B O L E T I N D E L A S O C I E DA D E S PA Ñ O L A D E

Cerámica y Vidrio
A R T I C U L O

Aplicación de un material vitrocerámico

a la biorremediación de metales pesados
A. M. GARCÍA1, J. M. VILLORA2, D. A. MORENO1, C. RANNINGER1, P. CALLEJAS2, M. F. BARBA2
1
Universidad Politécnica de Madrid, Dto de Ingeniería y Ciencia de los Materiales, Esc. Téc. Superior de Ingenieros Industriales, Madrid (España)
2
Instituto de Cerámica y Vidrio, CSIC, Kelsen s/n, Campus de Cantoblanco. Madrid (España)

En este trabajo se elaboró un material vitrocerámico conteniendo la fase de hidroxiapatita, partiendo de residuos industriales y urbanos.
Sobre la superficie del material se desarrollaron biopelículas de los microorganismos que aparecen habitualmente en las aguas residuales.
Se hicieron ensayos de retención usando distintos metales pesados para evaluar la capacidad del material de eliminar tales elementos de
un medio acuoso en presencia y ausencia de la biopelícula. Los resultados ponen de manifiesto la participación microbiana en los procesos
de eliminación de los metales pesados del medio acuoso y ofrecen la posibilidad de utilizar el material vitrocerámico en un proceso de
biorremediación de aguas contaminadas por metales pesados.

Palabras clave: Biorremediación, biopelícula, microorganismo, metal pesado, material vitrocerámico.

Aplication of glassceramic material to the bioremediation of heavy metals

In this study, a glassceramic material with hydroxyapatite phase was manufactured from industrial and urban wastes. On this material,
biofilms from the microorganisms usually appearing in wastewater were developed. Batch assays were made using different heavy metals
to analyze glassceramic material capacity to retain these elements from an aqueous medium in biofilm presence and absence. The results
suggest that microorganisms are implicated in the removing of heavy metals from the aqueous medium and open the possibility to use the
glassceramic material in a bioremediation process.

Keywords: Bioremediation, biofilm, microorganism, heavy metal, glassceramic material.

1. INTRODUCCIÓN 2. MATERIAL Y MÉTODOS

Durante los últimos años, la toxicidad y el potencial bioacumulativo

2.1. Material vitrocerámico
de los metales pesados han desencadenado gran interés por
desarrollar métodos que faciliten su eliminación del medio ambiente. Se elaboró un material vitrocerámico (Figura 1) dentro del sistema
La mayoría de los procesos químicos que se emplean actualmente SiO2-P2O5-CaO-Al2O3-X2O (X: elemento alcalino) a partir de residuos
para su tratamiento resultan muy caros y poco específicos (1,2) por industriales y urbanos (casco de vidrio, harina de huesos de animales,
lo que se ha empezado a considerar la capacidad natural de muchos tierra de diatomeas utilizadas y desechadas de la industria cervecera,
microorganismos de capturar y eliminar los metales pesados (3), lodos de la industria papelera, feldespatos y dolomitas que no cumplen
proceso conocido como biorremediación. La mejor forma de explotar especificaciones para cerámica blanca). Se prepararon probetas porosas
esta capacidad microbiana es inmovilizando los microorganismos en de dimensiones 35 x 15 x 3 mm por el método de la esponja polimérica
forma de biopelícula sobre un soporte adecuado en un biorreactor, (9). La composición química del material es 14% de P2O5, 28% de CaO,
lo que permite retenerlos con baja tasa de crecimiento y aumentar su 50% de SiO2, 2% de óxidos alcalinos, 5% de Al2O3 y restos minoritarios
concentración (4). El soporte ideal es aquel con gran superficie por de MgO y Fe2O3. Por difracción de rayos X, se detectaron fases
unidad de volumen, barato, de alta durabilidad y que no se colapse cristalinas de hidroxiapatita y en menor proporción otros fosfatos
fácilmente. Los materiales vitrocerámicos, aparte de reunir todas de calcio, tridimita, silicatos de calcio y fosfosilicatos de calcio, que se
estas características, presentan una elevada estabilidad química y forman por reacción química durante el tratamiento térmico.
termodinámica que permite regenerarlos elevando la temperatura lo
suficiente para quemar la materia biológica (5,6), por lo que resultan
2.2. Microorganismo
una alternativa bastante atractiva en este sentido. Además, se ha
comprobado su capacidad en la retención de metales pesados del El microorganismo empleado en este estudio se aisló de una
agua (7,8). muestra de agua residual tomada de la laguna de estabilización de la
En este trabajo se desarrolló un material vitrocerámico del sistema estación depuradora de La Poveda (Arganda del Rey, Madrid). Tras
SiO2-P2O5-CaO-Al2O3-X2O (X: elemento alcalino) a partir de materias extraer su material genético y secuenciar el gen que codifica para el
primas alternativas. Sobre su superficie se desarrollaron biopelículas ADN ribosómico de la subunidad 16S (16S rDNA), se comparó con
de los microorganismos que aparecen en las aguas residuales. Se las secuencias depositadas en las bases de datos del EMBL (European
realizaron ensayos de retención de metales pesados usando distintas Molecular Biology Laboratory) y NCBI (Nacional Center for Biotechnology
concentraciones de cadmio y plomo para evaluar la capacidad del Information). El microorganismo seleccionado resultó ser una bacteria
material de retener dichos elementos de un medio acuoso en presencia entero-hemorrágica, Escherichia coli 0157:H7 (99% de homología con el
y ausencia de la biopelícula microbiana. microorganismo con número de acceso AE005607).

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2.3. Crecimiento de microorganismos en presencia de metales pesados

Para conocer la capacidad de desarrollo de E. coli en presencia de

metales pesados se estudiaron sus curvas de crecimiento a diferentes
concentraciones de cadmio y de plomo (10 mg/L y 100 mg/L de cadmio
y de plomo, por separado y conjuntamente) en medio líquido TSB
(Tryptone Soya Broth, CM 129 Oxoid). Estos elementos se suministraron
en forma de nitratos para evitar el empleo de ácido nítrico, que podría
afectar al pH del medio. En todos los casos se preparó una solución
patrón con una concentración de 1000 mg/L, a partir de la cual se
consiguieron las concentraciones de metales pesados deseadas, y se
midió el pH de las soluciones comprobando que se encontraban en
torno a un pH neutro. La concentración de metales pesados en el medio
de cultivo se analizó por ICP-OES (espectrometría de emisión atómica
con fuente con plasma de acoplamiento inductivo).
Los cultivos de E. coli en TSB se incubaron a 30 ºC y se tomaron
muestras periódicamente para hacer diluciones seriadas en solución
salina estéril (9g/L NaCl en agua destilada) y siembra en placas de
TSB (Tryptone Soya Agar, CM129 Oxoid supplemented with Agar
(UPS) purissimen, Panreac) para recuento del número de unidades
formadoras de colonia por mL (UFC/mL). Figura 1. Estructura del material vitrocerámico por Microscopía
Electrónica de Barrido (SEM).
2.4. Desarrollo de biopelículas sobre el material vitrocerámico
tipo Echelle, dispersión cruzada por prisma y un mecanismo de inyección
Con el fin de evaluar la capacidad del microorganismo seleccionado de carga (CID) como detector de estado sólido por lo que se pueden
de desarrollarse sobre la superficie del material vitrocerámico y realizar análisis de varios elementos simultáneamente.
formar biopelículas se tomó un inóculo de 106 células/mL, obtenido
de un cultivo de 24 h en TSB, y se puso en contacto con la probeta
2.7. Microscopía Electrónica de Barrido (SEM)
paralepípeda de material vitrocerámico, previamente esterilizada
en autoclave, en medio líquido TSB. Tras 24 h a 30 ºC, se sacaron las Las probetas de material vitrocerámico de los diferentes ensayos,
probetas del medio de cultivo, se lavaron dos veces con agua destilada se fijaron en glutaraldehído al 2,5% (V/V) en cacodilato sódico 0,01M
estéril para eliminar los microorganismos planctónicos no adheridos a durante 3 horas a 4 ºC. A continuación, se deshidrataron mediante
la superficie del material y se prepararon las probetas para su estudio inmersión en una serie acetónica creciente (20%, 40%, 60%, 80% y
por Microscopía Electrónica de Barrido (SEM). 100%) de 30 minutos cada una a 4 ºC. Posteriormente, se prepararon las
probetas por punto crítico (Balzers Union CPD 020) y se metalizaron
2.5. Ensayos de retención de metales pesados con oro (Balzers Union SCD 004) para ser observadas por SEM (Zeiss
DSM 960) a 15 keV en modo de electrones secundarios.
Se colocaron probetas de material vitrocerámico, colonizadas
durante 24 h por un cultivo estandarizado (106células/mL) de E.
3. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
coli, en medio líquido TSB con diferentes concentraciones de los
metales pesados en estudio (10 mg/L Cd y 10 mg/L Pb por separado
3.1. Crecimiento del microorganismo en presencia de metales pesados
y conjuntamente). Se incubaron a 30 ºC durante 10 h, tiempo
estimado en el que se alcanza la fase estacionaria de crecimiento En la Figura 2 pueden observarse las curvas de crecimiento de
del microorganismo, agitándose suavemente cada hora para E. coli en presencia de las distintas concentraciones de los metales
homogeneizar los metales pesados de la solución. Transcurrido este pesados en estudio. Tanto a 10 mg/L como a 100 mg/L de cadmio
periodo, se sacaron las probetas del medio de cultivo, se lavaron dos y de plomo por separado y conjuntamente, muestra un crecimiento
veces con agua destilada estéril y se prepararon para su análisis por exponencial hasta aproximadamente las 8 h del cultivo, momento
SEM. El medio de cultivo se esterilizó en autoclave para eliminar los en el que alcanza la fase estacionaria de crecimiento que se mantiene
posibles microorganismos planctónicos y se analizó por ICP-OES para durante las 30 h de duración del ensayo. Aunque a 100 mg/L se
determinar la concentración de metales pesados en el medio. observa un desarrollo microbiano algo menor, no existe inhibición
El mismo ensayo se realizó sin la adición del inóculo bacteriano del crecimiento por la presencia de los metales pesados. Puede decirse
para poder comparar la retención de metales pesados por el material que el microorganismo cuenta, por tanto, con la capacidad de resistir
en presencia y en ausencia de la biopelícula microbiana y determinar altas concentraciones de los citados metales, (concentraciones bastante
así la influencia de ésta en la inmovilización de los metales. más elevadas de las que normalmente aparecen en la depuradora de
La Poveda) los cuales resultan tóxicos para otros microorganismos
(10). Estudios previos (11) ponen de manifiesto que en la resistencia
2.6. Espectrometría de emisión atómica por fuente de plasma de
de E. coli a estos metales pesados se encuentran implicadas dos
acoplamiento inductivo (ICP-OES)
enzimas superoxido dismutasas (Fe-SOD y Mn-SOD) que protegen
La concentración de metales pesados de las diferentes soluciones se al microorganismo del estrés oxidativo provocado por los metales.
midió en un espectrómetro Thermo Jarrell Ash modelo IRIS ADVANTAGE Asimismo, Grimaud y cols. (12) han identificado una nueva enzima,
con sistema de visualización axial y óptica auxiliar para una visión radial, metionina sulfóxido reductasa B (Msr B), que junto con la ya conocida
con una fuente de radiofrecuencia de 40,68 MHz y red de difracción del MsrA contribuirían a la resistencia de E. coli al cadmio.

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3.2. Desarrollo de biopelículas sobre el material vitrocerámico

Cuando se analizó la capacidad de E. coli de formar biopelículas

sobre el material vitrocerámico en estudio, se observó que el
microorganismo se desarrolla perfectamente sobre la superficie de las
probetas (Figura 3). A las 10 horas puede observarse por SEM colonias
bacterianas adheridas a las irregularidades del material, que van
uniéndose entre sí a través de sustancias poliméricas extracelulares
(EPS) y a las 24 h se detectan auténticas biopelículas. Este es un
mecanismo que permite a los microorganismos formar una matriz en
la que quedan embebidos junto con otras sustancias, como nutrientes,
y que les permite protegerse de factores externos adversos como por
ejemplo la toxicidad producida por los metales pesados (13).

3.3. Ensayos de retención de metales pesados

El desarrollo de E. coli sobre la probeta de material vitrocerámico

y en presencia de los metales pesados se observó por SEM. Este
microorganismo hace que aumente notablemente la cantidad de metal
pesado retenido sobre el material, de forma que el cadmio retenido
pasa de un 6% cuando el material está estéril a un 98% cuando está
colonizado por E. coli y el plomo de un 17% a un 39%, respectivamente.
Cuando ambos metales se encuentran simultáneamente en el medio de
cultivo, se observa también un aumento considerable en la eliminación
de metales del medio por los microorganismos, pero mientras que la
cantidad de Cd retenida es similar a lo que ocurría cuando el elemento
se encontraba en solitario (96%), en el caso del Pb se retiene mucha
mayor cantidad (58%) cuando también está presente el Cd (Tabla 1),
lo que pone de manifiesto las interacciones entre los iones metálicos.
Low y cols. (14) en un estudio de biosorción de cadmio y plomo en una
solución acuosa detectaron también esta mayor afinidad del plomo
Figura 2. Curvas de crecimiento de E. coli en presencia de metales
por unirse a los sitios de unión de la superficie bacteriana cuando
pesados. A: Crecimiento en presencia de una concentración
ambos metales se encuentran juntos. de metales de 10 mg/L. B: Crecimiento en presencia de una
concentración de metales de 100 mg/L.
Tabla I. Ensayos de retención de metales. Concentración de
metales pesados, en mg/L, medidos por ICP-OES en las distintas
soluciones. Control: Solución inicial, tras la adición de 10 mg/L
del metal. Material: Solución tras el ensayo con el material
vitrocerámico en ausencia de microorganismos. Biopelícula:
Solución tras el ensayo con el material vitrocerámico previamente
colonizado por un cultivo de 24 h de E. coli.

Ensayo Elemento Control Material Biopelícula

10 mg/L Cadmio Cd 9,06 8,52 0,15

10 mg/L Plomo Pb 9,69 7,99 5,92

10 mg/L Cadmio + 10 mg/L Cd 9,32 8,61 0,36

Plomo Pb 9,73 7,91 4,07

4. CONCLUSIONES

El material vitrocerámico que se ha desarrollado en este trabajo

constituye un filtro biológico ideal pues no sólo permite el desarrollo
de los microorganismos sobre su superficie, sino que además es capaz
de retener metales pesados por sí mismo. Conviene resaltar que se
trata de un material desarrollado a partir de residuos industriales
y urbanos por lo que contribuye al reciclado (casco de vidrio) y
reducción de otros tipos de residuos (lodos de industrias papeleras,
residuos de industria cervecera, etc.) además de los metales pesados.
Aparte de la retención de los metales pesados en el material Figura 3. Cultivo de 24 horas de E. coli sobre material vitrocerámico.
vitrocerámico, se están produciendo fenómenos de inmovilización Micrografía de SEM.

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de metales por la acción microbiana a través de diferentes M. Sanz de Tosetti. “Removal of cadmium and lead from dilute aqueous
solutions by Rhodotorula rubra. Bioresource Technology”. 72, 107-112. (2000).
mecanismos como pueden ser la biosorción, bioacumulación,
3. H. Eccles. “Treatment of metal-contaminated wastes: why select a biological
bioprecipitación, etc. Todos estos mecanismos se engloban dentro process?” Trends in Biotechnology. 17, 462-465. (1999).
del término biorremediación, que en este caso particular implica 4. G.M. Gadd. “Bioremedial potencial of microbial mechanisms of metal
el aprovechamiento de la capacidad microbiana para reducir mobilization and Immovilization”. Current Opinion in Biotechnology. 11, 271-
279. (2000).
y/o eliminar la toxicidad de los metales pesados de una solución
5. M. Romero, J. Ma. Rincón. “Glass-Ceramics as building materials”. Mater.
contaminada mediante la reducción de su concentración en el medio. Construcc. 46, 91-106 y 242-243, (1996)
En estos procesos las sustancias poliméricas extracelulares (EPS) de 6. M. Romero, J. Ma. Rincón. “The controlled vitrification/crystallization
la biopelícula desempeñan un papel muy importante, pues tienen process to the recycling of inorganic wastes”. Bol. Soc. Esp. Ceram. V., 39 (1)
155-163 (2000).
multitud de sitios de unión para los metales pesados (15). 7. K.S. TenHuisen, P.W Brown. “Phase evolution during the formation of
Los resultados de este trabajo suponen una contribución a los tricalcium phosphate”. Journal of the American Ceramic Society. 82 (10) 2813-
estudios de biorremediación de metales pesados de medios acuosos, 2818. (1999).
poniendo de manifiesto la participación microbiana en la eliminación 8. M-P. Ginebra, E. Fernández, F.C.M. Driessens, J.A. Planell. “Modelling of the
hydrolysis of tricalcium phosphate”. Journal of the American Ceramic Society.
de los metales pesados mediante la formación de biopelículas y abren 82 (10) 2808-2812. (1999).
la posibilidad de utilizar el material vitrocerámico elaborado como 9. J.M. Villora, P. Callejas, M. F. Barba. “Métodos de síntesis y comportamiento
soporte en un proceso de biorremediación de aguas contaminadas por térmico del hidroxiapatito”. Bol. Soc. Esp.Ceram.V., 41 (5) 443-450 (2002).
10. J. Llanos, C. Capasso, E. Parisi, D. Prieur, C. Jeanthon. “Susceptibility
metales pesados.
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thermophilic microorganisms isolated from deep-sea hydrothermal vents”.
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Aceptado: 30.11.03

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