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    Bitacora 4

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    Rodrigo Domínguez
    Este documento describe diferentes métodos para precipitar proteínas, incluyendo la adición de sales (salting out), solventes orgánicos y metales pesados. También explica cómo se puede determinar el punto isoeléctrico de una proteína midiendo su solubilidad a diferentes pHs. El objetivo es comprender los fundamentos de la precipitación de proteínas y analizar cómo factores fisicoquímicos afectan la solubilidad de proteínas.

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    Este documento describe diferentes métodos para precipitar proteínas, incluyendo la adición de sales (salting out), solventes orgánicos y metales pesados. También explica cómo se puede determinar el punto isoeléctrico de una proteína midiendo su solubilidad a diferentes pHs. El objetivo es comprender los fundamentos de la precipitación de proteínas y analizar cómo factores fisicoquímicos afectan la solubilidad de proteínas.

    Descripción original:

    Bitacora 4 Bioquímica general ENCB

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    Este documento describe diferentes métodos para precipitar proteínas, incluyendo la adición de sales (salting out), solventes orgánicos y metales pesados. También explica cómo se puede determinar el punto isoeléctrico de una proteína midiendo su solubilidad a diferentes pHs. El objetivo es comprender los fundamentos de la precipitación de proteínas y analizar cómo factores fisicoquímicos afectan la solubilidad de proteínas.

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    Instituto Politécnico Nacional

    Escuela Nacional de Ciencias Biológicas


    Bioquímica general
    Bitácora de la práctica “Precipitación, separación y
    punto isoeléctrico de proteínas”
    Domínguez Páez Rodrigo 4QV2

    Introducción
    La precipitación es un método por el cual una sustancia líquida se vuelve en un
    sólido mediante la acción de un agente precipitante. El sólido precipitado puede
    separarse de los componentes líquidos por medio de filtración, teóricamente la
    precipitación debe producir un soluto concentrado y puro.
    Los métodos de precipitación de proteínas se basan tres principios:
    • Disminución de la solubilidad: Se utilizan como agentes precipitantes sales
    como (NH₄)₂SO₄, Modificación del pH o uso de solventes.
    • Desnaturalización selectiva: La temperatura, pH y solventes son agentes
    precipitantes.
    • Afinidad: Mediante ligandos.
    Salting out: En este proceso buscamos que las interacciones entre proteínas y
    solvente se vuelvan débiles y al mismo tiempo fortalecer las interacciones entre
    proteínas para lograr precipitarlas, la adición de sales elimina el agua de que hidrata
    a la proteína permitiendo así que las regiones hidrofóbicas se combinen
    intermolecularmente entre más hidrofobicidad tiene una proteína antes precipitara.
    Precipitación por solventes: Las proteínas se mantienen en solución por la
    interacción de los grupos hidrofílicos de su superficie con el solvente Si la polaridad
    del solvente se reduce por la adición de un solvente orgánico menos polar que el
    agua, la proteína se vuelve menos soluble.
    Precipitación por metales pesados: Se lleva a cabo mediante la desnaturalización
    de proteínas, la desnaturalización ocasiona que la estructura cambie, sus
    propiedades biológicas se pierden y su solubilidad disminuye drásticamente, al
    adicionar iones metálicos estos se unen a las proteínas y provocan su
    desnaturalización
    Determinación del punto isoeléctrico: Esta técnica se basa en la disminución de
    la solubilidad en el punto isoeléctrico. Las proteínas por su naturaleza anfotérica
    presentan una carga neta negativa a pH altos y una carga neta positiva a pH bajos.
    Existe un pH llamado pH isoeléctrico al cual la carga neta de la proteína es cero. A
    este pH la molécula es incapaz de desplazarse en un campo eléctrico
    Objetivos
    Conocer diferentes métodos de precipitación de proteínas e identificar las
    aplicaciones prácticas de estos métodos.
    Comprender el fundamento de los métodos de precipitación de proteínas
    Analizar el efecto que produce la modificación de factores fisicoquímicos sobre la
    solubilidad de las proteínas. (objetivo del manual)
    Determinar el punto isoeléctrico de la insulina, basándose en sus propiedades de
    solubilidad a diferentes valores de pH. (objetivo del manual)
    Metodología

    Referencias
    Carmona Salazar, L. (s.f.). Bioquímica y Biología Molecular para la Industria. Recuperado el 9 de
    Marzo de 2020, de Facultad de química UNAM:
    http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/DiplomadoLunes1Oct_21564.pdf

    Huerta Ochoa, S. (s.f.). Principios de precipitación de proteínas. Recuperado el 9 de Marzo de 2020,


    de Universidad Autónoma Metropolitana:
    http://sgpwe.izt.uam.mx/files/users/uami/sho/Precipitacion.pdf

    Universidad Nacional Autonoma de México . (Enero de 2010). Estructura y propiedades de


    proteínas. Recuperado el 9 de Marzo de 2020, de
    https://bqexperimental.files.wordpress.com/2010/01/purificacion-salado.pdf

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