Biología

GUÍA TEÓRICO PRÁCTICA N°2

Unidad Nº3
Genética
Replicación del ADN

2°
MEDIO
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GENÉTICA

INTRODUCCIÓN

La herencia es un fenómeno donde la información genética pasa desde un organismo

hacia sus descendientes. La formación de un nuevo ser implica la producción de
nuevas células y la replicación de materia hereditario, es decir, del genoma del o los
progenitores.

Cuando una célula se replica es necesario que todo su material genético también se
replique, para que la información llegue hasta las células hijas. Para asegurar la
continuidad de la especie, es necesario que el proceso de replicación de ADN se realice
con precisión y respetando fielmente las características de la célula original.

Cuando una célula se divide, o cuando se originan los gametos, las nuevas células
que se forman deben contener la información genética que les permita sintetizar todas
las enzimas y el resto de las proteínas necesarias para realizar sus funciones vitales.
Ésta es la principal razón por la que el ADN debe replicarse.

REPLICACIÓN DEL ADN

Una vez que se comprobó que el ADN era el material hereditario y se descifró su
estructura, lo que quedaba era determinar cómo el ADN copiaba su información y
cómo la misma se expresaba en el fenotipo. Watson y Crick hicieron la siguiente
predicción: “la molécula de ADN contiene la información necesaria para su propia
replicación”.

Para confirmar la predicción de Watson y Crick, en 1958 un bioquímico

estadounidense, Arthur Kornberg, demostró que el ADN puede replicarse en un tubo
de ensayo sin la presencia de células. Para esto, se requiere de: ADN, enzimas ADN
polimerasas (que obtenía de Escherichia coli) y una mezcla de cuatro precursores
desorribonucleicos trisfosfatados: dATP, dCTP, dGTP y dTTP.

Su experimento plantea la idea de que el propio ADN sirve de molde para la reacción,
como una guía para la ubicación exacta de los nucleótidos en la nueva cadena. Donde
existe una T en el molde, deberá haber una A en la nueva cadena, etc. ¿Cómo realiza
el ADN la función de molde? Es decir, ¿cómo se replica exactamente la molécula?

Matthew Meselson y Franklin W. Stahl diseñaron una metodología para determinar la

forma de replicación del ADN.

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EXPERIMENTO DE MESELSON Y STAHL

En 1957, los biólogos estadounidenses Matthew Meselson y Franklin W. Stahl,

ocuparon el ADN de bacterias para crear una metodología en base a los isótopos 14
y 15 de nitrógeno.

Ellos investigaron tres métodos de replicación:

A) Replicación conservativa

En este método, la replicación del ADN culmina con dos moléculas: una compuesta
por las dos cadenas de ADN originales (cadenas de la célula madre), y otra compuesta
por dos cadenas nuevas, idénticas a la de la célula original.

MODELO CONSERVATIVO

B) Replicación semiconservativa

En este método se originan dos moléculas de ADN, ambas compuestas por una cadena
del ADN original y por una cadena nueva, complementaria a la original. Aquí, las
hebras originales sirven de molde para la síntesis de la cadena nueva.

MODELO SEMICONSERVATIVO

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C) Replicación dispersiva

El método dispersivo implica la ruptura de las cadenas de ADN y la posterior unión de

los fragmentos, resultando en moléculas de ADN hijas con una mezcla de fragmentos
nuevos y viejos en cada hebra de ADN, pareciéndose a un mosaico.

MODELO DISPERSIVO

Para determinar cuál método era el que realmente ocurría en la replicación celular,
Meselson y Stahl cultivaron varias generaciones de bacterias Escherichia coli en un
medio con un isótopo pesado de nitrógeno ( 15𝑁), y otras en uno con un isótopo de
nitrógeno más liviano ( 14𝑁), con el fin de que, tras varias generaciones, las bacterias
incorporaran en su ADN el isótopo 14 o el 15.

Luego de extraer el ADN de algunas de estas bacterias, lo centrifugaron y separaron

por densidad en tubos de ensayo (el ADN más pesado migra hacia el fondo del tubo
a diferencia del liviano).

MODELOS DE LOS TUBOS POST-CENTRIFUGADO

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Posteriormente, las bacterias que habían crecido en nitrógeno 15, fueron trasladadas
a un medio con nitrógeno 14 durante 30 minutos (lo que dura un ciclo de replicación).
Si la hipótesis de la síntesis conservativa fuese la correcta, se debería obtener lo que
se ve en (a); una marca de ADN pesado (15N-15N) y otra con ADN liviano (14N-
14N), pero lo que se obtiene en realidad es lo que se observa en (b) una sola marca
en posición intermedia, pues está formada por ADN híbrido (14N-15N).

Esto es, todas las células hijas tienen un ADN con una hebra con 14N y otra con 15N,
por lo tanto, se concluyó que la hipótesis de la síntesis semiconservativa es la que
tiene lugar dentro de las células.

MODELOS DE LOS TUBOS CON RESULTADOS

Lo observado en (c) es una segunda generación, donde se obtiene una marca de ADN
mixto (14N-15N) y otra de ADN liviano (14N-14N), lo que corrobora nuevamente la
hipótesis de la síntesis semiconservativa (c).

Meselson y Stahl establecieron, gracias a este estudio, que la replicación del ADN se
realiza mediante la separación de las hebras, y donde cada una sirve como molde
para la síntesis de una nueva, complementaria a la original.

Los estudios se realizaron en Escherichia coli, pero los resultados son universales y
aplicables para todos los organismos del planeta.

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ACTIVIDAD N°1

¿Por qué crees que Meselson y Stahl usaron isótopos de nitrógeno para el estudio de
ADN?

MECANISMOS DE REPLICACIÓN

Los procesos para la replicación del ADN se dilucidaron algunos años más tarde, con
otros experimentos realizados en Eschrerichia coli. Los mecanismos que se detallarán
a continuación corresponden a organismos procariontes, y presentan algunas
diferencias para eucariontes, que se revisarán al final.

A) Origen de la replicación

La replicación siempre comienza en un lugar específico de la doble hélice, en el

llamado origen de replicación, reconocido por su secuencia de nucleótidos.

Escherichia coli tiene un solo origen de replicación, y sus bases son en mayoría pares
de adenina-timina (A/T), que tienen solo dos puentes de hidrógeno y son más fáciles
de deshacer.

Varias proteínas están implicadas en reconocer el origen de replicación, cuando lo

hacen, se unen allí y abren la cadena ADN, dejando un espacio desenrollando. A partir
de ese espacio se forma la burbuja de replicación.

FUENTE: ADAPTACIÓN. KHANACADEMY.ORG

BURBUJA DE REPLICACIÓN

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Con la apertura de la doble hebra, se forman las horquillas de replicación que

comienzan a avanzar en ambos sentidos del círculo para dar origen a dos moléculas
de ADN hijas de acuerdo con el modelo conservativo.

La proteína helicasa rompe los puentes de hidrógeno que mantienen unidas a las
bases nitrogenadas, consiguiendo la separación de las hebras. Cuando el ADN se
encuentra muy condensado, las proteínas topoisomeras cortan una hebra de ADN
para ayudar en el desenrollamiento. Ambas proteínas permiten el avance de la
horquilla de replicación.

Las proteínas de unión a cadenas sencillas, SSB por su sigla en inglés, se unen a las
hebras desenrolladas e impide que se vuelvan a unir en doble hélice.

B) Elongación

Para la síntesis de nuevas hebras de ADN, la ADN polimerasa (ADN pol) es

fundamental. Esta enzima se encarga de añadir nucleótidos a la cadena que se forma,
incorporando aquellos complementarios a la hebra molde.

Para comenzar con la síntesis de la nueva cadena, la ADN polimerasa necesita unirse
al extremo 3’ de una cadena de ADN ya existente. Para esto, la enzima primasa
sintetiza pequeños fragmentos de ARN llamados cebadores, que se unen a la hebra
molde y le dan un lugar de unión a la ADN pol. La ADN polimerasa se une en el
extremo 3´ del cebador y comienza a sintetizar nucleótidos complementarios para
formar una hebra nueva.

FUENTE: ADAPTACIÓN. KHANACADEMY.ORG

ELONGACIÓN DE CADENA NUEVA

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La elongación de las cadenas no es igual para cada una. Las cadenas de ADN son
antiparalelas, es decir, una va en dirección 5’ a 3’ y la otra de 3’ a 5’. La ADN
polimerasa sintetiza nucleótidos en dirección 5’ a 3’, por lo que la cadena que va en
su misma dirección será replicada rápidamente. A esta cadena se le llama cadena
líder.

La otra cadena, de dirección 3’ a 5’, es más difícil de replicar porque va en dirección

opuesta a la ADN pol. Para la unión de nucleótidos nuevos en esta cadena, se
necesitan varios cebadores, llamados fragmentos de Okazaki. La replicación en esta
cadena es mucho más lenta, porque la ADN pol no sintetiza nucleótidos de manera
continua, sino por partes: debe separarse y volver a unirse al extremo 3’ de Okazaki,
cada vez que sintetiza un pequeño fragmento. A esta cadena se le llama cadena
retrasada.

FUENTE: ADAPTACIÓN. KHANACADEMY.ORG

FRAGMENTOS DE OKAZAKI

Para terminar con la elongación, es necesario remover todos los cebadores y

reemplazarlos con los nucleótidos que correspondan. Para eso, la comunidad científica
propone dos modelos:

 Modelo clásico. La ADN polimerasa degrada al cebador de la cadena líder y a los

fragmentos de Okazaki de la cadena retrasada, y sintetiza los nucleótidos faltantes
en el espacio libre. La proteína ADN ligasa sella las uniones entre nucleótidos.

 Modelo de acción enzimática. Una enzima ribonucleasa H degrada los

cebadores de ambas hebras, y luego la ADN pol sintetiza los nucleótidos faltantes
en el espacio libre.

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La evidencia in vitro, indica que cuando E. coli carece de la ribonucleasa, la bacteria

sigue siendo viable ya que ADN pol cumple su función. En la actualidad, aunque aún
se requiere de más estudio, se sugiere que es el modelo clásico es que impondría.

La ADN polimerasa también tiene actividad correctora. En un proceso llamado editing

la ADN pol detecta las bases que no están bien complementadas y lo repara, sacando
la base incorrecta y remplazándolo por la base que sea complementaria a la hebra
molde.

C) Término de la replicación

La replicación de las hebras de ADN termina cuando las dos horquillas de replicación
se encuentran con las secuencias de término. Las enzimas topoisomerasas cortan las
hebras implicadas y se da forma a las nuevas moléculas de ADN.

A continuación, se presenta el modelo completo de la replicación de ADN.

REPLICACIÓN DEL ADN

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ACTIVIDAD N°2

¿Cuál es la importancia de la ADN ligasa? Fundamenta

ACTIVIDAD N°3

La figura representa el proceso de replicación

Al respecto:

a) Las hebras del ADN son antiparalelas. Pinte la hebra que va de 3’ a 5’

b) ¿Cuál extremo de la doble hélice de ADN se va desenrollando el de su izquierda o

el de su derecha? Justifique

c) Anote en cada extremo del ARN, ¿cuál es el extremo 5’ y cuál extremo es el 3’?
Justifique su respuesta.

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REPLICACIÓN EN EUCARIONTES

La replicación entre procariontes y eucariontes es bastante parecida, aunque tienen

algunas diferencias. En ambos casos las proteínas involucradas son equiparables, por
ejemplo, en las células eucariontes la replicación ocurre gracias a cinco tipos de ADN
polimerasa, cada una especializada en alguna tarea. Mientras que en las células
procariontes la replicación ocurre gracias a una ADN pol que cumple todas las
funciones.

En las células de los organismos eucariontes, los cromosomas pueden tener múltiples
orígenes de replicación, por lo que las proteínas que reconocen estos sitios deben
detectar cuál está activo para la replicación.

En los organismos eucariontes, simultáneamente a la replicación de ADN se van

sintetizando las histonas y formando nucleosomas, para que el ADN vaya siendo
condensado a medida que se sintetiza.

ENZIMAS QUE INTERVIENEN EN LA SÍNTESIS DEL ADN

Cada etapa de la replicación del ADN eucariótico requiere la intervención de variadas

enzimas. A continuación, se presenta una descripción de estas enzimas.

A) ADN-helicasas

Las helicasas son proteínas motoras requeridas para desenrollar segmentos cortos
del ADN bicatenario (de doble hebra) original. Estas enzimas utilizan como energía el
ATP generado en la ruptura de los enlaces de los nucleótidos, para catalizar la
separación de las hebras y formar la horquilla de replicación durante la síntesis del
ADN.

B) ADN-primasa

Las primasas son las que inician la síntesis de una molécula de ARN esencial para
cebar la síntesis del ADN, tanto en la hebra adelantada como en la retrasada. Los
primeros nucleótidos son ribonucleótidos y los posteriores pueden ser ribonucleótidos
o desoxirribonucleótidos.

C) Proteínas de unión al ADN monocatenario (SSB)

Son proteínas que impiden que el ADN monocatenario se hibride para formar un ADN
bicatenario. Una función importante de estas proteínas durante la replicación del ADN
consiste en proteger una hebra monocatenaria hasta que se sintetice su hebra
complementaria.

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D) ADN-polimerasas

Varias ADN-polimerasas están implicadas en la replicación del ADN en eucariontes, y

cada una posee diferentes actividades. Cada polimerasa eucariótica posee una
actividad particular y funciona como un complejo para iniciar la síntesis del ácido
desoxirribonucleico (ADN polimerasa III).

Algunas ADN-polimerasas tienen una actividad de exonucleasa de 3’ a 5’, o capacidad

de lectura y corrección, que les permite eliminar los nucleótidos que no forman parte
de la doble hélice, como la ADN polimerasa I que elimina los cebadores. La enzima
retira los residuos emparejados erróneamente gracias a esta actividad correctora. Así
se mejora la fidelidad de la replicación del ADN, al volver a comprobar que el
apareamiento de bases es el correcto antes de seguir con la polimerización.

E) ADN-ligasa

La ligasa es una enzima que cataliza el cierre de las roturas en las hebras que aún
permanecen en el ADN, luego de que la ADN-polimerasa llena los espacios que dejan
los cebadores de ácido ribonucleico. La ADN-ligasa se encarga de crear el último
enlace fosfodiéster entre los nucleótidos adyacentes en una hebra de ADN.

F) Topoisomerasas o ADN girasa

A medida que la horquilla de replicación se mueve a lo largo de la hélice, la rotación

de las hebras una alrededor de la otra hace que el ADN se superenrolle. El
retorcimiento excesivo del ADN lo disminuyen las enzimas conocidas colectivamente
como topoisomerasas. Estas enzimas alivian la tensión torsional en el ADN: en primer
lugar, escinden el enlace fosfodiéster de una o ambas hebras, estas se abren, se
desenrollan, y finalmente la misma enzima vuelve a unir las cadenas.

G) Telomerasa

La telomerasa es una enzima que ayuda a mantener el telómero, que es una

secuencia repetitiva y protectora del ADN asociado a proteínas en el extremo de un
cromosoma, y que se va recortando con cada división celular. Se sabe que su
acortamiento forma parte del envejecimiento normal. Los telómeros son estructuras
cromosómicas importantes y permiten que la célula diferencie los cromosomas
intactos de los rotos y para proteger a los cromosomas de la degradación. También
sirven para los mecanismos de replicación normales.

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En la mayor parte de organismos, el ADN telomérico consiste en una ordenación en

secuencias repetitivas de ADN muy simples (en los humanos es TTAGGG). La enzima
que mantiene los telómeros es la telomerasa, una ADN-polimerasa que utiliza el ARN
como molde, y que añade repeticiones TTAGGG a los extremos de los cromosomas.

TELÓMEROS COMO PUNTOS BRILLANTES EN UNA MICROFOTOGRAFÍA DE CROMOSOMAS

Como se revisó anteriormente, cada etapa de la replicación requiere de la

participación de diversas enzimas. Unas se encargan de abrir el ADN bicatenario en
los distintos orígenes de replicación, otras deben reconocer y unirse a él y sintetizar
cebadores para la replicación. También este proceso necesita enzimas que mantengan
abierta la estructura del ADN, sinteticen una nueva hebra y finalmente, vuelvan a
juntar las hebras de ADN. Así mismo se necesitan otras enzimas para disminuir el
enrollamiento que se produce cuando se abre una doble hélice.

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ACTIVIDAD N°4: SELECCIÓN MÚLTIPLE

1. El hecho de que la replicación del ADN sea un proceso semiconservativo, se refiere

a que

A) la molécula de ADN recién sintetizada, contiene una hebra de ADN vieja y una
hebra de ADN nueva.
B) ambas hebras de la molécula de ADN recién sintetizada, son nuevas.
C) ambas hebras de la molécula de ADN recién sintetizada, contienen mezclas de
ADN nuevo y ADN viejo.
D) las dos hebras nuevas que tendrá la molécula de ADN recién sintetizada, se forman
a partir de cadenas viejas.
E) la molécula de ADN recién sintetizado contiene una mezcla desigual de ADN nuevo
y ADN viejo.

2. En relación con la replicación semiconservativa del ADN es correcto

I. afirmar que se realiza en las células procariontes y eucariontes.

II. inferir que toda molécula de ADN la conforma una hebra nueva y otra vieja.
III. deducir que se realiza solo en el proceso mitótico.

A) Solo I.
B) Solo II.
C) Solo I y II.
D) Solo II y III.
E) I, II y III.

3. Sobre la replicación del ADN es correcto señalar que utiliza

I. enzimas.
II. energía.
III. nucleotidos.

A) Solo I.
B) Solo II.
C) Solo I y II.
D) Solo II y III.
E) I, II y III.

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4. ¿Cuál de las siguientes proteínas permite agregar nucleótidos complementarios a

la hebra molde?

A) Ligasa.
B) ADN polimerasa.
C) Girasa.
D) Helicasa.
E) Topoisomerasa.

5. En la replicación del ADN la hebra retardada es aquella que

A) se replica en el sentido contrario a la dirección de apertura de la horquilla de

replicación.
B) se replica en el mismo sentido a la dirección de apertura de la horquilla de
replicación.
C) se replica en sentido de 5` a 3`.
D) se replica en sentido de 3`a 5`.
E) no puede ser replicada.

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SOLUCIONARIO

ACTIVIDAD N°1

El nitrógeno es uno de los componentes del ADN, cuando una célula en división crece
en un medio con este elemento, este sería integrado a los cromosomas de las
generaciones venideras. Además el nitrógeno tiene los isótopos 14 y 15 bien
diferenciados por peso molecular gracias a técnicas de laboratorio que ya se conocían,
por lo tanto, era posible determinar cuál isótopo de nitrógeno se añadía a cuál hebra
a estudiar.

ACTIVIDAD N°2

La ADN ligasa es importante para el proceso de replicación ya que sella las uniones
entre nucleótidos. Tiene vital valor en la cadena retrasada donde une los variados
fragmentos de Okasaki que surgen del proceso.

ACTIVIDAD N°3

b) ¿Cuál extremo de la doble hélice de ADN se va desenrollando el de su izquierda o

el de su derecha? Justifique
Se va desenrrollando hacia la izquierda ya que la hebra lider, la de arriba, replica en
dirección 3’ a 5’

ACTIVIDAD N°4

1) A
2) C
3) E
4) B
5) A

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