AREA DE INMUNODIAGNOSTICO ESPECIAL

ANTICUERPOS ANTINUCLEARES
Los anticuerpos antinucleares (ANA) es la prueba inicial de laboratorio para el despistaje de una gran variedad de
enfermedades del tejido conectivo, como es el lupus eritematoso sistémico (LES), la esclerosis sistémica progresiva, el
síndrome de Sjögren (SS) y la enfermedad mixta del tejido conectivo (EMTC), entre otras

DIAGNOSTICO

Los ANA pueden ser detectados en el laboratorio por el métodos de inmunofluorescencia indirecta (IFI) que se realiza
sobre cortes de tejido o líneas celulares, p.e. usando el sustrato HEP-2.

El laboratorio MEDLAB ha desarrollado un moderno sistema integrado de diagnostico de enfermedades autoinmunes que
va desde el uso de técnicas IFI de doble mozaíco, despliegue de los complejos nucleares y citoplasmáticos mediante el
perfil ENA extendido (14 antígenos) y por la cuantificación específica del marcador positivo mediante técnicas EIA para
completar un buen diagnóstico y un seguimiento estrecho de las enfermadades inmunes

Iniciamos el estudio realizando un test IFI , utilizando un sistema Biochip; el cual combina 2 sustratos : células HEP-2 y
cortes de Hígado de mono, lo que permite:

 Confirmación de patrones, ejemplo Anticuerpos

anti actina.
 Diferenciar patrones, como un SSa/SSb de un
Sm/RNP.
 Resultado adicional, como determinar
anticuerpos anti Endomisio o Anca en títulos
altos, anticuerpos contra LMA, LSP, conductos
biliares y células endoteliales.

INTERPRETACION:

Las muestras se consideran positivas a partir de una dilución de 1/100 (Positivo Débil) e indica una posible enfermedad de
tejido conectivo, se sugiere una evaluación clínica para decidir mayores estudios.

Las muestras positivas 1/320 indica presencia de una enfermedad autoinmune y se sugiere realizar estudios para
identificación de anticuerpos específicos para llegar al diagnostico preciso de enfermedad autoinmune.

LIC. TM WILLIAM ALVARADO JUAREZ

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Fluorescencia Interpretación
Sin reacción en 1:100 Negativo. No se detectan anticuerpos contra núcleos
celulares en la muestra del paciente.
Reacción positiva en 1:100 Rastros. Para tipos IF: patrón homogéneo,
centromérico, nuclear dots, Jo-1, patrones típicos de
SS-A/SS-B, Sm/RNP posible indicación de varias
enfermedades reumáticas y otras enfermedades.
Reacción positiva en 1:320 Positivo. Indicación de varias enfermedades reumáticas
y otras enfermedades.

En un ANA positivo se pueden identificar diferentes patrones de inmunoflurescencia y cada uno se correlaciona con la
presencia de un determinado anticuerpo, lo que a su vez determinará la enfermedad específica:

 Patrón Homogéneo: anticuerpos anti DNA (ds), histonas. Relacionado con LES inducido por drogas y otras
enfermedades del tejido conectivo.
 Patrón Periférico: Anticuerpos anti proteínas integrantes de la membrana nuclear, p.e., antilaminina, anti-gp210.
Relacionado con lupus eritematoso sistémico (LES) ,lupus en actividad y lupus nefrótico.
 Patrón Nucleolar:: anticuerpos anti- PM-Scl, fibrilarina, RNA polimerasa I, NOR. Ocurren fundamentalmente en
Esclerodermia pero también en pacientes con LES.
 Patrón Moteado: anticuerpos contra una gran familia de antígenos no histónicos:
-Moteado grueso: anticuerpos anti Sm, anticuerpos anti U1RNP,asociado a LES, esclerodermia y enfermedad
mixta del tejido conectivo (EMTC)
-Moteado fino: anticuerpos anti SSA /Ro, Anticuerpos anti SSB/ La, relacionado con síndrome de Sjögren (SS) y
LES.
 Patrón Centromerico: anticuerpos anti- centrómeros, son patognomónicos para la esclerosis sistémica
progresiva de la forma limitada.
 Patrón Nuclear Dots: Los anticuerpos contra gránulos nucleares SP100 ocurren en casos de cirrosis biliar
primaria , frecuentemente ,pero no siempre, en paralelo con anticuerpos contra mitocondria.
 Patrón Centriolar: Se observa puntos fluorescentes en los polos de células en mitosis, ubicados en extremos
opuestos uno del otro. No se ha determinado aun su asociación clínica. Otros autoanticuerpos asociados a
mitosis también producen patrones fluorescentes como el Huso acromatico (MSA-1 , mitosis-specific antibody
1 ; anti-tubulina?), anticuerpos contra la zona de separación (midbody, MSA-2),anticuerpos contra antígenos de
los cromosomas asociados (MSA-3).

Autoantigenos Nucleares Patron Fluorescente

DNA Cadena doble Homogéneo
DNA Cadena simple Homogéneo
Histonas (H1 , H2A, H2B, H3, Homogéneo
H4.)

Sm/RNP Moteado Grueso.

Sm Moteado Grueso.

LIC. TM WILLIAM ALVARADO JUAREZ

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SS-A (Ro) Moteado Fino

SS-B(La) Moteado Fino

CENT A-E Centromérico

U3-nRNP/Fibrilarina Nucleolar granular

RNA-Polimerasa-I Nucleolar granular
PM-Scl (PM-1) Nucleolar homogéneo
7-2-RNP (To) Nucleolar homogéneo
4-6-S-RNA Nucleolar homogéneo
Organizador del nucleolo Nucleolo 1 - 2 puntos

Un ANA positivo debe confirmarse con enzimoinmunoensayos específicos de acuerdo al patrón de inmunofluorescencia
inicial y confirmado por un PERFIL ENA EXTENDIDO .

ELISA.

El laboratorio MEDLAB cuenta con enzimoinmunoensayos específicos para la detección y cuantificación de

autoanticuerpos autoinmunes específicos como: Anti DNA nativo, nRNP/Sm , Sm , SS-A , SS-B , Scl-70 y Jo-1, etc.

El estudio mediante Elisa nos permite determinar en forma monoespecifica cada autoanticuerpo presente y cuantificarlo
aisladamente para el monitoreo de la enfermedad. Una desventaja del ANA es que en algunos ANA positivo pueden estar
presentes mas dos anticuerpos que podrían enmascararse por el autoanticuerpo de mayor título.

PERFIL ENA EXTENDIDO (LINEBLOT) .

El PERFIL ENA EXTENDIDO (LINEBLOT) es un Ensayo In vitro que nos permite la determinación de
autoanticuerpos de la clase IgG contra 14 diferentes antígenos nucleares y citoplasmáticos como:
nRNP, Sm, SS-A (SS-A nativo y Ro-52), SS-B, Scl-70, PM-Scl, Jo-1, CENP B, PCNA, dsDNA,
Nucleosomas, Histonas, Proteína P-ribosomal y AMA-M2 en suero o plasma.

Ventajas de esta novedosa prueba es que nos permite en forma simultanea. Determinar la presencia
de varios autoanticuerpos a la vez. Un resultado negativo descarta la presencia de Autoanticuerpos
incluidos en el perfil.

Después de determinar la presencia de los autoanticuerpos, se sugiere monitorear con Elisas

monoespecificos para cada marcador.

LIC. TM WILLIAM ALVARADO JUAREZ

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SIGNIFICANCIA CLÍNICA DE AUTOANTICUERPOS DETERMINADOS EN PERFIL ENA

EXTENDIDO

Anticuerpos a U1-nRNP son característicos de enfermedad del tejido conectivo mixto (MTCD, Síndrome de Sharp). La
prevalencia es del 95% al 100%. Los títulos de anticuerpos correlacionan con la actividad clínica de la enfermedad. Los
anticuerpos a U1-nRNP son también encontrados en el 30% al 40% de pacientes con Lupus eritematoso diseminado,
pero casi siempre en combinación con anticuerpos contra Sm.

Anticuerpos a Sm tienen una alta especificidad para Lupus eritematoso diseminado . Junto con los anticuerpos contra
dsDNA , ellos pueden ser considerados patognomónicos para esta condición, pero ocurren en sólo 5 – 10% de los
pacientes.

Anticuerpos a SS-A están asociados con varias enfermedades autoinmunes. Es más común en pacientes con Síndrome
se Sjögren (40% - 80% de casos), pero también en Lupus eritematoso diseminado (30% a 40%), y en cirrosis biliar
primaria (20%) y ocasionalmente en hepatitis crónicamente activa. Aparte de estos, los anticuerpos a SS-A pueden
encontrarse en prácticamente el 100% de los casos del Lupus eritematoso neonatal. Ellos son transmitidos a través de la
placenta hacia el feto y causa una reacción inflamatoria. Ellos pueden también causar un bloqueo cardiaco congénito en
recién nacidos.

Anticuerpos a SS-B son encontrados casi exclusívamente en mujeres (29 : 1) en casos de Síndrome de sjögren (40% -
80% de casos) y en Lupus eritematoso diseminado (10% - 20%). En el Síndrome de Sjögren, anticuerpos combinados
SS-A y SS-B ocurren principalmente.

Anticuerpos a Scl-70 son encontrados en 25% a 75% de pacientes con esclerosis sistémica progresiva (forma difusa),
dependiendo del método de prueba usado y del grado de actividad de la enfermedad (Scl = esclero- dermia). Ellos no se
observan en esclerodermia circunscrita.

Autoanticuerpos contra PM-Scl fueron descritos por primera vez por Wolfe y sus colegas en 1977 en pacientes con
polimiositis y los llamaron anticuerpos anti-PM. Posteriores estudios realizados por Reichlin y colaboradores en 1984
condujeron a una más exacta caracterización de los anticuerpos específicos PM-1 y a su denominación (anticuerpos PM-
Scl). Ellos son detectados en el 50% a 70% de los pacientes con el así llamado overlap syndrome, el cual combina
síntomas de polimiositis (PM), dermatomiositis (DM), y esclerosis sistémica progresiva (Scl). La prevalencia de los
anticuerpos a PM-Scl bordea el 3% en esclerosis sistémica progresiva (forma difusa) y el 8% en dermatomiositis y
polimiositis.

Anticuerpos a Jo-1 son encontrados en polimiositis con una prevalencia del 25% al 35%. Ellos están frecuentemente
asociados con una fibrosis intersticial concurrente en el pulmón.

Anticuerpos a centrómeros están asociados con la Esclerosis sistémica progresiva forma limitada (Síndrome CREST:
calcinosis, enfermedad de Raynaud, disfunción esofágica, esclerodactilia, telangiectasia) y pueden encontrarse en el 70 a
90% de pacientes.

Anticuerpos contra PCNA son específicos para Lupus eritematoso sistémico. La prevalencia es, sin embargo, sólo 3%.

Anticuerpos contra dsDNA son específicos para Lupus eritematoso sistémico. Además de los anticuerpos contra Sm, ellos
son un marcador serológico para esta enfermedad con una prevalencia del 40% a 90%.

Anticuerpos contra nucleosomas se detectan en sueros de pacientes con Lupus eritematoso sistémico (SLE). Sin
embargo, su relevancia como marcadores característicos para SLE es hasta ahora limitada, debido a que las
preparaciones convencionales para nucleosomas hasta el 70% de los sueros de pacientes con esclerodermia también
reaccionan. En nuestro sistema se emplea una novedosa, preparación de nucleosoma altamente purificada como
antígeno. Con esta prueba los anticuerpos contra nucleosomas tienen una especificidad para SLE de cerca al 100%. El
suero de donantes de sangre, de pacientes con esclerodermia, Síndrome de sjögren, de polimiositis no muestran alguna
reacción.

Anticuerpos a uno o varios tipos de histonas o al complejo H2A-H2B son constantemente encontrados en lupus
eritematoso medicamento inducido (procainamida, hidralazina y otros) (frecuencia 95%). Más aún, los anticuerpos a
histonas se encuentran entre 30% y 70% de los pacientes con Lupus eritematoso diseminado y en 15% a 50% de
pacientes con artritis reumatoide.

LIC. TM WILLIAM ALVARADO JUAREZ

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Enfermedad Prevalencia
DsDNA Lupus eritematoso sistémico 60-90%
Lupus eritematoso sistémico 70-95%
Lupus eritematoso medicamento inducido 60%
SsDNA Colagenosis mixta (MTCD , Síndrome Sharp) 20-50%
Polimiositis / Dermatomiositis 40-50%
Esclerodermia, Sindr. De Sjögren , Artritis reumatoide 8-14%
Lupus eritematoso sistémico 50%
RNA
4-6-S-RNA: Esclerodermia, Sindr. De Sjögren 65%
Lupus eritematoso medicamento inducido 95%
Histonas Lupus eritematoso sistémico 30-70%
Artritis reumatoide 15-50%
Colagenosis mixta (MTCD , Síndrome Sharp) 95-100%
U1-Nrnp Lupus eritematoso sistémico 30-40%
Artritis reumatoide (overlap syndrome) 3%
Sm Lupus eritematoso sistémico 20-40%
Síndrome de Sjögren 40-95%
SS-A (Ro) Lupus eritematoso sistémico 20-60%
Síndrome lúpico neonatal 100%
Síndrome de Sjögren 40-95%
SS-B (La)
Lupus eritematoso sistémico 10-20%
Fibrilarina Esclerosis sistémica progresiva, forma difusa 5-10%
RNA-Polimerasa I Esclerosis sistémica progresiva, forma difusa 4%
Polimiositis/Dermetomiositis/Overlap syndrome 50-70%
PM-Scl (PM1)
Esclerosis sistémica progresiva, forma difusa 5-10%
Centrómeros Esclerosis sistémica progresiva, forma limitada 80-95%
Scl-70 Esclerosis sistémica, forma difusa 25-75%
Ciclina (PCNA) Lupus eritematoso sistémico 3%
RANA Artritis reumatoide 90-95%
Lupus eritematoso sistémico 10%
Ku
Poli/Dermatomiositis, Esclerosis sist. progresiva > 50%
Mi-1 , Mi-2 Dermatomiositis 5-10%

LIC. TM WILLIAM ALVARADO JUAREZ

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LIC. TM WILLIAM ALVARADO JUAREZ