Formato de protocolo de Validación.

VALIDACIÓN DE MÉTODOS Página 1 de x

No. Protocolo x
PROTOCOLO Edición x

Analito Vigente Desde

Tipo de evidencia
Referencia Bibliográfica
Tipo de Validación

1. Objetivo:
Demostrar mediante un estudio de laboratorio que las características funcionales de un método de
ensayo lo hacen adecuado para la aplicación analítica prevista.

Registrar la información y los datos necesarios para establecer las especificaciones de

operatividad de la valoración.

2. Alcance: Debe efectuarse con los ensayos nuevos o con los ensayos actualmente utilizados cuando
se hagan cambios del equipo, el procedimiento, las condiciones de laboratorio, el personal técnico,
los reactivos, las materias primas, los materiales de referencia, los patrones, etc.

3. Responsabilidades: La persona capacitada que tiene a su cargo supervisar la realización de las

pruebas analíticas que realizará el personal técnico designado para el estudio de validación quienes
registrarán la información y los resultados obtenidos.

El supervisor planificará el estudio, revisará el protocolo, supervisará la operatividad y

comprobará la integridad de los registros.

El Jefe de cada sección estará a cargo de realizar el protocolo, el procedimiento y el informe de

validación.

4. Parámetros a evaluar:
La validación de un procedimiento analítico es el proceso que establece, mediante estudios en
laboratorio, que las características de desempeño del procedimiento cumplen los requisitos para las
aplicaciones analíticas previstas. Las características de desempeño analítico habituales que se
considerarán en esta metodología analítica se describen a continuación:

a. Linealidad.
 b. Límite de detección.
c. Exactitud.
d. Precisión (Repetibilidad y Reproducibilidad).
e. Robustez.
f. Estabilidad de la muestra analítica.
g. Selectividad.

5. Resumen de las características físicas de la entidad a evaluar:

(Describir brevemente las características físicas en que se encuentran los ítems de ensayo a evaluar
para validar el método de ensayo)

6. Metodología:

6.1 Instrumentos:

6.2 Materiales y otros accesorios:

6.3 Reactivos y Materiales de Referencia:

6.4 Muestras:

6.5 Procedimiento:

Ejecución

Especifique las condiciones para la ejecución de la prueba, y los análisis que se harán de los datos
recogidos, así como los criterios de aceptación que deberán llenarse. (Se necesitan describir
los diferentes tipos de estudios de validación para diferentes tipos de pruebas analíticas con
sus criterios de aceptación.)

Evaluación

Adjunte todos los formularios para el registro de datos y los gráficos. (Poner propuesta de
formularios)
Efectúe todos los cálculos y análisis estadísticos determinados con anterioridad.
Compare los datos con los criterios de aceptación.
(Incluida la justificación y la repercusión sobre la validez del ensayo.)
Prepare el informe de desviaciones
 Prepare el informe de validación de la valoración analítica.

Este documento debe incluir lo siguiente: fecha de inicio del estudio; fecha de finalización;
observaciones efectuadas; problemas identificados (si es que surgieran); integridad de la información
reunida; resumen del informe de desviaciones; resultados de las pruebas y los análisis estadísticos;
si los resultados de cada tanda de la valoración satisfacen los criterios de aceptación; si la variación
entre las repeticiones de la valoración cumplen los criterios especificados; ubicación de los
datos originales; y otra información pertinente al estudio.

Se formularán conclusiones con respecto a la validez de la valoración para los resultados

individuales y para las repeticiones.

Aprobación

Presente el informe de validación de una valoración analítica a Jefe de Unidad de Gestión de

Calidad para su evaluación y aprobación.

7. Análisis de datos

Documentar los cálculos estadísticos realizados (“Ver informe de validación”).

8. Límites de aceptación:

PARAMETRO CRITERIOS RESULTADO CONDICION

-Tipo de parámetro Descripción del El que especifique el Resultado Aprobado /

parámetro parámetro obtenido Rechazado

_________
___________ _____________ ________ ______

10. Referencia bibliográfica:

Redactado por: Firma y fecha

Revisado por: Firma y fecha
Nombre del Laboratorio

Procedimiento de validación propuesto:

Logo de la organización Nombre del Laboratorio

Código: Validación de métodos de ensayo

Revisado por: Versión:
Revisión:
Aprobado por: Fecha aprobación Página
4 de 16

1. Propósito

Establecer una guía para la validación de los métodos de ensayo de las áreas de las áreas de
laboratorio con método cuantitativos de la División de la Policía Técnica y Científica de la Policía
Nacional Civil.

2. Alcance

La validación aplica a los métodos no normalizados, métodos normalizados empleados fuera del alcance
previsto, ampliaciones y modificaciones de los métodos normalizados utilizados que el laboratorio ha
seleccionado.

3. Responsabilidades.

Actividad Responsable
Elaborar protocolo de validación Jefe de la Sección correspondiente.
Validar el método Jefe de la Sección y peritos designados.
Elaborar informe de validación Jefe de la Sección correspondiente.
Aprobar informe de validación Jefe de la Unidad de Gestión de Calidad.

4. Documentos o registros
Relación con otros documentos del SGC Registros generados
 Mencionar los documentos relacionados con el  Mencionar los registros relacionados, bitácoras,
sistema de calidad y normativas internacionales con expedientes, protocolo de validación, informe de
respecto al tema de validación validación, etc.

5.1 Conceptos de validación

Para el proceso de validación de los métodos se utilizarán los siguientes conceptos:

5.1.1 Coeficiente de variación (CV):

El coeficiente de variación permite comparar la dispersión entre dos poblaciones distintas e incluso, comparar
la variación producto de dos variables diferentes (que pueden provenir de una misma población). Equivale a la
razón entre la media aritmética y la desviación típica o estándar.

5.1.2 Desviación Estándar:

Es una medida del grado de dispersión de los valores alrededor de una media en una distribución de valores.

Generalmente, en la práctica se analiza una muestra y no toda la población. La desviación estándar, s, para la
muestra está dada por:

∑ ( x i−x )2
S= i=1
n−1

Para efectos de los laboratorios de la DPTC se realizará este análisis mediante la herramienta colaborativa
designada por la Unidad de Gestión de Calidad.

5.1.3 Desviación positiva(DP)

Ocurre cuando: el método a validar da un resultado positivo sin confirmación y el método de referencia da un
resultado negativo.

Esta desviación se convierte en un resultado positivo falso cuando puede demostrarse que el resultado
verdadero es negativo.

5.1.4 Desviación negativa(DN)

Ocurre cuando el método a validar da un resultado negativo sin confirmación y el método de referencia da un
resultado positivo.

Esta desviación se convierte en un resultado negativo falso cuando puede demostrarse que el resultado
verdadero es positivo.

5.1.5 Especificidad:
La capacidad de un método para medir solamente lo que se pretende que mida.

La especificidad es la capacidad de determinar el analito inequívocamente en presencia de componentes, los

cuales se espera que estén presentes. Comúnmente, esto puede incluir impurezas, degradantes, matriz, etc.

5.1.6 Estabilidad analítica de la muestra.

Propiedad de una muestra, preparada para su análisis, de conservar su integridad física o química y la
concentración del analito, después de almacenarse durante un tiempo determinado durante condiciones
específicas.

5.1.7 Exactitud
Es la proximidad de concordancia entre el resultado de una medición y el valor de Referencia aceptado.’

Nota: El término exactitud cuando se aplica a una serie de resultados de prueba, Involucra una combinación
de componentes aleatorios y una componente de error sistemático o sesgo.

Exactitud=x− xi

“La cantidad referida a las diferencias entre la media de una serie de resultados o un resultado individual y el
valor el cual se acepta como valor verdadero o correcto para la cantidad medida.”

5.1.8 Límite de Cuantificación:

La menor concentración de un analito que puede determinarse con una precisión (repetibilidad) y una
exactitud aceptables bajo las condiciones establecidas de la prueba

5.1.9 Límite de Detección:

El menor contenido de un ítem que puede medirse con una certeza estadística razonable.

La menor concentración del analito en una muestra que puede detectarse, pero no necesariamente
cuantificarse bajo las condiciones establecidas de la prueba.
El límite de detección, expresado como la concentración CL, o la cantidad qL, se deriva de la medida más
pequeña XL, que puede detectarse con certeza razonable por un procedimiento analítico dado. El valor de X L
es dado por la ecuación:

X L =X bl + K S bl

donde Xbl es la media de las mediciones del blanco y Sbl la desviación estándar de las mediciones del blanco y
k es un factor numérico elegido de acuerdo al nivel de confianza deseado.

También puede identificarse como Concentración neta mínima detectable, o Límite de Determinación/Límite
de Decisión, los cuales se definen como:

El menor contenido de analito, si está presente, que será detectado y que puede ser identificado.’

5.1.10 Linealidad:
Define la habilidad del método para obtener resultados de la prueba proporcionales a la concentración del
analito.

Nota: Se deduce que el intervalo lineal es el intervalo de concentraciones del analito dentro del cual los
resultados de prueba obtenidos por el método son proporcionales a la concentración del analito.’

5.1.11 Material de Referencia (MR):

Material o sustancia en la cual uno o más valores de sus propiedades son suficientemente homogéneos y
bien definidos como para ser utilizados en la calibración de aparatos, en la evaluación de un método de
medición o para asignar valores a otros materiales.

5.1.12 Medición:
Conjunto de operaciones que tienen por objeto determinar un valor de una magnitud

5.1.13 Mensurando:
Magnitud particular sujeta a medición.

Nota: La especificación de un mensurando puede requerir indicaciones acerca de magnitudes tales como
tiempo, temperatura y presión.

5.1.14 Muestreo:
Herramienta de la investigación científica, cuya función básica es determinar qué parte de una población debe
examinarse, con la finalidad de hacer inferencias sobre dicha población.

5.1.15 Precisión:
Es la proximidad de concordancia entre los resultados de pruebas independientes obtenidos bajo condiciones
estipuladas.

Nota: La precisión depende sólo de la distribución de los errores aleatorios y no se relaciona con el valor
verdadero o valor especificado. La medida de la precisión generalmente se expresa en términos de
imprecisión y se calcula como una desviación estándar de los resultados de la prueba. “Resultados de prueba
independientes” significa que los resultados fueron obtenidos de tal forma que no son influenciados por
cualquier otro resultado previo sobre el mismo o similar objeto de prueba. Las mediciones cuantitativas de la
precisión dependen en forma crítica de las condiciones estipuladas. La Repetibilidad y la Reproducibilidad son
series particulares de condiciones extremas.

5.1.16 Precisión Intermedia:

La precisión intermedia expresa la variación dentro de un laboratorio en: diferentes días, diferentes analistas,
diferente equipo, etc.

5.1.17 Prueba de Robustez:

La robustez de un procedimiento analítico es una medida de su capacidad de permanecer inalterado por
variaciones pequeñas, pero deliberadas en los parámetros del método y proporciona una indicación de su
confiabilidad durante su uso normal.

5.1.18 Rango o intervalo:

Se define como el intervalo entre la concentración superior e inferior para las cuales se ha demostrado la
correcta precisión, exactitud y linealidad del método.

5.1.19 Recuperación:
La fracción de analito adicionada a una muestra de prueba (muestra fortificada o adicionada) previa al análisis
que es determinada efectivamente por el método; el porcentaje de recuperación (%R) entre las muestras
fortificadas y sin fortificar se calcula como sigue:

CF−CU
%R= [ CA ]
x 100

Donde CF es la concentración de analito medida en la muestra fortificada; CU es la concentración de analito

medida en la muestra sin fortificar; CA es la concentración del analito adicionado (valor medido, no
determinado por el método) en la muestra fortificada.
5.1.20 Repetibilidad:
Precisión en condiciones de repetibilidad, es decir, condiciones según las cuales los resultados
independientes de una prueba se obtienen con el mismo método, sobre objetos de prueba idénticos, en el
mismo laboratorio, por el mismo operador, usando el mismo equipo y dentro de intervalos de tiempo cortos.

5.1.21 Repetibilidad (de resultados de mediciones):

La proximidad de concordancia entre los resultados de mediciones sucesivas del mismo mensurando
realizadas bajo las mismas condiciones de medición.

5.1.22 Reproducibilidad:
Precisión bajo condiciones de reproducibilidad, es decir, condiciones según las cuales los resultados de
prueba se obtienen con el mismo método, sobre objetos de prueba idénticos, en diferentes laboratorios, por
diferentes operadores, usando diferentes equipos.

Nota: Una definición válida de reproducibilidad requiere que se especifiquen las condiciones de prueba
modificadas. La reproducibilidad puede expresarse cuantitativamente en términos de la dispersión de los
resultados.

5.1.23 Selectividad (o Especificidad):

La capacidad de un método para determinar exactamente y específicamente el analito de interés en presencia
de otros componentes, en una matriz de muestra bajo las condiciones de prueba establecidas.

5.1.24 Sensibilidad:
El cambio en la respuesta de un instrumento de medición dividido por el correspondiente cambio del estímulo.

5.1.25 Sesgo:
La diferencia entre el valor esperado de los resultados de prueba y un valor de referencia aceptado

Nota: El sesgo es el error sistemático total en contraste con el error aleatorio. Puede existir uno o más
componentes del error sistemático que contribuyen al sesgo. Una mayor diferencia sistemática con respecto
al valor de referencia aceptado se refleja por un valor de sesgo mayor.

Caracteriza al error sistemático en un procedimiento analítico dado y es la desviación (positiva o negativa) de

la media de los resultados analíticos con respecto al valor verdadero (conocido o aceptado).

5.1.26 Validación
Confirmación, a través del examen y el aporte de evidencias objetivas, de que se cumplen los requisitos
particulares para un uso específico previsto.

5.1.27 Verificación:
Confirmación mediante la aportación de evidencia objetiva de que se han cumplido los requisitos específicos.
 6. Procedimiento

Seleccionar los
parámetros a validar

Elaborar protocolo

Realizar la validación

Elaborar informe

7.1 Diseño del estudio.

7.1.1 Selección de los parámetros

El responsable/técnico de laboratorio debe seleccionar los parámetros a evaluar según el tipo de estudio a
realizar:

- Para métodos fisicoquímicos

- Para métodos biológicos

7.1.2 Elaboración del protocolo.

Una vez seleccionado los parámetros, el Jefe de Sección deberá de elaborar el protocolo de validación.
7.2 Realización del estudio.

Una vez aprobado el protocolo de validación, se procederá a realizar la validación.

7.3 Elaboración del informe.

Con la información recopilada durante el estudio, el Jefe de Sección, procede a elaborar el informe

7.4 Historial de cambios

Especificar la edición y actualizaciones o modificaciones realizadas

8.0 Registro de difusión

Crear un registro de difusión del procedimiento

Redactado por: Firma y fecha

Revisado por: Firma y fecha
Nombre del Laboratorio
 Formato de Informe de validación.

 ENCABEZADO DE PRIMERA Y SIGUIENTES PAGINAS:

Primera página

[NOMBRE DEL LABORATORIO]

INFORME DE VALIDACIÓN DE [NOMBRE DEL ENSAYO]

Revisado por: Identificación Protocolo

Aprobado por: Fecha aprobación Página 12 de

16

Donde:

 [Nombre del laboratorio]: Colocar el nombre del laboratorio.

 [Tipo de estudio]: Validación.
 [Nombre del ensayo]: Nombre del método según se establece en el sistema de calidad.
 Protocolo utilizado: Colocar número del protocolo utilizado para realizar la verificación o validación
del método.

Páginas subsecuentes

Informe de validación Aprobación Página X de Y

 CONTENIDO DEL INFORME

1. Alcance de la validación.

Nombre del método : Nombre completo del ensayo

Tipo de método : Si es método normalizado, no normalizado, modificado o desarrollado.
Referencia: Nombre de la referencia del método.
Parámetros evaluados : Basados en la bibliografia

2. Matriz validada
Ejemplo:

 Tipo de evidencia: tabletas, jarabe, polvo, etc.

3. Responsables de la validación/verificación

Cargo Nombre

4. Resultados analíticos.
Presentar los resultados de lecturas o mediciones de cada muestra procesada.

5. Resultados estadísticos.
Presentar los datos estadísticos obtenidos a partir de los resultados de las muestras. Hacer referencia al
equipo o programa utilizado para hacer los cálculos.

6. Interpretación de resultados
Colocar la interpretación de los parámetros de aceptación establecidos.

7. Conclusión
La conclusión debe de contener un resumen de los aspectos positivos y negativos detectados durante el
estudio.

Debe de hacer referencia a la interpretación de los resultados y si aplica, a la comparación entre analistas.

Debe de hacer referencia a las personas que pueden realizar el método en base a los resultados
establecidos.

8. Aptitud del método.

El [Nombre del método] es apto para la [actividad] en [nombre de la matriz] ya que los resultados obtenidos
se encuentran dentro de los criterios de aceptación.

Los técnicos: [Nombre, cargo] se encuentran aptos para realizar este método.

FIN DEL INFORME

. PARAMETROS PARA LA VALIDACIÓN O VERIFICACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUIMICOS

Métodos normalizados

Parámetros Identificación Cuantificación de Cuantificación de Evaluación de

componentes componentes características
mayoritarios.** minoritarios o establecidas*
impurezas en
trazas**
Selectividad/especificidad Si + + +
Estabilidad analítica de la + + + +
muestra
Linealidad del sistema No Si Si +
Linealidad del método No + + +
Rango No + + +
Exactitud No Si Si +
Repetibilidad No Si Si Si
Precisión intermedia No Si Si Si
Reproducibilidad No ++ ++ ++
Límite de detección + No No No
Límite de cuantificación No + + +
Robustez + + + +
+ Puede o no requerirse, dependiendo de la normativa de referencia o la naturaleza del análisis.

++Dependerá de la disponibilidad del laboratorio.

* En esta categoría se hace alusión a procesos previos a la cuantificación (ej: dilución, liberación de analitos,
etc.), el método usado para la cuantificación (cuando aplique) se validará de acuerdo a columnas 2 ó 3.

Métodos normalizados modificados o no normalizados.

Parámetros Identificación Cuantificación de Cuantificación de Evaluación de

componentes componentes características
mayoritarios.** minoritarios o establecidas*
impurezas en
trazas**
Selectividad/especificidad Si + + +
Estabilidad analítica de la + + + +
muestra
Linealidad del sistema No Si Si +
Linealidad del método No Si Si +
Rango No Si Si +
Exactitud No Si Si +
Repetibilidad No Si Si Si
Precisión intermedia No Si Si Si
Reproducibilidad No ++ ++ ++
Límite de detección + No No No
Límite de cuantificación No + Si +
Robustez + + + +
+ Puede o no requerirse, dependiendo de la normativa de referencia o la naturaleza del análisi o de las
modificaciones que se le hagan al método.

++Dependerá de la disponibilidad del laboratorio.

* En esta categoría se hace alusión a procesos previos a la cuantificación(ej: dilución, liberación de analitos,
etc), el método usado para la cuantificación(cuando aplique) se validará de acuerdo a columnas 2 ó 3.

Métodos desarrollados/internos

Parámetros Identificación Cuantificación de Cuantificación de Evaluación de

componentes componentes características
mayoritarios.** minoritarios o establecidas*
impurezas en
trazas**
Selectividad/especificidad Si Si Si +
Estabilidad analítica de la Si Si Si +
muestra
Linealidad del sistema No Si Si +
Linealidad del método No Si Si +
Rango No Si Si +
Exactitud No Si Si +
Repetibilidad No Si Si Si
Precisión intermedia No Si Si Si
Reproducibilidad No ++ ++ ++
Límite de detección Si No + No
Límite de cuantificación No + Si +
Robustez + Si Si +
+ Puede o no requerirse, dependiento de la normativa de referencia o la naturaleza del análisis.

++Dependerá de la disponibilidad del laboratorio.

* En esta categoría se hace alusión a procesos previos a la cuantificación(ej: dilución, liberación de analitos,
etc), el método usado para la cuantificación(cuando aplique) se validará de acuerdo a columnas 2 ó 3.
Métodos normalizados modificados, no normalizados o métodos desarrollados/internos

Parámetros Método cuantitativo Método Método cualitativo

Semi cuantitativo
Coeficiente de variación (CV) Si Si
Repetibilidad Si Si
Reproducibilidad Si Si
Exactitud Si Si
Límite de detección Si
Desviación Positiva (DP) Si
Desviación Negativa(DP) Si
Robustez Si