“Extracción casera del ADN a partir de tejido vegetal”

Polo Beitia, Andrea Viktoria ID (8-943-2411)

Álvarez Zapata, Byron Elhyel ID (4-833-2160)
Curso de Química Orgánica (QM 234), Escuela de Química, Facultad de Ciencias
Naturales y Exactas, Universidad Autónoma de Chiriquí, República de Panamá

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[email protected]

I. Resumen

En el presente informe se documentan los resultados obtenidos en la extracción

de moléculas de ADN procedentes de bananas con la finalidad de aplicar una
técnica relativamente sencilla para extraer ADN con instrumentación casera,
comprender el proceso de extracción y la funcionalidad de los reactivos utilizados.
Para iniciar con los procesos de extracción se preparó una solución salina-
jabonosa (detergente, sal y agua), luego se trituró la fruta para obtener una
muestra homogénea que hace más fácil el rompimiento o lísis de las células;
seguidamente se mezcló la solución salina-jabonosa con la muestra de fruta a
baño maría (37ºC), se filtra dicha mezcla para eliminar la parte sólida del sistema y
finalmente se procedió a hacer precipitar el ADN por acción de alcohol etílico. Si al
introducir una varilla de vidrio en la solución, se logra observar una fibra
blaquecina enrollarse a la varilla, es indicativo de que se extrajo con éxito las
moléculas de ADN, lo cual se logró observar al realizar la experiencia. Al finalizar
este experimento se comprobó la eficiencia de la técnica de extracción utilizada y
la importancia de estudiar el ADN ya que este contiene la información genética de
las células

II. Palabras claves: extracción, células, ácidos nucleicos, moléculas,

ADN.

III. Objetivos Muchas veces, el ADN es comparado

con un plano o una receta, o
 Aplicar una técnica sencilla un código, ya que contiene las
para obtener ADN de células instrucciones necesarias para
vegetales. construir otros componentes de
 Comprender el proceso las células, como las proteínas y las
necesario para la extracción moléculas de ARN. Los segmentos
del ADN. de ADN que llevan esta información
genética son llamados genes, pero
IV. Marco teórico las otras secuencias de ADN tienen
propósitos estructurales o toman
parte en la regulación del uso de esta la célula, para luego separar las
información genética. moléculas de ADN del resto de los
Para que la información que contiene constituyentes de la célula.
el ADN pueda ser utilizada por la A la hora de escoger que método
maquinaria celular, debe copiarse en de extracción de ADN utilizar se
primer lugar en unos trenes de tienen en cuenta varios factores:
nucleótidos, más cortos y con unas  La cantidad de muestra de la
unidades diferentes, llamados ARN. que se dispone para extraer el
ADN.
Los ácidos nucleicos, y el ADN en  El tipo de muestra o fuente de
particular, son macromoléculas clave la que se quiere obtener el
en la continuidad de la vida. El ADN ADN.
lleva la información hereditaria que se  La pureza con la que se quiere
trasmite de padres a hijos y obtener el ADN extraído.
proporciona las instrucciones sobre  El tiempo que consume cada
cómo (y cuándo) hacer muchas método, su costo y el
proteínas necesarias para construir y rendimiento esperado.
mantener en funcionamiento células,
 Uso que se le va a dar al ADN
tejidos y organismos. Los ácidos
extraído. (Guzmán, E. 2005).
nucleicos, macromoléculas
compuestas de unidades llamadas
V. Materiales y reactivos
nucleótidos
En el ácido desoxirribonucleico, o
Cuadro 1. Materiales
ADN, las cadenas se encuentran
normalmente en una doble hélice,
Material Cantidad Capacidad
una estructura en la que dos cadenas
Medidor 1 100 mL
emparejadas (complementarias) se
de
unen entre sí. Los azúcares y los
volumen
fosfatos se encuentran en el exterior
Licuadora 1 ---------------
de la hélice y constituyen el esqueleto
del ADN; esta parte de la molécula se Envases 2 100 mL
suele llamar esqueleto de azúcar- de vidrio
fosfato. Las bases nitrogenadas se Tubo de 1 ---------------
extienden hacia el interior, en parejas, ensayo
como los peldaños de una escalera; Papel 2 ---------------
las bases de un par se unen entre sí filtro de
mediante puentes de hidrógeno. café
(Morales J.) Varilla 1 ---------------
policial
La extracción de ADN se realiza para Cuchillo 1 ---------------
obtener las moléculas aisladas con
alto grado de pureza y poderlas
utilizar en investigación científica, en
medicina o para la ciencia forense. Cuadro 2. Reactivos
La mayor parte de los métodos que
existen para extraer el ADN consisten Reactivo Cantidad
en lograr primero la lisis o ruptura de Jabón lava 1 cucharada
platos 1-Preparación de solución salina-jabonosa:
Sal de mesa 1 cucharada Preparamos una solución salina-jabonosa
NaCl compuesta con 100 ml de agua (media taza), 10 ml
Fruta fuente de 1 fruta de detergente lavaplatos (1 cucharada) y 13 g de
NaCl o sal de cocina (una cucharada). Mezclamos
ADN muy bien , luego trasvasamos a un recipiente y la
Agua 100 enfriamos en la nevera.
VI. Procedimientos

2- Preparación de las frutas:

se usa plátano, lo pelamos y cortamos en cubos
pequeños, luego lo trituramos en un mortero o
licuamos en períodos breves de 10 segundos con
un poco de agua, hasta que quede pastoso.

3- Adición de la solución de sal y detergente a la

fruta: Agregamos la solución salina-jabonosa bien
fría al vaso de la licuadora . Licuamos en pulsos
cortos durante 2 minutos. colocamos el preparado
en un baño de María a 37ºC durante 15 minutos
para facilitar la extracción.

4- Separación del material sólido, proteínas y

lípidos:
Pasamos por un papel de filtro de café para
retirar el grueso de la sopa de fruta, hasta obtener
5 ml del liquido filtrado en un envase. Durante
todo eltiempo mantenemos el filtrado bien frío.

5- Precipitación del ADN por acción del alcohol:

Sobre el jugo de fruta, vertemos lentamente por
las paredes del tubo el etanol frío. Dejamos
reposar unos minutos. Debe aparecer una capa
blanquecina gelatinosa. Si introducimos una varilla
de vidrio, con movimientos circulares podremos
recuperar el ADN enrollado en la varilla.
 VII. Resultados

A. Estudiante Byron Álvarez

Figura 4. Filtrado de la mezcla

Figura 1. Fruta seleccionada para

extracción

Figura 5. ADN enrollado en varilla de

vidrio

Figura 2. Mezcla de Bananos y solución B. Estudiante Andrea Polo

salina-jabonosa previamente licuada

Figura 6. Fruta seleccionada para la

extracción
Figura 3. Mezcla de banano y solución
salina-jabonosa en baño maría
 el cual se encuentra el ADN de los
tejidos utilizados. En cuanto más
muestra trituremos, mayor será la
cantidad de núcleos se romperán y
mucho más eficiente será la
experiencia por el simple hecho de el
aumento de los ácidos nucleicos en la
mezcla. Según [ CITATION Sci09 \l
3082 ] , El ADN y otros componentes
celulares, como lípidos, azúcares y
proteínas, se disuelven en la solución
de lisis.
Luego de esto agregamos una
solución salina- jabonosa a
Figura 7. Filtrado de la mezcla
temperatura baja para que el
detergente descompusiera
los lípidos en la membrana celular y
los núcleos. El ADN se libera a
medida que se rompen estas
membranas. Según
(McDoogleburger, Amelia, 2018)
agregamos solución salina para
tornar el medio en una condición de
diferencia osmótica mayor, y así los
núcleos que aún no se habían roto
logren romperse en totalidad por el
fenómeno conocido como plasmólisis,
en el cual el agua se desplazará de
menor a mayor concentración (de
dentro hacia fuera) y con ella se
Figura 8. ADN en varilla de vidrio muevan las fibras de ADN las cuales
son muy pequeñas y logran atravesar
VIII. Discusión
la membrana nuclear. Es importante
mencionar que se aconsejó agregar
La extracción de ADN es un
jugo de piña para facilitar la
procedimiento de rutina que se utiliza
extracción, en nuestro caso no se
para aislar el ADN del núcleo de las
realizó este paso, pero aun así surge
células. Para dar inicio con este
la interrogante ¿Qué función cumple
proceso llevamos a cabo el primer
el jugo de piña? Según [CITATION
paso de tres existentes: la lisis de las
Kit06 \l 3082 ] se añade proteasa,
células, para ello se procedió a
una enzima que digiere proteínas,
triturar la fruta seleccionada (en
para eliminar las proteínas unidas al
nuestro caso el plátano) en una
ADN y para destruir las enzimas
procesadora con un poco de agua.
celulares que podrían digerir el ADN.
Esto se realiza para que las células
Esto asegura que la cantidad de ADN
presentes en el tejido se rompan y así
intacto recogida sea máxima. El
resulta más fácil obtener el núcleo en
extracto celular que contiene
proteasa se incuba a 50 ºC, la IX. Conclusiones
temperatura óptima para la actividad
proteasa, esta es la razón del baño  Se comprobó que es posible
maría aplicado en la experiencia. extraer de manera exitosa las
Finalizado esto llegamos al segundo moléculas de ADN
punto de los procesos de extracción provenientes del plátano
del ADN: La separación del ADN de aprovechando las
las proteínas y otros restos celulares. características fisicoquímicas
Para obtener una muestra limpia de la molécula, ya que
de ADN , es necesario eliminar la utilizando los reactivos y
mayor cantidad posible de restos procedimientos adecuados
celulares. Esto se puede hacer esta molécula interactuará y se
mediante una variedad de métodos. A separará sin inconvenientes
menudo algunos de los desechos  Se comprendió que la
celulares se pueden eliminar filtrando selección del método de
la muestra para así lograr extraer la extracción es fundamental en
mayor cantidad de ADN sin este tipo de técnica y depende
interferencias como lo pueden ser los principalmente del analito de
sólidos presentes en la mezcla interés, y de cuan purificado
manipulada. deseemos el producto final.
Finalmente, una ves sean separados  Pudimos corroborar que
el ADN de proteínas y lípidos extracción de ADN íntegro y
presentes en la matriz de la sin contaminantes es esencial
muestra, se agrega para tener éxito en la
cuidadosamente alcohol helado (ya obtención de datos genéticos,
sea etanol o isopropanol) a la es el primer paso en la lista de
muestra de ADN. Según[ CITATION técnicas moleculares que nos
Mat02 \l 3082 ] El mismo por su llevarán a comprender mejor y
naturaleza química es soluble en conservar la diversidad
agua pero insoluble presencia biológica a partir del
de sal y alcohol. Esto se debe a que conocimiento de genes y
con altas concentraciones de iones genomas que anteriormente
de sodio que se unen a los grupos era inaccesible para le
fosfato neutralizando su carga ecología y la evolución.
negativa, esta mezcla reduce las
fuerzas repulsivas entre las cadenas
de ADN y permite que el mismo se X. Referencias
pliegue sobre si mismo haciéndolo bibliográficas
insoluble. Todo este proceso es
preferible que se realice en frio  Morales J. Laboratorio de
debido que esto favorece a la Biología, Universidad Libre,
precipitación del ADN. Al agitar Facultad de Ingeniería
suavemente la capa de alcohol con  Guzmán, E. (2005). Biología
un policial, se hace visible un para bachillerato. México:
precipitado que se puede enrollar. Si
LIMUSA
hay mucho ADN, es posible que vea
un precipitado blanco fibroso.
  Science Learning Hub - Pokapū Akoranga Pūtaiao. (18 de Junio de 2009).
DNA Extraction. Science Learning Hub - Pokapū Akoranga Pūtaiao , 5.
 BIO-RAD. (16 de 2006 de 2006). Biotechnology Explorer™. Recuperado el
1 de Septiembre de 2020, de BIO-RAD: http://www.bio-
rad.com/webroot/web/pdf/lse/literature/4110034ES.pdf
Interacciones entre las moléculas que
 Mathews, v. H. (2002). conforman la pared, la membrana
Bioquímica. (1Vol. 3ª ed). mexico: celular y nuclear se modifican o
Pearson Education. destruyen permitiendo que los ácidos
nucleicos se liberen
Cuestionario
5- ¿Cuál es el papel del
1. ¿Qué contiene el zumo de cloruro de sodio?
piña?
Este permite que los grupos fosfatos
Bromelina es una enzima con cargados negativamente se
acción proteolítica para una mejor neutralicen debido a su unión con el
asimilación de los aminoácidos que ion de sodio, lo que permite que las
las componen. La bromelina deshace moléculas de ADN se pliegue sobre si
las proteínas de igual manera que misma y posteriormente precipite.
la pepsina, enzima que forma parte
del jugo gástrico. Se encuentra en 6. ¿Cuál es la estructura del
las piñas. ADN (primaria, secundaria,
terciaria) que visualizamos a
2. ¿Cuál es el efecto del través del tubo de ensayo?
alcohol en el aislamiento
de ácidos nucleicos? La estructura secundaria, la cual es
El alcohol se utiliza para precipitar cuando el ADN se encuentra en
el ADN que es soluble en agua pero forma desenrollada lo que permite
que al encontrarse con alcohol éste que el mismo se acumule y precipite.
se desenrolla y cae hasta quedarse
entre el agua y el alcohol, dos 7. ¿Qué se hace para
líquidos con distintas densidades. remover las proteínas
asociadas al ADN, para
3-¿Cuál es el papel de la poder obtener ADN puro?
trituración en la extracción
de ADN? Se filtra la muestra para separarla de
la matriz de proteínas y lípidos
Consiste en romper las uniones entre también se podría centrifugar la
las células para facilitar la interacción muestra para obtener una mejor
con las soluciones de lisis que separación.
ayudan a liberar el material genético

4-Cuál es el papel de la
adición del detergente?
 8. Dibuje la estructura de la
adenina y la timina e indique
como se unen los puentes
hidrógeno entre las dos

bases nitrogenadas.

9. ¿Qué fue lo que quedó en

la solución luego de sacar
las fibras de ADN?

Que da parte de la solución acuosa

de jabón con sal y el etanol.

10-Qué pruebas de
laboratorio se utilizan para
identificar que el material
extraído es un ácido
nucleico?.

Se utiliza la técnica de
espectrofotometría también se puede
utilizar la electroforesis y la
ampliación por PCR.