Laboratorio de Genética: Estudio del modelo biológico Drosophila melanogaster

Acuña Jorge Luis, Martínez Karolina Liceth

Profesor: Lourdes Varela Prieto.
Programa de Biología, Facultad de Ciencias Básicas, Universidad Del Atlántico.
Barranquilla - Atlántico

1. INTRODUCCIÓN
La especie Drosophila melanogaster es un díptero braquícero que se conoce comúnmente con el nombre
de mosca de la fruta o mosca del vinagre, perteneciente a la familia Drosophilidae, en la clase Insecta del
Phylum Arthropoda. Esta especie recibe su nombre debido a que se alimenta de frutas en proceso de
fermentación como lo son manzanas, bananos uvas, entre otros. La importancia de la mosca de la fruta
como modelo anima fue descubierta por Thomas Hunt Morgan en 1933, quien obtuvo un Premio Nobel de
Fisiología y Medicina después de haber demostrado que los cromosomas portan la información genética
utilizando esta especie. Para propósitos de investigación, es una especie que puede remplazar fácilmente a
los humanos, tiene una rápida reproducción que permite estudiar muchas generaciones en muy poco
tiempo.

Morfológicamente es un animal pequeño, posee un tamaño de 2 a 3mm y un peso promedio de 0,8 a 1,5
mg. Al pertenecer al phylum Arthropoda se diferencia la presencia de los 3 tagmas: La cabeza, que se
compone de 6 segmentos fusionados en los que se encuentran las antenas, aristas, la proboscis, los ojos
compuestos, ocelos y setas; El tórax, que se compone de 3 segmentos fusionados (protórax, mesotórax y
metatórax); El abdomen, que consiste en una serie de segmentos visibles que pueden ser 7 u 8 para la
hembra y 5 o 6 para el macho, el abdomen esta compuesto por tergitos, esternitos, espiráculos
abdominales y región genital.

El ciclo vital de D. melanogaster es uno de los aspectos más importantes en cuanto al estudio de
laboratorio, es bastante complejo pero muy conocido. Su ciclo de vida depende de diversos factores
ambientales como la temperatura y la humedad. Por ejemplo, a temperatura ambiente (25°C), el ciclo
completo puede durar entre 9 y 10 días. Se dice que es un ciclo complejo debido a que esta formado por 4
estadíos, huevo, larva (3 estadíos), pupa (2 estadíos) y adulto. En el desarrollo de esta experiencia se
busca que el estudiante estudie y comprenda el modelo biológico de D. melanogaster para la obtención de
la primera y segunda generación filial, identificando y caracterizando morfológicamente la especie y las
diferentes estructuras externas e internas que lo componen.

2. MARCO TEORICO
Dimorfismo sexual: Estado adulto y estado pupa
Drosophila melanogaster es una especie que cuenta únicamente con 4 pares de cromosomas, lo cuál lo
hace mucho más interesante como organismo de estudio. Las hembras son XX y los machos XY, el primer
cromosoma es el sexual y el numero de cromosomas es el que determina el sexo, es decir doblemente X
determina hembra y una sola X determina macho, proceso diferente al que ocurre en los humanos ya que el
sexo se determina con la presencia o ausencia del cromosoma Y. Existen varios criterios que permiten
diferenciar machos y hembras en D. melanogaster.

HEMBRAS ♀ MACHOS ♂
Mayor tamaño corporal Menor tamaño corporal
Abdomen puntiagudo Abdomen redondeado
Pigmentación clara en el abdomen Pigmentación oscura en el abdomen
7 u 8 segmentos abdominales 5 o 6 segmentos abdominales
Sin cerco sexual Con cerco sexual
Ponen huevos Posee pene al final del abdomen
En estado de pupa completamente formada no En estado de pupa completamente formada se
se observa observa
el cerco sexual en las patas el cerco sexual en las patas
Tabla 1. Diferenciación de sexos en Drosophila melanogaster. Tomado de: (Karageorgiou, 2018)

Como se observa en la anterior tabla, el cerco sexual es una estructura que solo se presenta en las moscas
1
macho, esta consiste en una fila aproximada de diez sectas negras en la articulación társica proximal, cada
una del primer par de patas, esta estructura también es diferenciable en el estadío de pupa, siempre y
cuando la mosca este completamente formada.

2
Realización de cruces
Para obtener la primera generación filial de un cruce entre parentales el necesario seguir una serie de
pasos que permitan establecer que los huevos que posee la hembra si son del macho con el cual se desea
cruzar. Para esto es necesario asegurar que la hembra es virgen y que los huevos si son del macho
deseado, ya que las hembras de D. melanogaster tienen la capacidad de almacenar semen de distintos
machos, por lo cual los huevos que ponen no tienen que ser necesariamente del ultimo macho con el cual
se apareo. Los pasos para realizar cruzamientos son los siguientes:

 Seleccionar machos y hembras de las cepas a cruzar, de las cuales las hembras tienen que ser
vírgenes. Existen 2 forma de seleccionar hembras vírgenes; la primera, en estado adulto, debido a
que las hembras solo son fértiles hasta pasadas 8 a 10 horas de la eclosión del huevo, se pueden
sacar todos los organismos adultos del cultivo y esperar que eclosionen los huevos y sacar las
hembras adultas pasado este tiempo, así se aseguraría que son hembras vírgenes. La segunda
forma, en estado de pupa, consiste en sacar pupas del medio de cultivo en ultimo estado de
desarrollo y observar con lupa la presencia o ausencia del cerco sexual, aquellas que no lo posean
serán hembras y debido a están en el ultimo estadío de desarrollo serán vírgenes.
 Colocar los machos y hembras vírgenes seleccionados en un medio de cultivo juntos, es necesario
poner un numero suficiente de machos y hembras para que se asegure un buen numero de
descendientes, se recomiendan 10 machos y 10 hembras vírgenes.
 Esperar 1 semana para que se realicen los apareamientos a 27°C de temperatura, esto debido a
que según varíe la temperatura, variará el tiempo que se tarden en ocurrir los apareamientos. La
temperatura y el tiempo de apareamiento son dos variables inversamente proporcionales, es decir,
si se aumenta la temperatura, se disminuye el tiempo de apareamiento y si se disminuye la
temperatura el tiempo de apareamiento aumentará.
 Eliminar los parentales para evitar la mezcla en las generaciones, ya que, si se dejan los adultos
parentales en el medio de cultivo, al cabo de un tiempo tendremos una nueva generación en la cual
no se podría distinguir si la progenie es producto de los parentales o producto de los cruces entre
los descendientes.
 Esperar 1 semana para que se realicen los nuevos cruces entre la F1 y así obtener una segunda
generación filial F2.

Cromosomas politénicos: Endomitosis, glándulas salivales en estado larvario y tejidos

especializados
Los cromosomas politénicos que se encentran en ciertos insectos, como D. melanogaster, son cromosomas
grandes con numerosas cadenas de ADN. Drosophila tiene únicamente 4 pares de cromosomas,
característica que lo otorga nivel para ser escogido como modelo de estudio biológico. El cromosoma
numero 1, es el cromosoma sexual, las hembras son XX y los machos son XY. En ciertas células, de las
glándulas salivales de este insecto, los cromosomas se replican, pero no se divide la célula, estos
cromosomas son capaces de unirse por medio del centrómero. Todo este proceso se conoce como
endomitosis.

La endomitosis es la replicación cromosómica que no va acompañada por una división nuclear o

citoplasmática, en el cual los cromosomas homólogos se replican y se aparean, formando cromosomas
mucho más grandes de lo normal, en los cuales son visibles las bandas donde el ADN esta condensado y
sin condensar, lo que permite un patrón de bandas especifico en estos cromosomas. Este tipo de
cromosomas son visibles en glándulas salivales de dípteros y en otros tejidos especializados, por ejemplo,
en algunas plantas, de la familia de Lirios en células del suspensor, antípodas y células sinérgidas.

En Drosophila estos cromosomas cumplen su función en las glándulas salivales, las larvas tienen que
producir gran cantidad de saliva, para que se pueda originar la pupa en donde se va a dar todo el proceso
de metamorfosis. Para observar los cromosomas politénicos, se necesita extraer las 2 glándulas salivales
de una larva en tercer estadío de desarrollo.

3. OBJETIVOS
 Estudiar el modelo biológico Drosophila melanogaster para obtención de F1 y F2
 Identificar y caracterizar correctamente el dimorfismo sexual de la especie
 Identificar y extraer correctamente las glándulas salivales de larvas
4. METODOLOGÍA
Manejo en el laboratorio
 Materiales y Equipos
- Medo de cultivo para cepa silvestre de Drosophila melanogaster
- Estereoscopio o lupa
- Microscopio óptico
 - Éter etílico
- Alcohol al 70%
- Solución Ringer para invertebrados (6g/l ClNa)
- Orceína acética al 2%
- Botellas con tapones para medio de cultivo
- Cajas Petri
- Tubos de ensayo con tapones
- Algodón
- Pincel pequeño
- Frasco morgue, para introducir las moscas desechadas
- Kit de disección.
- Papel filtro
- Portaobjetos
- Cubreobjetos

 Medio de cultivo (UNAM, 2018)

Para preparar 1L de medio de cultivo, se necesitan:
- 10g agar o carragenina
- 135g azúcar
- 1450ml de agua
- 105,5g de harina de maíz
- 72,5g de levadura de cerveza en polvo
- 4ml de ácido propiónico o tegosept
- 4ml de nipagín al 10% (disuelto en alcohol etílico al 70%)

En un recipiente, limpio, seco y esterilizado, coloque 10g de agar o carragenina, 135g de azúcar y
105,5g de harina de maíz, mezcle hasta obtener una mezcla homogénea (mezcla 1). Posteriormente
agregue 1250ml de agua y disuelva completamente. En otro recipiente agregue 200ml de agua a 72,5g
de levadura y disuelva (mezcla 2). Caliente la mezcla 1 hasta que hierva y permita que continúe
hirviendo en fuego moderado por 20min, agregue la mezcla 2 y permita que continúe hirviendo durante
20 min.

Retire del fuego la mezcla final, agregue 4ml de ácido propiónico o tegosept y 4ml de nipagín al 10%,
mézclelos perfectamente. Tome los frascos esterilizados en un horno a 150°C, donde depositará
aproximadamente 50ml del medio de cultivo aun caliente, coloque la tapa de los mismos y déjelos
reposar en el horno apagado hasta el día siguiente cuando ya el medio de cultivo está listo para
utilizarlo

 Anestesia de las moscas

Para anestesiar las moscas utilizaremos una botella con éter etílico, para esto humedezca un algodón
marcado con éter y póngalo como tapón de la botella que utilizará para anestesiar (una diferente a la
del medio de cultivo). Pasados unos 5 minutos tome la botella con las moscas en su medio de cultivo,
de unos golpes al fondo de la botella con el objetivo de que caigan las moscas, destape ambas botellas
con cuidado de que no se escapen las moscas y con rapidez vacíe las moscas de la botella con el
medio de cultivo en la botella con el éter, tape ambas botellas rápidamente y espere de 30s a 1 min que
se duerman las moscas, luego transfiéralas a un tubo de ensayo limpio y seco para que no se mueran
las moscas por exceso de éter, tápelas y proceda a realizar las observaciones.

Observación
 Identificación y clasificación de machos y hembras.
Tome el tubo de ensayo donde se encuentran las moscas dormidas y deposite 4 o 5 en una caja Petri
para realizar observaciones con ayuda del pincel pequeño y el estereoscopio. Observe su morfología,
anatomía y características principales, ubique la presencia o ausencia del cerco sexual y clasifíquelas
en tubos de ensayo diferentes, para posteriormente realizar los cruces en una nueva botella con medio
de cultivo. Repita este procedimiento hasta obtener 10 moscas hembras y 10 moscas macho.

 Identificación y extracción de glándulas salivales de larvas en tercer estadio

Seleccione una botella de cultivo con moscas en tercer estadío de desarrollo, de esta escoja con ayuda
de un pincel humedecido con agua las larvas que tengan el mayor tamaño pero que aun no hayan
pupado, colóquela en un porta objeto con 1 gota de solución isotónica para evitar que la larva se
deshidrate y poder hacer la extracción. Realice la
 observación en el microscopio de las larvas y ubique los aparatos bucales que es donde se encuentran
las glándulas salivales. Para realizar la extracción sujete la larva con ayuda de las pinzas y de un
pinchazo con la aguja de disección a 1/3 de la cabeza en el aparato bucal (detrás de las mandíbulas),
estire el cuerpo de la larva hasta que se rompa la piel y separe las glándulas salivales.

 Tinción con orceína acética al 2%

La orceína acética es una sustancia que se utiliza para teñir las glándulas salivales y poder observar los
cromosomas politénicos. Tome las glándulas extraídas del paso anterior y proceda a limpiar y eliminar
todos los cuerpos grasos que se encuentran pegados en las glándulas, para esto es necesario tener
mucho cuidado de no romper las glándulas. Posteriormente coloque las glándulas limpias en un nuevo
portaobjetos y tíñalas con 1 gota de orceína acética al 2% por 10 minutos, coloque un cubreobjetos y
realice las observaciones de los cromosomas politénicos en el microscopio. Finalmente deseche las
glándulas en el frasco morgue con alcohol al 70%.

 Devolver adultos y larvas al medio de cultivo

Si lo desea, puede regresar al medio de cultivo inicial las larvas y moscas antes de que se despierten,
para que estas no se mueran. Para ello debe colocar las moscas sobrantes del tubo de ensayo en la
botella con el medio de cultivo, pero esta botella debe encontrarse en dirección horizontal, lo que
permitirá que cuando las moscas despierten no tengas las alas pegadas y mueran al caer directamente
en el medio de cultivo. Si no desea conservar el cultivo, coloque las moscas y larvas en el frasco
morgue con alcohol al 70% para su posterior desecho.

5. BIBLIOGRAFÍA
Adams, Saltar, Celniker, & Holt. (2000). Science 287.

Andrwes, C. (2016). Drosophila melanogaster. Obtenido de:

https://sites.google.com/site/drosophilamelanogastermkl/home/caractersticas-
morfologicas

Gasper, S. (2014). Animalresearch.info. Obtenido de http://www.animalresearch.info/es/el-

diseno-de-la- investigacion/animales-de-investigacion/drosophila-melanogaster/

Karageorgiou, H. (2018). Universidad Autonoma de Barcelona - Introducción a la biología y

morfología de Drosophila melanogaster.

Reiter et al. (2001). Genome Research.

UNAM. (2018). Banco de Moscas. Obtenido de

http://bancodemoscas.fciencias.unam.mx/Medio%20de
%20cultivo.html