UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Y FARMACIA

ESCUELA DE QUÍMICA
QUÍMICA BIOLÓGICA
FISICO QUÍMICA

OTTO ROBERTO CASTILLO LINARES – QB- 201512418

Revisión de artículo: Investigando el impacto del diseño del

sistema de administración sobre la eficacia de las vacunas de
ARN autoamplificadoras

El objetivo principal de éste artículo es investigar el impacto de los diseños de los

sistemas de administración sobre la eficacia de las vacunas ARN
autoamplificadoras. Identificando las funciones y diferencias entre las vacunas de
ARNm y ADNp.
Metodología
En la metodología del presente artículo se realizaron varios pasos para lograr el
objetivo de éste:
 Se sintetizó el ARNm autoamplificador que se abrevia como SAM por sus
siglas en inglés. Se sintetizaron los plásmidos utilizando técnicas de
trabajos previos. Utilizando un ARN autoamplificado que codifica al virus de
la rabia se utilizó en el estudio.
 Para la preparación de formulaciones SAM se realizó formulando
nanopartículas de liposomas, lípidos sólidos y nanopartículas, emulsiones y
formulaciones cargadas con SAM.
 Se cuantificó la carga de SAM y la eficiencia de adsorción utilizando un
ensayo de Kit de ARN siguiendo las instrucciones del fabricante y mediante
la fluorescencia se determinó la concentración de SAM no cargada y la
carga real se obtuvo restando la SAM no cargada a la concentración inicial
de ARN.
 Para la caracterización fisicoquímica de las formulaciones se utilizaron
términos de tamaño hidrodinámico.
 En el ensayo de protección de la ARNasa se evalué la capacidad de las
formulaciones para proteger al ARN autoamplificado del virus de la Rabia
(SAM-RVG) se realizó por medio de la degradación de una RNasa y se
expuso durante 30 minutos a temperatura ambiente, Luego la ARNasa se
inactivó mediante una proteinasa K. Para extraer el SAM de las
 formulaciones lipídicas se agregó etanol a cada muestra y se centrifugaron
durante 25 minutos. Se analizaron mediante electroforesis en gel.
 Se realizó un ensayo para evaluar la toxicidad celular en células renales de
bebés hámster; cultivando las células de riñón (BHK) durante 2 a 3 días a
37 °C y 5% CO 2. Después de 16 horas las células se tripsinizaron, se
transfirieron a placas y se tiñeron. Luego de dos lavados las células
resuspendieron y el porcentaje de células vivas y muertas con respecto al
control de células sin tratar se midieron mediante citometría de flujos.
 Para medir la eficiencia de asociación celular de células BHK se sembraron
células y se incubaron durante 6 horas para permitir la adhesión celular.
Para rastrear la absorción celular, las partículas SAM-RVG se formularon
con un colorante añadido a la mezcla de lípidos antes de la emulsificación
de los microfluidos. Se añadió lípidos catónicos y se infubaron durante 16
horas a 37 °C y 5% CO 2. Las células se recolectaron de las placas, se
lavaron y se resuspendieron. y el porcentaje de células con respecto al
control sin tratar se midió mediante citometría de flujo.
 Para medir la potencia in vitro de las formulaciones SAM-RVG se
sembraron en placas como se describió previamente. Después de 6 a 8
horas, las células se incubaron durante 16 horas con liposomas las células
fueron tripsinizadas y transferidas a placas, lavado dos veces, fijado y
permeabilizado. Luego, después del lavado, las células se incubaron con
anticuerpo secundario. Finalmente, las células se lavaron y resuspendieron
en PBS para citometría de flujo. Y se calculó el porcentaje de formulaciones
RVG con respecto al control de células sin tratar.
 En la evaluación de las respuestas inmunitarias in vivo de diferentes
adyuvantes seleccionados y su antígeno asociado se determinaron de
títulos de anticuerpos séricos específicos de antígeno mediante el ensayo
inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) y la tinción de citocinas
intracelulares (ICS) en esplenocitos.
 Para los análisis estadísticos los resultados se calcularon como media y
desviación estándar. También se utilizó ANOVA o un análisis de varianza y
para la comparación se reconoció la significancia para valores de p. El
análisis y la interpretación se realizaron utilizando un software estadístico.
Evaluando los resultados con respecto al objetivo principal del presente artículo se
puede apreciar que en la evaluación de los atributos físicos de los liposomas,
partículas lipídicas sólidas, partículas poliméricas y emulsione producido con SAM-
RVG que se basaron en estudios ya planteados anteriormente. Y lograron una
carga alta que fue mayor al 95% usando cualquiera de los lípidos catiónicos y así
lograr una mejor eficacia en las vacunas ARNm.
Resultados
Tabla 1. Propiedades físico-químicas de los sistemas de liberación catiónicos
basados en lípidos.
DOTAP (1,2-dioleoil-3-trimetilamonio-propano), NP de DDA
(dimetildioctadecilamonio) (polimérico nanopartículas), SLN (nanopartículas de
lípidos sólidos), tamaño (diámetro medio Z), ZP (potencial zeta), PDI (índice de
polidispersidad), EE (eficiencia de encapsulación), AE (eficiencia de adsorción).

Para la evaluación de los atributos físicos de los liposomas, Se prepararon SAM

adsorbentes que codifican la glicoproteína G (RVG) de la rabia. Se midió la
potencial zeta para evaluar el impacto de carga SAM en estos sistemas. Los
liposomas, SLN, NP y emulsiones exhibieron diferentes composiciones, pero todas
contenían la misma concentración de lípidos catiónicos ya sea DOTAP o DDA.
Sus características físico-químicas se muestra en la Tabla 1. Cuando se mezcló
SAM con estos liposomas preformados, los tamaños de partícula aumentaron
significativamente (p <0.05) (100-145 nm para formulaciones DOTAP y 170-200
nm DDA) y el potencial zeta reducido debido a la alta adsorción (95% -99%) como
puede apreciarse en la Tabla 1.
Cuando el SAM-RVG quedó atrapado dentro de los liposomas, el impacto del
tamaño de partícula fue menos notable para los liposomas DOTAP (80-90 nm),
que eran de naturaleza catiónica. El atrapamiento de SAM-RVG dentro de los
liposomas de DDA produjeron partículas de tamaño similar a aquellas en las que
se adsorbió SAM-RVG. En general, se logró una carga alta mayor al 95%,
independientemente del lípido catiónico empleado y el método de fabricación.
En los SLN, cuando se formularon en ausencia de SAM-RVG, las partículas tenían
entre 65 y 75 nm, con un PDI bajo menor a 0,3, y de naturaleza catiónica,
independientemente del lípido catiónico utilizado. Cuando estos SLN catiónicos se
mezclaron con SAM-RVG, se produjo un aumento significativo en el tamaño de
partícula nuevamente visto en combinación con una reducción en el potencial zeta
y una alta carga SAM-RVG mayor al 95%. En cuanto a los liposomas, los SLN
basados en DDA eran más grandes que sus contrapartes DOTAP.
Nanopartículas poliméricas formulados con DOTAP o DDA tenían un tamaño de
40 a 60 nm, con un PDI bajo y un potencial zeta alto. Cuando estas nanopartículas
se mezclaron con SAM-RVG, las nanopartículas basadas en DOTAP precipitaron
y las nanopartículas basadas en DDA aumentaron significativamente su diámetro,
hasta 260–270 nm. Por el contrario, cuando las nanopartículas poliméricas se
formularon para atrapar SAM-RVG, solo los que contienen DOTAP podrían
prepararse con tamaños de partículas de aproximadamente 200 nm, potencial
zeta catiónico entre 20-30 mV y alta incorporación mayor al 95% de SAM-RVG.
Finalmente, antes de la adición de SAM-RVG a las emulsiones, los tamaños de los
glóbulos fueron de 140 a 160 nm para las emulsiones basadas en DOTAP y 170 a
210 nm para emulsiones basadas en DDA, se observó una alta adsorción mayor al
95% combinada con un aumento en el glóbulo tamaño y una caída en el potencial
zeta.
En general, antes de la adición de SAM-RVG, la elección del lípido catiónico
utilizado ya sea DOTAP o DDA no tuvo un impacto notable en el tamaño de las
partículas y todos los sistemas fueron altamente catiónicos.
Figura 1. Viabilidad celular y asociación celular de plataformas de parto con
células de riñón de hámster bebé (BHK).
En la asociación celular de liposomas, SLN, NP y emulsiones cargados con SAM-
RVG en la línea celular BHK la citotoxicidad de todas las formulaciones en células
BHK se cuantificó después de 16 horas. En la figura 1A, B se puede observar
que Las formulaciones DOTAP fueron menos tóxicas en comparación con las
formulaciones DDA, y las células permanecieron viables en concentraciones de
hasta 33 µg/mL para los sistemas de administración basados en DOTAP en
comparación con 11 µg/mL para sistemas de entrega basados en DDA.
Según estos resultados, las concentraciones del sistema de administración de 11
µg/ml o menos fueron utilizados dentro de los estudios celulares. Para investigar el
impacto de la elección de lípidos catiónicos en la asociación celular, se prepararon
formulaciones basadas en DOTAP (Figura 1C) y DDA (Figura 1D) marcadas con
fluorescencia. Todos los sistemas de administración se incubaron durante 16
horas

Figura 2. Asociación celular de formulaciones en la línea celular BHK expresada

como intensidad media de fluorescencia (IMF). Intensidad de fluorescencia media
de las células BHK después de 16 h de incubación con DOTAP (A, C) y
Liposomas, SLN, NP y emulsiones basados en DDA (B, D).
En la Figura 2 pueden observarse las diferencias en la eficiencia de asociación
entre las formulaciones fueron evidentes cuando analizando los valores medios de
intensidad de fluorescencia. En La Figura 2A muestra que la intensidad media de
fluorescencia de DOTAP SLN y NP fue significativamente mayor en comparación
con las formulaciones basadas en liposomas y emulsión: SLN y NP MFI, mientras
que los sistemas de emulsión y liposomas basados en DOTAP tenían una
intensidad media de fluorescencia menor. En la Figura 2B solo los NP mostraron
niveles significativamente más altos en comparación con los otros. En la Figura
2C, D, los valores absolutos fueron más bajos en comparación con los medidos en
medio completo, una tendencia similar se observó en los sistemas de
administración y se compararon los dos lípidos catiónicos diferentes.

Figura 3. Potencia in vitro (IVP) en la línea celular BHK. IVP en BHK en FCS al
5% (A, B) o sin FCS (C, D) medio de formulaciones basadas en DOTAP (A, C) y
basadas en DDA (B, D).

La Figura 3 representa el porcentaje de células positivas para RVG después de

16 horas de incubación de SAM-RVG cargado con partículas de DOTAP (Figura
3A, C) o DDA (Figura 3B, D) a diferentes concentraciones de antígeno en total
medio. En general, la eficiencia de transfección fue independiente de la dosis de
SAM: dentro de la concentración rango probado, el aumento del contenido de
SAM-RVG no dio como resultado una mayor expresión de antígeno. En la Figura
3A Los valores de las células RVG + no fueron significativamente diferentes entre
los liposomas, los SLN y los NP en concentraciones. En la Figura 3B se observó
un patrón similar con las formulaciones basadas en DDA. Debido a un posible
efecto inhibidor de las proteínas séricas sobre la entrega de genes, también se
realizó la prueba de potencia in vitro (PIV) realizado en ausencia de suero en
cultivo, como puede observarse en la Figura 3C, D.
Tabla 2. Representación esquemática de los criterios aplicados a los liposomas
basados en DOTAP o DDA, lípidos sólidos nanopartículas y emulsiones para
seleccionar formulaciones para avanzar a estudios in vivo.

La inmunogenicidad de las vacunas SAM-RVG se realizó en ratones. Se

seleccionaron candidatos basado en una estrategia de selección descendente con
aquellos que muestran atributos físicos apropiados, y luego en base a la potencia
in vitro (IVP), tres sistemas de administración progresaron a la in vivo estudio:
liposomas DOTAP, liposomas DDA y NP DOTAP, como se resume en la Tabla 2.
Figura 4. Inmunogenicidad de la vacuna SAM-RVG administrada por diferentes
portadores catiónicos.
Se realizó en grupos de 10 ratones y se inmunizaron en los días 0 y 28 con 1,5 o
0,15 µg de ARN autoamplificado que codifica la proteína G del virus de la rabia
formulada en nanopartículas poliméricas (NP) DOTAP, DOTAP, Liposomas o
Liposomas DDA. Los títulos de IgG específicos se midieron mediante ensayo
inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA). Para cada grupo, hubo 5 muestras,
cada una representando los datos de grupos de dos ratones (representados como
círculos) y los títulos de media geométrica (GMT) son líneas continuas.
Los sueros se recolectaron y analizaron (A) 4 semanas después de la primera
inmunización y (B) 2 semanas después de la segunda inmunización. Los títulos
menor a 0,125 EU / mL (línea azul punteada) estaban por debajo del límite de
detección, mientras que los títulos mayor a 0,5 UE / ml (línea roja punteada) eran
una indicación de protección. La comparación intergrupal fueron analizados
mediante la prueba de análisis de varianza unidireccional. (Figura 4)

Figura 5. Porcentajes de células T CD4 + o CD8 + específicas de antígeno.

Células T esplénicas (A) CD4 + y (B) CD8 +.
Después de dos inmunizaciones, todos los animales tenían células T CD4 + y CD8
+ específicas de RVG (Figura 5). Aunque no es estadísticamente significativo, los
NP a 1,5 µg de SAM indujeron la mayor frecuencia de células T CD4 + específicas
de RVG, en comparación con todas las demás formulaciones.

Figura 6. Porcentajes de linfocitos T citotóxicos CD4 + o CD8 +.

El fenotipo efector de las células T CD4 + y CD8 + se evaluó adicionalmente
mediante la cuantificación de la expresión superficial de CD107a, un marcador de
desgranulación cuya expresión se correlaciona con la citotoxicidad in vivo de las
células T (Ver Figura 6).
Teoría que se utilizó para explicar el artículo
Las vacunas basadas en ARN mensajero (ARNm) han surgido como un enfoque
transformador, debido a su capacidad para provocar inmunidad humoral y celular.
Recientemente, ha aumentado el interés en la aplicación de esta tecnología por
numerosas empresas. En contraste con el ADN plásmido (pDNA) vacunas, el
ARNm no necesita ser transportado a través de la membrana nuclear y puede
inducir directamente expresión del antígeno en el citosol, de modo que se evita
cualquier integración genómica potencial. Además, las vacunas de ARNm inducen
la expresión transitoria de antígenos, mientras que las vacunas de ADN
proporcionan una expresión, imitando así una infección viral aguda.
Una estrategia para aumentar el rendimiento del ARNm es incluyen elementos
genéticos que permiten la autoamplificación.
Las vacunas SAM se autoamplifiquen con el tiempo y, en consecuencia, induzcan
más potentes respuestas inmunes en comparación con las vacunas
convencionales de ARNm no amplificador.

Anexos
  Antígeno: Un antígeno es una sustancia que desencadena la formación de
anticuerpos y puede causar una respuesta inmunitaria. [ CITATION Bec12 \l
4106 ]
 ADN Plasmídico: Un plásmido es una pequeña molécula de ADN circular
que a menudo se encuentran en bacterias y otras células. Los plásmidos
son separados del cromosoma bacteriano y se replican
independientemente de ella. [ CITATION Sal13 \l 4106 ]

 Polineuropatía hereditaria: son un grupo de trastornos heredados que

afectan el sistema nervioso periférico.Las neuropatías hereditarias se
dividen en cuatro subcategorías principales:neuropatía hereditaria motriz y
sensitiva, neuropatía hereditaria sensitiva, neuropatía hereditaria motriz, y
neuropatía hereditaria sensitiva y autonómica. [ CITATION Meg14 \l 4106 ]

 Liposomas: es una nanovesícula esférica formada, principalmente, por

fosfolípidos, los cuales adoptan una estructura de bicapa lipídica cuando
están en dispersiones acuosas. [ CITATION Tim13 \l 4106 ]

 Emulsiones: una mezcla de dos líquidos inmiscibles de manera

homogénea. [ CITATION Tim13 \l 4106 ]

Bibliografía
Becker, W., Kleinsmith, L., & Hardin, J. (2,012). Biología Celular y Molecular. México: Pearson
Educación.

HIPRA, s.f. Importancia del tipo de adyuvante y emulsión de las vacunas contra la Salmonella y su
efecto sobre el potencial reproductivo en las parvadas de reproductoras. Consultado de
https://www.hipra.com/portal/en/hipra/animalhealth/products/detail-global/avisan-secure

Megías, M., Molist, P., & Pombal, M. (2,014). Atlas de Histología Animal y Vegetal: La célula.
España: Facultad de Biología, Universidad de Vigo. Recuperado el Julio de 2,020, de
https://ccqqfar.virtual.usac.edu.gt/pluginfile.php/10327/mod_resource/content/1/atlas-
celula-03-membrana-celular.pdf

Salazar, A., Sandoval, A., & Armendáriz, J. (2013). Biología Molecular. Mc Graw Hill. doi:ISBN: 978-
607-15-0912-3

Timberlake, K. (2013). Química General y Orgánica. México: Pearson.

Conclusión personal
El artículo presenta una idea demasiado innovadora para lograr engañar al
sistema inmune para hacerle desarrollar una inmunidad activa adquirida para un
virus sin que haya tenido contacto con él mediante una vacuna. Ya que estas
vacunas se basan en genes y no en proteínas como en las vacunas para la gripe;
las que se basan en genes transportan instrucciones y le enseñan a las células
inmunológicas a crear un antígeno adecuado para inducir la respuesta inmune.

Pregunta de Sección de Instrucciones:

Indique cómo se controla la formación de una emulsión en una vacuna y
cómo se mantiene estable:
Las vacunas inactivadas que contienen bacterias son naturalmente más reactivas
en comparación con las vacunas que contienen virus debido a la composición
estructural de patógenos. Por esta razón, el tipo de tecnología de adyuvante y
emulsión contenida en una vacuna contra la Salmonella son extremadamente
importantes para modular la inflamación en el sitio de aplicación y activar la
respuesta inmunitaria, todo en equilibrio.
Los adyuvantes son sustancias añadidas a la formulación de bacterias para
mejorar la respuesta inmune, para promover la estimulación selectiva a un
determinado tipo, o incluso para aumentar su duración.
El conjunto adyuvante + emulsión está totalmente relacionado con la eficacia y
seguridad de la vacuna, es decir, la calidad de la respuesta inmunitaria generada y
la modulación de las reacciones adversas después de la aplicación depende de
ella.
Para la mayor duración de la inmunidad se utiliza la doble emulsión que permite
un equilibrio en la liberación de antígenos. Por un lado, el antígeno en la fase
acuosa externa de se libera rápidamente, permitiendo que el proceso de respuesta
inmunitaria comience poco después de la inyección de la vacuna. Por otro lado,
los antígenos presentes en la fase acuosa interna se liberarán más adelante,
modulando así la duración de la respuesta inmune.
(HIPRA, s.f.)
 Revisión de artículo: Vacunas de ARNm: una nueva era en
vacunología

Síntesis
Las vacunas de ARNm son otra ooción innovadora y que promete otros enfoques
y resultados vacunas convencionales debido a su alta potencia, capacidad de
desarrollo rápido y potencial de bajo costo fabricación y administración segura.
Las terapias con ácidos nucleicos han surgido como otras alternativas a los
enfoques de vacunas convencionales. En 1990 fue la primera vez que se aplicó
ésta técnica de terapias con ácidos nucleicos.
El uso de ARNm tiene varias ventajas:
1. Seguridad: dado que el ARNm es una plataforma infecciosa, no integrable,
no hay potencial riesgo de infección o mutagénesis insercional. ARNm es
degradado por procesos celulares normales y su vida media in vivo se
puede regular mediante el uso de diversas modificaciones y métodos de
entrega.
2. Eficacia: Varias modificaciones hacen que el ARNm sea más estable y
altamente traducible. Las vacunas de ARNm se pueden administrar
repetidamente.
3. Producción: las vacunas de ARNm tienen el potencial de Fabricación
económica y escalable, principalmente debido a los altos rendimientos de
las reacciones de transcripción in vitro.
Los datos sugieren que las vacunas de ARNm tienen el potencial deresolver
muchos de los desafíos en el desarrollo de vacunas para tanto enfermedades
infecciosas como cáncer.
Dos tipos principales de ARN se estudian actualmente como vacunas: no
replicantes ARNm y ARN autoamplificador derivado de virus. Las vacunas
convencionales basadas en ARNm codifican el anti-gen de interés y contienen 5ʹ y
3ʹ regiones sin traducir, mientras que los ARN autoamplificadores codifican no solo
el antígeno, sino también la maquinaria de replicación viral que permite la
amplificación del ARN intracelular y abundante expresión de proteínas.
Una vez que el ARNm transita al citosol,la maquinaria de traducción celular
produce una proteína que sufre modificaciones postraduccionales, lo que resulta
en una proteína correctamente plegada y completamente funcional. Esta
característica de del ARNm es particularmente ventajoso para vacunas y terapias
de reemplazo de proteínas que requieren proteínas citosólicas o transmembrana
que se administrarán a los compartimentos celulares correctos para una
presentación o función adecuada. El ARNm finalmente es degradado por procesos
fisiológicos, reduciendo así el riesgo de toxicidad por metabolitos.
El ARNm exógeno es inherentemente inmunoestimulador, ya que es reconocido
por una variedad de superficies celulares, endosomales y receptores inmunes
innatos citosólicos. Dependiendo de la aplicación terapéutica, esta característica
del ARNm podría ser beneficiosa o perjudicial. Exponencialmente ventajoso para
la vacunación porque en algunos casos puede proporcionar actividad adyuvante
para conducir la maduración de células y, por lo tanto, provocan células T y B
robustas respuestas inmunes. Sin embargo, la detección inmune innata de ARNm
también se ha asociado con la inhibición de expresión de antígeno y puede afectar
negativamente al sistema inmunológico. Aunque los efectos paradójicos de los
innatos la detección inmune en diferentes formatos de vacunas de ARNm se
comprenden de forma incompleta.
Los estudios realizados durante la última década han demostrado que el perfil
inmunoestimulador del ARNm puede moldearse por la purificación de ARNm de
IVT y la introducción de nucleósidos modificados. Las preparaciones de ARNm
sintetizadas enzimáticamente contienen contaminantes de ARN bicatenario como
productos aberrantes de la reacción.
Las propiedades inmunoestimuladoras del ARNm pueden a la inversa,
aumentarse con la inclusión de un adyuvante para aumentar la potencia de
algunas vacunas de ARNm. Estos incluyen adyuvantes tradicionales, así como
nuevos enfoques que aprovechan la inmunogenicidad del ARNm o su capacidad
para codificar proteínas moduladoras. Las vacunas de ARN autorreplicantes
mostró mayor inmunogenicidad y eficacia después de formular el ARN en una
nanoemulsión catiónica basado en el adyuvante autorizado. Otra estrategia
adyuvante eficaz es TriMix, una combinación de ARNm que codifican tres
proteínas activadoras inmunes:CD70, ligando CD40 (CD40L) y constitutivamente
activoTLR4. El ARNm de TriMix aumentó la inmunogenicidad de ARNm desnudo,
sin modificar y sin purificar en múltiples estudios de vacunas contra el cáncer y se
asoció particularmente con mayor maduración de DC y linfocitos T citotóxicos
respuestas de linfocito (CTL).
La entrega eficiente de ARNm in vivo es fundamental para lograr relevancia
terapéutica. El ARNm exógeno debe penetrar la barrera de la membrana lipídica
para alcanzar el citoplasma para ser traducido a proteína funcional. Los
mecanismos de captación parecen depender del tipo de célula, y las propiedades
fisicoquímicas de los complejos de ARNm puede influir profundamente en el
suministro celular y la disfunción de órganos.
Hay dos enfoques básicos para la entrega de las vacunas de ARNm que se han
descrito hasta la fecha. Primero, carga de ARNm en DC ex vivo, seguido de
reinfusión de las células transfectadas; y segundo, la inyección parenteral de
ARNm con o sin un portador.
ARNm desnudo se ha utilizado con éxito para inmunizaciones in vivo,
particularmente en formatos que se dirigen preferentemente a antígenos
presentando células, como en inyecciones intradérmica e intranodal. Un informe
reciente mostró que inmunizaciones intranodales repetidas con desnudos, sin
ARNm que codifica neoantigeno generaron respuestas robustas de células T y
aumentaron su supervivencia libre de progresión.
ARNm autoamplificador (SAM) más utilizado actualmente en las vacunas y se
basan en un genoma de alfavirus, donde los genes que codifican la maquinaria de
replicación del ARN son intactos pero los genes que codifican las proteínas
estructurales se reemplazan con el antígeno de interés. El largo ARN tiene una
longitud aproximada de 9 kb y se puede producir fácilmente mediante IVT a partir
de una plantilla de ADN.
La plataforma SAM permite una gran cantidad de producción de antígeno a partir
de una pequeña dosis de vacuna debido a la replicación intracelular del ARN que
codifica el antígeno. Un estudio temprano informó que la inmunización con 10 μg
de vacuna SAM desnuda codificante de virus de la influenza aglutina o la
premembrana y la envoltura del virus enfermo resultaron en respuestas de
anticuerpos y par-protección inicial frente a desafíos virales letales en ratones.
Estudios adicionales demostraron la inmunogenicidad de esta plataforma de
vacuna forma contra diversos virus en múltiples especies, incluyendo
citomegalovirus humano (CMV), virus de la hepatitis C y virus de la rabia en
ratones, VIH-1 en conejos y VIH-1 y CMV humano en macacos rhesus.
Como se describió anteriormente, la carga de CD ex vivo es un método seguido
para generar inmunidad mediada por células contra el cáncer. Desarrollo de
enfermedad infecciosa las vacunas que utilizan este enfoque han sido
principalmente limitadas a una vacuna terapéutica para el VIH-1: infectado por el
VIH-1 a personas en tratamiento antirretroviral de gran actividad fueron tratados
con CD autólogas electroporadas con ARNm que codifica varios antígenos del
VIH-1 y células inmunes.
Las vacunas de ARNm directamente inyectables y no replicantes son un formato
de vacuna atractivo debido a su simple y administración económica,
particularmente en recursos y ajustes limitados. Aunque un informe temprano
demostró que la inmunización con ARNm complejado con liposomas que codifican
las nucleoproteínas del virus de la influenza provocaron respuestas en ratones, la
primera demostración de protección en respuestas inmunes por vacunas de
ARNm contra infecciones de patógenos se publicó hace solo unos años. Este
trabajo final demostró que administrado por vía intradérmica el ARNm no
complejado que codifica varios virus de la influenza antígenos combinados con un
ARN complejado con protamina el adyuvante fue inmunogénico en múltiples
modelos animales y protegió a los ratones del desafío viral letal.

Glosario de conceptos desconocidos

 RNasas: La ribonucleasa es una enzima que cataliza la hidrólisis de ARN
en componentes más pequeños. [ CITATION Bec12 \l 4106 ]

 Nanoemulsión: Es una mezcla de agua y lípidos con tamaño de partículas

entre 50 a 200 nm. [ CITATION Cha13 \l 4106 ]

 Alfavirus: son un grupo de virus ARN monocatenario positivo. Existen

numerosas especies de alfavirus que pueden provocar enfermedades en el
hombre y otros animales vertebrados, como caballos, roedores, peces y
aves. [ CITATION Sal13 \l 4106 ]

Resumen de términos conocidos

Los Inmunoestimuladores son sustancias como fármacos que estimulan el
sistema inmunitario induciendo activación o aumentando la actividad de
cualquiera de sus componentes. [ CITATION Bec12 \l 4106 ]

Un virus Bicatenario es un virus en el que su material genético está

compuesto por ADN de doble cadena y se replica usando una ADN
polimerasa dependiente del ADN, no usando el ARN como intermediario
durante la replicación. [ CITATION Bec12 \l 4106 ]

Un Nucleosido es una molécula monomérica orgánica glusosilamida, que

integra las macromoléculas de los ácidos nucleicos y que resulta de la
unión covalente entre una base nitrogenada con una pentosa, que puede
ser ribosa o desoxirribosa. [ CITATION Tim13 \l 4106 ]

Bibliografía
Becker, W., Kleinsmith, L., & Hardin, J. (2,012). Biología Celular y Molecular. México: Pearson
Educación.
Chang, R., & Goldsby, K. (2,013). Química (Undécima ed.). México: Mc Graw Hill. Recuperado el 28
de Julio de 2,020, de
https://drive.google.com/drive/folders/1lTcmEr1n9rtnqQGUGobcioDQSNVXxAYu

Salazar, A., Sandoval, A., & Armendáriz, J. (2013). Biología Molecular. Mc Graw Hill. doi:ISBN: 978-
607-15-0912-3

Timberlake, K. (2013). Química General y Orgánica. México: Pearson.