.

0 CAPÍtULO 2 Agua y pH

El agua Es un EXcElEntE

nuclEófIlo

Las reacciones metabólicas a menudo comprenden el ataque por

pares solitarios de electrones que residen sobre moléculas ricas

en electrones llamadas nucleófilos sobre átomos con pocos electrones llamados electrófilos.
Los nucleófilos y electrófilos no necesariamente poseen una carga negativa o positiva formal.
El

agua, cuyos dos pares solitarios de electrones sp3

tienen una carga negativa parcial (figura 21), es un excelente nucleófilo. Otros

nucleófilos de importancia biológica son los átomos de oxígeno

de fosfatos, alcoholes y ácidos carboxílicos; el azufre de tioles; el

nitrógeno de aminas, y el anillo imidazol de la histidina. Los electrófilos comunes son los
carbonos carbonilo en amidas, ésteres,

aldehídos y cetonas, y los átomos de fósforo de fosfoésteres.

El ataque nucleofílico por agua en forma típica origina la

división de los enlaces amida, glucósido o éster que mantienen

juntos a los biopolímeros. Este proceso recibe el nombre de hidrólisis. A la inversa, cuando
unidades de monómeros se unen

para formar biopolímeros como proteínas o glucógeno, el agua

es un producto, por ejemplo, durante la formación de un enlace

peptídico entre dos aminoácidos:

Si bien la hidrólisis es una reacción favorecida desde el punto de vista termodinámico, los
enlaces amida y fosfoéster de polipéptidos y oligonucleótidos son estables en el ambiente
acuoso de

la célula. Esta conducta al parecer paradójica refleja el heho

de que la termodinámica que rige el equilibrio de una reacción

no determina el índice al cual procederá. En las células, catalíticos proteína llamados enzimas
aceleran el índice de reacciones

hidrolíticas cuando es necesario. Las proteasas catalizan la hidrólisis de proteínas hacia los
aminoácidos que las componen,

mientras que las nucleasas catalizan la hidrólisis de los enlaces

fosfoéster en el DNA y el RNA. Se requiere control cuidadoso de

las actividades de estas enzimas para asegurar que sólo actúen

sobre moléculas blanco apropiadas en momentos apropiados.

Muchas reacciones metabólicas

comprenden transferencia de grupo

Muchas de las reacciones enzimáticas de las cuales dependen la

síntesis y desintegración de biomoléculas comprenden la transferencia de un grupo químico G

desde un donador D hacia un

aceptor A para formar un complejo de grupo aceptor, A—G:

D—G + A →→A—G + D

Por ejemplo, la hidrólisis y la fosforólisis de glucógeno comprenden la transferencia de grupos

glucosilo a agua o a ortofosfato. La

constante de equilibrio para la hidrólisis de enlaces covalentes

favorece fuertemente la formación de productos de división. Por

el contrario, en muchos casos las reacciones de transferencia de

grupo de las cuales depende la biosíntesis de macromoléculas

comprenden la formación no favorecida termodinámicamente

de enlaces covalentes. Los catalíticos de enzimas desempeñan

un papel crucial en la superación de estas barreras en virtud de

su capacidad para enlazar directamente entre sí dos reacciones

que en circunstancias normales están separadas. Al unir una reacción de transferencia de

grupo energéticamente desfavorable

con una reacción termodinámicamente favorable, como la hidrólisis de ATP, puede generarse
una nueva reacción acoplada

cuya carga general neta en energía libre favorece la síntesis de

biopolímero.

Dado el carácter nucleofílico del agua y su alta concentración en las células, ¿por qué los
biopolímeros como las proteínas

y el DNA son relativamente estables?, además, ¿de qué modo la

síntesis de biopolímeros puede ocurrir en un ambiente acuoso,

en apariencia prohidrolítico? Las propiedades de las enzimas

son fundamentales para ambas preguntas. En ausencia de catálisis enzimática, incluso las
reacciones muy favorecidas desde el

punto de vista termodinámico no necesariamente tienen lugar

con rapidez. El control preciso y diferencial de la actividad enzimática, así como el secuestro de
enzimas en organelos específicos, determinan en qué condiciones fisiológicas un biopolímero
dado se sintetizará o degradará. Los biopolímeros recién sintetizados no se hidrolizan de
inmediato, ya que los sitios activos de

enzimas biosintéticas secuestran sustratos en un ambiente del

cual es factible excluir al agua.

Las moléculas de agua muestran

una tendencia leve pero importante

a disociarse

La capacidad del agua para ionizarse, si bien es leve, tiene importancia fundamental para la
vida. Dado que el agua tiene la capacidad de actuar como un ácido y como una base, su
ionización

puede representarse como una transferencia de protón intermolecular que forma un ion
hidronio (H3

O+) y un ion hidróxido

(OH–

):

H O H O H O OH 2 2 + ++

3 →→ −

El protón transferido en realidad se relaciona con una agrupación de moléculas de agua. Los
protones existen en solución no

sólo como H3

O+, sino también como multímeros tipo H5

O2

+y

H7

O3

+. Sin embargo, el protón se representa de manera sistemática como H+, aun cuando de hecho
está muy hidratado.

Dado que los iones hidronio e hidróxido se recombinan de

manera continua para formar moléculas de agua, es imposible

declarar que un hidrógeno u oxígeno individual está presente

como un ion o formando parte de una molécula de agua. En un

instante es un ion, pero al siguiente forma parte de una molécula

de agua; de modo que no se consideran iones o moléculas individuales. En lugar de eso, se

hace referencia a la probabilidad de
que en cualquier instante en el tiempo un hidrógeno estará

02 Murray_C02.indd 10 11/15/12 12:06 PM

CAPÍtULO 2 Agua y pH 11

presente como ion o como parte de una molécula de agua. Dado

que 1 g de agua contiene 3.46 × 1022 moléculas, la ionización del

agua puede describirse de manera estadística. Declarar que la

probabilidad de que un hidrógeno exista como un ion es de 0.01

significa que, en cualquier momento dado en el tiempo, un átomo de hidrógeno tiene 1

probabilidad en 100 de ser un ion pero

99 probabilidades en 100 de formar parte de una molécula de

agua. La probabilidad real de que un átomo de hidrógeno en agua

pura exista como un ion hidrógeno es de alrededor de 1.8 × 10–9.

De este modo, la probabilidad de que forme parte de una molécula de agua es de casi la
unidad. Dicho de otra manera, por

cada ion hidrógeno y cada ion hidróxido en agua pura, hay

1.8 mil millones o 1.8 × 109

moléculas de agua. Sin embargo, los

iones hidrógeno y los iones hidróxido contribuyen de manera

importante a las propiedades del agua.

Para la disociación del agua,

K=

+ − H OH

H O2







[]

donde los corchetes representan concentraciones molares (estrictamente hablando,

actividades molares) y K es la constante

de disociación. Puesto que un mol de agua pesa 18 g, 1 litro (L)

(1 000 g) de agua contiene 1 000 ÷ 18 = 55.56 mol. Así, el agua

pura es 55.56 molar. Dado que la probabilidad de que un hidrógeno en agua pura exista como
un ion hidrógeno es de 1.8 × 10–9,

la concentración molar de iones H+ (o de iones OH–

) en agua

pura es el producto de la probabilidad, 1.8 × 10–9, veces la concentración molar de agua, 55.56
mol/L. El resultado es 1.0 × 10–7

mol/L.

Ahora es posible calcular K para el agua pura:

K==

=×=

+ H OH

HO

10 10

2 55.56

77







[]









[]

−−−

− 0 018 10 1 14 . .8 10 16 × − mol/L

La concentración molar del agua, 55.56 mol/L, es demasiado

grande como para que la disociación la afecte de manera significativa, de modo que se
considera que, en esencia, es constante.
Así, esta constante puede incorporarse en la constante de disociación K para proporcionar una
nueva y útil constante Kw (W,

de water, “agua”) llamada el producto ion para el agua. La relación entre Kw y K se muestra a
continuación:

H OH

HO

mol/L

H O H OH

w2

KK

=







[]=×

= ( )[ ] = 



1 8 10 16 .



= × ( )( )

=×(
−

mol/L mol/L

mol/L

1 8 10 55 56

1 00 10

16

14

..

.)

Note que las dimensiones de K son mol por litro y las de Kw son

mol2

por L2

. Como su nombre lo sugiere, el producto ion Kw es

igual desde el punto de vista numérico al producto de las concentraciones molares de H+ y OH

K w = H OH + 







A 25°C, Kw = (10–7)2

, o 10–14 (mol/L)2

; a temperaturas por debajo

de 25°C, Kw es un poco menor de 10–14, en tanto que a temperaturas superiores a 25°C es un

poco mayor de 10–14. Dentro de las

limitaciones declaradas del efecto de la temperatura, Kw es igual

a 10–14 (mol/L)2

para todas las soluciones acuosas, incluso soluciones de ácidos o bases. Se usa Kw para
calcular el pH de soluciones ácidas y básicas.
El pH Es El logarItmo

nEgatIvo dE la concEntracIón

dE Ion HIdrógEno

El término pH fue introducido en 1909 por Sörensen, quien lo

definió como el logaritmo negativo de la concentración de ion

hidrógeno:

pH H = − + log 



Esta definición, si bien no es rigurosa, es suficiente para muchos

propósitos bioquímicos; a fin de calcular el pH de una solución:

1. Se calcula la concentración de ion hidrógeno [H+].

2. Se calcula el logaritmo base 10 de [H+].

3. El pH es el negativo del valor que se encuentra en el paso 2.

Por ejemplo, para agua pura a 25°C,

pH H = − = − = − − = + log log  .  

 10 7 7 0 ( ) −7

Este valor también se conoce como la potencia (power [inglés],

puissant [francés], o potennz [alemán]) del exponente, de ahí el

uso de “p”.

Los valores de pH bajos corresponden a concentraciones

altas de H+, y los valores de pH altos corresponden a concentraciones bajas de H+.

Los ácidos son donadores de protones y las bases son aceptores de protones. Los ácidos
fuertes (p. ej., HCl, H2

SO4

) se

diso cian por completo hacia aniones y protones, incluso en soluciones fuertemente acídicas
(pH bajo); por su parte, los ácidos

débiles se disocian sólo en parte en soluciones acídicas. De

modo similar, las bases fuertes (p. ej., KOH, NaOH) —no así las

bases débiles (p. ej., Ca[OH]2

)— están por completo disociadas

a pH alto. Muchas sustancias bioquímicas son ácidos débiles.

Las excepciones son los intermediarios fosforilados, cuyo grupo

fosforilo contiene dos protones disociables, el primero de los

cuales es fuertemente acídico. Los ejemplos que siguen ilustran

cómo calcular el pH de soluciones ácidas y básicas.

Ejemplo 1: ¿Cuál es el pH de una solución cuya concentración de ion hidrógeno es de 3.2 × 10–
4 mol/L?

pH H = −

=×

=−−

+ log

log .

log . log



−()

()()−

3 2 10

3 2 10

3.5

=+

−0 5 4 0. .

Ejemplo 2: ¿Cuál es el pH de una solución cuya concentración de ion hidróxido es de 4.0 × 10–4
mol/L? Primero se define

una cantidad pOH que es igual a –log [OH–

] y que puede derivarse a partir de la definición de Kw:

K w = H OH = + − − 






 10 14

Por ende,

log log log H OH + − −  + =  





 10 14

o bien

pH pOH + = 14

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12 CAPÍtULO 2 Agua y pH

Para resolver el problema mediante este método:

OH

pOH OH

−−

=×

=−

=−×

=−−





()

()
4 0 10

4 0 10

40

log

log .

log . log

..

10

0 60 4 0

34

−4

=−+

()

Ahora:

pH pOH = − = −

14 14 3 4

10 6

Los ejemplos anteriores ilustran de que modo la escala

de pH logarítmica facilita la emisión de reporte y la comparación de concentraciones de ion

hidrógeno que difieren por

órdenes de magnitud de otra, esto es, 0.00032 M (pH 3.5) y

0.000000000025 M (pH 10.6).

Ejemplo 3: ¿Cuáles son los valores de pH de a) 2.0 × 10–2

mol/L KOH y de b) 2.0 × 10–6 mol/L KOH? El OH–

surge a partir

de dos fuentes: KOH y agua. Dado que el pH está determinado

por el [H+] total (y el pOH por el [OH–

] total), ambas fuentes

deben considerarse. En el primer caso, a), la contribución del

agua al [OH–

] total es insignificante; es imposible decir lo mismo para el segundo caso, b):

Concentración (mol/L)

(a) (b)

Molaridad de KoH 2.0 × 10−2 2.0 × 10−6

[oH–

] proveniente de KoH 2.0 × 10−2 2.0 × 10−6

[oH–

] proveniente de agua 1.0 × 10−7 1.0 × 10−7

[oH–

] total 2.00001 × 10−2 2.1 × 10−6

Una vez que se ha llegado a una decisión acerca de la importancia de la contribución por el
agua, es factible calcular el pH como

se mencionó.

Los ejemplos anteriores suponen que la base fuerte KOH

está por completo disociada en solución y que, entonces, la concentración de iones OH–

fue igual a la del KOH más la presente

al principio en el agua. Esta suposición es válida para soluciones

diluidas de bases o ácidos fuertes, no así para bases o ácidos débiles. Dado que los electrólitos
débiles sólo se disocian un poco

en solución, es necesario usar la constante de disociación para

calcular la concentración de [H+] (o de [OH–

]) producida por

una molaridad dada de un ácido (o base) débil antes de calcular

el [H+] total (o el [OH–

] total) y después el pH.

Los grupos funcionales que son ácidos

débiles tienen gran importancia

fisiológica

Muchas sustancias bioquímicas poseen grupos funcionales que

son ácidos o bases débiles. Los grupos carboxilo, los grupos amino y los ésteres fosfato, cuya
segunda disociación cae dentro del

rango fisiológico, están presentes en proteínas y ácidos nucleicos,

en casi todas las coenzimas y en casi todos los metabolitos intermediarios. De este modo, el
conocimiento de la disociación de

ácidos y bases débiles es básico para entender la influencia del

pH intracelular sobre la estructura y la actividad biológica. Las

separaciones basadas en carga, como la electroforesis y la cromatografía de intercambio

iónico, también se entienden mejor

en términos de la conducta de disociación de grupos funcionales.

La especie protonada (p. ej., HA o R—NH3

+) recibe la denominación de ácido, en tanto que la especie no protonada (p. ej.,

A–

o R—NH2

) es su base conjugada. De modo similar, puede

hacerse referencia a una base (p. ej., A–

o R—NH2

) y su ácido

conjugado (p. ej., HA o R—NH3

+). Los ácidos débiles representativos (columna izquierda), sus bases conjugadas (al centro) y

valores de pKa

(columna derecha) incluyen los siguientes:

R CH COOH R CH p

R CH R CH p

H CO





−
32

22

22

45

9 10

COO

NH NH

=−

=−+

33

244

64

72

HCO p

H PO HPO p

−−

.
Las fuerzas relativas de ácidos y bases débiles se expresan en función de sus constantes de
disociación. A continuación se muestran las expresiones para la constante de disociación (Ka

) para

dos ácidos débiles representativos, R—COOH y R—NH3

+.

R COOH R COO H

R COO H

R COOH

RRH



ΝΗ ΝΗ

32

−+

++







[]

Ka

RH
R=

ΝΗ

ΝΗ

[ ]





→→

→→

Dado que los valores numéricos de Ka

para ácidos débiles son números exponenciales negativos, Ka

se expresa como pKa

, donde

pK K a = − a log

Note que pKa

se relaciona con Ka

como el pH se relaciona con

[H+]. Mientras más fuerte es el ácido, más bajo es el valor de

pKa

La pKa

se usa para expresar las fuerzas relativas tanto de ácidos como de bases. Para cualquier ácido
débil, su conjugado es

una base fuerte; de modo similar, el conjugado de una base fuerte es un ácido débil. Las
fuerzas relativas de bases se expresan

en términos de la pKa
 de sus ácidos conjugados. Para compuestos polipróticos que contienen más de un protón
disociable, se

asigna un número subíndice a cada disociación, comenzando a

partir de la unidad en orden decreciente de acidez relativa. Para

una disociación del tipo

R NH R NH H   3 2

++→+

la pKa

es el pH al cual la concentración del ácido R—NH3

+ es

igual a la de la base R—NH2

A partir de las ecuaciones anteriores que relacionan la Ka

con el [H+] y con las concentraciones de ácido no disociado y su

base conjugadas, cuando

R COO R COOH  − 

=[]

02 Murray_C02.indd 12 11/15/12 12:06 PM

CAPÍtULO 2 Agua y pH 13

o cuando

[ ] R NH R NH   2 3 



=+

entonces

Ka = H+ 



De este modo, cuando las especies asociada (protonada) y disociada (base conjugada) están
presentes a iguales concentraciones,

la concentración de ion hidrógeno [H+] prevaleciente es igual

desde el punto de vista numérico a la constante de disociación,

Ka

. Si se toman los logaritmos de ambos lados de la ecuación

anterior y se multiplican por –1, las expresiones quedan como

sigue:

−=−





 log log

Dado que –log Ka

se define como pKa

y –log [H+] define al

pH, la ecuación puede reescribirse como

p pH Ka =

esto es, la pKa

de un grupo ácido es el pH al cual las especies

protonada y no protonada están presentes a concentraciones

iguales. La pKa

para un ácido puede determinarse al añadir 0.5

equivalente de álcali por equivalente de ácido. El pH resultante

será igual a la pKa

del ácido.

La ecuación de Henderson-Hasselbalch

describe el comportamiento

de ácidos débiles y amortiguadores

La ecuación de HendersonHasselbalch se deduce a continuación.

Un ácido débil, HA, se ioniza como sigue:

HA H A + − →→ +

La constante de equilibrio para esta disociación es

Ka

HA

HA = 







[]

+−

La multiplicación cruzada da

H A HA a

+−







=K[]

Se dividen ambos lados por [A–

]:

HA

Aa

+
−=

[]



Se toma el logaritmo de ambos lados:

log log

log log

HA

HA

+=

=+



[]






[]



Se multiplica todo por –1:

−



[]



− log log log H

HA

A = − − Ka

Se sustituye el pH y la pKa

para –log [H+] y –log Ka

, respectivamente; entonces:

pH p

HA

A=a−K−[]



log
La inversión del último término elimina el signo de menos

y da la ecuación de Henderson-Hasselbalch:

pH =pKa + log

A− 



[ ] HA

La ecuación de HendersonHasselbalch tiene gran valor predictivo en equilibrios protónicos. Por

ejemplo,

1. Cuando exactamente la mitad de un ácido está neutralizada, [A−] = [HA]. En estas

condiciones,

pH pK

HA a += log = pKa log = pKa +

−



][

0

Por ende, cuando la mitad de un ácido está neutralizada,

pH = pKa

2. Cuando la proporción [A−]/HA] = 100:1,

pH p
A

HA

pH K p p

aa

+=

log

log

−⎡

⎣⎤

][

+ (100/1) = + 2

3. Cuando la proporción [A−]/HA] = 1:10,

pH = Ka + log p (1/10) = pKa + −1)(

Si la ecuación se evalúa a proporciones de [A−]/[HA] que

varían desde 103

hasta 10–3 y se grafican los valores de pH calculados, el gráfico resultante describe la curva de
titulación para

un ácido débil (figura 2-5).

Las soluciones de ácidos débiles

y sus sales amortiguan cambios del pH

Las soluciones de ácidos o bases débiles y sus conjugados muestran amortiguación, la

capacidad para resistir a un cambio del

pH después de la adición de un ácido o una base fuerte. Dado

que muchas reacciones metabólicas se acompañan de liberación

o captación de protones, casi todas las reacciones intracelulares

están amortiguadas. El metabolismo oxidativo produce CO2

, el
anhídrido del ácido carbónico, que de no amortiguarse produciría acidosis grave. El
mantenimiento de un pH constante comprende amortiguación mediante fosfato, bicarbonato
y proteínas,

que aceptan o liberan protones para resistir a un cambio del

pH. En experimentos donde se usan extractos de tejido o enzimas, el pH constante se

mantiene por medio de la adición de

amor tiguadores como MES (ácido [2Nmorfolino]etanosulfónico, pKa

6.1), ortofosfato inorgánico (pKa2 7.2), HEPES (ácido NhidroxietilpiperazinaN'2etanosulfónico,

pKa

6.8) o Tris

(tris[hidroximetil]aminometano, pKa

8.3). El valor de pKa

respecto al pH deseado es el principal determinante de cuál amortiguador se selecciona.

La amortiguación se observa al usar un medidor de pH mientras se titula un ácido o una base

débil (figura 2-5). También es

02 Murray_C02.indd 13 11/15/12 12:06 PM

14 CAPÍtULO 2 Agua y pH

factible calcular la desviación de pH que acompaña a la adición

de ácido o base a una solución amortiguada. En el ejemplo, la

solución amortiguada (un ácido débil, pKa

= 5.0, y su base conjugada) se encuentra, al inicio, en uno de cuatro valores de pH;

se calcula el cambio de pH producido cuando se añaden 0.1 mEq

de KOH a 1 mEq de cada solución:

pH inicial 5.00 5.37 5.60 5.86

[A–

inicial 0.50 0.70 0.80 0.88

[HA]inicial 0.50 0.30 0.20 0.12

([A–

]/[HA])inicial 1.00 2.33 4.00 7.33

La adición de 0.1 meq de KOH produce

[A–

]
final 0.60 0.80 0.90 0.98

[HA]final 0.40 0.20 0.10 0.02

([A–

]/[HA])final 1.50 4.00 9.00 49.0

log ([A–

]/[HA])final 0.18 0.60 0.95 1.69

pH final 5.18 5.60 5.95 6.69

ΔpH 0.18 0.60 0.95 1.69

Note que el cambio de pH por mEq de OH− añadido depende

del pH inicial. La solución se resiste a cambios del pH con mayor

eficacia a valores de pH cercanos a la pKa

. Una solución de un

ácido débil y su base conjugada amortigua de manera más eficaz en el rango de pH de pKa

± 1.0 unidades de pH.

La figura 25 también ilustra la carga neta en una molécula

del ácido como una función del pH. Una carga fraccionaria de

–0.5 no significa que una molécula individual porta una carga

fraccionaria sino que la probabilidad es de 0.5 de que una molécula dada tenga una carga
negativa de unidad en cualquier

momento dado en el tiempo. La consideración de la carga neta

sobre macromoléculas como una función del pH proporciona la

base para técnicas de separación, como la cromatografía de intercambio de ion y la

electroforesis.

La fuerza del ácido depende

de la estructura molecular

Muchos ácidos de interés biológico poseen más de un grupo que

se disocia. La presencia de carga negativa adyacente obstaculiza

la liberación de un protón desde un grupo cercano, lo que aumenta su pKa

. Esto queda de manifiesto a partir de los valores de

pKa

para los tres grupos que se pueden disociar de ácido fosfórico y ácido cítrico (cuadro 2-2). El
efecto de la carga adyacente
disminuye con la distancia. La segunda pKa

para el ácido succínico, que tiene dos grupos metileno entre sus grupos carboxilo,

es de 5.6, mientras que la segunda pKa

para el ácido glutárico,

que tiene un grupo metileno adicional, es de 5.4.

Los valores de pKa

dependen

de las propiedades

del medio

La pKa

de un grupo funcional también está profundamente influida por el medio circundante. El

medio puede aumentar o

disminuir la pKa

dependiendo de si el ácido no disociado o su

base conjugada es la especie cargada. El efecto de la constante

dieléctrica sobre la pKa

se observa al añadir etanol al agua. La

pKa

de un ácido carboxílico aumenta, mientras que la de una

amina disminuye porque el etanol aminora la capacidad del agua

para solvatar una especie cargada. De este modo, los valores pKa

de grupos que se están disociando en los interiores de proteínas,

están muy afectados por su ambiente local, lo que incluye la presencia o ausencia de agua.

cuadro 2–2 Fuerzas relativas d