UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN

MARCOS
(Universidad del Perú, DECANA DE AMÉRICA)
FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
E.P. FARMACIA Y BIOQUÍMICA

INFORME DE LABORATORIO N°5:

CUANTIFICACIÓN DE UNA MUESTRA POR COMPARACIÓN CON UN

ESTÁNDAR Y DETERMINACIÓN DE FRAMICETINA EN UNA SOLUCIÓN OTO-
OFTÁLMICA

CURSO
QUÍMICA ANALÍTICA INSTRUMENTAL

DOCENTE
Dr. Cueva Mestanza Rubén E.
Mg. Carlos Casas Norma Angélica

INTEGRANTES
Del Aguila Santa Maria, Sally Sofia
Gamboa Vega, Evelyn
Gómez Slava, Brian Anderson
Montes Huaynate, Astrid Zully
Quiñones Huayaney, Maria Ines
Salvatierra Tintaya, Luis Enrique

Lima-Perú
2020

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 CUANTIFICACIÓN POR COMPARACIÓN CON UN ESTÁNDAR Y
DETERMINACIÓN DE FRAMICETINA EN UNA SOLUCIÓN OTO-OFTÁLMICA
La Framicetina presente en una forma farmacéutica oto-oftálmica, forma un complejo
coloreado con el nitroprusiato de sodio en un medio bufferado de color púrpura cuyo
máximo de absorción es a 585 nm. La concentración óptima de lectura es a una
concentración de 1000 ppm.

I. OBJETIVO:
● Cuantificar la framicetina por el método de comparación con un estándar
Fundamento:
● Formación de un complejo coloreado de framicetina con el nitroprusiato de
sodio en un medio bufferado.

II. MATERIALES:
● Espectrofotómetro UV- visible Genesys 10S
● Pipetas volumétricas de 1,0; 2,5; 5,0 mL al centésimo, vasos de precipitados,
fiolas de 25 mL.

III. PROCEDIMIENTO:
1. Disponer tres fiolas de 25 mL, marcando respectivamente, blanco (Bl),
estándar (St) y muestra problema (MP).
2. Medir 2,5 mL del estándar de Framicetina al 1% y colocarlo en la fiola estándar.
Medir un volumen adecuado de muestra problema en fiola MP. Medir 2,5 mL
de agua en fiola Bl.
3. Adicionar a todas las fiolas y de manera ordenada: 1 mL de nitroprusiato de
sodio al 10%, 2 mL de acetona, 5 mL de una solución saturada de tetraborato
de sodio.
4. Enrasar con agua destilada. Mezclar y guardar en reposo 10 a 15 minutos.
5. Hacer las lecturas de absorbancia antes de los 20 minutos.

IV. CÁLCULOS Y RESULTADOS:

Para fiola de 25 mL
Para fiola de
10 mL
Blanco Estándar Muestra
Problema

Solución - 2,5 mL - 1 mL
estándar 1%

M.P. - - 2,5 mL 1 mL
(Framidex)

Agua 2,5 mL - - 1 mL
destilada

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 Nitroprusiato 1 mL 1 mL 1 mL 0,4 mL
de sodio 10%

Acetona 2 mL 2 mL 2 mL 0,8 mL

S.S.
Tetraborato 5 mL 5 mL 5 mL 2 mL
de sodio

Agua c.s.p 25 mL c.s.p 25 mL c.s.p 25 mL c.s.p 10 mL

destilada

Long de onda máx: 560 nm

BI St. M.P.

Absorbancia 0 0,539 0,612

(fiola 10 ml)

1. Detallar los cálculos previos. Detallar los cálculos del factor de dilución.

Framicetina al 1% = 1g/100mL ---> 10mg/mL

Concentración óptima: 1000 ug/ml <----> 1 mg/mL

● Para fiola de 25 mL:

C1.V1 = C2.V2
10 mg/mL.V1= 1mg/mL. 25 ml
V1 = 2,5 ml (alícuota)

● Para fiola de 10 mL:

C1.V1 = C2.V2
10mg/mL.V1 = 1mg/mL.10ml
V1 = 1 ml (alícuota)

● Diluciones:
➔ 25 ml ------> 2 ml
10 ml ------> 0,8 ml
➔ 25 ml ------> 2,5 ml
10 ml ------> 1ml
➔ 25 ml ------> 1 ml
10 ml ------> 0,4 ml
➔ 25 ml ------> 5 ml
10 ml ------> 2 ml

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 ● Factor de dilución (FD):
FD = 10 mL
1 mL
FD = 10

2. Hacer los cálculos de la concentración de framicetina en la forma farmacéutica

expresados en mg/mL

Según la Ley de Lambert-Beer:

A = ε.b.c

● Considerando un paso óptico de 1 cm y la misma absortividad molar para

ambos:
A St = A MP
C St C MP

0,539 = 0,612
1000 μg/mL C m.p

C MP = 1135,436 μg/mL
C MP = 1,135 mg/mL

3. Concluya si la muestra se acepta o se rechaza, ¿por qué?

● [MP]1 = A MP x [St] x FD x ( 1mg )

A St (1000 ug )
[MP]1 = 0,612 x [10-3 g/ml] x 10 x 1
0,539
[MP]1 = 0,01135435993 g/ml <--> 11,35 mg/ml

➔ En 100 ml: 1,135 g/100ml

● Rango de framicetina según farmacopea: 90% - 130%

11,35 x 100% = 113,5

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➔ Según la farmacopea, esta muestra es aceptable.

La USP número 36 nos indica que el porcentaje de framicetina se

encuentra entre un rango de 90 a 130%; por lo que la muestra SÍ es
ACEPTADA ya que está dentro del rango permitido (113,5 % < 90.0%).

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V. CONCLUSIÓN:
• Se cuantificó la framicetina por el método de comparación con un estándar

VI. CUESTIONARIO:

1. Desarrolle la ecuación química del fundamento.

2. Cuál es la ventaja de esta forma de cuantificación.

La ventaja de este método de cuantificación para la determinación de un
analito, es la confiabilidad de los resultados obtenidos (1). Ello debido a que,
se trabaja bajo las mismas condiciones, por lo tanto, se elimina o minimiza los
errores (2).

3. ¿En qué consiste un patrón externo? Ejemplos prácticos

El método del patrón externo consiste en un método para cuantificar un
compuesto (analito) presente en una muestra, pero teniendo como referencia
otra muestra de concentración conocida (patrón) (3).
Cuando se quiere cuantificar un compuesto presente en una muestra por el
método del patrón externo y obtener sus cromatogramas, los pasos a seguir
son los siguientes (M):

1 2

Primero se debe preparar Segundo, inyectar el mismo volumen

disoluciones que tengan de cada una de las disoluciones
concentraciones crecientes, del patrón en el cromatógrafo, así como
patrón correspondiente al del extracto de la muestra. De esta
compuesto a cuantificar. El intervalo forma tendremos los distintos
de concentraciones ha de ser similar cromatogramas de los patrones (un
a la concentración del analito en la cromatograma para cada disolución
muestra problema (3). patrón) y el cromatograma de la
muestra (3).

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 Un ejemplo práctico sería, cuando se quiere determinar un analito cuya
concentración en el extracto de la muestra, se espera que esté comprendida
en un margen de 120 a 180 mg/L, se podrían preparar e inyectar en el
cromatógrafo 5 disoluciones patrón con las siguientes concentraciones:
• Patrón 1: 100 mg/L
• Patrón 2: 125 mg/L
• Patrón 3: 150 mg/L
• Patrón 4: 175 mg/L
• Patrón 5: 200 mg/L

4. Determine el valor K de los datos obtenidos en la preparación de la curva

de calibración y observe si es constante o no, e interprete A st/C st = K

Muestra Absorbancia

Estándar (St.) 0,539

M.P. 0,612

Para long. de onda 560 nm:

● En la solución estándar (St.)

Kst. = A st = 0,539__
C st 1000 μg/mL

Kst. = 0,000539 = 5,39 x 10-4

● En la solución problema (M.P.)

KM.P. = A st = 0,612__
C st 1135,436 μg/mL

KM.P. = 0,0005389 = 5,389 x 10-4

5. ¿Cómo se puede calibrar la influencia de la matriz en el método?

El método de adición estándar se usa ampliamente para compensar de forma
parcial o completa las interferencias químicas o espectrales introducidas por la
matriz de la muestra. Un método de adición estándar puede adoptar varias
formas. En una de las más comunes se añaden uno o más incrementos de una
solución patrón a alícuotas de la muestra con volúmenes idénticos (adición de
muestras). Luego cada disolución se diluye a un volumen fijo antes de medir.
Cuando la cantidad de muestra es limitada, las adiciones se realizan mediante

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 introducciones sucesivas de incrementos del patrón a un único volumen
medido de la incógnita. Las medidas se toman en la muestra original y en la
muestra a la que se añadió el patrón después de cada adición.
La matriz de la muestra es casi idéntica después de cada adición, la única
diferencia es la concentración del analito. Los otros constituyentes de la mezcla
de reacción deben ser idénticos porque los patrones están preparados en
alícuotas de la muestra (4).
Dicho de otra forma, varias alícuotas de la solución desconocida cuya
concentración se vierten en matraces de un volumen determinado. A cada uno
se le añade un volumen variable de solución patrón o estándar del analito de
concentración conocida. Luego, se añaden reactivos adecuados y cada
solución se diluye a cierto volumen. Se efectúan las mediciones instrumentales
en cada una de las disoluciones y se corrigen por una respuesta blanco para
obtener una respuesta neta del instrumento (4).
En cada solución, las señales son afectadas de manera similar por los
interferentes de la matriz. En general, se obtienen intervalos lineales de
concentración de trabajo muy estrechos, originados por los efectos químicos
de los componentes de la matriz. Cabe resaltar que este método no elimina las
interferencias, solo las compensa, ya que se obtienen todas las señales
analíticas bajo las mismas condiciones (5).

VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. García M. Apuntes para Espectrometría de Radiación Ultravioleta Visible
(UV/VIS). [Internet]. Universidad Autónoma del Estado de México. 2016. [citado
17 Nov 2020]. Disponible en:
http://ri.uaemex.mx/bitstream/handle/20.500.11799/68318/secme-
1814.pdf?sequence=1&isAllowed=y
2. Velásquez M, Pérez F, Ríos G, Alejandre I, Castillo L, Castrejón L, Chávez M.
Manual de Laboratorio de Análisis de Fármacos y Materias Primas II. [Internet].
Universidad Nacional Autónoma de México. 2016. [citado 17 Nov
2020]. Disponible en: https://www.zaragoza.unam.mx/wp-
content/Portal2015/Licenciaturas/qfb/manuales/13Manual_Analisis_Farmacos
_MateriasPrimas2.pdf
3. M. Segovia I, García E. Cuantificación de compuestos por cromatografía:
Método del Patrón Externo. [Internet]. ETSIAMN - Universidad Politécnica de
Valencia. [citado 17 Nov 2020] Disponible en:
https://riunet.upv.es/bitstream/handle/10251/16719/M%C3%A9todo%20Patr%
C3%B3n%20Externo.pdf?sequence=1
4. Skoog D., Holler F., Crouch S. Principios de análisis instrumental, 6ta ed.
Cengage Learning: México; 2007.
5. Sánchez M. Métodos de calibrado [Internet]. 2018 [Recuperado 17 nov 2020].
Disponible en:
http://webdelprofesor.ula.ve/ciencias/angelisa/Downloads/tecnicascalibracio_
vr1.pdf