PED 3. Difraccion de Rayos X de Ángulo Bajo

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TEMA 3: Resumen de la Técnica de Difracción de Rayos X de

Ángulo Bajo

La difracción de rayos X de bajo ángulo es una técnica de dispersión de bajo


ángulo mediante la cual se pueden cuantificar las diferencias de densidad a
nanoescala en una muestra. Es un método analítico que determina la
estructura de las partículas en términos del promedio de su forma o tamaño, un
método no destructivo para investigar nanoestructuras con un tamaño de entre
1 nm hasta 200 nm. El requisito fundamental para la generación de dispersión
a bajo ángulo es la presencia en la muestra de inhomogeneidades en la
densidad electrónica del material. Evalúa el patrón de dispersión de rayos X de
las nanopartículas en ángulos bajos para obtener información sobre la
estructura de sus partículas. Esto significa que puede, por tanto, determinar la
distribución del tamaño de las nanopartículas, resolver el tamaño y la forma de
las macromoléculas (monodispersas), determinar los tamaños de los poros, las
distancias características de los materiales parcialmente ordenados y mucho
más.

Esto se logra analizando el comportamiento de dispersión elástica de los rayos


X cuando viajan a través del material, registrando su dispersión en ángulos
bajos (típicamente 0.1 - 10 °). Generalmente se realiza mediante rayos X con
una longitud de onda de 0,07 a 0,2 nm. Dependiendo del rango angular en el
que se puede grabar una clara señal de dispersión, SAXS es capaz de entregar
información estructural de dimensiones entre 1 y 100 nm, y de distancias
repetidas en sistemas parcialmente ordenados de hasta 150 nm.

El haz de rayos X incidente interactúa con los electrones de todos los átomos
en la macromolécula, originando un “parón de dispersión” (es decir, diferentes
intensidades de rayos X en diferentes ángulos de dispersión) que permite
caracterizar la estructura de las partículas.

Esta técnica pertenece a una familia de técnicas de difracción de rayos X que


se utilizan en la caracterización de materiales. En el caso de macromoléculas
biológicas como las proteínas, la ventaja de SAXS sobre la cristalografía es
que no se necesita una muestra cristalina. Los métodos de espectroscopia de
resonancia magnética nuclear encuentran problemas con macromoléculas de
masa molecular más alta. Sin embargo, debido a la orientación aleatoria de las
moléculas disueltas o parcialmente ordenadas, el promedio espacial conduce a
una pérdida de información en SAXS en comparación con la cristalografía.

La técnica de difracción a bajo ángulo se utiliza para determinar la estructura a


microescala o nanoescala de los sistemas de partículas en términos de
parámetros tales como tamaños de partícula promediados, formas, distribución
y relación superficie-volumen (análisis de la nanoestructura: forma, tamaño y
estructura interna). Los materiales pueden ser sólidos o líquidos y pueden
contener dominios sólidos, líquidos o gaseosos (denominados partículas) del
mismo u otro material en cualquier combinación. No solo se pueden estudiar
las partículas, sino también la estructura de sistemas ordenado. El método es
preciso, no destructivo y generalmente requiere solo un mínimo de preparación
de la muestra. Las aplicaciones son muy amplias e incluyen coloides de todo
tipo, metales, cemento, petróleo, polímeros, plásticos, proteínas, alimentos y
productos farmacéuticos, y se pueden encontrar tanto en la investigación como
en el control de calidad. La fuente de rayos X puede ser una fuente de
laboratorio o luz de sincrotrón que proporciona un mayor flujo de rayos X.

Se utiliza en otras varias aplicaciones como pueden ser: la nucleación de


partículas, la porosidad (superficie específica), cristalinidad y orientación,
macromoléculas biológicas en solución (Bio-SAXS) i superfícies nano
estructuradas (GISAXS).

Las bases para esta técnica son la interacción de los rayos X con la materia y
las interferencias.

La dispersión es un modo de interacción de los rayos X con la materia que


puede ocurrir con o sin perdida de energía (Dispersión Compton) o bien puede
tener la misma longitud de onda (Dispersión Rayleigh o Thomson)

El Efecto Compton se produce cuando un fotón golpea un electrón y “rebota”.


El fotón pierde una fracción de su energía, que es tomada por el electrón. La
radiación dispersada tiene una longitud de onda diferente. No tiene ninguna
relación de fase particular con la radiación incidente. No puede producir
fenómenos de interferencia y por lo tanto no llevara información de la
estructura.

En el caso del efecto Rayleigh los fotones chocan con los electrones
fuertemente ligados sin transferencia de energía. Los electrones comienzan a
oscilar a la misma frecuencia que la radiación entrante. Como consecuencia a
esta oscilación, los electrones emiten radiación con la misma frecuencia.
Debido a que las ondas emitidas de átomos vecinos oscilan en sincronía entre
sí, producen “ondas coherentes” (dispersión coherente) que tienen la
capacidad de interferir en el detector. Estos patrones de interferencia llevan la
información acerca de la estructura de las partículas.

Para el análisis mediante modelos de difracción de bajo ángulo, se deben tener


en cuenta las Interferencias. Éstas pueden ser constructivas o destructivas, en
una interferencia constructiva la interferencia provoca un punto brillante en el
detector y en una interferencia destructiva las ondas se extinguen entre sí,
produciendo una mancha oscura en el detector. (Cuando las ondas llegan en
fase, el detector recibe brillo y cuando las ondas llegan fuera de fase, entonces
el detector recibe oscuridad.) El resultado es un patrón de interferencia 2D,
donde la intensidad varía de posición en el plano de detección.

La dispersión de una partícula formada por muchos átomos, puede ser


explicada como el patrón de interferencia producida por todas las ondas que se
envían al detector de cada electrón/átomo dentro de la partícula.
El esquema de un perfil SAXS es el siguiente:

La dispersión de una partícula formada por muchos átomos puede ser


explicada como el patrón de interferencia producido por todas las ondas que se
envían al detector de cada electrón/átomo dentro de la partícula.

Ley de Guinier: Información respecto del tamaño de la partícula y de su forma


global (sin tener en cuenta detalles estructurales finos). Ley de Fournier:
Información procedente de la forma específica de la partícula dispersora. Ley
de Porod: Información de la superficie.

El factor forma, P(q), de una partícula es el patrón de la interferencia, producido


por las oscilaciones que son típicos de la forma de la partícula. En un intento de
independizarse de la longitud de onda, los patrones de dispersión se presentan
usualmente como funciones de q (“vector de dispersión”)

El instrumental para dicha técnica puede verse en el esquema que aparece a


continuación:
Puede realizarse un análisis más detallado de los patrones SAXS utilizando
modelos geométricos definidos. Existen expresiones matemáticas para factores
de forma correspondientes a diferentes estructuras incorporados a los códigos
de múltiples programas de ajuste de modelos de SAXS.

En un instrumento SAXS se lleva un haz de rayos X monocromático a una


muestra de la cual se dispersan algunos de los rayos X, mientras que la
mayoría simplemente recorre la muestra sin interactuar con ella. Los rayos X
dispersos forman un patrón de dispersión que luego se detecta en un detector
que generalmente es un detector de rayos X planos bidimensionales situado
detrás de la muestra perpendicular a la dirección del haz primario que
inicialmente golpeó la muestra. El patrón de dispersión contiene la información
sobre la estructura de la muestra. El principal problema que debe superarse en
la instrumentación SAXS es la separación de la débil intensidad dispersada del
fuerte haz principal. Cuanto menor sea el ángulo deseado, más difícil será esto.
En SAXS, el haz no dispersado que simplemente viaja a través de la muestra
debe ser bloqueado, sin bloquear la radiación dispersa adyacente. La mayoría
de las fuentes de rayos X disponibles producen haces divergentes y esto
complica el problema. En principio, el problema podría solucionarse enfocando
el haz, pero esto no es fácil cuando se trata de rayos X y anteriormente no se
hizo, excepto en los sincrotrones donde se pueden usar los espejos grandes y
doblados. Esta es la razón por la que la mayoría de los dispositivos de bajo
ángulo de laboratorio dependen de la colimación. Los instrumentos de
laboratorio SAXS se pueden dividir en dos grupos principales: instrumentos de
colimación puntual y de colimación de líneas:

-Los instrumentos de colimación puntual tienen orificios que dan forma al haz
de rayos X en un pequeño punto circular o elíptico que ilumina la muestra. Por
lo tanto, la dispersión se distribuye centro-simétricamente alrededor del haz de
rayos X primario y el patrón de dispersión en el plano de detección consiste en
círculos alrededor del haz primario. Debido al pequeño volumen de muestra
iluminado y al desperdicio del proceso de colimación, solo se permite que
pasen los fotones que vuelan en la dirección correcta; la intensidad dispersada
es pequeña y, por lo tanto, el tiempo de medición es del orden de horas o días
en Caso de dispersores muy débiles. La colimación puntual permite determinar
la orientación de los sistemas no isotrópicos (fibras, líquidos cortados).

-Los instrumentos de colimación de línea restringen el haz solo en una


dimensión, de modo que la sección transversal del haz es una línea larga pero
estrecha. El volumen de muestra iluminado es mucho mayor en comparación
con la colimación puntual y la intensidad dispersada a la misma densidad de
flujo es proporcionalmente mayor. Por lo tanto, los tiempos de medición con la
colimación de líneas de los instrumentos SAXS son mucho más cortos en
comparación con la colimación puntual y están en el rango de minutos. Una
desventaja es que el patrón grabado es esencialmente una superposición
integrada (una auto-convolución) de muchos patrones de orificios adyacentes.
La colimación de líneas es de gran beneficio para cualquier material
nanoestructurado isotrópico, por ejemplo, proteínas, tensioactivos, dispersión
de partículas y emulsiones.
Distinguimos varias aplicaciones:

-Combinación de SAXS y RMN para el análisis estructural de biomoléculas. La


combinación de los métodos SAXS y RMN proporciona información
complementaria sobre la forma tridimensional general y el tamaño de los
complejos e solución (SAXS), así como información de alta resolución sobre las
distancias inter-atómicas, las interfaces y orientación de subunidades (NMR).
La caracterización estructural y dinámica de los complejos proteicos, es clave
para la comprensión de los procesos y mecanismos biológicos esenciales. Para
caracterizar estos sistemas de muestras complejas en su estado natural, deben
ser medidas en solución.

-Determinación de proteínas en solución. La estructura de las proteínas es


comúnmente estudiada por cristalografía y resonancia magnética nuclear
(NMR). La estructura en solución de proteínas es diferente comparado con la
estructura cristalina. Muchas proteínas no se pueden cristalizar. Una solución
diluida de la glucosa isomerasa fue analizada por SAXS, la envoltura 3D fue
calculada a partir de datos de dispersión mediante métodos de análisis en
software. Los resultados basados en SAXS muestran las formas de proteína de
un tetrámero en solución.
BIBLIOGRAFIA

file:///C:/Users/Ines/Desktop/Ines%20UNED/DIFRACCION%20RAYOS
%20X/Tema_3A.pdf

file:///C:/Users/Ines/Desktop/Ines%20UNED/DIFRACCION%20RAYOS
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file:///C:/Users/Ines/Desktop/Ines%20UNED/DIFRACCION%20RAYOS
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https://en.wikipedia.org/wiki/Small-angle_X-ray_scattering

https://prezi.com/zqtuyrdddr66/dispersion-de-rayos-x-a-bajo-angulo-saxs/

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