Pasos para el procesamiento de los tejidos:

1. Fijación
2. Inclusión
3. Corte
4. Tinción

Fijación:

Soluciones químicas que mantienen al tejido con su estructura estable y evitan su autolisis o
destrucción por microorganismo

- Formol
- Liquido de Bouin

Después de 24h de la fijación el tejido tiene consistencia endurecida.

Se mete al tejido en un cassette y se vuelve a colocarlo en el formol

Inclusión:

Consiste en un proceso para endurecer el tejido, por lo que para proceder al proceso de corte
(4 micras) el tejido se sumerge en PARAFINA (hidrófoba) para darle consistencia

1. Deshidratación: se pasa el tejido por alcoholes de graduación creciente para eliminar

el agua (16h)
2. Se sumerge al tejido en un Baño de parafina líquida (60C)
3. Sacamos el tejido del cassette y se lo coloca en molde metalico lleno de parafina
líquida
4. Colocamos una parte del cassette encima del molde
5. Llenamos con más parafina y se coloca en superficie fría (4º) para obtener el molde de
parafina con el tejido sujetado por el cassette

Corte:

Utilizamos el baño de agua templada (37º) o flotación y el Microtomo

- Colocamos el bloque en el porta bloques junto con la cuchilla

- El corte se lo coloca en el baño de agua
- Se pasa el portaobjeto para conseguir el tejido

Desparafinización:

Eliminar la parafina para proceder a la tinción

Se mete los tejidos en los portas en una estufa a 60º para que se derrita la parafina

Tinción:

Colorantes habituales son acuosos, por lo que debemos someter a la muestra a una
rehidratación mediante el uso de alcoholes de graduación decreciente

Hematoxilina (tiñe los núcleos: ácidos-colorantes basófilos) eosina (tiñe citoplasma: básicos-
colorante acido)
Coloca cubreobjetos con pegamento especial, por lo que se debe deshidratar nuevamente el
tejido y proceder a la observación en el microscopio.

Medio de montaje: fracción de la luz sea vertical, en un solo ángulo (resinas), visión nítida de la
imagen

FIJADORES SIMPLES

Etanol, metanol, acetona. Fijan por deshidratación y coagulación de las

proteínas, sobre todo las citosólicas. Extraen los lípidos de los tejidos, pero no
afectan a los carbohidratos. En general, son buenos fijadores de muestras de
pequeño tamaño

También como un conservantes de las muestras. Pueden producir

endurecimiento y retracción de los tejidos

Ácido acético. Su proceso de fijación consiste en cambiar el estado coloidal

de las proteínas. Se utiliza a una concentración que varía entre el 1 y el 5 %. Es el
fijador ideal para ácidos nucleicos y nucleoproteínas. Como inconvenientes cabe
destacar la destrucción de las mitocondrias y mala fijación de membranas y
citoplasma. Se suele usar en combinación con otros fijadores. Ejemplos: Bouin,
FAA.

Acido pícrico. Las sales del tipo picrato coagulan las proteínas de los tejidos.
Preserva bien la estructura celular, no produce retracciones cuando el tiempo de
fijación es óptimo, preserva bien glucógeno y lípidos. Es un buen fijador para
tinciones generales puesto que tiene efecto mordiente y favorece la unión de los
colorantes. Se suele usar combinado con otros fijadores. Ejemplos: Bouin.

Formaldehído. Es un fijador ampliamente usado por la buena preservación

del tejido, actúa como conservante, produce poca retracción tisular, es compatible
con la mayoría de las tinciones histológicas. El formaldehído preserva bien los
lípidos, sobre todo si se añade a la solución fijadora iones de calcio (reducen la
solubilidad de los fosfolípidos), y no reacciona con los carbohidratos. Normalmente
se usa en solución tamponada e isotónica. Se utiliza a concentraciones próximas al
4 %. Ejemplos: formaldehído tamponado , Bouin, FAA, PLP.

Por cada parte de tejido 20 de formol (1/10 tmb)

Se diluye el formol al 10%, proporción de 1 formol a

9 de agua destilada
 Bactericida, inhibe algunos virus, protector biológico

Puede dañar detalles celulares por eso se

neutraliza

Conservación a 4º idealmente, también puede

ser a temperatura ambiente.

Envases de plástico proporcional al tamaño de la

muestra por seguridad, 1-10. 1-.20, con tapa ancha

Tiempo que puede estar fijándose si son muy pequeñas hasta 6 horas de
fijación, el formol no penetra indefinidamente en la muestra, el formol máximo
penetra 10mm de profundidad, 1mm/h, hay que diseccionar el tejido para que
penetre el formol (tajadas de 2cm), fijación ideal de alrededor de 24h.

Cuando se fija mal no hay marcha atrás

Glutaraldehído. Es uno de los fijadores más usados. El glutaraldehído tiene

poca velocidad de penetración. Forma puentes entre las moléculas de los tejidos.
Tiene una alta capacidad para preservar la estructura celular puesto que es capaz
de entrelazar el tejido más fuertemente que otros aldehídos, por lo que es el fijador
de referencia para la observación ultraestructural de las células con el microscopio
electrónico. Sin embargo, no se recomienda para inclusiones en parafina. Se usa
en soluciones tamponadas isotónicas y normalmente en combinación con el
formaldehído.

Tetróxido de osmio. Tiene poca penetración en los bloques de tejido, entre

0.5 y 1 mm, y se puede usar tanto en solución como en vapor. No produce
artefactos pero hace a las muestras de tejido frágiles. Por eso se emplea
habitualmente para las observaciones con el microscopio electrónico, ya que
preserva y oscurece las membranas celulares. Pero también en microscopía óptico
se usa para estudiar las grasas insaturadas, para observar los tractos de mielina, y
es necesario para las impregnaciones argénticas como en el método de Golgi.

Mezclas fijadoras

Líquido de Bouin. Está formado por ácido pícrico, formaldehído y ácido

acético glacial. Es una solución muy utilizada para el procesamiento de tejidos que
 se incluirán en parafina y a cuyas secciones se les puede aplicar un amplio
espectro de tinciones. Hay que tener cuidado con el tiempo de fijación, que no debe
exceder de 48 h en el caso de fijaciones por inmersión. Tras la fijación las muestras
de tejido se pueden conservar en etanol de 70°.

Solución de Clarke. Está formada por etanol y ácido acético glacial (3:1). Es
uno de los primeros fijadores que se empleó para muestras que se incluían en
parafina.

Carnoy. Es un buen fijador para el glucógeno, para los hidratos de carbono

simples y para las proteínas fibrosas. Es bueno para observar los ácidos nucleicos,
aunque no la morfología nuclear, y para los grumos de Nissl del sistema nervioso.
Puede producir retracciones tisulares. Está formado por etanol absoluto 60 %,
cloroformo 30 % y ácido acético glacial 10 %.

Mezclas con formaldehído. El formaldehído es quizá el fijador más usado

hoy en día. Lo más frecuente es utilizarlo en solución al 4 % junto con otros
fijadores. Se suele disolver en soluciones tamponadas que tienen una osmolaridad
similar a la del tejido que se pretende fijar. Para fijaciones de tejidos destinados a
microscopía electrónica se suelen utilizar soluciones fijadoras que contienen
formaldehído y glutaraldehído. La función del formaldehído es iniciar una fijación
rápida, por su mayo capacidad de penetración, mientras que el glutaraldehído
realizará una fijación más poderosa, pero más lenta, que no afectará a la estructura
tisular puesto que el formaldehído ya ha realizado una fijación previa. Ejemplos:
formaldehído tamponado , Bouin, FAA, PLP.

Glutaraldehído-tetróxido de osmio. Los fijadores en combinación no tienen

necesariamente que usarse al mismo tiempo. Es habitual que los tejidos destinados
a microscopía electrónica sean inicialmente fijados en glutaraldehído (1 al 3 %) y
paraformaldehído (2 al 4 %), para posteriormente ser postfijados en tetróxido de
osmio al 1 % en solución tamponada.

Fijadores físicos

Desecación: Calor seco y húmedo

Frío: Congelamiento

De 24 a 48h como mínimo la fijación

Lo relevante en una solicitud a patología

Material a analizar

Datos clínicos

Tipos de intervención

Histología previa: Si, No y su diagnóstico

Juicio Clínico: