Calculos en Cromatografía PDF

UNIVERSIDAD DEL ATLÁNTICO - FACULTAD DE CIENCIAS BÁSICAS - DEPARTAMENTO DE QUÍMICA
CÁLCULOS EN
CROMATOGRAFÍA
Profesor: Cristóbal Caicedo M.
1
• “La Química Analítica es la ciencia de la

producción e interpretación de señales”
Erno Pugno.
Señal = CROMATOGRAMA
• Tres datos importantes del Cromatograma:

1. Tiempo de retención
2. Tamaño del pico
3. Forma del pico 2
EL DETECTOR
• El detector cromatográfico es un dispositivo
que mide la concentración de cada uno de
los componentes de la muestra y genera una
señal eléctrica proporcional a dicha
concentración.
3
Análisis Cualitativo
El análisis cualitativo por Cromatografía se

refiere a la comparación de los datos de
retención de una muestra problema con los de
una muestra conocida o estándar.
4
Análisis Cualitativo
Técnicas:
1. Datos de retención (tiempo de retención)
2. Logaritmo de tiempo de retención
3. Índice de retención (Indice de Kovats).
4. Técnicas acopladas.
5
Análisis cualitativo:
1. tiempo de retención
Estándar Muestra
6
2. logaritmo del tiempo de retención
7
3. índice de retención
• El índice de retención de Kovats es un
método que ayuda a confirmar la estructura
de una molécula orgánica.
log tR'  x   log tR'  n 

I X  100n  100
log tR'  N   log tR'  n 
8
Índice de retención de Kovats.
9
Índices de retención de kovats
10
2. logaritmo del tiempo de retención
log tR'  log(tR ( n )  t0 )  a.n  b
11
Ejemplo:
• Los siguientes tiempo de retención
ajustados (tR’) en minutos, fueron medidos
en un cromatograma: n-hexano 0.84,
ciclohexano 1.46, n-heptano 1.57, tolueno
1.83 y n-octano 3.08. Calcule el Indice de
Kovats para el ciclohexano y para el
tolueno.
12
Solución
log tR'  x   log tR'  n 
I X  100n  100
log tR'  N   log tR'  n 
• Para ciclohexano:
log1.46  log0.84
I X  100  6  100  688
log1.57  log0.84
• Para tolueno:
log1.83  log1.57
I X  100  7  100  723
log3.08  log1.57
13
4. técnicas acopladas
• GC – MS, HPLC-MS
• GC – IR, HPLC-IR.
14
DATOS DE RETENCIÓN.
Algunos factores pueden afectar el tiempo de

retención de los componentes:
• Control de la temperatura.
• Flujo de fase móvil.
• Tamaño de la muestra.
15
Análisis Cuantitativo
16
Para responder a la pregunta ¿Cuánto hay? a
partir de la información suministrada en el
cromatograma, la cromatografía se apoya
en el principio de que el tamaño del pico
cromatográfico (área) es proporcional a
la cantidad de sustancia.
17
Los conceptos básicos que se usan en la
determinación del tamaño (área) del pico
son:
Medida de la altura del pico
Medida del área del pico
La relación entre estas dos magnitudes y la
cantidad de componentes en la muestra.
18
El tamaño (área) de los picos se pueden
medir por:
Métodos manuales
Integración automática (integradores
mecánicos ó eléctricos)
19
Integradores:
Como la Cromatografía exige la realización
rápida de medidas de áreas, se ha
fomentado el desarrollo de métodos de
integración automática, que son los
preferidos por su rapidez y precisión.
20
Métodos de análisis cuantitativos:
1. Normalización de áreas (Normalización
interna)
2. Estandarización interna (calibración
relativa).
3. Estandarización externa (calibración
absoluta)
21
1. Normalización interna
• Por normalización interna o normalización
de áreas, se entiende el cálculo de la
composición porcentual de la mezcla,
mediante la medición del área de cada pico
referida al área total de los picos:
Ai
pi  x100
 Ai
22
1. Normalización interna
 La aplicación de este método supone dos
situaciones:
1. En el cromatograma se encuentran
registrados los picos de todos los
componentes de la muestra problema, por
lo tanto la suma de sus áreas es 100.
2. La respuesta del detector a todos los
componentes de la muestra es la misma.
23
Ejemplo:
• Calcular el % en peso de cada componente
de una mezcla de n-hexano, n-heptano, n-
undecano y n-tetradecano, si un
cromatograma de la mezcla dio los
siguientes valores de área de los picos:
3260, 4680, 7380 y 8490 unidades de área,
respectivamente.
24
Solución:
areas  3260  4680  7380  8490  23810
3260
%C6   100  13.69%
23810
%C7  19.66%
%C11  30.99%
%C14  35.65%
25
Normalización interna:
factor de respuesta.
• Factor de corrección: F (o factor de
respuesta).
Cx
Fx 
Ax
FA
pi  i i x100
 Fi A i
26
Normalización interna
• En la práctica se registran cromatogramas
de una mezcla patrón que contiene un peso
wi de cada componente que da lugar a un
área Ai
wi Ai
Fi  
 wi  Ai
27
Normalización interna
• Ejemplo:
• Supongamos el ejemplo anterior que es una mezcla de 4
hidrocarburos: C6, C7, C11 y C14 y cuya composición
porcentual queremos calcular:
• En primer lugar se prepara un estándar por adición de

pesos conocidos de los componentes C6, C7, C11 y C12
puros, se calcula su porcentaje en peso y luego se corre el
cromatograma y se registra el área de cada pico según los
datos siguientes.
28
ESTÁNDAR
Comp. Peso(g) Área del %Peso %Área %Peso- Factor de
pico área respuesta
(F)
C6 0.3786 4231 21.74 22.41 0.005138 1.000
C7 0.4692 5087 26.94 26.94 0.005296 1.031
C11 0.5291 5691 30.38 30.14 0.005338 1.039
C14 0.3648 3872 20.94 20.51 0.005408 1.053
Total 1.7414 18881 100.00 100.00
29
• Ahora se inyecta la muestra problema y se

obtiene el cromatograma, el cual registra las
áreas de los picos, según los datos
siguientes:
30
MUESTRA
Comp. Área del pico Factor de respuesta Área x F %Peso
(F)
C6 3260 1.000 3260.00 13.20
C7 4680 1.031 4825.08 19.54
C11 7380 1.039 7667.82 31.05
C14 8490 1.053 8939.97 36.20
Total 23810 _______ 24692.87 100.00
31
Otro ejercicio:
• Calcular el % en peso de cada componente para una
mezcla de alcoholes n-butílico, iso-butílico, sec-
butílico y ter-butílico, de cuyo cromatograma se
obtuvieron las siguientes áreas de picos: 1.731, 3.753,
2.845 y 1.117 cm2.
• Para la obtención del factor de respuesta se
inyectaron las siguientes cantidades de patrones y se
obtuvieron de los cromatogramas las áreas
relacionadas a continuación: n-butílico 0.1731g,
3.023 cm2; iso-butílico 0.1964g, 3.074 cm2; sec-
butílico 0.1514g, 3.112 cm2 y ter-butílico 0.1826g,
3.004 cm2.
32
EJEMPLO DE APLICACIÓN
• En una separación por CG, se prepararon
estándares cuya composición y áreas
obtenidas del ensayo cromatográfico, fueron
las siguientes, en el orden de aparición en el
cromatograma:
• Pico 1: 20.5 g/100 mL, 10580 unidades
33
• El ensayo cromatográfico de la muestra,

mostró las siguientes áreas:
Pico 1: 10477 unidades
• Calcular la composición porcentual de la
muestra por normalización interna.
34
2. Estándar Interno
• El método del estándar interno consiste en agregar

a la mezcla problema una cantidad conocida de
una sustancia que sirve de patrón interno y se
determina la relación de las áreas
(muestra/patrón).
35
2. Estándar Interno
• Con los datos de las áreas de los picos expresados

en el cromatograma y conociendo los pesos de la
muestra y del estándar, se puede determinar el
factor de respuesta o factor de corrección y el
porcentaje de un componente determinado en la
muestra problema.
36
Estándar Interno
37
• En el ejemplo anterior: supóngase que solo

el hidrocarburo C11 es el compuesto de
interés y que la muestra problema no
contiene C6.
38
Estandarización Interna
Comp. Peso (g) Área Relación de Relación de F= Relación
peso C11/EI área C11/EI área/Relació
n peso
C6 (EI) 0.3786 4231
1.398 1.345 0.962
C11 0.5291 5691
39
• Se observa que el factor F es:

A C11
A EI
F 
WC11
WEI
C11: solución patrón

EI: estándar interno
40
• Se observa que:
WC11 A C11
 F
WEI A EI
41
• Como el peso del estándar interno es

conocido, el peso de C11 en la muestra
puede ser calculado:
A C11.WEI
WC11  F
A EI
y como el peso de la muestra es conocido:
WC11
%C11  x100
Peso de la muestra
42
Ejemplo:
• Suponga que 100 mg de un estándar interno,
se adicionan a 1.00 g de la muestra que
contiene tres componentes. El cromatograma
muestra las áreas (en unidades arbitrarias)
para los componentes y el estándar en el
siguiente orden: A1: 2700, AEI: 8000, A2:
2000, A3: 7000 y la suma de las áreas: 19700.
¿Cuál será la cantidad del componente 3 en la
muestra?
43
Solución:
 A3 
W3  WEI  
 EI 
A
 7000 
W  100 mg    87.5mg
 8000 
 87.5 mg 
% del componente 3     100  8.75%
 1000 mg muestra 
44
Ejemplo:
• Se quiere determinar por CG el contenido de etanol en una
muestra farmacéutica líquida que contiene una mezcla de
sulfas. Para realizar el análisis se prepararon las siguientes
soluciones (v/v):
• Estándar Interno (EI): acetonitrilo al 2%
• Solución patrón de etanol (SP): al 1.99%
• Solución Estándar (SE): 10 mL SP de etanol + 10 mL de
EI aforados a 100 mL.
• Muestra: 40 mL de la muestra farmacéutica + 10 mL de
EI aforados a 100 mL.
• Se inyectó 1 μL en el CG. Detector: FID. Columna capilar
de carbowax, 30m x 0.25mm x 0.25 μm.
• Ti: 150°C, Td: 150°C, Tc: 60°C.
45
Ejemplo:
• Resultados experimentales:
Área de EtOH Ärea EI

Estándar 87153 86290
Muestra 20418 85190
• Calcular el contenido de etanol en la muestra en % (v/v).
46
Solución:
• Determinación del factor de respuesta.
Área de EtOH Ärea EI rel . A rel. C F

87153 86290 1.01 0.995 1.015
• Determinación del contenido de alcohol:
Área EtOH Área EI rel. A % EtOH % v/v final

20418 85190 0.240 0.048 0.122
47
Ejemplo:
• Resultados experimentales:
• Solución estándar:
Área de EtOH Ärea EI
87153 86290
81210 78844
86500 84804
• Muestra Farmacéutica:
Área EtOH Área EI
20418 85190
24512 102133
19820 82928
• Calcular el contenido de etanol en la muestra en % (v/v). 48

• El método del estándar interno requiere de

patrones de referencia y del uso de otra
sustancia, el estándar interno, cuya pureza
no tiene que ser tan controlada como la del
patrón de referencia, pero debe cumplir
algunos requisitos.
49
REQUISITOS PARA EL
ESTÁNDAR INTERNO.
• El patrón interno debe cumplir las siguientes
condiciones:
1. No debe estar presente en la muestra.
2. Debe tener similitud estructural con la sustancia
que se determina.
3. Debe tener una concentración aproximada a la
sustancia que se determina.
4. Debe resolverse completamente  RS  1.5 
5. Debe ser estable y químicamente inerte.
50
REQUISITOS PARA EL
ESTÁNDAR INTERNO.
6. Debe responder en forma semejante al analito
con el detector seleccionado.
7. Eluir lo más cerca posible del componente de
interés e idealmente antes del último pico de la
muestra.
8. Ser lo suficientemente no volátil para que
permita su almacenamiento y conservación
cómo estándar por un período de tiempo
significante.
51
3. Estándar externo
• Consiste en preparar estándares de

concentración semejante al analito en la
muestra y realizar la corrida cromatográfica
del estándar y de la muestra en las mismas
condiciones operativas.
52
2. Estándar externo
• La concentración del analito se determina
comparando el área del pico en cuestión con
el área correspondiente al estándar de
referencia.
Cx CS AxCS
 Cx  x100
Ax AS AS
53
Estándar externo
54
Ejercicio.
• Se quiere determinar la cantidad de cloroformo presente en
una muestra de agua que contiene trihalometanos; para ello
se inyecta en el cromatógrafo 1 uL de un estándar de
CHCl3 que contien 130 ppb de CHCl3 dando un pico con
un área de 13500 unidades. La corrida de 1 uL de la
muestra de agua, dio como resultado los siguientes datos:
• Cloroformo: 15600 ua
• Bromodiclorometano: 51300
• Dibromoclorometano: 14900
• Tribromometano: 17600
55
Ejercicio.
• La corrida de una muestra de agua potable, para
determinar presencia de trihalometanos, por CG y
la corrida de los estándares, dio los siguientes
datos:
Muestra
Estándar
Trihalometanos
Concentración (ppb) Área de pico Área de pico
CHCl3 1.30 13500 15600
CHCl2Br 0.90 61200 51300
CHClBr2 4.00 17100 14900
CHBr3 1.20 15200 17600
• Calcule la concentración de cada compuesto en la

56
mezcla.

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Profesor: Cristóbal Caicedo M.

• “La Química Analítica es la ciencia de la

• Tres datos importantes del Cromatograma:

El análisis cualitativo por Cromatografía se

log tR'  x   log tR'  n 

Índice de retención de Kovats.

Índices de retención de kovats

log tR'  log(tR ( n )  t0 )  a.n  b

Algunos factores pueden afectar el tiempo de

• En primer lugar se prepara un estándar por adición de

C6 0.3786 4231 21.74 22.41 0.005138 1.000

C7 0.4692 5087 26.94 26.94 0.005296 1.031

C11 0.5291 5691 30.38 30.14 0.005338 1.039

C14 0.3648 3872 20.94 20.51 0.005408 1.053

Total 1.7414 18881 100.00 100.00

• Ahora se inyecta la muestra problema y se

C6 3260 1.000 3260.00 13.20

C7 4680 1.031 4825.08 19.54

C11 7380 1.039 7667.82 31.05

C14 8490 1.053 8939.97 36.20

Total 23810 _______ 24692.87 100.00

• El ensayo cromatográfico de la muestra,

• El método del estándar interno consiste en agregar

• Con los datos de las áreas de los picos expresados

• En el ejemplo anterior: supóngase que solo

1.398 1.345 0.962

C11 0.5291 5691

• Se observa que el factor F es:

C11: solución patrón

• Como el peso del estándar interno es

y como el peso de la muestra es conocido:

Área de EtOH Ärea EI

• Calcular el contenido de etanol en la muestra en % (v/v).

Área de EtOH Ärea EI rel . A rel. C F

• Determinación del contenido de alcohol:

Área EtOH Área EI rel. A % EtOH % v/v final

• Calcular el contenido de etanol en la muestra en % (v/v). 48

• El método del estándar interno requiere de

• Consiste en preparar estándares de

CHCl3 1.30 13500 15600

CHCl2Br 0.90 61200 51300

CHClBr2 4.00 17100 14900

CHBr3 1.20 15200 17600

• Calcule la concentración de cada compuesto en la

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