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Un estudio sobre alubias procesan tratamiento de nanofiltración de aguas residuales y recuperación de lupanina

Teresa Esteves, Ana Teresa Mota, Catarina Barbeitos, Késsia Andrade, Carlos AM Afonso, Frederico
Castelo Ferreira

PII: S0959-6526 (20) 33394-1

DOI: https://doi.org/10.1016/j.jclepro.2020.123349

Referencia: JCLP 123349

Aparecer en: Diario de producción más limpia

Fecha de recepción: 15 de enero de 2020 Fecha de

revisión: 16 de julio de 2020 Fecha de aceptación: 17

de julio de 2020

Cite este artículo como: Esteves T, Mota AT, Barbeitos C, Andrade K, Afonso CAM, Ferreira FC, un estudio sobre el tratamiento de
nanofiltración de aguas residuales de proceso de frijoles lupinos y recuperación de lupanina, Diario de producción más limpia, https://doi.org/10.1016/j.jclepro.2020.123349
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 Un estudio sobre alubias procesan tratamiento de nanofiltración de

aguas residuales y recuperación de lupanina

Teresa Esteves una, Ana Teresa Mota una, Catarina Barbeitos una, Késsia Andrade si,

Carlos AM Afonso si, Frederico Castelo Ferreira una

una iBB - Instituto de Bioingeniería y Biociencias, Departamento de Bioingeniería, Instituto

Superior Técnico, Universidade de Lisboa, Avenida Rovisco Pais, 1049- 001 Lisboa, Portugal.

[email protected] ;

[email protected] ; [email protected] ;

[email protected].
si Instituto de Investigación de Medicina (iMED, ULisboa); Facultad de Medicina,

Universidade de Lisboa, Avenida Prof. Gama Pinto, 1649-003 Lisboa, Portugal.

[email protected] ; [email protected]

**
Autor correspondiente: Frederico Castelo Alves Ferreira; iBB - Instituto de Bioingeniería y

Biociencias, Departamento de Bioingeniería, Instituto Superior Técnico, Universidade de Lisboa,

Avenida Rovisco Pais, 1049-001 Lisboa, Portugal. Tel: +351 218419598;

[email protected].
Teresa Esteves: Investigación, conceptualización, análisis formal, visualización, escritura de supervisión: borrador
original de todas las secciones del estudio. Ana Teresa Mota, Catarina Barbeitos, Késsia Andrade: Investigación,
análisis formal. Carlos AM Afonso y Frederico Castelo Ferreira: recursos, redacción, supervisión y conceptualización
sobre los objetivos generales del estudio.
 3

Treated

Wastewater
4

Solvent
6,16
17

Extraction

18

Lupanine

19
 Un estudio sobre alubias procesan tratamiento de nanofiltración de

aguas residuales y recuperación de lupanina

Teresa Esteves una, Ana Teresa Mota una, Catarina Barbeitos una, Késsia Andrade si,

Carlos AM Afonso si, Frederico Castelo Ferreira una

una iBB - Instituto de Bioingeniería y Biociencias, Departamento de Bioingeniería, Instituto

Superior Técnico, Universidade de Lisboa, Avenida Rovisco Pais, 1049- 001 Lisboa, Portugal.

[email protected] ;

[email protected] ; catarinabarbeito [email protected] ;

[email protected].
si Instituto de Investigación de Medicina (iMED, ULisboa); Facultad de Medicina,

Universidade de Lisboa, Avenida Prof. Gama Pinto, 1649-003 Lisboa, Portugal.

[email protected] ; [email protected].

**
Autor correspondiente: Frederico Castelo Alves Ferreira; Instituto iBB para

Bioingeniería y Biociencias, Departamento de Bioingeniería, Instituto Superior Técnico, Universidade

de Lisboa, Avenida Rovisco Pais, 1049-001 Lisboa, Portugal. Tel: +351 218419598;

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Descripción Página

1. Detalles experimentales. …………………………………………… S2

2. Estudios de cinética y isoterma de unión …………………………. S8

3. Selección de solventes para la extracción de lupanina de aguas residuales ... S9

4. Figuras …………………………………………………………… S11

5. Tablas ……………………………………………………………. S15

6. Referencias ……………………………………………………… S24

S1
1. Detalles experimentales

1.1. Experimentos de nanofiltración

Para el cribado de la membrana de mejor rendimiento, se probaron las siguientes membranas NF de Dow

Filmtec, compradas a Lenntech: NF270, NF200 y NF90. Las características de la membrana se pueden

encontrar en la Tabla S2. Se usó un sistema de flujo cruzado METcell de Evonik, que comprende un

depósito, dos celdas de filtración de flujo cruzado de alta presión y una bomba de engranajes BVP-Z

(ISMATEC) para hacer circular la solución entre el depósito y las células a 420 ml / min. Todos los

experimentos se realizaron a temperatura ambiente con presiones, obtenidas por presurización de

nitrógeno, entre 15-24 bar.

Los experimentos se realizaron en modo de concentración o recirculación total (Esquema S1). Las membranas se

preacondicionaron con permeación de alrededor de 400 ml de agua destilada. Las nanofiltraciones se alimentaron

con 400 ml de agua residual compuesta de frijoles lupinos después de ser centrifugadas a 6,000 rpm y 20 ºC

durante 30 minutos. Las muestras iniciales se obtuvieron del tanque de depósito después de la recirculación de la

solución de alimentación durante aproximadamente 5 minutos a través del sistema sin aplicar presión, antes de

comenzar el ensayo presurizado.

Esquema S1. Representación de modos de concentración y recirculación para experimentos de

nanofiltración.

S2
El permeado se recuperó en cilindros graduados, el flujo se registró con el tiempo y el flujo (J) y la

permeabilidad (Lp) se calcularon de acuerdo con las ecuaciones 1 y 2, considerando un área de

membrana total de 0.0026 m 2)

J (L / h 1 ·metro 2) = Velocidad de flujo (L / h 1) / Área de membrana (m 2) (Ecuación 1)

Lp (L / h 1 ·metro 2 ·bar 1) = J (L / h 1 ·metro 2) / P (barra) (Ec. 2)

Se tomaron muestras de permeado y retenido durante los experimentos para mediciones de

lupanina, DQO, pH y conductividad. Se realizaron despresurizaciones cada vez que se tomó una

muestra retenida. Los rechazos de DQO y lupanina se calcularon usando las ecuaciones 3 y 4,

Rechazo DQO (%) = ( BACALAO alimentar - COD permeado) / BACALAO alimentar x 100 (Ecuación 3)

Rechazo lupanina (%) = ( lupanina alimentar - lupanina impregnar)/ lupanina alimentar x 100 (Ec.4) donde COD alimentar es el valor

de DQO en la muestra compuesta de aguas residuales y DQO impregnar es el valor de DQO determinado

para el permeado recuperado al final del experimento NF. Lupanina alimentar es la concentración de

lupanina en el tanque de reserva (valor inicial para el modo de concentración y valor final para el modo

de recirculación completa), y la lupanina impregnar es la concentración de lupanina en el permeado.

En el modo de concentración, el volumen del retenido disminuye y el volumen recogido de permeado

aumenta, por lo que la concentración de especies retenidas aumentará con el tiempo en el tanque de

reserva.

En el modo de recirculación completa, no solo la corriente de retención, sino también la corriente de

permeado se retroalimentan al tanque de depósito. En caso de que no se observen pérdidas de material en

el sistema (por ejemplo, debido a la adsorción de solutos a la membrana o la evaporación del agua) las

concentraciones de los solutos en los diferentes compartimentos deben ser constantes en el modo de

recirculación; Por lo tanto, este modo de operación, desde la perspectiva de la operación de la membrana,

permite simular en los entornos de laboratorio un paso continuo a través de filtración (por ejemplo, para

estudiar el ensuciamiento) con un uso mínimo de soluciones de aguas residuales. La recirculación de la

corriente de permeado de regreso al tanque de depósito se logró con una bomba de alta presión adicional

Serie I (Labhut), que comenzó después de la permeación de alrededor de 100 ml de permeado, dejando

aproximadamente 300 ml en el lado retenido del sistema.

S3
1.2. Experimentos de adsorción de resina

1.2.1 Experimentos por lotes: Dieciocho resinas diferentes fueron evaluadas con

muestras de lupanina pura en agua, y con la muestra de aguas residuales de cocción tal como se recibió (a pH

4) o después de ajustar el pH con gránulos de NaOH a pH 11 y centrifugación (5 min a 6,000 rpm). Las

características de los adsorbentes se pueden encontrar en la Tabla S1. Los experimentos de detección de

adsorción se llevaron a cabo agregando 150 mg de cada resina a 1,5 ml de las aguas residuales de cocción o

muestras de lupanina pura en tubos Eppendorf de 2 ml y agitación magnética (200 rpm), en una placa de

agitación (RCT Classic, IKA), para ca 15 h. Luego se centrifugaron las mezclas (6,000 rpm durante 4 min), se

eliminaron las resinas y se usó el sobrenadante para el protocolo de cuantificación de lupanina como se

describió anteriormente. El porcentaje de unión a lupanina (%) y la capacidad de adsorción (Q) para cada

resina se calcularon a partir de las ecuaciones 5 y 6, respectivamente:

Unión de lupanina (%) = (C Yo - C L, f) / C Yo x 100 (Ecuación 5)

Q (mg / g) = (C Yo - C L, f) / M x V (Ecuación 6)

donde C Yo corresponde a la concentración de lupanina en la muestra, C L, f es la concentración final de

lupanina, V es el volumen de muestra utilizada (1,5 ml) y M es la masa de resina utilizada (150 mg).

1.2.2. Experimentos de recuperación de lupanina: Para las resinas con interesantes

adsorciones de lupanina, es decir, Amberlite IRC 50, Amberlite IRC 86, AG-50W-X2, AG-50W-X8, Amberlyst

16, Amberlyst 36, Purolite PD206, Amberlite XAD-16 y Dowex MAC-3 un examen para la recuperación de

lupanina de los adsorbentes se realizaron, después de la adsorción de resina, usando cinco soluciones

diferentes: HCl 10% (p / p) en agua, NaOH 10% (p / p) en agua, HCl 10% (p / p) en EtOH / agua (70 : 30 v /

v), NaOH al 10% (p / p) en EtOH / agua (70:30 v / v) y EtOH absoluto. Se añadieron 1,5 ml de una solución

de recuperación a los tubos Eppendorf que contienen las resinas después de la adsorción. Las mezclas se

dejaron a 200 rpm a temperatura ambiente durante 15

h. Después de este tiempo, las mezclas se centrifugaron a 6,000 rpm durante 4 minutos para la separación de la

resina y el sobrenadante se sometió al protocolo de cuantificación de lupanina descrito anteriormente. Para los

experimentos de recuperación que contienen EtOH, después de la centrifugación, el disolvente se evaporó a

temperatura ambiente y el volumen se volvió a llenar con agua (1,5 ml) antes de someterlo al protocolo de análisis

de lupanina. Teniendo en cuenta la naturaleza de las resinas XAD-16 y MAC 3, solo las opciones de uso

S4
El etanol absoluto (900 µL) o 750 µL de una solución de NaOH al 10% (p / p) se ensayó respectivamente

como se describió previamente.

1.2.3 Experimentos de adsorción de isoterma: Los ensayos de unión a isoterma fueron

realizado mediante la adición de diferentes cantidades de resinas XAD-16 o MAC-3 (37.5, 75,

112,5, 225, 300, 375 y 450 mg) a 1,5 ml de aguas residuales de cocción en tubos Eppendorf de 2 ml. El paso

de adsorción y la cuantificación de lupanina se realizaron como se describe para los experimentos de

adsorción por lotes. Los datos obtenidos se ajustaron a los modelos de unión a isotermas de Freundlich y

Langmuir. La isoterma de Freundlich viene dada por la ecuación 7:

q e = K F x C mi exp (1 / n) (Ecuación 7)

donde, q mi es la cantidad de lupanina adsorbida por unidad de masa de resina (mg / g), K F

es la constante de Freundlich (relacionada con la capacidad de adsorción relativa del adsorbente (mg / g)), C mi

es la concentración de equilibrio de lupanina (g / L) y 1 / n es un factor de heterogeneidad.

El modelo de isoterma de Langmuir viene dado por la ecuación 8:

q e = [ q max x K L x C e] / [ 1 + K L x C mi] (Ec. 8)

donde, q mi es la cantidad de lupanina adsorbida por unidad de masa de resina (mg / g), q max es la capacidad

máxima de adsorción y K L es la constante de Langmuir (relacionada con la energía libre de adsorción (L /

mg)).

1.2.4. Experimentos cinéticos: Los ensayos cinéticos se realizaron agregando 150 mg de resinas

XAD-16 o MAC-3 a 1,5 ml de agua residual de cocción en tubos Eppendorf de 2 ml. Se dejó reposar las

mezclas a 200 rpm a temperatura ambiente, durante diferentes períodos de tiempo (5, 15, 30 y 45 min, 1,

2, 4, 6, 8, 24 y 27 h). En diferentes puntos de tiempo, los tubos se centrifugaron a 6,000 rpm durante 4

minutos y el sobrenadante se recuperó y se basificó con gránulos de KOH (pH 13 - 13.5) y se sometió al

protocolo de cuantificación de lupanina.

Los perfiles cinéticos se ajustaron a los modelos cinéticos de pseudo primer o segundo orden dados por las

ecuaciones 9 y 10 respectivamente:

ln [q mi - q (t)] = ln (q mi) - k 1 t (Ecuación 9)

t / q (t) = t / q mi + 1 / (k 2 xq e2) (Ecuación 10)

donde q mi es la cantidad de lupanina adsorbida por unidad de peso de adsorbente en equilibrio (mg de lupanina /

g de resina), q (t) es la cantidad de soluto por unidad de peso de

S5
adsorbente en el tiempo ty k 1 ( h- 1) y k 2 ( g / (mg · h)) son las constantes de pseudo primer o segundo orden,

respectivamente.

1.3. Experimentos de extracción líquido-líquido.

Se evaluaron diez solventes orgánicos de diferentes clases químicas: DCM, MTBE, MIBK, heptano, hexano,

tolueno, Et 2 O, 1-octanol, 1-butanol y EtOAc. Se extrajeron 4 ml de agua residual de la etapa de cocción

(previamente basificada a pH 12-13 con NaOH) y de soluciones acuosas de lupanina pura (aproximadamente

3,26 g / L) con dos extracciones sucesivas, utilizando 2 ml de cada disolvente. En cada extracción, se usó un

vórtice vertical (IKA) durante 2-3 minutos con tiempos de sedimentación de 8-10 minutos. La eficiencia de

extracción de lupanina se calculó mediante la ecuación 11: eficiencia de extracción (%) = [(C L, aq0 x V aq0) - (C L, aq x

V aq)] / ( V aq0 x C L, aq0) x 100

(Ec. 11)

donde C Laq0 y V aq0 son la concentración inicial de lupanina en frijoles lupinos para cocinar aguas

residuales y el volumen inicial de la fase acuosa y C L, aq y

V aq son la concentración de lupanina y el volumen de la fase acuosa después de las dos extracciones,

respectivamente.

Se realizaron experimentos en blanco para los solventes con mayores eficiencias de extracción de lupanina

(es decir, DCM, MTBE, 1-octanol, 1-butanol, tolueno y EtOAc) extrayendo, como se describió anteriormente,

muestras de agua destilada. El COD (COD aq, en blanco) de la fase acuosa de dichos espacios en blanco,

resultante de la solubilidad acuosa del solvente orgánico, se cuantificó como se describió anteriormente. La

ecuación 12 determinó la pureza de la lupanina para los experimentos de extracción con solventes para

DCM, MTBE, 1-octanol, 1butanol, tolueno y EtOAc:

Pureza (%) = DQO lupanina / BACALAO org.phase x 100 (Ec. 12)

donde COD lupanina se calcula como 2.33 x V aq0 x (C L, aq0 - C L, aq) y COD org.phase se calcula como V aq0 x [COD aq0 -

(COD aq - BACALAO aq0)] donde COD aq0 es la DQO de la muestra de aguas residuales y la DQO aq es la

DQO de la fase acuosa de la extracción. La DQO de una muestra acuosa de lupanina pura (a 1 g / L)

se cuantificó dando como resultado un valor de 2,33 ± 0,27 gO 2 / L.

S6
Las extracciones de Liqui-Liquid para MTBE y EtOAc también se realizaron a mayor escala con 150 ml de

muestra de aguas residuales de cocción en dos extracciones sucesivas de 75 ml de disolvente orgánico.

La extracción de lupanina con MTBE y EtOAc se optimizó utilizando 4 ml de aguas residuales de cocción,

basificadas a pH 12-13 con NaOH, se extrajeron 4 veces con 4 ml de MTBE o 3 veces con 4 ml de EtOAc,

como se describe en la sección 2.5. Las fases acuosas se usaron para la DQO y la cuantificación de

lupanina.

S7
2. Estudios de cinética y isoterma de unión.

Los ensayos de isoterma de unión se realizaron para la resina XAD-16 a pH 11 y la resina MAC-3 a pH 4

utilizando las aguas residuales de cocción de frijoles lupinos, y se estudió si los datos obtenidos se ajustaban a

los modelos de isoterma Langmuir y / o Freundlich. De acuerdo con la Figura S4, los datos de unión a la

isoterma obtenidos para la adsorción de lupanina a XAD-16 a pH 11 se ajustan mejor con el modelo de

Freundlich (R 2 =

0.8306), que supone la posibilidad de que la lupanina pueda formar una capa múltiple en la superficie de la

resina. Para la resina MAC-3, para las aguas residuales a pH 4, los datos de la isoterma de unión se ajustaron

mejor mediante el modelo Langmuir (R 2 = 0.8185), siendo posible suponer que la lupanina puede formar una

monocapa en la superficie de la resina, que se describe como una superficie homogénea con sitios de adsorción

idénticos. Los parámetros físicos para cada ajuste y las isotermas de adsorción para la resina MAC-3 se pueden

encontrar en la Información de soporte (Tabla S4 y Figura S5).

El perfil cinético para ambas resinas MAC-3 (Figura S5) y XAD-16 (Figura S4) se evaluó a

temperatura ambiente. Se observó que, un modelo de pseudo segundo orden mostró los mejores

ajustes (R 2 = 0.9998 para MAC-3 y R 2 = 0.9987 para XAD-16) con el equilibrio alcanzado después de

dos horas. Los parámetros del modelo obtenidos se pueden encontrar en Información de soporte

(Tabla S5).

S8
3. Selección de solventes para la extracción de lupanina de aguas residuales

La extracción con solvente se evaluó como una forma posible de aislar la lupanina después de la

etapa de purificación de resina o directamente del retenido, rico en lupanina y con alto contenido de

DQO, a partir de los experimentos con NF. Teniendo en cuenta que la lupanina se extrae mejor en

su forma neutra (pKa = 9.1), el pH de las soluciones acuosas se ajustó a 13-13.5. Los solventes que

mostraron una mayor eficiencia de extracción de lupanina fueron DCM, tolueno, 1-octanol, 1-butanol,

EtOAc y MTBE (Figura S6). Para estos solventes, se observó que la matriz de muestra ejerció una

influencia positiva, para tolueno, 1-octanol y 1-butanol, mientras que para MTBE la matriz tuvo un

efecto negativo y para DCM o EtOAc este efecto fue insignificante. El efecto de la matriz acuosa

sobre la extracción de lupanina probablemente depende de los iones presentes en las aguas

residuales,

La selección del solvente debe considerar principalmente la eficiencia de extracción del solvente, la pureza de la

lupanina, la contaminación del solvente de la fase acuosa y el punto de ebullición del solvente, considerando su

reciclabilidad. Además, el disolvente seleccionado sería el capaz de extraer la mayor cantidad de lupanina, con la

capacidad de mantener otras especies orgánicas, es decir, el contenido de materia orgánica (DQO), en la fase

acuosa. Todos los solventes mostraron resultados similares con respecto a la DQO presente en la fase orgánica

después de la extracción (Figura S6) con valores entre 2.16 y 9.92 gO 2 / L.

Además, para la decisión final sobre la selección del solvente, es importante considerar también la

contaminación del agua con el solvente, el impacto ambiental, los desechos y la salud humana del

solvente orgánico seleccionado, así como el punto de ebullición del solvente para facilitar el reciclaje

del solvente y el aislamiento de la lupanina (Tablas S7 - S9) (Alder et al., 2016; Chickos and Acree,

2003; Levet et al., 2016; Smallwood, 1996). Por lo tanto, el 1-butanol y el 1-octanol deben excluirse,

respectivamente debido a la contaminación sustancial del agua (observada para la muestra en

blanco) y al alto punto de ebullición. El tolueno presenta un impacto ambiental significativo, mientras

que el DCM es un solvente muy peligroso (considerando los desechos y los problemas de salud

humana). La potencial hidrólisis de EtOAc en medio básico (requerida para la extracción de

lupanina) podría ser un factor de exclusión para este solvente. Sin embargo,

S9
Por lo tanto, EtOAc y MTBE son los solventes más adecuados para la extracción de lupanina que presentan puntos

de ebullición factibles para una fácil recuperación de la lupanina (77 ºC y 55 ºC, respectivamente). A partir de estos

ensayos preliminares con MTBE, fue posible recuperar la lupanina con un rendimiento del 57,1% y una pureza del

70%, mientras que para EtOAc se logró un rendimiento del 84,4% con una pureza del 80% (Figura S6).

S10
4. Figuras

Figura S1. Rechazo de conductividad para un factor de concentración del 66% a una presión de 24 bar.

S11
Figura S2. Experimentos de nanofiltración con membrana NF270 a 20 bar: experimento de

concentración superior con la muestra compuesta; Experimento de recirculación media con la fase de

cocción; Fondo: experimento de concentración con muestra de cocción. Derecha: contenido de lupanina

y DQO ​de muestras iniciales, retenidas y permeadas de experimentos de NF para muestra compuesta

(arriba) y fase de cocción (medio e inferior).

S12
Figura S3. Reciclabilidad MAC-3 y XAD-16 para la unión de lupanina (WW = aguas residuales).

Figura S4. Freundlich, Langmuir e isotermas de adsorción experimental (izquierda) y modelos de unión cinética

(derecha) para resina XAD-16 a pH 11 para lupanina en aguas residuales de cocción a temperatura ambiente.

S13
Figura S5. Freundlich, Langmuir e isotermas de adsorción experimental (izquierda) y modelos de unión cinética

(derecha) para resina MAC-3 a pH 4 para lupanina en aguas residuales en fase de reposo a temperatura

ambiente.

Figura S6. Izquierda: extracción de lupanina en varios solventes orgánicos para altramuces en reposo de aguas

residuales y soluciones de lupanina pura (3.2 g / L). Derecha: columnas: contaminación por DQO por solventes

orgánicos y DQO ​presente en la fase orgánica de la lupanina extraída de las habas de lupino que descansan las aguas

residuales; línea - contenido de DQO de lupanina en la muestra total extraída.

S14
5. Tablas

Tabla S1. Caracterización de las membranas de nanofiltración (NF) evaluadas en este estudio: NF90,

NF200 y NF270.

Membrana Material MWCO, rechazos

257-330 Da
Dow FILMTEC
Poliamida > 98% de MgSO 4 4 rechazo 90-96%
NF90 de rechazo de NaCl

~ 200 Da
Dow FILMTEC
Poliamida > 98% de MgSO 4 4 rechazo 50% de
NF200 rechazo de NaCl

Dow FILMTEC
Poliamida> 98% MgSO 4 4 rechazo
NF270 50% de rechazo de NaCl

S15
Tabla S2. Clasificación, grupos funcionales, formas iónicas y matriz polimérica de las resinas comerciales

ensayadas. Se indica la estructura molecular de los grupos funcionales.

Forma
Clasificación Resina Grupo funcional Matriz
iónica

Poliestireno reticulado con 2% de

AG 50W-X2
divinilbenceno

Poliestireno reticulado
AG 50W-X8
con 8% de divinilbenceno
Ácido fuerte
Sulfonato Hidrógeno
intercambiador Amberlyst 36 NF
(-R-SO 3-) (H +)
de cationes

Amberlyst 16 NF

Poliestireno reticulado
Purolite PD206
con divinilbenceno

Amberlite IRA 400 Amonio cuaternario Poliestireno

(NR 4+)
Amberlite IRA 458 Poliacrílico

Bencil dimetil 2-
hidroxietilamonio
Estireno reticulado con
Amberlite IRA 410 divinilbenceno
Base fuerte
Cloruro copolímero
intercambiador
(Cl-)
de aniones

Trimetil bencilo
amonio
Dowex 1X8-50 Poliestireno

Amberlite CG-400 Amonio cuaternario NF

(NR 4+)

Base débil
Amonio terciario Base
intercambiador Amberlite IRA 68 Acrilato reticulado
(NHR 3+) libre
de aniones

Amberlite IRC 86

Ácido débil
Ácido carboxílico Poliacrílico
intercambiador Amberlite IRC 50 H+
(-R-COOH)
de cationes

Dowex MAC-3 *

Intercambiador de Ácido aminodiacético

Sodio (Na
cationes IRC 7481 Poliacrílico
+)
quelantes

Poliaromática
Amberlite XAD-16
hidrofóbica

Adsorbente
Amberlite XAD-7 N/A N/A Éster poliacrílico
polimérico

Amberlite XAD-1 NF

S16
Los grupos funcionales y las formas iónicas no se aplican a las resinas poliméricas, lo que se indica como "NA" - "no aplicable". NA:

no aplicable; NF: no encontrado. * Dowex MAC-3 es la resina alternativa a IRC 50 e IRC 86, ya que estos dos ya no están disponibles

comercialmente.

S17
 rate (L/h)
beans resting wastewater, using N

287.28 ± 11.31 308.15 ± 42.81

31.69 ± 20.75 21.82 ± 12.43
54.24±3.71 85.27 ± 9.25 37.59 ± 9.79 83.93 ± 5.73 42.32 ± 9.67

Flux
(L/m
2
·
h)

11.97 ± 0.47 Permeability

2.18±0.15 3.55 ± 0.3912.84 ± 1.78
1.57 ± 0.41 3.50 ± 0.241.32 ± 0.861.76 ± 0.40 0.91 ± 0.52
(L/m
2
·

h·bar)

32.69 ± 1.28 40.58 ± 0.96 26.66 ± 0.33 25.93 ± 0.65 28.80 ± 2.94
2.88 ± 0.01 3.74 ± 0.01 30.6 ± 1.12
3.30 ± 0.07 3.64 ± 0.08 3.13 ± 0.12 3.36 ± 0.13

Feed
- - -

67.64 ± 5.24
0.96 ± 0.01
66.28 ± 6.10
0.32 ± 0.01 52.27 ± 6.93 55.09 ± 4.20
5.72 ± 0.19 7.93 ± 0.04 55.48 ± 6.37
4.33 ± 0.98
46.72 ± 5.46
5.60 ± 0.27
Retentate

- - -
Lupanine

lupin

0.27 ± 0.13 1.40 ± 0.32 0.01 ± 0.01

3.36 ± 0.60 0.02 ± 0.03
4.15 ± 2.97 0.03 ± 0.03Permeate
7.91 ± 0.82 (g/L) COD (gO
1.4 ± 0.58
2/ L)

- 0 0 - 0 -

Rejection

99.17 96.56 94.75(99.93)

99.7989.04 84.01(99.79)
99.2872.53
(99.77)
99.13
100 100 100
- - -
(100) (100) (100)
(%) (%mass)

S18
Tabla S4. Langmuir y Freundlich vinculan los parámetros físicos de la isoterma para XAD-16 a pH 11

y Dowex MAC-3 a pH 4.

Langmuir Freundlich

Resina q max ( mg / g) K L ( g / l) R2 norte K F ( mg / g) R2

XAD-16 71,43 77 0.9911 2.24 71,64 0.8306

MAC-3 72,99 0,35 0.8185 1.15 18,23 0,9748

Tabla S5. Parámetros cinéticos de pseudo primer y pseudo segundo orden para XAD-16 a pH 11 y

Dowex MAC-3 a pH 4.

Pseudo primer orden Pseudo-segundo orden

k2
Resina k 1 ( h- 1) q e ( mg / g) R2 q e ( mg / g) R2
((g / (mg · h))

XAD-16 0,09 6.58 0.6196 0,12 22,37 0.9987

MAC-3 0,26 3,67 0.5987 0,22 23,36 0.9998

Tabla S6. Parámetros de rendimiento para la columna cromatográfica XAD-16 a pH

11)

Lupanina

Ciclo de unión (%) Recuperación (%)

1 98,10 76,49

2 97,82 79,89

3 91,78 81,90

44 91,89 70,86

55 97,93 75,59

66 91,42 70,91

77 12.09 41,73

S19
Tabla S7. Lista de los solventes orgánicos explorados, con el correspondiente punto de ebullición, polaridad,

solubilidad en agua, solubilidad en agua y log 10 ( K Ay) valores.

Solubilidad en Solubilidad de Iniciar sesión 10

Punto de Entalpía de Polaridad
agua (25 o C; agua en (25 o C; K Ay
Solvente ebullición [46] vaporización (kJ (agua =
w / w) w / w) (w / w)
( o C) / mol) [1] 100) [2]
[2] [2] [2]

DCM 40 28,8 30,9 1.3 0,20 1,25

Tolueno 111 38,0 9,9 0,052 0,033 2,69

1-octanol 195 70,1 54,3 0.6 4.8 -

1-butanol 118 52,5 60,2 7.3 20,4 0,88

EtOAc 77 35,0 23,0 7.7 3,3 0,73

MTBE 55 29,8 14,8 4.3 1.4 0,94

MIBK 117 41,0 27 1.7 1.9 1,31

Et 2 O 35 27,2 11,7 6,9 1.3 0,77

Heptano 98 36,6 1,2 0,0003 0,010 3.50

Hexano 69 31,5 0.9 0.0010 0,011 3.80

S20
 represents the lethal concentration of each solv
of after exposure for 4 hours [3]. Air impact scor
population,

),
(4) not harmful (LC50 > 100 mg.L- 1

).
LC50

S8. List of organic solvents used in th

),
(2)

S21
 Ecotoxicological

- - 4 4 4 4 4 2 3 4 class [3]

DCM
(invertebrates)

Aquatic

3 3 5 9 7 9 9 5 7 8

Impact [4]

POCP
63.3 21.8
42 53 60 55 56 0.9
- -
[2]

[2] (21
pressure
o
C; mmHg) Vapor
128 462 16.5 206 0.14 23.2 37.6
40 78 4.8

Impact [4]

5000 Odor
150 0.5 250
50 40
- 1 8 - threshold [2]
(ppm)

Vapor

0.001 Pressure: Odor

0.27 462 2.06 1.56 0.28 0.58 0.15
- -
Threshold Ratio

(mmHg/ppm)

Air
5 5 3 3 5 5 3 4 2 6

S22
Tabla S9. Incineración, reciclaje, biotratamiento, emisiones de COV, riesgo para la salud y puntajes potenciales

de exposición atribuidos a los solventes orgánicos utilizados en el presente estudio [4].

Emisiones Peligro para Potencial de

Solvente Incineración Reciclaje Biotratamiento
de COV la salud exposición

DCM 2 10 44 1 1 2

Tolueno 10 77 66 77 77 66

1-octanol 9 77 8 10 77 10

1-butanol 66 77 55 8 77 77

EtOAc 55 66 55 44 10 77

MTBE 77 8 44 2 77 44

MIBK 77 8 55 77 77 66

Et 2 O 77 77 3 1 10 44

Heptano 10 44 55 66 10 66

Hexano 10 8 44 3 77 44

S23
Tabla S10. Identificación de las corrientes en las estrategias propuestas para el tratamiento de aguas residuales de altramuces

y el aislamiento de lupanina.

Corriente Descripción

1 Cocinar y desaguar aguas residuales 1 m3

2 Sólidos separados de las aguas residuales de los altramuces 2%

Nanofiltration

3 Corriente acuosa obtenida después de la separación de sólidos. 1 m3

(NF)

44 NF retenido: rico en lupanina y otras especies orgánicas 0.23 m 3

55 NF permeado: aguas residuales tratadas 0,77 m 3

66 NaOH para ajuste de pH de NF retenido 11,5 kilogramos

77 Adsorbente: Amberlite XAD-16 34,5 kilogramos

8 EtOH: para la recuperación de lupanina de XAD-16 0,14 m 3

9 Corriente acuosa para la regeneración del adsorbente. 0,14 m 3

10 Gasto basificado gastado de la adsorción de columna 0,23 m 3

Column Chromatography

11 Adsorbente gastado (XAD-16) 34,5 kilogramos

(CC)

12 Pasó acuoso sm la regeneración adsorbente 0,14 m 3

13 Gasto EtOH de la recuperación de lupanina 0,10 m 3

Fase orgánica concentrada enriquecida en lupanina (EtOH)

14 0,034 m 3

15 EtOH gastado 0,034 m 3

dieciséis Disolvente Orgánico (EtOAc) 0,69 m 3

17 Fase acuosa basificada gastada 0,23 m 3

Extraction
Solvent

(SE1)

18 años Fase orgánica rica en lupanina 0,69 m 3

19 Disolvente orgánico gastado (EtOAc) 0,69 m 3

20 Agua para la disolución del residuo seco del EtOH 0,034 m 3

21 NaOH para ajuste de pH en fase acuosa 0,72 kg

22 Disolvente orgánico: EtOAc 0,10 m 3

Solvent Extraction (SE2)

23 EtOH gastado 0,034 m 3

24 Fase acuosa gastada 0,034 m 3

25 Fase orgánica rica en lupanina (EtOAc) 0,10 m 3

26 Disolvente orgánico gastado (EtOAc) 0,10 m 3

S24
6. Referencias:

1 - JS Chickos, WE Acree, Entalpías de vaporización de compuestos orgánicos y organometálicos, J.

Phys. Chem Árbitro. Datos, 2003, 32, 519–878. 2 - IM Smallwood, Manual de propiedades de

solventes orgánicos, 1996, Elsevier Ltd. Butterworth-Heinemann.

3 - A. Levet, C. Bordes, Y. Clément, P. Mignon, C. Morell, H. Chermette, P. Marote, P. Lantéri,

Toxicidad acuática aguda de solventes orgánicos modelados por QSARs, J. Mol. Modelo., 2016, 22,

288.

4 - CM Alder, JD Hayler, RK Henderson, AM Redman, L. Shukla, LE Shuster, HF Sneddon,

Actualización y expansión de la guía de sostenibilidad solvente de GSK, Green Chem., 2016, 13,

3879–3890.

S25
 1 Un estudio sobre el altramuz procesa las aguas residuales

2 tratamiento de nanofiltración y recuperación de lupanina

44

55 Teresa Esteves una, Ana Teresa Mota una, Catarina Barbeitos una, Késsia Andrade si,

66 Carlos AM Afonso si, Frederico Castelo Ferreira una

77

8
una iBB - Instituto de Bioingeniería y Biociencias, Departamento de
9

10 Bioingeniería, Instituto Superior Técnico, Universidad de Lisboa, Avenida

11 Rovisco Pais, 1049-001 Lisboa, Portugal. [email protected] ;

12 [email protected] ; gato [email protected] ;

13 [email protected].
si Instituto de Investigación de Medicina (iMED, ULisboa); Facultad de Medicina,
14

15 Universidade de Lisboa, Avenida Prof. Gama Pinto, 1649-003 Lisboa, Portugal.

dieciséis [email protected] ; [email protected]

17

18 años

**
19 Autor correspondiente: Frederico Castelo Alves Ferreira; iBB - Instituto para

20 Bioingeniería y Biociencias, Departamento de Bioingeniería, Instituto

21 Superior Técnico, Universidade de Lisboa, Avenida Rovisco Pais, 1049-001

22 Lisboa, Portugal. Tel: +351 218419598; [email protected].

23

24

1
25 Resumen:

26 El estudio actual aborda un problema ambiental de alto impacto para los alimentos.

27 industrias de procesamiento: el uso eficiente del agua contribuye a minimizar

28 ambiental cuestiones relacionadas con la escasez de agua y la mejora industrial

29 proceso de sostenibilidad. Las alubias son semillas altamente nutritivas, con un

30 uso creciente en productos veganos. Su sabor amargo característico es conferido

31 por la presencia de alcaloides tóxicos, a saber, lupanina. A pesar de ser de secano

32 planta con bajos requerimientos de agua, el proceso industrial para hacer estos frijoles

33 comestible, eliminando tales alcaloides, usa altas cantidades de agua dulce.

34 La nanofiltración, una operación escalable fácil, se investiga aquí para la purificación de

35 estas aguas residuales, al tiempo que retienen diferentes especies orgánicas, incluida la lupanina, en

36 El retenido. La membrana seleccionada, NF270, presenta un flujo transmembrana

37 de 33 L · h- 1 ·metro- 2 y rechazos de membrana para lupanina y especies orgánicas totales

38 de 99.5% y 94.1%, respectivamente. Purificación adicional de lupanina por solvente

39 Se investigó la extracción y / o adsorción de resina. Resina Amberlite XAD-16

40 y acetato de etilo se seleccionaron como adsorbentes prometedores y solventes extractantes,

41 respectivamente, para la purificación de lupanina. En general, el proceso sugerido es capaz de

42 Recuperar alrededor del 80% de las aguas residuales como una corriente de agua con una pureza alta

43 suficiente para ser reciclado in situ, mientras que el 95.4% de lupanina con 78% de pureza puede ser

44 aislado correspondiente a alrededor de 9 Kg de producto natural de lupanina por tonelada de producto seco

45 frijoles procesados. Conversión de lupanina a esparteína mediante reducción utilizando

46 NaBH 4 / yo 2 y la posterior destilación a presión reducida permite la

47 aislamiento de esparteína con 60% de rendimiento y> 95% de pureza.

48

49

50 Palabras clave: Frijoles altramuces; Tratamiento de aguas residuales; Lupanina; Nanofiltración;

51 Extraccion solvente; Adsorción de resina.

52

53

54

55

56
2
57 1. Introducción

58 Las alubias son semillas de leguminosas ricas en proteínas, actualmente exploradas en la industria

59 y como parte de las dietas animales y humanas que se utilizan principalmente como merienda en el

60 60 Región mediterránea (Huyghe, 1997; Lucas et al., 2015; Mitchell y

61 Shammet, 2008; Gavrilin et al., 2006; Ruiz-López et al., 2019; Prusinski, 2017).

62 Frijol lupino característico amargor, conferido por la presencia de tóxicos

63 alcaloides, implica que deben ser procesados ​adecuadamente antes de convertirse

64 comestible de forma segura (Ganzera et al., 2010). Aunque es una planta de secano, con baja

sesenta y requerimientos
cinco de agua (Sulas et al., 2016), el proceso de desbarbado del lupino

66 frijoles utiliza grandes volúmenes de agua dulce y consiste brevemente en cuatro pasos: seco

67 hidratación de frijoles, cocción de frijoles hinchados, endulzamiento de frijoles hervidos (es decir, un

68 fase de desbarbado, agregando agua fresca hasta el sabor amargo y el

69 los alcaloides correspondientes se eliminan de los frijoles, Esquema 1) y una salazón

70 Etapa final de conservación (Carmali et al., 2010). Si bien este proceso suele ser

71 realizado en lote, el paso de desbarbado, donde la mayor cantidad de agua de

72 se consume todo el proceso, se puede realizar de forma continua o secuencial

73 pasos de lavado. Aunque, desde el punto de vista de la agricultura, los cultivos de frijoles lupinos

74 no son especies que requieren agua (van de Noort, 2017), como se mencionó, su

75 El procesamiento industrial requiere el uso de grandes volúmenes de agua dulce que resultan

76 en corrientes de residuos contaminados. Escasez de agua causada por la contaminación del agua, por

77 ejemplo, plantea un desafío mundial para la humanidad que lucha por nuevos

78 suministros de agua para poblaciones (Pimentel et al., 2004; Inyinbor et al., 2018).

79 Dado que el procesamiento de alubias es intensivo en agua, reciclar el agua dulce utilizada en

80 Por lo tanto, el paso de debittering es de suma importancia para contribuir con

81 ahorro en este recurso natural limitado y para la sostenibilidad del proceso.

82

3
 83 Esquema 1. Representación general del procesamiento industrial de alubias.

84

85 Las aguas residuales del proceso industrial de alubias contienen oligosacáridos,

86 aminoácidos, lípidos, proteínas y alcaloides que se extraen de los frijoles

87 (Santana et al., 2002). La principal especie alcaloide presente es la lupanina (Figura 1)

88 (Wink, 1982, 1987; Hamed y Ayoub, 2015). Este compuesto ha sido

89 evaluado en ratas para el tratamiento de la diabetes tipo 2 (Zambrana et al., 2018;

90 Lopez et al., 2004; Bobkiewicz-Koslowska, 2007), por sus efectos en el centro

91 91 sistema nervioso (Pothier et al., 1998), y es el material de partida para el

92 síntesis de otros alcaloides (Wlodarczak et al., 2010; Maulide et al., 2014),

93 a saber, la esparteína (Figura 1), que es un bloque de construcción conocido para el

94 industria farmacéutica utilizada como selector quiral en procedimientos sintéticos

95 (Jasiewicz et al., 2011; Chuzel y Riant, 2005).

96

97

98 Figura 1. Estructuras de alcaloides de lupanina y esparteína.

99

100 La lupanina y la esparteína tienen una estructura química muy compleja, lo que hace que su

101 síntesis o modificación química bastante desafiante. Por lo tanto, aislando

102 lupanina de un desecho industrial, donde está fácilmente disponible en cantidades significativas

103 cantidades, es una oportunidad que vale la pena investigar. El tratamiento eficiente de

104 aguas residuales, para su posterior reutilización en el paso de desbarbado y aislamiento de lupanina

105 de otras especies presentes en el flujo de residuos orgánicos ricos, es un desafío.

106 Varios Se han investigado los procesos de desbarbado de habas de altramuz y

107 Intento a escala de banco utilizando microorganismos o extracción con orgánicos

108 disolventes (p. ej., hexano, etanol, diclorometano) o compuestos alcalinos (p. ej.

109 NaHCO 3) a diferentes temperaturas y tiempos de remojo (Carvajal-Larenas et al.,

110 2013, 2016; Erbas, 2010; Ertas y Bilgiçli, 2014; Hamed y Ayoub, 2015).

44
111 Sin embargo, actualmente, el único método industrial de grado alimenticio para alubias

112 la depuración depende del uso de grandes cantidades de agua que generan alrededor de 10 a

113 20 L de aguas residuales ricas en lupanina por Kg de alubias secas. Sin embargo,

114 Los estudios que se ocupan de las aguas residuales industriales de los altramuces son escasos en el

115 literatura. Como ejemplo, Carmali et al. describir una posible estrategia para

116 recuperación de lupanina de industrial aguas residuales de frijoles lupinos usando osmótica

117 evaporación seguida de extracción con disolvente con éter etílico a partir de un sólido básico

118 medio, con solo 18.5% de rendimiento (Carmali et al., 2010).

119

120 El trabajo actual apunta a definir cuáles son las operaciones unitarias más adecuadas para

121 ser utilizado en un proceso capaz de: i) tratar las aguas residuales industriales simultáneamente

122 y minimizar el consumo de agua dulce, y ii) obtener un crudo rico en lupanina para

123 mayor valorización por derivatización química, por ejemplo. Para lograr esto, el

124 El uso de nanofiltración (NF), extracción con solvente y adsorción de resina fueron

125 evaluado experimentalmente a escala de banco utilizando aguas residuales industriales de lupino

126 procesamiento de frijoles. En experimentos de NF, se evaluaron varias membranas en

127 para obtener agua limpia como permeado y un retenido rico en lupanina. Varios

128 Se evaluaron solventes orgánicos y resinas disponibles comercialmente para

129 129 recupere y aísle la lupanina de la fracción rica en lupanina retenida NF,

130 considerando una contaminación mínima con otras especies orgánicas presentes en el

131 aguas residuales. Para minimizar el potencial ambiental impacto, además de

132 eficiencia de separación, las toxicidades de los solventes orgánicos y de los

133 Los desechos adicionales generados se tuvieron en cuenta en las decisiones relativas a

134 selección de solventes (Alder et al., 2016).

135

136 2. Materiales y métodos

137 2.1. Materiales

138 Heptano, hexano, tolueno, éter dietílico (Et 2 O), etanol absoluto (EtOH),

139 tetrahidrofurano (THF), ácido clorhídrico (HCl), solución acuosa al 37%, etilo

140 acetato (EtOAc) y diclorometano (DCM), metanol (MeOH) y

141 El grado de HPLC de acetonitrilo (MeCN) se adquirió de Fisher Scientific. Metilo

142 el éter terc-butílico (MTBE) se adquirió de Lab-Scan. Metil isobutil cetona

55
143 (MIBK) fue comprado de Acros Organics. 1-octanol, hidróxido de sodio

144 (NaOH) gránulos, sulfato de sodio (Na 2 ENTONCES 4) y cloruro de potasio (KCl) fueron

145 comprado de Merck. Gránulos de hidróxido de potasio (KOH) y sodio

146 fosfato dibásico (Na 2 HPO 4) fueron comprados de Panreac. Resinas de ámbar

147 (IRC 50, IRC 7481, IRA 68 e IRA 458-Cl) se compraron de Rohm y

148 Haas 1-Butanol, resinas Amberlite (IRC 86, IRA 400-Cl, IRA 410, XAD-1, XAD-7

149 y XAD-16), resinas Amberlyst (16 y 36), resina Dowex MAC-3 y CDCl 3

150 (99.8%) usado para grabar 1 H y 13 Los espectros de RMN C se compraron de Sigma-

151 Aldrich Las resinas AG-50W-X2 y AG-50W-X8 se compraron de Bio-Rad.

152 La resina Amberlite CG-400 se adquirió de BDH Chemicals. La resina

153 Dowex 1X8-50 fue comprado de Alfa Aesar. La resina Purolite PD206 de

154 Purolite fue amablemente proporcionado por Neoquímica SA, Portugal.

155

156 2.2. métodos analíticos

157 La demanda química de oxígeno (DQO) se midió como se describe en otra parte

158 (Himebaugh y Smith, 1979). La conductividad y el pH se midieron con un

159 medidor de conductividad portátil WD-35607-20 (Oakton, EE. UU.) y un medidor de pH 69

160 (Metrohm), respectivamente. 1 H y 13 Los espectros de RMN C se obtuvieron en un Bruker

161 espectrómetro MX300 que funciona a 300 MHz.

162

163 La lupanina se cuantificó usando un sistema de HPLC Hitachi LaChrom en la habitación

164 temperatura con detección UV a 220 nm y un Kinetex EVO de fase inversa

165 Columna C18 de 100 Å (5 µm, 250 mm x 4,6 mm, Phenomenex). muestras de lupanina

166 se basificaron con KOH (pH 13-13.5), se centrifugaron usando una microcentrífuga 1-15P

167 (Sigma) a 6,000 rpm durante 4 min y se filtra con filtros de jeringa de nylon (13 mm

168 diámetro y 0.22 μ m tamaño de poro, Tecnocroma). El método fue isocrático durante 25

169 min, a 1 ml / min con la fase móvil como 15% de MeCN y 85% de Na 2 HPO 4 ( 1,8

170 g / L) tampón ajustado con NaOH a pH 10.5, con 20 μ L volumen de inyección.

171

172 2.3. Aguas residuales

66
173 Industrial Tremoceira M. proporcionó amablemente las aguas residuales de los frijoles lupinos.

174 Ferreira Bastos Lda. (TMFB), Portugal. Dos tipos de muestras de efluentes fueron

175 considerado en este estudio:

176 i) una etapa de cocción, correspondiente a las aguas residuales obtenidas después de la hidratación,

177 etapas de cocción y enfriamiento de los frijoles. Se obtiene esta fracción de aguas residuales.

178 después de cocinar los frijoles, y se los llamará cocción de frijoles lupinos

179 fase de aguas residuales;

180 ii) y un paso de depuración de aguas residuales, correspondiente a una corriente industrial

181 obtenido de la elución de lupanina de los frijoles, con adición de fresco

182 agua. Es importante mencionar que, la lupanina y el contenido de materia orgánica

183 disminuir a lo largo de esta operación. Por lo tanto, en el estudio actual utilizamos un

184 solución compuesta representativa de todo el paso de debittering.

185

186 La caracterización de ambas muestras de efluentes se puede encontrar en la Tabla 1. Se usa DQO

187 en este estudio como medida para evaluar la cantidad de materia orgánica en el

188 aguas residuales, que incluyen la propia lupanina.

189

190 Tabla 1. Muestras de aguas residuales de procesamiento industrial de altramuz.

Lupanina (g / L) DQO (gO 2 / L)

Etapa de cocina 3.26 ± 0.07 27,85 ± 0,90

Muestra compuesta 0.40 ± 0.02 5.31 ± 0.55

191

192 2.4. Experimentos de nanofiltración

193 Las siguientes membranas NF de Dow Filmtec, compradas a Lenntech,

194 fueron probados: NF270, NF200 y NF90. Características de la membrana se pueden encontrar

195 en la Tabla 2 (Tabla S1). Los experimentos se realizaron en concentración o

196 modo de recirculación total (para más detalles sobre los modos de operación, ver Soporte

197 Información, Esquema S1).

198

77
199 Tabla 2. Caracterización de las membranas de nanofiltración (NF) evaluadas en este

200 estudio: NF90, NF200 y NF270.

201

202

203

Membrana MWCO Rechazo de sal

NF90 257-330 Da> 98% MgSO 4 4

90-96% de NaCl

> 98% de MgSO 4 4

NF200 ~ 200 Da
50% de NaCl

NF270 200-400 Da> 98% MgSO 4 4

50% de NaCl

204 204

205 El flujo (J) y la permeabilidad (Lp) se calcularon de acuerdo con las ecuaciones 1 y 2,

206 considerando un área total de membrana de 0.0026 m 2)

207

208 J (L / h 1 ·metro 2) = Velocidad de flujo (L / h 1) / Área de membrana (m 2) (Ecuación 1)

209 Lp (L / h 1 ·metro 2 ·bar 1) = J (L / h 1 ·metro 2) / P (barra) (Ec. 2)

210

211 Los rechazos de DQO y lupanina se calcularon usando las ecuaciones 3 y 4,

212

213 Rechazo DQO (%) = ( BACALAO alimentar - COD permeado) / BACALAO alimentar x 100 (Ecuación 3)

214 Rechazo lupanina (%) = ( lupanina alimentar - lupanina impregnar)/ lupanina alimentar x 100 (ecuación 4)

215

216 donde COD alimentar es el valor de DQO en la muestra compuesta de aguas residuales y

217 BACALAO impregnar es el valor de DQO determinado para el permeado recuperado al final

218 del experimento NF. Lupanina alimentar es la concentración de lupanina en el

219 tanque de reserva y lupanina impregnar es la concentración de lupanina en el

220 impregnar.

221

222 2.5. Adsorción de resina

8
223 2.5.1. Experimentos por lotes: Dieciocho resinas diferentes fueron evaluadas con

224 muestras de lupanina pura en agua, y con la muestra de aguas residuales de cocción como

225 recibido (a pH 4) o después de ajustar el pH con gránulos de NaOH a pH 11 y

226 centrifugación (5 min a 6,000 rpm). Las características de los adsorbentes pueden ser

227 encontrado en la Tabla S2. El porcentaje de unión a lupanina (%) y la adsorción

228 La capacidad (Q) para cada resina se calculó a partir de las ecuaciones 5 y 6, respectivamente:

229

230 Unión a lupanina (%) = (C Yo - C L, f) / C Yo x 100 (Ecuación 5)

231 Q (mg / g) = (C Yo - C L, f) / M x V (Ecuación 6)

232

233 donde C Yo corresponde a la concentración de lupanina en la muestra, C L, f es

234 la concentración final de lupanina, V es el volumen de muestra utilizada (1,5 ml) y M

235 es la masa de resina utilizada (150 mg).

236

237 2.5.2. Experimentos de recuperación de lupanina: Para resina XAD-16, 900 µL de absoluto

238 Se añadieron etanol a los tubos Eppendorf que contenían las resinas después de

239 adsorción. Las mezclas se dejaron a 200 rpm a temperatura ambiente durante 15 h.

240 Después de este tiempo, las mezclas se centrifugaron a 6,000 rpm durante 4 minutos para obtener resina.

241 separación. El disolvente se evaporó a temperatura ambiente y el volumen

242 rellenado con agua antes del protocolo de análisis de HPLC de lupanina. Para la resina MAC 3,

243 Se agregaron 750 µL de una solución de NaOH al 10% (p / p) a los tubos Eppendorf

244 que contiene las resinas después de la adsorción. Las mezclas se dejaron a 200 rpm a

245 temperatura ambiente durante 15 h. Después de este tiempo, las mezclas se centrifugaron a

246 6000 rpm durante 4 minutos para la separación de resina y se analizó el sobrenadante para

247 contenido de lupanina como se describe anteriormente.

248

249 2.5.3. Experimentos de regeneración de resina: Para XAD-16 y MAC-3, después

250 ensayos de recuperación de lupanina, 1 ml de agua destilada y 750 µL de HCl al 10% (p / p)

251 se añadieron, respectivamente, a las resinas (150 mg) y se dejaron agitando a 200 rpm a

252 temperatura ambiente durante 15 h. Después de este tiempo, las mezclas se centrifugaron a

253 6,000 rpm durante 4 min, se eliminaron las resinas y se recogió el sobrenadante y

254 sometido al protocolo de análisis de lupanina (no se detectó lupanina). Las resinas
9
255 luego se usaron en varios ciclos, cada uno de los cuales incluía lo descrito anteriormente, un paso

256 de adsorción, un paso de recuperación de lupanina y un paso de regeneración para

257 evaluar la posible reutilización de resinas.

258

259 2.5.4. Cromatografía de columna: Una cromatografía en columna de vidrio, con un

260 diámetro de alrededor de 1 cm tapado con algodón, fue embalado con 15 g de

261 Resina Amberlite XAD-16 y preacondicionada con agua destilada, para dar una altura

262 de ca 9 cm. Se centrifugaron 100 ml de muestra de aguas residuales de cocción durante 30 minutos

263 a 6,000 rpm y pasó a través de la columna para la adsorción de lupanina con un

264 flujo constante alrededor de 2 ml / min, seguido de 60 ml de EtOH para lupanina

265 recuperación y 100 ml de agua destilada para la regeneración de resina a un flujo alrededor de 1

266 mL / min. Se recogieron partes alícuotas de 2 ml para la medición de lupanina y DQO. UNA

267 Se realizó un nuevo ciclo de unión / recuperación / regeneración pasando el mismo

268 volúmenes de aguas residuales, EtOH y agua destilada a través de la columna,

269 respectivamente. Las fracciones de EtOH (15 ml) con alto contenido de lupanina fueron

270 procesado como se describe en la sección 2.5.2. para lupanina purificación adicional por

271 extracción con solvente y para lupanina y mediciones de DQO.

272

273 2.6. Experimentos de extracción líquido-líquido.

274 Se evaluaron diez solventes orgánicos de diferentes clases químicas: DCM,

275 MTBE, MIBK, heptano, hexano, tolueno, Et 2 O, 1-octanol, 1-butanol y EtOAc.

276 4 ml de agua residual de la etapa de cocción (previamente basificada a pH 12-13 con NaOH)

277 y de soluciones acuosas de lupanina pura (ca 3.26 g / L) se extrajeron con

278 dos extracciones sucesivas, usando 2 ml de cada solvente. En cada extracción, un

279 Se usó vórtice vertical (IKA) durante 2-3 minutos con tiempos de sedimentación de 8-10 minutos.

280 La eficiencia de extracción de lupanina se calculó mediante la ecuación 7:

281

282 Eficiencia de extracción (%) = [(C L, aq0 x V aq0) - (C L, aq x V aq)] / ( V aq0 x C L, aq0) x 100

283 (Ecuación 7)

284

285 donde C L, aq0 y V aq0 son la concentración inicial de lupanina en frijoles lupinos

286 aguas residuales de cocción y el volumen inicial de la fase acuosa y C L, aq y

10
287 V aq son la concentración de lupanina y el volumen de la fase acuosa

288 después de las dos extracciones, respectivamente. Para detalles sobre experimentos en blanco

289 para extracción con solvente, consulte el archivo de información de soporte.

290

291 La pureza de la lupanina para los experimentos de extracción con solventes se determinó mediante

292 ecuación 8:

293

294 Pureza (%) = DQO lupanina / BACALAO org.phase x 100 (Ec. 8)

295

296 donde COD lupanina se calcula como 2.33 x V aq0 x (C L, aq0 - C L, aq) y COD org.phase es

297 calculado como V aq0 x [COD aq0 - (COD aq - BACALAO aq0)] donde COD aq0 es el COD de

298 la muestra de aguas residuales y DQO aq es la DQO de la fase acuosa de la

299 extracción. La DQO de una muestra acuosa de lupanina pura (a 1 g / L) fue

300 cuantificado resultando en un valor de 2.33 ± 0.27 gO 2 / L.

301

302 Las extracciones de Liqui-Liquid para MTBE y EtOAc también se realizaron a una mayor

303 escalar con 150 ml de muestra de aguas residuales de cocción en dos extracciones sucesivas

304 con 75 ml de solvente orgánico.

305

306 La extracción de lupanina con MTBE y EtOAc se optimizó utilizando 4 ml de

307 aguas residuales de cocción, basificadas a pH 12-13 con NaOH, extraídas 4 veces con 4

308 ml de MTBE o 3 veces con 4 ml de EtOAc, como se describe en la sección 2.6. los

309 Se usaron fases acuosas para la cuantificación de DQO y lupanina como se describe en

310 sección 2.2.

311

312 2.7. Extracción de lupanina de fracciones de cromatografía en columna: los

313 las fracciones de columna, obtenidas en EtOH (ver sección 2.5.4), en un total de 15 ml, fueron

314 recogido y evaporado a sequedad a temperatura ambiente. El residuo fue

315 disuelto en 15 ml de agua destilada, el pH se ajustó a 12-13 con NaOH

316 Los gránulos y la solución resultante se extrajeron sucesivamente dos veces con 7,5 ml.

317 de MTBE o EtOAc. Las fases acuosas se procesaron como se describe en

318 sección 2.2. para cuantificación de lupanina y mediciones de DQO.

11
319

320 2.8. Conversión de lupanina en esparteína

321 A una solución agitada de lupanina (5.0 g, 20 mmol) en THF (200 mL) se le añadió

322 NaBH 4 ( 0,76 g, 1,0 eq) y yo 2 ( 2,55 g, 0,5 eq). La mezcla se agitó bajo

323 reflujo durante 16 hy luego se enfrió a temperatura ambiente. Se añadió MeOH (25 ml)

324 y la mezcla se vertió posteriormente en 50 ml de NaOH acuoso (1 M).

325 La solución resultante se extrajo con Et 2 O (3 x 200 ml), el orgánico

326 los extractos se secaron sobre Na 2 ENTONCES 4, concentrado al vacío y luego destilado

327 en un Kugelrohr (190-220ºC / 0.7-1 mbar) de Buchi para obtener esparteína (2.8 g,

328 con 60% de rendimiento de reacción) como un líquido ligeramente amarillo, puro por 1 H y 13 RMN C

329 análisis.

330

331 3. Resultados y discusión

332

333 3.1. Experimentos de nanofiltración

334 El problema a resolver con NF es obtener agua limpia en el permeado y

335 un retenido rico en lupanina. La nanofiltración también funciona como una operación para

336 concentre la lupanina en un volumen reducido de aguas residuales, lo que permite más pequeñas

337 operaciones de unidades de procesamiento, tales como extracción con solvente o adsorción de resina, para

338 aislamiento de lupanina.

339

340 Previamente a los experimentos de NF, se realizó una centrifugación, sin

341 influencia en el contenido de DQO de las aguas residuales, para eliminar partículas suspendidas,

342 que en la implementación del proceso puede ser reemplazado por una prefiltración en línea.

343

344 Las membranas estudiadas en este trabajo, NF90, NF200 y NF270 (Tabla 2), fueron

345 evaluados en su flujo, flujo, permeabilidad y rechazos de DQO y lupanina.

346 Los datos experimentales detallados obtenidos se pueden encontrar en la Tabla S3. Inicial

347 Se realizaron experimentos utilizando alrededor de 400 ml de aguas residuales de cocción,

348 concentrado hasta 50-60% del volumen inicial a dos valores de pH diferentes, 4 y

349 11. El pH característico de las aguas residuales es 4, sin embargo, la lupanina tiene un pKa

350 de 9.1 (Figura 2) (Mende y Wink, 1987). Por lo tanto, se decidió evaluar
12
351 si el rechazo de lupanina dependía de su estado de protonación. pH y conductividad

352 también se determinaron para el permeado y el retenido obtenido al final de la

353 experimentos

354

H
H H+ norte
N pKa = 9.1

norte
norte H
H
O
355 O

356 Figura 2. pKa y estados de protonación de lupanina.

357

358 De la Figura 3 es posible observar que, de las membranas estudiadas,

359 NF270 mostró el mayor rechazo de lupanina y materia orgánica (DQO) con

360 valores superiores al 95% junto con la permeabilidad más alta alrededor de 3.5

361 L / m 2 · H · bar a pH 4, lo que la convierte en la membrana seleccionada para la cocción de alubias

362 procesos de aguas residuales NF. Sin embargo, con respecto a la conductividad, esta membrana

363 presentó un rechazo del 52% (Figura S1) a pH 4, mientras que la membrana NF90

364 presentó un rechazo del 92% al mismo pH. En este caso, el agua obtenida en

365 el permeado con la membrana NF270 puede necesitar más pulido para reducir

366 contenido de iones antes de ser reutilizado, por ejemplo, in situ para la reducción de agua dulce

367 demanda en la etapa de debittering.

368

13
369 Figura 3. Rechazos de lupanina y DQO ​en el eje primario; permeabilidad en el

370 eje secundario para membranas de nanofiltración. Rechazos medidos para un

371 factor de concentración del 66% a una presión de 24 bar.

372

373 La membrana NF270 se evaluó primero en modo de concentración utilizando el

374 muestra compuesta de aguas residuales para la estimación del flujo a lo largo del tiempo hasta un

375 porcentaje de concentración (aquí definido como relación permeado / alimentación). Esta muestra es

376 representativo del paso de depuración donde el mayor volumen de aguas residuales es

377 generado. El flujo a través de la membrana representado en la Figura 4 (arriba a la izquierda

378 panel) es ilustrativo de varios ensayos realizados y muestra que a pesar del flujo

379 disminución observada, probablemente debido a un aumento de la presión osmótica y

380 viscosidad, los valores observados se mantienen por encima de aproximadamente 30 Lh- 1) metro- 2 hasta

381 porcentajes de concentración tan altos como 80%. En estos ensayos, utilizando el

382 muestra de aguas residuales compuestas de desecación, una concentración de lupanina y una DQO

383 de aproximadamente 2 g / L y 27 gO 2 / L respectivamente, se lograron, que están en el mismo

384 rango de concentración de la muestra de aguas residuales de cocción con valores de 3,26 g / L

385 y 27.85 gO 2 / L para lupanina y DQO, respectivamente (Tabla 1 y Figura 4, arriba

386 Derecha).

387

14
388

389 Figura 4. Experimentos de nanofiltración con membrana NF270 a 20 bar: Arriba -

390 experimento de concentración con la muestra compuesta; Abajo - recirculación

391 Experimente con la fase de cocción. Derecha: contenido de lupanina y DQO ​de inicial

392 muestras, retenido y permeado de experimentos de NF para muestra compuesta (arriba)

393 y fase de cocción (abajo).

394

395 Se realizó un experimento de recirculación completa para una mayor investigación del

396 robustez de esta operación y como evaluación preliminar de flujo adicional

397 disminución debido a posibles eventos de adsorción como la formación de incrustaciones. El lleno

398 Se realizaron experimentos de recirculación utilizando la muestra más concentrada

399 del paso de cocción durante 16 horas (después de un porcentaje de concentración inicial de

400 25%).

401

402 De los resultados del experimento del modo de recirculación completa (Figura 4, abajo) es

403 posible observar que, incluso en condiciones más estrictas, el flujo de membrana

404 la disminución con el tiempo no fue significativa, permaneciendo por encima de 25 Lh- 1) metro- 2) Este resultado

405 es una indicación preliminar de la robustez de la nanofiltración de membrana

15
406 operación, con las especies presentes no planteando problemas de incrustación con el tiempo. Nota

407 que las características de las soluciones iniciales y retenidas sobre los ensayos de

408 La recirculación completa del agua de cocción es similar a la del agua final.

409 soluciones retenidas obtenidas en el modo de concentración del material compuesto

410 muestra. Siguiendo los mismos motivos racionales y prácticos, las alubias

411 las aguas residuales de cocción se usaron directamente en experimentos de detección de solventes

412 pasos de extracción y adsorción de resina en los que el retenido de la nanofiltración

413 del total de las aguas residuales, obtenidas de la etapa de depuración, se utilizarían.

414

415 Las operaciones de seguimiento (adsorción de resina y solvente líquido-líquido

416 extracción) podría beneficiarse de una mayor reducción de volumen y concentración en

417 lupanina más allá del rango de 2 a 5 g / L. Para evaluar dicha opción, una muestra de

418 la fase de cocción también se sometió a un ensayo en el modo de concentración.

419 Sin embargo, dicha opción plantea un caso más desafiante con una fuerte disminución del flujo

420 (Figura S2), probablemente debido al alto contenido en materia orgánica, aumente en

421 presión osmótica y viscosidad, así como posibles agentes contaminantes. Aún así, el

422 la membrana mantuvo una alta selectividad, reteniendo efectivamente la lupanina

423 concentraciones tan altas como 9.5 g / L, prácticamente sin lupanina encontrada en el

424 permeado (Figura S2). Nuevamente, la membrana NF270 también mostró un buen

425 desempeño en la retención de materia orgánica que alcanza altos niveles de DQO en el

426 retenido comparado con la alimentación (Figura S2).

427

428 Es importante destacar que la lupanina en el permeado fue prácticamente cero en los ensayos en

429 el modo de recirculación con agua de cocción y 1.6 y 6.2 mg / L en los ensayos

430 en modo de concentración utilizando agua de cocción y muestra compuesta de

431 depuración de aguas residuales. Como se mencionó, la concentración de lupanina disminuye durante

432 el paso de desbarbado de valores altos a residuales, donde los frijoles lupinos son casi

433 Listo para el consumo. Concentraciones de lupanina obtenidas en el permeado, de

434 Las diversas nanofiltraciones realizadas son inferiores al valor de lupanina EC50 y

435 menor que el contenido residual de lupanina obtenido al final de las alubias

436 Paso de desbarbado. Por lo tanto, desde una lógica de reutilización del agua dentro de la misma

437 proceso, el agua purificada en la fracción de permeado puede ser potencialmente reciclada
dieciséis
438 para desbarbar habas de altramuz. La DQO medida en el permeado fue mayor

439 que el valor de referencia legislado de 5 mgO 2 / L para la calidad del agua para humanos

440 consumo para ser utilizado en una empresa del sector alimentario (Directiva del Consejo,

441 1998; Decreto-ley, 2007). Esto significa que eventualmente el pulido adicional de la

442 El permeado puede necesitar realizarse antes de su uso in situ para el reciclaje del agua.

443 Sin embargo, dado que las especies orgánicas presentes en las aguas residuales son inherentes a

444 El proceso, a partir del cual se origina, tras la adecuada calificación de la comestibilidad de

445 Los altramuces generados, estos niveles de DQO son lo suficientemente bajos como para no perjudicar

446 La reutilización de esta agua tratada dentro del mismo proceso industrial. En esto

447 caso, la recuperación de agua sería una medida de ahorro de agua y al mismo tiempo

448 tiempo contribuiría a reducir la carga contaminante enviada al municipio

449 planta de tratamiento de aguas residuales.

450

451 3.2. Experimentos de adsorción de resina

452 El problema técnico abordado en esta sección es el aislamiento de lupanina de

453 el retenido de NF usando resinas disponibles comercialmente en una etapa de adsorción. A

454 Al mismo tiempo, se espera la recuperación de lupanina con un mínimo orgánico

455 contaminación de la materia Unión y recuperación de lupanina para diferentes adsorbentes,

456 Se evaluaron la eliminación de DQO y la regeneración y reciclabilidad de la resina.

457 Se realizaron ensayos de unión para 18 resinas disponibles comercialmente con

458 diferentes funcionalidades químicas utilizando altramuces para cocinar aguas residuales, sin

459 cualquier pretratamiento, y los resultados se compararon con muestras de lupanina pura

460 preparado en agua, en el mismo rango de concentración. De la Figura 5 (arriba) es

461 posible observar que las resinas con mayor adsorción de lupanina

462 correspondió a intercambiadores de cationes ácidos fuertes y débiles (AG 50W-X2, AG

463 50W-X8, Amberlyst 36, Amberlyst 16, Purolite PD206, Amberlite IRC 50,

464 Amberlite IRC 86 y Dowex MAC-3) y también a la resina polimérica Amberlite

465 XAD-16.

466

467 La lupanina tiene un valor de pKa de alrededor de 9.1 (Mende y Wink, 1987), y el

468 el pH de las aguas residuales es de alrededor de 4, lo que significa que la lupanina está presente como lupaninio

469 ion en esas soluciones (Figura 2). Por lo tanto, la lupanina tendrá una carga positiva que
17
470 intercambiará con los protones de los grupos ácido sulfónico o carboxílico de estos

471 intercambiador catiónico de resinas. Para probar el rendimiento de los adsorbentes hacia

472 lupanina en su forma neutra, también se realizaron los mismos ensayos de adsorción

473 con el pH de las aguas residuales ajustado a 11 (Figura 5).

474

475 Como se esperaba, las resinas de intercambio aniónico no eran eficientes para la lupanina

476 vinculante, porque los grupos funcionales de resina están cargados positivamente (Tabla S2)

477 y hay una repulsión entre estos grupos y los cargados positivamente

478 Moléculas de lupaninio. Además, no hay interacción con moléculas de lupanina neutras

479 a pH más alto se esperaba con los grupos funcionales de tales resinas. Sin embargo,

480 En algunos casos, podría obtenerse una unión baja, que puede ser el resultado de

481 interacciones no iónicas entre lupanina y la matriz polimérica de las resinas.

482

483 Los polímeros acrílicos pueden formar enlaces de hidrógeno y estireno reticulados con

484 Los copolímeros de divinilbenceno pueden interactuar a través de efectos hidrófobos. los

485 la resina polimérica que promovió una mayor adsorción de lupanina fue Amberlite

486 XAD-16 con una cadena polimérica hidrófoba. Eso interactúa con orgánico

487 compuestos (como la lupanina) a través de efectos hidrofóbicos y polares, debido a la

488 presencia de pi-pi, a saber, enlaces aromáticos. Amberlite XAD-7 se compone de un

489 polímero acrílico, lo que significa que existe la posibilidad de enlaces de hidrógeno

490 entre lupanina y la resina. Como los enlaces de hidrógeno son más fuertes

491 interacciones que las interacciones hidrofóbicas o polares, una mayor unión sería

492 esperado para XAD-7. Sin embargo, mientras que el diámetro de poro es similar para ambas resinas

493 (90 Å para XAD-7 y 100 Å para XAD-16), el área de superficie de XAD-16 (900 m 2 / gramo)

494 es aproximadamente el doble del de XAD-7 (450 m 2 / g) (Sigma, 2019) que puede

495 dar como resultado una mayor capacidad de unión y explicar el mayor rendimiento de XAD-16

496 en comparación con XAD-7.

18 años
497

498

499 Figura 5. Arriba: unión de lupanina para varias resinas disponibles comercialmente para

500 Muestras puras en agua y frijoles lupinos que cocinan aguas residuales a pH 4 y pH 11.
19
501 Midle: recuperación de lupanina de resinas ácidas y la resina polimérica Amberlite

502 XAD-16 después de la elución a pH 4. Parte inferior: recuperación de lupanina de resinas ácidas y

503 la resina polimérica Amberlite XAD-16 después de la elución a pH 11. Amb. = Amberlita.

504

505 3.2.1. Recuperación de lupanina de resinas

506 La recuperación de lupanina de los adsorbentes se evaluó preliminarmente para

507 resinas que presentan una mayor unión a la lupanina, a saber, catión ácido fuerte y débil

508 intercambiadores y el adsorbedor polimérico Amberlite XAD-16. Cinco diferentes

509 Las soluciones de lavado se probaron: HCl al 10% (p / p) en agua, NaOH al 10% (p / p) en

510 agua, HCl 10% (p / p) en EtOH / agua (70:30 v / v), NaOH 10% (p / p) en

511 EtOH / agua (70:30 v / v) y EtOH absoluto. Mientras que el uso de resinas representa

512 un intento de desarrollar un proceso libre de solventes para el aislamiento de lupanina, el específico

513 El uso de EtOH es interesante desde la perspectiva de la intensidad del proceso, ya que es uno de los

514 disolventes que pueden usarse para una mayor resolución de la lupanina por diastereómeros

515 recristalización (Maulide et al., 2014). El uso de soluciones de NaOH y HCl tiene como objetivo

516 para explorar interacciones iónicas, mientras que el uso de EtOH tiene como objetivo explorar el uso de

517 interacciones más débiles (hidrofóbicas o dipolo-dipolo). Mientras que el uso de EtOH para

518 La recuperación de lupanina de las resinas de intercambio iónico demostró no ser eficiente

519 (Figura 5), ​el uso de este disolvente fue muy útil para recuperar la lupanina adsorbida

520 en resina XAD-16. En general, el tratamiento de las resinas ácidas con NaOH en agua.

521 Parecía ser más eficiente que con HCl. Los iones de sodio (Na +) compiten con

522 lupanina protonada para unir la resina, la lupanina (en forma neutra) se disocia de

523 la resina y se mueve a la solución. En el caso del HCl, se disocia en agua y

524 los protones (H +) protonarán los grupos sulfónicos o carboxílicos de las resinas,

525 permitiendo que se recupere la lupanina protonada. Soluciones acuosas de HCl y

526 NaOH con EtOH no tuvieron éxito al promover aumentos significativos en

527 recuperación de lupanina de esas resinas.

528

529 Teniendo en cuenta los resultados de la unión y recuperación de lupanina, los resultados señalan

530 para una estrategia que emplee como adsorbente las resinas de intercambiador catiónico de ácido débil

531 Amberlite IRC50, Amberlite IRC86 y Dowex MAC-3, o el polímero

532 resina adsorbente Amberlite XAD-16. Aunque el fuerte intercambiador de cationes ácidos
20
533 las resinas presentaron una unión de lupanina más cercana al 100%, su recuperación fue mayor

534 eficiente para las débiles resinas de intercambio catiónico ácido (alrededor del 80% de lupanina

535 recuperado para el 70% de la unión). Aún así, debe tenerse en cuenta que la basificación de

536 las aguas residuales aportan mejoras significativas para la unión de lupanina en su

537 forma neutra a Amberlite XAD-16 hasta valores del 96% (recuperación del 89,5%).

538 Además, las resinas Amberlite IRC50 e IRC86 fueron descontinuadas, siendo

539 sustituido por la resina Dowex MAC-3, que presenta un rendimiento similar.

540 Por lo tanto, los siguientes resultados se referirán solo a las resinas MAC-3 y XAD-16.

541

542 La capacidad de las resinas para separar la lupanina de la materia orgánica total fue

543 También evaluado. Idealmente, durante los ensayos de adsorción por lotes de resina, mientras que la lupanina

544 será retenido en la resina, la otra materia orgánica permanecerá disuelta en

545 solución. La DQO restante en solución después de los ensayos de adsorción usando MAC-3

546 y se midieron las resinas XAD 16 y se adsorbieron los resultados para el total estimado

547 las especies orgánicas (expresadas como DQO) se resumen en la Tabla 3. Fue

548 observó que alrededor del (19-32)% de DQO permaneció adsorbido a la resina de

549 que alguna contribución se debe a la lupanina misma. La pureza de lo combinado.

550 los pasos de adsorción y recuperación de lupanina se estimaron como la proporción de DQO

551 en la solución de recuperación debido a la lupanina por la DQO total medida para ese

552 solución (después de la evaporación completa de EtOH utilizada como disolvente de recuperación). Después de la

553 paso de recuperación, aunque la pureza de la lupanina es similar para ambos adsorbentes en

554 ambos valores de pH, (52-65)%, derivados de la mayor unión de lupanina en su

555 forma neutral a la resina XAD-16 a pH 11, este adsorbente presenta una mayor

556 rendimiento con un rendimiento general de alrededor del 86% en comparación con solo alrededor del 57%

557 para la resina MAC-3 a pH 4, para la recuperación de lupanina del agua residual.

558

559

560

561 Tabla 3. Unión de lupanina, recuperación, rendimiento general y pureza y COD adsorbido

562 para resinas MAC-3 y XAD-16 a pH 4 y pH 11 para cocción de altramuces

563 aguas residuales.

21
 Lupanina

Rendimiento BACALAO en resina después de

Enlace de pH (%) Recuperado (%) Pureza (%)*
global (%) la unión (%) **

44 74,74 ± 8,22 76,31 ± 7,63 57,03 ± 8,48 52,42 ± 4. 14 28,48 ± 3,04

MAC-3

11 66,88 ± 0,28 76,83 ± 1,22 51,38 ± 0,84 65,71 ± 1 .61 32,69 ± 3,65
Batch Binding$

44 66,77 ± 2,70 83,38 ± 8,83 55,67 ± 6,31 62,98 ± 0. 62 19,35 ± 3,04

XAD-16

24,52 ± 4,26
11 96,29 ± 2,40 89,47 ± 4,22 86,15 ± 4,60 63,11 ± 0,65
CC#

XAD-16

11 97,80 ± 1,13 79,43 ± 2,74 77,68 ± 3,09 48,00 ± 2 .42 54,07 ± 2,09

564 ** - BACALAO lupanina / BACALAO total después de la recuperación de lupanina (%). ** incluye DQO debido a la lupanina misma. PS

565 Ensayos a 100 mg. resina/ mL aguas residuales # - cromatografía en columna a 150 mg resina/ mL aguas residuales.

566

567 3.2.2. Regeneración de resina y reciclabilidad.

568 Para evaluar la reciclabilidad de las dos resinas seleccionadas, 3 unión / regeneración

569 Se realizaron ciclos para las resinas XAD-16 y MAC-3. Los resultados (Figura S3) muestran

570 que ambos adsorbentes presentan un comportamiento estable en todo el tres

571 ciclos de unión / recuperación realizados, con la unión de lupanina permaneciendo constante.

572 Para la resina MAC-3, la recuperación de lupanina se realiza con una solución acuosa de

573 NaOH en el que los iones Na + intercambian con lupanina y permanecen en el polímero

574 matriz. Después de este paso, la regeneración de resina se realiza con HCl en agua para intercambiar

575 los iones Na + vuelven a H +, promoviendo la protonación y consecuente

576 regeneración de la resina. En cuanto a la resina XAD-16, la recuperación de lupanina es

577 realizado usando EtOH, que tiene una alta afinidad con la matriz polimérica. Al terminar

578 del ensayo de recuperación, la resina está saturada en las moléculas de disolvente, y

579 La regeneración se realiza mediante lavado con agua, para eliminar el EtOH

580 moléculas. Más detalles sobre estudios isotérmicos y cinéticos para las aguas residuales.

581 con las resinas XAD-16 y MAC-3 a temperatura ambiente se puede encontrar en Soporte

582 información.

583

584 3.3. Cromatografía de columna

22
585

586 La cromatografía en columna se realizó para las aguas residuales de cocción usando XAD-

587 16 resina para verificar los resultados obtenidos en experimentos de lotes de unión, de modo que un

588 pequeño volumen tuvo que ser procesado para el aislamiento de lupanina a partir de un pequeño número de

589 fracciones ricas en lupanina. De la Figura 6 es posible confirmar que la lupanina es

590 recuperado en las fracciones de EtOH y que se necesita un paso de lavado con agua para

591 regeneración de resina, confirmando los resultados en experimentos de unión por lotes. los

592 Los experimentos cinéticos (Figura S4, Tabla S5) indicaron que el sistema necesita

593 alrededor de 2 h para alcanzar el equilibrio. Sin embargo, debido a la práctica limitaciones de

594 configuración experimental, el ensayo en columna se realizó a un flujo de alrededor de 2

595 mL / min, correspondiente a un tiempo de residencia de 50 min, por lo tanto, bastante más bajo que el

596 2 h. Consecuentemente, los resultados para la columna y los experimentos por lotes son

597 diferente, como se resume en la Tabla 3. Además, fue posible determinar

598 La reutilización de este procedimiento para 6 ciclos de unión, recuperación y

599 regeneración con valores entre (91-98)% para la unión a lupanina, (70-81)% para

600 su recuperación en fracciones de EtOH con una pureza de alrededor del 48%. También se observó

601 que en un 7 th ciclo, el porcentaje vinculante cayó casi 8 veces al 12%, con

602 una recuperación de solo el 41.7% (Tabla S6).

603

604 Figura 6 Perfil cromatográfico en columna con resina XAD-16 para el lupino

605 frijoles que cocinan las aguas residuales a pH 11 a través de la unión / recuperación / regeneración.

606

23
607 El uso de resina XAD-16 con recuperación de EtOH puede aislar la lupanina de

608 volúmenes significativamente mayores de retenidos de nanofiltración de aguas residuales y proporcionan un

609 crudo rico en lupanina con una pureza de alrededor (52 - 67)%. Sin embargo, tal

610 el crudo de lupanina concentrado requerirá un mayor pulido para recuperar la lupanina

611 con un menor porcentaje de contaminación de materia orgánica.

612

613

614 3.4. Experimentos de extracción con solventes

615

616 3.4.1. Selección de solventes para la extracción de lupanina de aguas residuales

617

618 La extracción con solvente se evaluó como una posible forma de aislar la lupanina después de

619 el paso de purificación de resina o directamente del retenido, rico en lupanina y con

620 alto contenido de DQO, de los experimentos de NF. Teniendo en cuenta que la lupanina es mejor

621 extraído en su forma neutra (pKa = 9.1) se ajustó el pH de las soluciones acuosas

622 a 13-13.5. Los solventes que muestran una mayor eficiencia de extracción de lupanina fueron

623 DCM, tolueno, 1-octanol, 1-butanol, EtOAc y MTBE (Figura S6).

624

625 La selección del disolvente debe considerar principalmente la eficiencia de extracción del disolvente

626 pureza de lupanina, contaminación con solvente de la fase acuosa y ebullición del solvente

627 punto, contemplando su reciclabilidad (Tablas S7-S9) (Alder et al., 2016; Chickos

628 y Acree, 2003; Levet et al., 2016; Smallwood, 1996). Por lo tanto, EtOAc y

629 MTBE son los solventes más adecuados para la lupanina. De estos ensayos preliminares

630 con MTBE fue posible recuperar lupanina con un rendimiento del 57.1% y una pureza

631 del 70%, mientras que para EtOAc se logró un rendimiento del 84,4% con una pureza del 80%

632 (Figura S6).

633

634

635

636

637 3.4.2. Extracción de lupanina con MTBE y EtOAc a mayor escala y

638 extracciones sucesivas

24
639

640 Después de la detección de solventes para el aislamiento de lupanina del agua residual en un pequeño

641 a escala, se realizó una extracción con disolvente con 150 ml de fase de cocción

642 aguas residuales utilizando MTBE y EtOAc. En ambos casos, fue posible lograr

643 Más del 80% de pureza de lupanina (Tabla 4) con recuperaciones similares a las observadas

644 en los ensayos de cribado.

645

646 Tabla 4. Extracción de lupanina y pureza de las aguas residuales en fase de cocción.

AcOEt MTBE

Extracción Extracción de 3 Extracción Extracción de 4

Protocolo de
inicial de 2 pasos inicial de 2 pasos
extracción
pasos mejorada pasos mejorada

Recuperación (%) 74,50 ± 0,01 98,40 ± 0,20 40,00 ± 0,01 92,53 ± 0,71

Pureza (%)* 81,86 ± 1,94 78,41 ± 2,59 85,90 ± 0,01 76,52 ± 1,92

647 * * - BACALAO lupanina / BACALAO total después de la recuperación de lupanina (%).

648

649 Para mejorar aún más la recuperación de lupanina, extracciones sucesivas adicionales de

650 Se realizaron las aguas residuales de cocción. Los coeficientes de distribución de

651 lupanina entre las aguas residuales y MTBE (K p = 2.22 ± 0.50) o EtOAc (K p =

652 3.57 ± 0.82) donde se estimó. Usando una proporción de 1: 1 para cada extracción individual y

653 4 o 3 extracciones sucesivas para MTBE y EtOAc respectivamente, fue posible

654 para recuperar (92 - 98)% de lupanina con una pureza similar de alrededor del 77% para ambos

655 disolventes Los protocolos de extracción mejorados, utilizando mayores cantidades de solvente.

656 que el método de extracción inicial utilizado, da como resultado una mayor recuperación de lupanina

657 cede con pequeños pérdidas en la pureza; indicando la naturaleza hidrofílica de

658 contaminantes Aún así, de acuerdo con el factor de distribución más alto estimado, el

659 Los resultados para EtOAc se lograron usando menos solvente orgánico. Por esta razón,

660 EtOAc es el solvente orgánico sugerido para integrar una posible estrategia de

661 extracción con solvente para aislamiento de lupanina.

662

663 3.5. Estrategia propuesta

664
25
665 En el Esquema 2 se presentan tres estrategias principales para la eliminación de lupino de frijoles

666 Posible tratamiento de aguas residuales con aislamiento de lupanina para una mayor valorización. Todas

667 Estas tres estrategias consideran primero una nanofiltración con membrana NF270 para

668 obtener un permeado del agua tratada que representa aproximadamente el 80% de la

669 paso de deshidratación de aguas residuales y un retenido concentrado enriquecido en lupanina.

670 Luego se aísla la lupanina de dicho retenido mediante: (1) una etapa de adsorción

671 utilizando resina XAD-16 por cromatografía en columna, (2) extracciones con múltiples solventes

672 con EtOAc o (3) una etapa de adsorción usando resina XAD-16 por columna

673 cromatografía seguida de extracciones con múltiples disolventes con EtOAc (Esquema 2,

674 Tabla 5).

675

676

677

678

679 Esquema 2. Estrategias propuestas para el tratamiento de aguas residuales industriales de alubias

680 con aislamiento de lupanina.

681

682

683

684

685 Tabla 5. Identificación de las corrientes en las estrategias propuestas para los frijoles lupinos

686 tratamiento de aguas residuales y aislamiento de lupanina.

26
 NF NF NF
Corriente Descripción
CC SE CC + SE
1 Cocinar y desaguar aguas residuales 1 m3 1 m3 1 m3

2 Sólidos separados de las aguas residuales de los altramuces 2% 2% 2%

3 Corriente acuosa obtenida después de la separación de sólidos. 1 m3 1 m3 1 m3

44 NF retenido: rico en lupanina y otras especies orgánicas 0,23 m 3 0,23 m 3 0,23 m 3

55 NF permeado: aguas residuales tratadas 0,77 m 3 0,77 m 3 0,77 m 3

66 NaOH para ajuste de pH de NF retenido 11,5 kilogramos 11,5 kg 11,5 kg

77 Adsorbente: Amberlite XAD-16 34,5 kilogramos - 34,5 kilogramos

8 EtOH: para la recuperación de lupanina de XAD-16 0,14 m 3 - 0,14 m 3

9 Corriente acuosa para la regeneración del adsorbente. 0,14 m 3 - 0,14 m 3

10 Gasto basificado gastado de la adsorción de columna 0,23 m 3 - 0,23 m 3

11 Adsorbente gastado (XAD-16) 34,5 kilogramos - 34,5 kilogramos

12 Spent aqueous stream from the adsorber regeneration 0.14 m 3 - 0.14 m 3

13 Spent EtOH from lupanine recovery 0.10 m 3 - 0.10 m 3

14 Concentrated organic phase enriched in lupanine (EtOH) 0.034 m 3 - 0.034 m 3

15 Spent EtOH 0.034 m 3 - -

16 Organic Solvent (EtOAc) - 0.69 m 3 -

17 Spent basified aqueous phase - 0.23 m 3 -

18 Organic phase rich in lupanine - 0.69 m 3 -

19 Spent organic solvent (EtOAc) - 0.69 m 3 -

20 Water for dissolution of dry residue from EtOH - - 0.034 m 3

21 NaOH for aqueous phase pH adjustment - - 0.72 Kg

22 Organic solvent: EtOAc - - 0.10 m 3

23 Spent EtOH - - 0.034 m 3

24 Spent aqueous phase - - 0.034 m 3

25 Organic phase rich in lupanine (EtOAc) - - 0.10 m 3

26 Spent organic solvent (EtOAc) - - 0.10 m 3

687

688 In the strategies presented in Scheme 2, around 97% of lupanine and 94% of

689 the organic matter of the sample are retained in the first NF stage,

690 corresponding to a stream where lupanine represents only 19.4% of the total

691 organic matter contributing to COD (Table 6).

692

693 Table 6. Summary of lupanine yield and purity obtained with different strategies

694 for its isolation from lupin beans industrial wastewaters according to strategies

695 exemplified in Scheme 2.

27
 Lupanine

Operations Yield (%) Purity (%)

NF + CC 75.7 48.0

NF + SE 95.4 78.4

NF + CC + SE 74.4 78.4

696 NF – Nanofiltration; CC – Column chromatography; SE – Solvent extraction. Yields for isolated

697 operations: 97.0% for NF, 98.4% for SE and 78.0% for CC.
698
699

700 In the strategy comprising (NF + CC), the NF stage is followed by an adsorption

701 step with XAD-16 resin by column chromatography. At this point the overall

702 yield for lupanine recovery was around 75%, but the final purity achieved was

703 only around 48%. To further improve the purity of this lupanine fraction, in the

704 strategy comprising (NF + CC + SE), a solvent extraction step with EtOAc was

705 performed only for the fractions of the column which showed the presence of

706 lupanine. After this unit operation the overall yield of the intermediary step was

707 kept constant, around 75%, but it was possible to obtain a purer fraction of

708 lupanine in the end at 78%. A simpler alternative to the previous strategy, would

709 comprise (NF + SE), in which after the NF stage, a multiple solvent extraction

710 step with EtOAc is proposed allowing to obtain an overall yield of 95.4% for

711 lupanine recovery which is around 78% pure.

712

713 Comparing the several strategies, it is possible to observe that driven by the

714 performance of the solvent extraction step, both strategies (NF + SE) and (NF +

715 CC + SE) reach the same final purity of around 78% (Table 6), but with higher

716 losses of lupanine in the last one. In strategy (NF + SE) more extractant organic

717 solvent, EtOAc is used than in strategy (NF + CC + SE). However, this strategy

718 uses also other solvent, EtOH, and additionally to having a lower lupanine yield,

719 is also more cumbersome, requiring more equipment and materials than in (NF

720 + SE). Therefore, the simpler process scheme with a nanofiltration and a

721 solvent extraction is the process route recommended by this study.

722

28
723 A previous study reports osmotic evaporation followed by celite adsorption in

724 basic medium, filtration and successive extraction with petroleum ether, Et 2 O

725 and DCM, to recover lupanine from lupin beans wastewater in the Et 2 O fraction.

726 In this case an osmotic agent was used, calcium chloride, and the membrane

727 process was run at 32 ºC to keep the work flux constant through the time of

728 experiment (Carmali et al., 2010). With this method it was possible to recover

729 only 18.5% of lupanine with 90% purity. In the strategies we propose it is

730 possible to have a higher recovery yield of lupanine between 75% and 95%.

731 Therefore, considering a batch production of 2.5 tons of lupin beans, generating

732 60 m 3 of debittering wastewater, it is possible to recover (5.36 - 6.76) Kg of

733 lupanine per ton of dry beans at around 78% purity. Such enriched lupanine

734 crude will require further polishing to recover lupanine with a lower percentage

735 of organic matter contamination. That is possible through further purification of

736 this smaller sample of lupanine using for example recrystallization from hexane.

737 However, to show the feasibility of using lupanine batches with purities around

738 78%, lupanine conversion into sparteine was assayed.

739

740 3.5. Lupanine conversion in sparteine

741 The lupanine isolated from lupin beans wastewater was reduced to sparteine by

742 applying a reported procedure using NaBH 4/ I 2 methodology (Maulide et al.,

743 2014), followed by distillation under reduced pressure allowing the isolation of

744 pure (by NMR) sparteine in 60% yield, a value similar to the one obtained using

745 pure lupanine. This result suggests that remaining impurities, carried out with

746 the crude lupanine isolated by solvent extraction from the wastewater, do not

747 affect the chemical reaction performance with the final distillation step allowing

748 their removal efficiently.

749

750 4. Conclusions

751 Several unit operations were assessed separately and optimized for lupin beans

752 wastewater treatment and recycling and lupanine alkaloid recovery.

753

29
754 Importantly, the NF270 membrane showed the highest lupanine rejection

755 (99.5%) originating a lupanine rich retentate.

756

757 While the rejection for lupanine was high, the rejection for the other organic

758 matter present in the wastewater was equally high (94%). Therefore, further

759 isolation of lupanine from this stream was evaluated by solvent extraction and

760 resin adsorption. XAD-16 resin was the selected adsorber, leading to 77% of

761 lupanine yield but only with 48% purity by column chromatography.

762

763 Notably, EtOAc was the best performing solvent for lupanine recovery, allowing

764 a recovery of 98% of the lupanine, with the highest purity achieved (78%), using

765 three successive extractions. The use of EtOAc, uses less organic solvent when

766 compared to MTBE.

767

768 Overall, the best combination for lupanine isolation comprised a NF stage

769 followed by multiple EtOAc solvent extractions, being possible to recover 95%

770 of lupanine with a purity of 78%.

771

772 The treated water obtained in the NF permeate, representing 80% of the

773 debittering step wastewater, can be further re-used within the industrial process

774 addressing a major environmental issue concerning savings in the use of high

775 amounts of fresh water in the lupin beans debittering process. The lupanine

776 fraction obtained after NF and successive organic solvent extractions can

777 successfully be used in the process of conversion to sparteine with a final purity

778 above 95%.

779

780 Acknowledgements

781 The authors acknowledge: i) LAIST, Laboratório de Análises do IST, for

782 providing technical support in water quality parameters determination; ii) T MFB

783 for providing the industrial wastewater samples. The authors acknowledge

784 dedicated funding from WaterWorks2014 ERA-NET Cofunded Call, through the

785 collaborative project ID 278 – Biorg4WasteWaterVal+, Fundação para a

30
786 Ciência e Tecnologia (FCT) through the Projects WaterJPI/0001/2014,

787 WaterJPI/0002/2014 and WaterJPI/0003/2014 and iBB-Institute for

788 Bioengineering and Biosciences (UID/BIO/04565/2020), from Programa

789 Operacional Regional de Lisboa 2020 (Lisboa-01-0145-FEDER-007317). This

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903

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904 Supplementary Information

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907

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Highlights

- Nanofiltration can successfully isolate lupanine from lupin beans wastewater.

- More than 95% of lupanine is recovered using nanofiltration and solvent extraction.

- High purity sparteine is obtained from lupanine extracted from lupin beans wastewater.
Declaration of interests

☒ The authors declare that they have no known competing financial interests or personal relationships that could have appeared
to influence the work reported in this paper.

☐ The authors declare the following financial interests/personal relationships which may be considered as potential competing
interests: