Marco Teorico Adn

MARCO TEORICO
Para realizar el aislamiento de ADN genómico, existen diferentes métodos y

tecnologías. Sin embargo, en todos ellos podemos diferenciar varias etapas
comunes en términos generales:
1. Obtención y clasificación de la muestra
2. Disrupción o alteración de la membrana celular
3. Lisis de las membranas citoplasmáticas
4. Desproteinización y separación de contaminantes e inhibidores
5. Recuperación y aislamiento del ADN
El primer paso en cualquier protocolo de extracción es la clasificación del material
inicial, ya sea de origen viral, bacteriano, vegetal o animal, ya que esto
condicionará el tratamiento que deberemos emplear para la obtención del material
genético.
Dicho material genético está alojado en el interior de la célula procariota o en el
núcleo de la célula eucariota. Por ello, el protocolo de extracción seleccionado
debe permitirnos lisar la célula de forma leve a fin de causar el menor daño al
ADN.
En cuanto a los mecanismos de lisis celular, podemos distinguir dos tipos:
aquellos basados en la acción mecánica, como el pulverizado del tejido con hielo
seco o nitrógeno líquido, o los basados en la degradación enzimática de la pared
celular (si está presente) y la lisis de las membranas celulares mediante
detergentes. En GENYCA empleamos en todos nuestros protocolos un choque
térmico para favorecer la alteración de las membranas citoplasmáticas,
acompañado de un buffer de lisis para acabar de romper dichas membranas.
Seguido a esta lisis celular, la mayoría de métodos involucran una
desproteinización con el fin de purificar el ADN de posibles contaminantes o
inhibidores. Este proceso lo conseguimos mediante la adición de una proteasa
(Proteinasa K).
Finalmente, el material genético es precipitado y concentrado en un buffer de
elución, estando ya listo para ser amplificado (PCR) y utilizado en diferentes
aplicaciones y diagnósticos.
TIPOS DE MUESTRAS
Existen una gran variedad de muestras a partir de las cuales podemos obtener
material genético. Por tanto, esto nos permite poder realizar pruebas genéticas a
partir de prácticamente todo tipo de muestras biológicas que contengan células.
En GENYCA empleamos para nuestros estudios genéticos
principalmente muestras provenientes de mucosa bucal en torundas estériles. Es
la muestra más utilizada en la mayor parte de los laboratorios de análisis y
diagnóstico genético, debido a su fácil extracción y a la alta tasa de éxito en la
obtención del ADN.
Es también muy frecuente la utilización de muestras de sangre para la realización
de nuestros estudios genéticos. En ella, encontramos los glóbulos blancos o
leucocitos a partir de los cuales podemos obtener ADN.
Además de las ya mencionadas, existen una infinidad de muestras de las que
podemos obtener material genético humano, algunas de las más utilizadas son:
 Folículo capilar o raíz del cabello.
 Tejido muscular no degradado.
 La cabeza de los espermatozoides obtenidos a partir de muestras de
semen.
 Muestras de hueso y dientes, importantes en pruebas forenses.
 Cepillos de dientes.
 Uñas, siempre y cuando tengan adheridas células de la piel.
EXTRACCIÓN
Una vez extraído y eluido el ADN es necesario conservarlo a 4º C si no se va a
utilizar de inmediato.
Tras dicha extracción, ya tenemos el material genético a partir del cual poder
realizar los estudios genéticos pertinentes. Generalmente, el paso posterior a la
extracción es la amplificación genética o PCR mediante la reacción en cadena de
la polimerasa, esta técnica nos permite ampliar la región concreta del genoma que
nos interesa para cada estudio genético. Las técnicas de post-amplificación más
utilizadas son: hibridación, secuenciación, restricción enzimática, electroforesis,
etc. con todas sus variantes. Las iremos describiendo en siguientes artículos.

5. BIBLIOGRAFÍA
 Klug, W.S. & Cummings, M. R. (1999). Conceptos de Genética, 5ª ed.
Prentice Hall, Madrid.

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