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Microbiologia Y Parasitologia

Microbiologia Y Parasitologia (Universidad Nacional de Trujillo)

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UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA

“Acción de los microorganismos sobre los carbohidratos, proteínas y grasas. Acción de

agentes físicos y químicos sobre el desarrollo bacteriano. Antibiograma y espectro antibiótico.
Desarrollar protocolos para el diagnóstico de laboratorio de los microbios mencionados en
clase teórica. Destacar: tipos de muestra, observación microscópica, cultivo y aislamiento y,
serología si correspondiera.”

CURSO
MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA

DOCENTE
GONZÁLES VARAS, ADALBERTO JAVIER

ALUMNO
ARROYO CORDOVA, JUAN ARTURO

TRUJILLO – PERÚ
2020

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TAREA N°2
Escuela A.P. Farmacia y Bioquímica
Curso: Microbiología y Parasitología Sección: B
Apellidos y nombres: Arroyo Cordova, Juan Arturo
Código de Matrícula: 1051101017
Profesor: Gonzales Varas, Adalberto Javier
N° de tarea: 02 Fecha: 17/07/2020

Acción de los microorganismos sobre los carbohidratos, proteínas y

grasas. Acción de agentes físicos y químicos sobre el desarrollo
bacteriano. Antibiograma y espectro antibiótico. Desarrollar protocolos
para el diagnóstico de laboratorio de los microbios mencionados en clase
teórica. Destacar: tipos de muestra, observación microscópica, cultivo y
aislamiento y, serología si correspondiera.
I. MARCO TEÓRICO
Agar: Se utiliza como agente gelificante para dar solidez a los medios de
cultivo. En el agar bacteriológico el componente dominante es un polisacárido
que se obtiene de ciertas algas marinas y que presenta la indudable ventaja de
que, a excepción de algunos microorganismos marinos, no es utilizado como
nutriente.
Peptonas: Son mezclas complejas de compuestos orgánicos, nitrogenados y
sales minerales, que se obtienen por digestión enzimática o química de proteínas
animales o vegetales (soja caseína carne, etc.). Las peptonas son muy ricas en
pépticos y aminoácidos, pero pueden ser deficientes en determinadas vitaminas
y sales minerales.
Medio de cultivo: Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de
crecimiento y otros componentes que crean las condiciones necesarias para el
desarrollo de los microorganismos.

II. OBJETIVOS

- Conocer la acción de las bacterias sobre los carbohidratos, proteínas y

grasas.
- Interpretar las diversas reacciones químicas de las bacterias sobre los
diferentes sustratos usados en la presente práctica, considerando los
resultados positivos y negativos.
- Conocer las técnicas microbiológicas comunes en la evaluación de agentes
microbianos (físicos y químicos) sobre cultivos bacterianos y observar la
respuesta frente a diferentes tipos de compuestos

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- Conocer el procedimiento para realizar una prueba de difusión por disco.

- Interpretar los diámetros de la zona de inhibición como sensible, intermedio
o resistente para organismo/agente microbiano específico.
- Conocer el procedimiento para evaluar el especto de acción de un antibiótico
a través de la prueba de difusión por disco.
- Interpretar los resultados de acuerdo a la inhibición del crecimiento de los
organismos de prueba.

III. MATERIALES Y PROCEDIMIENTO

- MEDIOS LÍQUIDOS:
Caldo rojo de fenol y glucosa
Caldo rojo de fenol y lactosa
Caldo rojo de fenol y sacarosa
Caldo peptonado para producción de indol y H2S
Caldo RM-VP

- MEDIOS SEMISÓLIDOS:
Gelatina nutritiva

- MEDIOS SÓLIDOS:
Agar urea de Christensen
Agar almidón
Agar tributirina

1. ACCIÓN DE LOS MICROORGANISMOS SOBRE LOS

CARBOHIDRATOS, PROTEÍNAS Y GRASAS.

• FERMENTACIÓN DE CARBOHIDRATOS
Procedimiento:
Inocular los cultivos bacterianos en una serie de tubos con caldo rojo
de fenol + glucosa, lactosa y sacarosa.
Incubar los tubos a 35-37°C durante 24 horas
Hacer una lectura a las 24 horas de incubación. Determinar si hay
crecimiento, cambios en el color del indicador y producción de gas
en la campana de Durham (medios de glucosa, lactosa y sacarosa).

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Prueba de ácido:
Prueba positiva (+): color amarillo
Prueba negativa (-): color rojo
Producción de gas:
Prueba positiva (+): burbujas
Prueba negativa (-): sin burbujas

• PRUEBAS DE ROJO DE METILO – VOGUES PROSKAUER

Procedimiento:
Inocular los cultivos bacterianos en una serie de caldo de MR-VP.
Incubar los tubos a 35-37°C durante 48 horas.
Hacer la lectura a las 48 horas de incubación. Determinar si hay
crecimiento, añadir a un tubo dos gotas del reactivo RM y observar
el cambio en el color del indicador y al otro
tubo reactivo Barrit (VP): 0.4mL sol “A” +
0.6mL sol “B” y observar el cambio de color en
el medio.
Prueba rojo de metilo
Solución indicadora: Se prepara disolviendo
0.1g de rojo de metilo en 300mL de etanol al
95% y diluyendo luego con agua hasta 500mL.
Prueba positiva (+): color rojo intenso
Prueba negativa (-): color amarillo
Prueba Voges – Proskauer
Solución del reactivo: Se prepara sol. “A”
KOH al 40% y sol. “B” alfa-naftol al 5% en
etanol absoluto.
Prueba positiva (+): color rojo
Prueba negativa (-): color amarillo

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• PRODUCCIÓN DE INDOL Y H2S:

Procedimiento:
Inocular los cultivos bacterianos en una serie de
tubos con caldo peptonado o triptonado y una
cinta de papel de filtro embebida con acetato de
plomo de solución saturada.
Incubar los tubos a 35-37°C durante 24 horas.
Realizar observaciones a las 24 horas.
Producción H2S:
Prueba positiva (+): ennegrecimiento de la cinta
de papel filtro.
Prueba negativa (-): no hay ennegrecimiento.
Producción de indol:
Reactivo Kovac: se disuelve p-dimetil-
aminobenzaldehido 10g en 150mL de alcohol
amílico o isoamílico y añadir lentamente 50mL
de ácido clorhídrico concentrado.
Prueba positiva (+): aparición de un color
grosella.
Prueba negativa (-): no hay aparición de color.

• HIDRÓLISIS DE LA ÚREA
Procedimiento:
Inocular cada cultivo bacteriano en tubos con caldo o agar urea.
Incubar los tubos a 35-37°C durante 24 horas.
Hacer la lectura a las 24 horas de incubación.
Caldo (agar) urea:
Prueba positiva (+): color rojo cereza.
Prueba negativa (-): no hay
cambio de color.

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• HIDRÓLISIS DE LA GELATINA
Procedimiento:
Inocular los cultivos bacterianos en tubos con medio gelatina
nutritivo o en placa medio gelatina de Frazier.
Incubar en tubos a 35-37°C durante 24 horas.
Antes de realizar las observaciones de lectura colocar los tubos en
refrigeración durante 20 minutos y a las placas añadir el reactivo de
Frazier.
Reactivo de Frazier:
Prueba positiva (+): Medio licuado, halo transparente de hidrólisis.
Prueba negativa (-): Medio líquido, sin presencia de halos.

• HIDRÓLISIS DEL ALMIDÓN

Procedimiento:
Inocular los cultivos bacterianos en una placa Petri con agar almidón.
Incubar los tubos a 35-37°C durante 24 horas.
Realizar las observaciones a las 24
horas.
Añadir alícuotas de solución de
Lugol
Prueba positiva (+): halos
transparentes en un fondo azul
oscuro
Prueba negativa (-): no hay halos,
todo azul oscuro.

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• HIDRÓLISIS DE LA TRIBUTIRINA
Procedimiento:
Inocular los cultivos bacterianos en una placa Petri con agar
tributirina.
Incubar los tubos a 35-37°C durante 24-48 horas.
Realizar las observaciones.
Lectura:
Prueba positiva (+): halos transparentes alrededor de la colonia.
Prueba negativa (-): no hay halos.

2. ACCIÓN DE AGENTES FÍSICOS Y QUÍMICOS SOBRE EL

DESARROLLO BACTERIANO

• AGENTES FÍSICOS
A. Punto térmico mortal: temperatura mínima en la que un
organismo muere en 10 minutos.
Procedimiento:
Divida el reverso de una caja con agar nutritivo en cinco partes,
con un marcador.
A partir de 18 horas de incubación de E. coli en caldo nutritivo,
tome un asada y siembre por estria una división de la placa de
agar nutritivo. Marque el reverso con un código.
Coloque los tubos en un baño maría a 37, 50, 60, 70, 80 y 92°C.
tome un asada a los de 10 minutos de tratamiento y siembre en
los sectores de la placa de agar previamente dividida.
Incubar las placas sembradas a 35-37°C por 24 horas.
Determine el punto térmico mortal para E. Coli.

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B. Tiempo térmico mortal: tiempo de la exposición para lograr la

muerte de una población.
Procedimiento:
Divida el reverso de una caja con agar nutritivo en cinco partes,
con un marcador.
A partir de 18 horas de incubación de B Subtilis en caldo
nutritivo, tome un asada y siembre por estria en una división de
la placa de agar nutritivo. Marque el reverso con un código.
Coloque los tubos en baño maría a 70°C. tome un asada en los
tratamientos de los 5, 10, 15, 20, 25 y 30 minutos y siembre cada
tratamiento en uno de los sectores de la placa de agar. El tiempo
total de calentamiento será de 40 minutos.
Incube todas las placas sembradas a 35-37°C por 24 horas
Determine el tiempo térmico mortal en B. Subtilis.

C. Influencia del pH:

Prepare tres sets de tubos con caldo nutritivo y con diferentes pH
(5.0; 7.0; 9.0)
Procedimiento:
Deje un tubo control del caldo normal sin sembrar.
Inocule un set de diferentes pH, con 0.1 mL de E. Coli, P.
Fluorescens y Lactobacillus sp.
Incube la bacteria a 37°C por 24 horas.

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Registre la turbidez cualitativamente con cruces y compare el

crecimiento en los diferentes pH y con los diferentes organismos.

• AGENTES QUÍMICOS
A. Actividad bacteriostática o bactericida de algunos
compuestos químicos.
Procedimiento:
Siembre la superficie de una placa, por medio de un hisopo
estéril impregnado de una
suspensión bacteriana de S. aureus.
Hacer lo mismo con E. coli.
Distribuya varios círculos de papel
impregnado con: antisépticos,
limpiadores comerciales y
domésticos, colorantes,
desinfectantes, jabones,
antibióticos, etc.
Incube a 37°C por 24 horas, mida
el radio de inhibición alrededor de
cada circulo de papel para cada
compuesto y compare entre las dos
bacterias probadas.
Determine si hay diferencias en el
efecto de cada compuesto para las
dos bacterias.

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3. ANTIBIOGRAMA Y ESPECTRO ANTIBIÓTICO

• Prueba por difusión por disco.
Una vez que se han aislado colonias de un organismo que ha sido
identificado como patógeno potencial, debe realizar lo siguiente para
la prueba de susceptibilidad.
Procedimiento:
Seleccionar colonias.
Preparar una suspensión del inóculo.
Estandarizar la suspensión del inóculo.
Inocular la placa.
Colocar discos de antimicrobiano.
Inocular la placa.
Medir las zonas de inhibición.
Interpretar los resultados.
• Método de difusión en agar (Kirby-Bauer)
Día 1:
Preparación de las placas con el medio de cultivo.
Preparación del inóculo.
Siembra de las placas.
Colocación de los discos.
Incubación de las placas.
Día 2:
Medición de las zonas de inhibición.
Resultados:
Estándares de interpretación de zonas de diámetro.
Categorías representativas:
Sensible: Afección
debido a una cepa.
Intermedio: Eficacia
clínica.
Resistente: Las
cepas no son
inhibidas por la
concentración
sistémica.

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• ESPECTRO ANTIBIÓTICO
Procedimiento:
En una placa Petri con medio de cultivo Mueller Hinton, colocar en
la zona central un disco de penicilina y en otra placa un disco de
tetraciclina o el disco del antibiótico a evaluar.
Sembrar por estría radial, a partir del disco, los microorganismos de
prueba anotando el orden en que fueron sembrados.
Incubar a 37°C por 24 horas.
Hacer la lectura de los resultados según la distancia a que se
desarrollen los microorganismos a partir del borde del disco de
antibiótico.
Interpretar los resultados.

4. DESARROLLAR PROTOCOLOS PARA EL DIAGNÓSTICO DE

LABORATORIO DE LOS MICROBIOS MENCIONADOS EN
CLASE TEÓRICA. DESTACAR: TIPOS DE MUESTRA,
OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA, CULTIVO Y
AISLAMIENTO Y, SEROLOGÍA SI CORRESPONDIERA.

• Diagnóstico Staphylococcus aureus

Procedimiento
Muestra
Humanos: secreción nasal, faríngea, ótica, ocular, heridas, acné
Alimentos: leche, mayonesa, etc.
Animales
Examen directo usamos tinción Gram
En medio de cultivo:
A Chapman: Colonias amarillas.
A Sangre: Colonias blanquecinas.
Medio tioglicolato o BHI: Se observa turbidez.

Staphylococcus aureus

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• Diagnóstico Streptococcus Pyogenes

Procedimiento:
Muestra
Secreción de heridas (pus), secreción faríngea, secreción ótica,
secreción ocular, etc.
Examen directo usamos tinción gran.
En medio de cultivo:
Enriquecido con A.S.: Observación de colonias puntiformes,
pequeñas, hemolíticas.

Streptococcus pyogenes β-hemolítico

IV. COMENTARIO:
En los medios de cultivo, se tiene en cuenta los agentes físico químicos que
pueden alterar el crecimiento de estas, tales como la temperatura, pH, etc. Los
microorganismos también actúan en el las proteínas, grasas y carbohidratos,
para los cuales, desarrollamos y aprendimos en clase, como es el proceso para
identificar la acción de esos microorganismos.
Es importante también resaltar la importancia del antibiograma y el espectro
antibiótico, que nos ayuda a medir la sensibilidad de una cepa bacteriana que se
sospecha es la responsable de una infección a uno o varios antibióticos.
Se pudo apreciar el diagnostico de dos importantes microbios, como son,
Staphylococcus aureus y Streptococcus Pyogenes, donde al poner a prueba
nuestros conocimientos adquiridos en la práctica veremos las colonias formadas
en las distintas muestras extraídas.

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V. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. PUMAROLA. (1990). Microbiología y parasitología médica. (Vol. 2). España:

Salvat.
2. CERCEDANO, E. SAAVEDRA-LOZANO, J. (2009) El antibiograma.
Interpretación del antibiograma: conceptos generales. Vol. 7. Recuperado: 19 de
julio 2020. Revista Elsevier. Disponible en: https://www.elsevier.es/es-revista-
anales-pediatria-continuada-51-articulo-el-antibiograma-interpretacion-del-
antibiograma-S1696281809719274
3. Jawetz., Melnick. and Adelberg., 2014. Microbiología Médica. México D.F.:
McGraw Hill.

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Medio de Reactivo(s)
Prueba Sustrato Fundamento
cultivo [SI] [NO]
GLUCOSA CALDO X Producción de ácidos y gas, vira el indicador de pH de medio
Fermentación de GLUCOSOLADO
glucosa
GLUCOSA CALDO X Producción de fuerte acidez, pH menos 4,4
MR-VP
RM

GLUCOSA CALDO X Producción de acetilmetil carbinol

VP MR-VP
ALMIDON AGAR X Hidrolisis por la producción de amilasas y reacción del yodo
Hidrólisis del almidón ALMIDON
PEPTONA/ CALDO X Utilización del triptófano por triptofanasa y producción de indol que
TRIPTONA PEPTONADO/ reacciona con reactivo de Kovac
Producción de Indol TRIPTONADO
PEPTONA/ CALDO X Utilización de aminoácidos azufrados con producción de H2S que
Producción de H2S TRIPTONA PEPTONADO/ reacciona con el acetato de plomo formando PbS
TRIPTONADO
AGAR X Utilización de la urea por ureasa y cambio de pH del medio
UREA ÚREA
Hidrólisis de urea

AGAR X Utilización de gelatina por gelatinasas y liquefaccion del medio

Hidrólisis de gelatina en GELATINA GELATINA
tubo
AGAR X Utilización de gelatina por gelatinasas y observación de halos
Hidrólisis de gelatina en GELATINA GELATINA transparentes por reactivo de Frazier.
placa
AGAR X Utilización de tributirina por lipasas y observación de halos transparentes
TRIBUTIRINA TRIBUTIRINA
Hidrólisis de Tributirina

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