
- Se usan dialdehidos, diaminoésteres, diaminas u
otras proteínas
- Enzimas unidas con enlaces intermoleculares

irreversibles
18
Características de las enzimas inmovilizadas
- La inmovilización altera el comportamiento de las
enzimas.
- Son más estables (aumento de la rigidez las protege de
la desactivación térmica o química)
- Están protegidas de las proteasas del medio
- Se evita la agregación intermolecular de la enzima
- La actividad catalítica puede disminuir (unión incorrecta

al soporte, unión del soporte al centro activo)
- La actividad catalítica disminuye drásticamente si el
sustrato de la enzima es voluminoso.
19
Aplicaciones de las enzimas inmovilizadas
Reactores enzimáticos
Un reactor enzimático consiste en un recipiente cerrado
termostatizado y con agitación donde ocurre la reacción
enzimática
Tipos de reactores:
- Discontinuos (o por lotes): aquellos en los que no
entra ni sale material cuando ocurre la reacción
- Continuos: aquellos en los que continuamente está

entrando material reactante y se está retirando
producto
20
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22
Aplicaciones industriales:
- Síntesis química
- Síntesis de medicamentos
- Industria agroalimentaria
- Tratamiento de residuos
23
24
Aplicaciones médicas: desbridamiento de úlceras
- Una buena cicatrización de las úlceras pasa por una
buena eliminación del tejido muerto
- Las proteasa (papaína, tripsina,

colagenasa) se han utilizado con éxito
para ayudar a la limpieza (colágeno,
fibrina y elastina del tejido muerto)
- La inmovilización de proteasas en apósitos y vendas es

una alternativa de suministro de la enzima
25
Aplicaciones médicas: desbridamiento de úlceras
26
Aplicaciones médicas: tratamiento del cáncer
- Las células tumorales parecen utilizar principalmente

Asn como nutriente esencial
- Algunos tipos de leucemia pueden tratarse mediante la

eliminación de la asparagina del organismo
Reaction diagramm
Reaction catalyzed by asparaginase (3.5.1.1)
A s p a rag i n a s a s e u t i l i z a
terapeuticamente para la + H2O = + NH3
eliminación de la Asn
L-asparagine + H2O = L-aspartate +
27
NH3
Aplicaciones médicas: tratamiento del cáncer
- La asparaginasa puede inmovilizarse en la fibra hueca

de hemodializadores
- Las tecnologías de inmovilización

permiten aplicar alternativas menos
invasivas que la inyección de la
asparaginasa en el torrente
sanguineo
28
Aplicaciones analíticas: Biosensores (tema 15)
29

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Características de enzimas inmovilizadas

Aplicaciones de enzimas inmovilizadas

Una enzima inmovilizada es aquella que ha sido

Es aquella que tiene restringida la movilidad

Una enzima inmovilizada no está en solución, sino unida a

Inmovilización en una Confinamiento en una

Ideal para operaciones continuas

Los productos están libres de enzima

Aumenta la facilidad de operación y

Ofrece un potencial considerable en uso

Reduce los problemas de tratamiento de

Costos adicionales de reactivos para

- Unión a soportes { Adsorción

- Suele realizarse con polímeros tipo

- El proceso se lleva a cabo mediante la suspensión de la

- Se realizan en sistemas como

- Las microcapsulas son

- Consiste en la unión entre la enzima y un material inerte

- La unión entre la enzima y el soporte puede ser por:

- Ventajas: preparación sencilla, bajo coste, no hay

- Inconvenientes: costes de optimización, poco estables

- Ventajas: la unión es mas duradera, alta resistencia

Soporte M o l é c u l a Enzima Enzima inmovilizada

- Ej: penicilina acilasa de Kluyvera citrophila

- Ej: espaciadores: dialdheidos, carbodiimidas

- Este tipo de unión dota de flexibilidad a la enzima

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- Al aumentar el tamaño molecular aparente de la enzima

- Enzimas unidas con enlaces intermoleculares

- Se evita la agregación intermolecular de la enzima

- La actividad catalítica puede disminuir (unión incorrecta

- Continuos: aquellos en los que continuamente está

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- Las proteasa (papaína, tripsina,

- La inmovilización de proteasas en apósitos y vendas es

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