PROTOCOLO DE LABORATORIO

CURSO MICROBIOLOGÍA
Código 151006

Claudia Patricia Jiménez Forero

Directora de curso

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA

ESCUELA DE CIENCIAS DE LA SALUD
Bucaramanga, mayo 2020

1
 Contenido

Pág.

Introducción.................................................................................5
Actividad práctica 1. Medios de cultivo, métodos de siembra y
características macroscópicas de cultivos bacterianos.........................7
Actividad práctica 2. Caracterización microscópica de cultivos
bacterianos: Coloración de Gram...................................................18
Actividad práctica 3. Siembra de Microbiota normal..........................22
Actividad práctica 4. Prueba de susceptibilidad a antimicrobianos:
difusión en disco.........................................................................26
Actividad práctica 5. Caracterización macroscópica y microscópica de
hongos......................................................................................30
Actividad práctica 6. Parásitos de importancia en salud.....................35
Bibliografía.................................................................................40

2
 Lista de tablas

Pág.

Tabla 1 Clasificación de los microorganismos según algunas condiciones

del medio ambiente.......................................................................7
Tabla 2 Métodos para el cultivo de microorganismos en medios sólidos10
Tabla 3 Características macroscópicas de colonias bacterianas en
cultivos sólidos............................................................................11

3
 Lista de figuras

Pág.

Figura 1 Clasificación de los medios de cultivo...................................9

Figura 2 Características microscópicas observables en la coloración de
Gram.........................................................................................18
Figura 3 Árbol filogenético de la vida..............................................22
Figura 4 Diferencias morfológicas y de tamaño entre hongos
filamentosos, levaduriformes y bacterias.........................................30

4
 Introducción

La Microbiología es la ciencia que estudia aquellos organismos vivos

cuyo tamaño se encuentra por debajo del poder resolutivo del ojo
humano, desde luego, ciencia precedida por la invención del
microscopio, con sus principios estructurales tal como ahora se le
conocen, alrededor del año 1620. Un siglo después, la experimentación
en animales, el descubrimiento de los cultivos bacterianos, la relación
entre patógeno y patología, el perfeccionamiento de técnicas
microbiológicas, entre otros, abrió los canales para constituir el cuerpo
de conocimientos de esta ciencia.

Fue así como resultado de la observación y análisis, aquel otro reino

diminuto y antes inexistente por descubrir, trajo consigo nuevas ciencias
como la inmunología y la virología, afianzando la relación estrecha con
la Medicina. Hecho que no quedó allí puesto que estudios posteriores
sobre microbiota del suelo han resaltado la gran diversidad fisiológica de
los microorganismos y su ubicuidad, generando la necesidad de que
otras ciencias biológicas entraran a apoyar el estudio de
microorganismos, tales como la genética y la bioquímica, dando así paso
a la biología celular y molecular.
Por las atribuciones de esta ciencia, el amplio campo de acción y el
propósito de la comprensión cabal por parte del estudiante,
especialmente desde el punto de vista práctico, de lo que se debiese
hacer y cómo se debiese hacer, el curso de Microbiología de la Escuela
de Ciencias de la salud de la Universidad Nacional Abierta y a Distancia
UNAD, está diseñado para que los estudiantes, a través de actividades
prácticas, lleven a cabo procesos para comprender, aplicar y desarrollar
nuevo conocimiento en el estudio de la Microbiología.
El objetivo propuesto aquí se divide básicamente en cuatro partes, una
que involucra aplicar conceptos en la resolución de problemas por parte
del estudiante, mediante el análisis de la información; otra que
desarrolla un pensamiento crítico y de análisis a través de la discusión;
una más, explicando los conceptos de microbiología con el lenguaje
técnico apropiado en los ejercicios académicos y, otra que contiene los
elementos generales para desarrollar habilidades en el estudiante, las

5
cuales les permitan la identificación de posible causalidad, factores de
riesgo y medidas preventivas en los eventos infecciosos en salud.
Por último, es bueno resaltar que esta guía no tiene la pretensión de ser
un profundo estudio teórico, ni una guía exhaustiva para el desarrollo de
prácticas, sino que principalmente se centra en interpretar lo mejor
posible a términos prácticos algunos aspectos propios de la
Microbiología, de modo que se facilite su manejo por parte de los
interesados.

6
 Actividad práctica 1. Medios de cultivo, métodos de siembra y
características macroscópicas de cultivos bacterianos

Introducción

Los medios de cultivo son una preparación compuesta de biomoléculas

conformadas por macronutrientes tales como carbono, oxígeno,
hidrogeno, nitrógeno, fósforo y azufre, y de micronutrientes como el
magnesio, cobalto, entre otros; cuyo fin es lograr el crecimiento,
transporte o mantenimiento de microorganismos. Su clasificación se
puede observar en la Figura 1.

Sin embargo, los medios de cultivo no son los únicos necesarios para
generar multiplicación y desarrollo de microorganismos, se hacen
necesarias condiciones físicas tales como el pH, temperatura, luz,
presión, entre otras, su conocimiento permite el diseño de métodos para
control o destrucción de poblaciones de estos organismos. Según sean
estas condiciones, se desarrollarán algunos microorganismos y otros no,
por ello se han establecido clasificaciones para cada condición (Tabla 1).

Tabla 1 Clasificación de los microorganismos según algunas

condiciones del medio ambiente

Clasificación de
Condición Definición los Significado
microorganismos
Indica la Crecen entre
Acidófilas
concentración de pH 0 y 5.0 pH
H+ en una solución Crecen entre
pH Neutrófilas
e interfiere en el pH 5.0 y 8.0
funcionamiento de Crecen entre
Alcalófilas
biomoléculas pH 8.5 a 11.5
Pueden crecer
Magnitud que mide a 0°C, pero su
el calor de un Psicrófilas temperatura
Temperatura objeto e influye en optima es
la velocidad de las 15°C
reacciones Se desarrollan
Mesófilas
químicas en los 25-40°C
microorganismos Se desarrollan
Termófilas
45-60°C
Concentración El oxígeno es un Aerobias Se desarrollan

7
 Clasificación de
Condición Definición los Significado
microorganismos
gas incoloro e en 20% de O2
inodoro que Se desarrollan
de Oxígeno Anaerobias
interviene en en presencia o
facultativas
procesos de ausencia de O2
crecimiento Se desarrollan
Anaerobias
bacteriano en <2% de O2
Se expresa como Viven en
actividad de agua medios
Disponibilidad (aw) que es una hipertónicos y
Osmófilos
de agua medida del agua se subdividen
disponible para el en halófilos y
microorganismo sacarófilos.
Fuente: Construcción propia equipo de docentes (2017)

Conjunto a la creación de medios de cultivo y al descubrimiento de las

condiciones de crecimiento de los microorganismos, se han creado
métodos de siembra para cultivar y separar las diversas poblaciones de
microorganismos provenientes de las muestras a estudiar. La acción de
sembrar (o inocular) implica poner una porción de la muestra (ej. Agua,
alimentos, sangre, etc) en un medio de cultivo e incubarlo en
condiciones adecuadas. Según sea el medio de cultivo, se pueden
emplear instrumentos tales como: asas bacteriológicas, hisopos, pipeta
o asa de Drigalsky, teniendo en cuenta que todos ellos deben estar
estériles a la hora de hacer uso de ellos.

8
Figura 1 Clasificación de los medios de cultivo.

Fuente: Rojas (2011). Conceptos y práctica de Microbiología general.

Manual.

En un medio líquido, el método de cultivo es relativamente sencillo,

consiste en agregar parte de la muestra al recipiente en dónde se
encuentra el medio; esa muestra puede agregarse con una pipeta o un
asa estéril. Mientras que, para los medios de cultivo sólidos, se han
generado diversos métodos (Tabla 2).

9
Tabla 2 Métodos para el cultivo de microorganismos en medios
sólidos

Método Proceso
1. Esterilizar asa bacteriológica recta y dejar
enfriar.
2. Tomar la muestra con el asa estéril.
Siembra en 3. Introducir el asa –con el inoculo- de forma
picadura o vertical y en el centro del tubo con medio de
punción cultivo.
4. Saque el asa rápidamente y evite tocar las
paredes del tubo.
5. Esterilizar asa.
1. Esterilizar asa bacteriológica recta y dejar
enfriar.
2. Tomar la muestra con el asa estéril.
3. Introducir el asa –con el inoculo- de forma
Siembra en estría vertical, en el borde inferior del tubo con medio
de cultivo inclinado.
4. Sacar, lentamente el asa, e inmediatamente
realizar estrías (líneas en zigzag) en la
superficie del medio, hasta su borde superior.
5. Esterilizar asa.
1. Esterilizar asa bacteriológica curva y dejar
enfriar.
2. Tomar la muestra con el asa estéril.
3. Suspender la muestra en un extremo de la caja
con medio de cultivo, realizando estrías –no
superpuestas- sobre una tercera parte de la
Siembra por caja.
agotamiento 4. Esterilizar asa bacteriológica curva y dejar
enfriar.
5. Realizar estrías en dirección perpendicular a las
estrías antes hechas, comenzando en la última
estría.
6. Repetir el paso 4 y 5.
7. Esterilizar asa.
Siembra en 1. Esterilizar asa bacteriológica curva y dejar
cuadricula enfriar.
2. Poner volumen de muestra en caja con medio
de cultivo, usando pipeta automática.
3. Distribuir la muestra con el asa, en forma de
línea recta por el centro del medio de cultivo.
4. Hacer estrías de lado a lado del medio de

10
 Método Proceso
cultivo y en sentido contrario a la línea recta
antes hecha.
5. Girar el medio de cultivo 90°grados y hacer
estrías de lado a lado del medio y en sentido
contrario a las estrías hechas antes.
6. Esterilizar asa.
1. Destapar el hisopo estéril.
2. Introducir el hisopo en la muestra.
3. Sacar el hisopo y escurrirlo en las paredes del
recipiente dónde está la muestra.
4. Hacer estrías estrechas de lado a lado de la
Siembra con caja con medio de cultivo, desde el borde
hisopo superior hasta el borde inferior.
5. Girar el medio de cultivo 90°grados y hacer
estrías estrechas de lado a lado del medio y en
sentido contrario a las estrías hechas antes.
6. Repetir el paso 5, tres veces más.
7. Arrojar el hisopo en Guardián de desechos.
Fuente: Construcción propia equipo de docentes (2017)

Hecho esto, posterior a la siembra de microorganismos, se espera

obtener crecimiento de microorganismos, el cual tendrá unas
características macroscópicas y microscópicas.

Las características macroscópicas de un microorganismo son todos

aquellos detalles observables a simple vista en los medios de cultivo
sembrados; en medios de cultivo líquidos se puede observar
enturbiamiento u opacidad (ligera, media o nula), precipitados o
sedimentos (compacto, polvoriento, granuloso, viscoso) o formación de
película. En los medios sólidos se pueden observar diversas
características de la morfología de las colonias, entre ellas la hemólisis,
la producción de pigmentos y las que se exponen en la tabla 3.

Tabla 3 Características macroscópicas de colonias bacterianas en

cultivos sólidos.

Características
Tamaño Grande >1mm
Mediano 1mm
Pequeño <1mm

11
 Características
Forma Puntiforme

Circular

Filamentosa

Irregular

Rizoide

Lanceolada

Borde Continuo

Ondulado

Lobulado

Espinoso, dentado o
lacerado

Filamentoso

Elevación Plana o aplastada

Convexa

Mamelonada

12
 Características
Pulvinada

Umbilicada

Superficie Lisa
Rugosa
Consistencia Blanda
Dura
Mucoide
Aspecto Brillante
Opaco
Fuente: Construcción propia equipo de docentes (2017). Modificado de
Rojas 2011.

Objetivos

 Clasificar los diferentes tipos de medios de cultivo que se manejan en

el laboratorio de microbiología.
 Practicar los métodos de siembra de microorganismos en diferentes
medios de cultivo.

Materiales

Materiales de la práctica de laboratorio simulado

 Acceso a internet
 Protocolo de laboratorio
 Gelatina de cualquier color (simulará el medio de cultivo),
palillos largos (simulará el asa bacteriológica), recipientes
redondos (simulará cajas de Petri) y un vaso angosto o tubo de
vidrio (simulará tubo de cultivo inclinado).
 Ver vídeo introductorio en: https://www.youtube.com/watch?
v=30htD86TWzE

13
Procedimiento-Ejercicio trazo de siembra

1. Preparación de un medio de cultivo simulado (en gelatina): Prepare

en casa gelatina de cualquier color, póngala en 3 moldes redondos
del tamaño de su mano, preferiblemente transparentes y de una
profundidad aproximada de 3 a 4 centímetros. Ponga gelatina en un
tubo o vaso con tapa, déjelo en la nevera con una inclinación
aproximada de 45° de tal manera que la gelatina coagule haciendo
una superficie inclinada respecto al tubo.
2. En uno de sus cultivos redondos, pase uno de los palillos haciendo
una siembra simulada por método de agotamiento. Recuerde no
romper la gelatina sólo evidenciar el trazo.
3. En otro de sus medios de cultivo redondo, pase uno de los palillos
haciendo una siembra simulada por método de estría.
4. El que le queda haga el mismo ejercicio y siembre en rejilla.
5. En el medio de cultivo simulado con inclinación, siembre por estría.
6. Tome fotografías de la ejecución de cada uno de los puntos
anteriores y anéxalas como evidencia en la pregunta 2 del
cuestionario.

Cuestionario y resultados
1. Complete la siguiente tabla:

Utilidad (para qué sirve, que

Nombre del medio de
Componentes del agar grupo de bacterias ayuda a
cultivo
identificar o crecen en él)
Agar MacConkey  Sales biliares  Solo sirve para que
crezcan los bacilos gran
 Colorante cristal negativos
violeta  Agar selectivo para el
aislamiento de
 Indicador rojo Salmonellas, Shigellas y
neutro bacterias Coliformes, a
partir de heces, orina,
 Lactosa alimentos, aguas
residuales, etc.
 Peptona

14
  Cloruro sódico
 Medio de cultivo
utilizado para
propósitos generales,
para el aislamiento y
recuento de
 0,5% de peptona;
microorganismos con
 0,3% de extracto
escasos requerimientos
de carne/extracto
nutricionales, su uso
de levadura;
esta descripto en
 1,5% de agar;
procedimientos para el
 0,5% de cloruro de
análisis de alimentos,
sodio;
Agar Nutritivo aguas y otros materiales
 agua destilada;
de importancia sanitaria
 pH casi neutro (6,8)
 sirve para el subcultivo
a 25 °C.
de especies,
 El caldo nutritivo se mantenimiento de
hace exactamente cepas, contaje de
igual, excepto por colonias, como base
la omisión del agar. para preparar agar
sangre, entre otras.
 Escherichia coli
 Staphylococcus aureus
 Enterococcus faecalis
Agar SIM Está compuesto por:  Es un medio de cultivo
 tripteína que se considera
 peptona diferencial, debido a
 sulfato de hierro que su uso logra
 sulfato de amonio distinguir entre los
 tiosulfato de sodio microorganismos
 agar. capaces de producir
sulfuro de hidrógeno de
los que no lo hacen;
también destaca
aquellas que forman
indol a partir del
triptófano de las que no
lo forman, y finalmente
diferencia las bacterias
mótiles de las inmóviles.
 especialmente diseñado
15
 para ayudar a la
identificación de
algunas bacterias,
principalmente de la
familia
Enterobacteriaceae.

2. Complete la siguiente tabla con los medios de cultivo empleados y

el esquema del tipo de siembra que realizó.

Medio de cultivo Esquema o fotografía de

Tipo de Siembra
(preparado en gelatina) la siembra que realizó

Incorpore fotografía

Incorpore fotografía

Incorpore fotografía

Incorpore fotografía

3. Averigüe 3 microorganismos diferentes que puedan cultivarse en

al menos 2 de los medios de cultivos tratados en la pregunta 1 e
indique: En qué condiciones de temperatura y tiempo se realiza la
incubación.
Agar MacConkey:
1. Escherichia coli
2. Proteus mirabilis
3. Salmonella typhimurium

16
Almacenarlas en un lugar oscuro a una temperatura de 2 a 8 °C en su
envase original hasta justo antes de su uso. Evitar la congelación y el
sobrecalentamiento. Las placas pueden inocularse hasta la fecha de caducidad e
incubarse durante los tiempos de incubación recomendados.
Las placas de pilas abiertas de 10 unidades almacenadas en un área limpian a una
temperatura de 2 a 8 °C pueden utilizarse durante una semana.

Agar Nutritivo
1. Streptococcus pyogenes
2. Escherichia coli
3. Staphylococcus aureus

El tiempo, la temperatura, y la atmosfera de incubación, dependerán del

microorganismo que se quiera recuperar.
En general se recomienda:
Bacterias de fácil crecimiento: en aerobiosis, a 35-37° C durante 18 a 24 horas.
Bacterias exigentes en sus requerimientos nutricionales: en atmosfera con 5-10 % de
CO₂ a 35-37 °C durante 24-48 horas
Temp. Min.:2 ºC Temp. Max.:25 ºC

4. Describa las características macroscópicas de las colonias

resultantes de siembra en los medios de cultivo usados en el
siguiente video de la Universidad de Salamanca.
https://www.youtube.com/watch?v=6hfS1XbPfQk

AGAR NUTRITIVO

 De tamaño mediano
 Con bordes ondulados
 elevación convexa
 superficie lisa
 consistencia blanda
 aspecto opaco
 Tonalidad cremosa

AGAR MacConkey

 De tamaño pequeño

17
  borde filamentoso
 elevación mamelonada
 superficie rugosa
 consistencia dura
 aspecto brillante
 Tonalidad turquesa

EMB Levine

 Tonalidad verde metálica

 De tamaño grande
 bordes espinoso, dentado o lacerado
 elevación convexa
 superficie rugosa
 consistencia mucoide
 aspecto brillante

Recuerde: 1. Ver el video, indicar la cepa sembrada en cada Agar. 2.

Describir las características de la cepa en el cuadro respectivo y tomar
la fotografía del vídeo o dibujar lo que ve. 3. Si desea ampliar su
observación puede buscar en los siguientes Atlas microbiológicos la cepa
sembrada en el agar correspondiente.

Atlas disponibles para ampliar visualización:

Atlas de Socalemi: http://www.socalemi.es/index.php/atlas-de-

microbiologia (en este atlas puede revisar los microorganismos por su
clasificación)

Atlas de microbiología Online:

https://www.microbiologyinpictures.com/atlas%20de
%20bacteriologia.html (en este atlas debe hacer click sobre las fotos del
encabezado de la página para ver todos los recursos, hacer la búsqueda
y ampliar la visualización)

18
Medio de cultivo Agar MacConkey cepa sembrada:_________________
Características Dibujo o fotografía tomada del
Descripción de la cepa
macroscópicas vídeo

Tamaño Pequeño

Forma Lanceolada

Superficie Rugosa

Consistencia Dura

19
Medio de cultivo Agar MacConkey cepa sembrada:_________________
Características Dibujo o fotografía tomada del
Descripción de la cepa
macroscópicas vídeo

Aspecto Opaco

Color Turquesa

Agar EMB Levine (escoja uno de los cultivos explicados en el

Medio de cultivo
vídeo) cepa sembrada: 1. Escherichia coli
Características Dibujo o fotografía tomada del
Descripción de la cepa
macroscópicas vídeo

20
 Tamaño Grande

Forma Lanceolada

Superficie Rugosa

Consistencia Mucoide

21
 Aspecto Brillante

Color Verde metálico

5. Registre las referencias citadas, usando norma APA

 https://www.youtube.com/watch?v=6hfS1XbPfQk
 https://mdmcientifica.com/agar-macconkey-2/
 https://es.wikipedia.org/wiki/Agar_MacConkey
 https://www.lifeder.com/agar-nutriente/
 https://www.lifeder.com/medio-sim/#:~:text=El%20medio%20SIM%20es
%20un,tiosulfato%20de%20sodio%20y%20agar.
 https://www.bd.com/resource.aspx?IDX=8804#:~:text=Incubar%20la%20placa
%20de%20agar,durante%2024%20a%2048%20horas.

22
 Actividad práctica 2. Caracterización microscópica de cultivos
bacterianos: Coloración de Gram

Introducción

Dentro de las técnicas de diagnóstico directo en enfermedades

infecciosas se emplea frecuentemente el examen microscópico, con el
propósito de observar las características de los microorganismos de la
muestra a estudiar. Dicho examen puede hacerse a través de la
realización de una preparación en fresco de la muestra o se puede
realizar coloreando la misma. Dentro de las coloraciones más empleadas
en la Microbiología se encuentra la coloración de Gram, la cual fue fruto
de la curiosidad del médico Danés Hans Christian Joachim Gram, en
1884, cuando este examinaba tejido pulmonar obtenido de un paciente
fallecido por neumonía, observando que las bacterias presentes en la
muestra tomaban diferentes coloraciones cuando se les colocaban
distintos colorantes.

Pero ¿para qué hacer coloración? Los microorganismos no solo son

invisibles para el ojo humano, sino que también son semitransparentes;
esto hace que su visualización a través del microscopio sea aún más
difícil. Por lo anterior, la coloración de Gram permite revelar tamaño,
forma, agrupación y afinidad tintorial (Figura 1), características que
hacen posible la clasificación de microorganismos.

Figura 2 Características microscópicas observables en la

coloración de Gram.

Fuente: Construcción propia equipo de docentes (2017)

23
Con la coloración de Gram se pueden establecer dos grandes grupos de
bacterias: Gram positivas y Gram negativas. Las bacterias Gram
positivas se observarán moradas, debido a que retienen el complejo
cristal violeta-lugol, a pesar de la exposición a la solución de alcohol-
acetona; mientras que las bacterias Gram negativas se observaran
rojas, debido a que no retienen el complejo cristal violeta-lugol y por lo
tanto dejan el espacio al colorante de contraste: la safranina. Esta
diferencia en la afinidad tintorial está dada por la pared celular
bacteriana, compuesta de peptidoglicano o mureína, que para las
bacterias Gram positivas es más gruesa y forma más entrecruzamientos
que en las bacterias Gram negativas.

En conclusión, esta coloración es un gran aporte al estudio de las

enfermedades infecciosas; técnica sencilla, rápida y que aporta
información valiosa a la hora de apoyar un diagnóstico, ya que no sólo
permite identificar el microorganismo, sino que esta puede sugerir
antimicrobianos efectivos para tratar el mismo.

Objetivos

 Conocer la coloración de Gram en las muestras a estudiar.

 Clasificar las bacterias por su afinidad tintorial, su morfología y
agrupación.

Materiales

Materiales de la práctica de laboratorio mediado

 Acceso a internet
 Protocolo de laboratorio
 Hojas blancas y colores, o uso de Word con herramientas para
gráficos con colores.
 Ver vídeo de coloración de Gram de la Universidad de Navarra
en: https://www.youtube.com/watch?v=nqzDzuwOvXo
 Revise la clasificación de las bacterias con tinción de Gram en el
simulador de tinción de bacterias en
http://glencoe.mheducation.com/sites/dl/free/0078802849/383
941/BL_06.html (Recuerde habilitar en su computadora adobe
flash para visualizar el simulador)

24
Cuestionario y resultados

1. Describa el paso a paso de la realización de una tinción de Gram, por

medio de un esquema gráfico (o flujograma) que incluya dibujos y
colores acorde con dicho procedimiento. Puede realizarlo a mano o en
Word.

TINCION DE GRAM

GRAM + PASOS GRAM –

Se extiende la muestra
Recogida

Se añade el cristal violeta

Por 1 minuto

Se lava con agua

Se añade el Lugol por 1

Minuto

Decolorar la muestra con

Alcohol/acetona

Se añade el Colorante de
Contraste: Safranina

2. Siga los pasos del simulador (1. Lea el libro, 2. Arrastre el gotero de
la tinción de Gram a cada lámina. 3. Ponga cada lámina en el
microscopio. 4. Visualice en la pantalla el microorganismo) Con cada
lámina tome pantallazo de lo que visualiza y registre los resultados
de las 3 muestras en la Tabla de datos que debe diligenciar (Data

25
 Table). Para finalizar el ejercicio, tome pantallazo de su tabla de
datos con los resultados de las 3 láminas.

Fuente: Fotografía tomada del Simulador Virtual lab. (2020).

26
27
Guanina y citosina

3. Explique ¿Por qué las bacterias Gram positivas no se decoloran

cuando se les agrega la solución de alcohol-acetona?

No se decoloran porque tienen una capa más gruesa de peptidoglicano y forma más
entrecruzamiento, retienen el complejo cristal violeta- Lugo.

4. Según el video de la coloración de Gram, diligencie la siguiente tabla.

Características
Gram positivas Gram negativas
microscópicas
Morfología
Afinidad tintorial
Agrupación

28
 Características
Gram positivas Gram negativas
microscópicas

Dibujo o fotografía de las

bacterias y el color que
toman con la tinción de
Gram finalizada

5. Registre las referencias citadas, usando norma APA

Actividad práctica 3. Siembra de Microbiota normal.  

Introducción

El árbol filogenético de la vida consta de tres dominios: Bacteria,

Archaea y Eukarya, siendo un dominio el rango taxonómico más alto de
los organismos. Muchos miembros de los dos primeros dominios
mencionados viven una vida simbiótica dentro de nosotros.

29
Figura 3 Árbol filogenético de la vida.

Fuente: Construcción propia equipo de docentes (2017). Modificado de

Woese, 1996.

El cuerpo humano aloja comunidades microbianas complejas cuya

población supera a nuestras propias células en al menos un factor de
10. Con el fin de caracterizar la ecología de las comunidades
microbianas asociadas con el hombre, los Institutos Nacionales de Salud
lanzaron en 2007 el Proyecto Microbioma Humano y en el 2012 se
publicaron los siguientes resultados: 4.788 muestras analizadas de 33
hábitats, tanto femeninos como masculinos, que representaban cinco
áreas principales del cuerpo (cavidad oral y orofaringe, piel, fosas
nasales, tracto gastrointestinal y vagina) de 242 adultos sanos. Las
comunidades encontradas en cada uno de los hábitats del cuerpo
poseían una fuerte especialización en su sitio, tanto dentro de este como
entre individuos. Así mismo, se observó que, dentro de los hábitats, la
variabilidad interpersonal es alta, mientras que los individuos presentan
una variabilidad temporal mínima.

Los análisis de la diversidad taxonómica asociada con la microbiota

humana -colección de microorganismos que están presentes en una
comunidad de un hábitat corporal definido- se han convertido en tema
de gran importancia, ya que estudiar los taxones comúnmente
compartidos, en comparación con los menos prevalentes, permite
30
establecer un elemento de base para comparar personas sanas o
enfermas.

La microbiología médica moderna se centró en microorganismos

patógenos, considerando a la microbiota normal como una población de
microbios vasta y desconocida. Sin embargo, esta visión ha ido
cambiando, el estudio de esta ha emergido como un importante factor
en la fisiología y la enfermedad en humanos.

Las relaciones entre los cerca de 100 trillones de simbiontes microbianos

y el cuerpo humano nos han facilitado la extracción de energía de los
alimentos, proporcionado factores de crecimiento, promovido la
diferenciación y función de la mucosa, estimulado el sistema inmune y
proporcionado resistencia a la colonización por patógenos. Si la
microbiota afecta la fisiología humana, los cambios de su composición
pueden alterar la homeostasia del huésped y, por tanto, incrementar el
riesgo a enfermar. De hecho, en enfermedades como el asma, la
obesidad, la vaginosis bacteriana y la enfermedad inflamatoria intestinal
se han encontrado comunidades microbianas alteradas. Lo anterior,
también sugiere que se si se conoce la composición de la microbiota
normal, se pueden generar intervenciones para su restablecimiento y,
por lo tanto, se puede superar la situación de enfermedad.

Objetivo

 Evidenciar la diversidad de microorganismos existentes en las

diferentes zonas del cuerpo humano en estado de salud.

Materiales

Materiales de la práctica de laboratorio mediado

 Acceso a internet
 Protocolo de laboratorio
 Ver vídeo de microbiota humana de la Universidad de Sevilla
en: https://www.youtube.com/watch?v=TVVfAEdpj7I

Cuestionario y resultados

31
1. Complete ¿qué géneros de microorganismos pueden encontrarse en
las siguientes zonas anatómicas?

Zona Microorganismos Morfología y afinidad tintorial

Piel Staphylococcus spp. Coco-Gram positivo

Boca las bacterias anaerobias pueden ambas Gram positivas y

sonarnos ya algunos nombres gramnegativos.
como lactobacillus o
actinobacillus. En el caso de las
bacterias aerobias, el tipo de
género al que pertenecen,
como staphylococcus o
Streptococcus
Tracto respiratorio La microbiota habitual incluye bacilos gramnegativos
superior distintos microorganismos entre
los que destacan los
estreptococos, estafilococos,
micrococos, neisserias,
Moraxella catarrhalis,
corinebacterias, Haemophilus
spp, Porphyromonas,
Prevotella, Fusobacterium,
Veillonela, Peptostreptococcus,
Actinomyces, etc.
Bacterias potencialmente
patógenas como S. pneumoniae
o Streptococcus pyogenes se
encuentran en no pocas
ocasiones colonizando a las
personas sanas
Tracto  Clostridium ambas gram positivas y gram
gastrointestinal  Eubacterium negativas.
 Faecalibacterium
 Bacteroides
 Bifidobacterium

32
  Streptococcus
 Escherichia coli
 enterobacteriacae
Tracto genital  Entre las bacterias ambas Gram positivas y gran
involucradas en las negativa.
infecciones del tracto
genital masculino más
comunes se encuentran
Chlamydia trachomatis,
Neisseria gonorrhoeae,
Treponema pallidum,
Ureaplasma urealyticum
y Mycoplasma hominis
(6), sin embargo, las dos
últimas no son
ampliamente
consideradas como ITS
debido a su presencia en
individuos sanos y
asintomáticos.

 los órganos no son

estériles y contienen
colonias bacterianas
muy diversas a lo largo
del tracto. En la vagina y
el útero predominan
lactobacilos (L. crispatus,
L. iners y otras especies
del género
Lactobacillus), mientras
que en el endometrio,
los géneros
Pseudomonas,
Acinetobacter,
Vagococcus y

33
Sphingobium van
ganando terreno y su
proporción aumenta
hasta las trompas de
Falopio.

34
2. Reporte en la siguiente tabla, 3 microorganismos diferentes entre
sí, que pertenezcan a nuestra microbiota humana y que haya listado en
la tabla anterior. Explique en qué medio de cultivo los pondría crecer y
porqué.

Porque escoge este

Medio de cultivo Nombre del Microorganismo medio de cultivo

es un medio adecuado
para el cultivo y
Agar nutritivo Staphylococcus aureus
enumeración de
bacterias exigentes
Este separa las bacterias
Agar MacConkey Pseudomonas fermentadoras de la
lactosa
es un medio de uso
general para el cultivo de
dermatofitos1,2. Hoy en
día se utiliza para el
aislamiento y cultivo de
todos los hongos3-5
. Las peptonas en
Agar Sabouraud escherichia coli Sabouraud
Glucose Agar son fuentes
de factores de
crecimiento nitrogenoso.
La glucosa aporta una
fuente de energía para el
crecimiento de
microorganismos

3. Registre las referencias citadas, usando norma APA

 https://muysaludable.sanitas.es/salud/dental/que-bacterias-tenemos-en-la-
boca/
 https://www.seimc.org/contenidos/documentoscientificos/procedimientosmicr
obiologia/seimc-procedimientomicrobiologia23.pdf
 https://www.biocodexmicrobiotainstitute.com/es/intestinal
 https://scielo.conicyt.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0717-

35
 75262014000300010#:~:text=Entre%20las%20bacterias%20involucradas
%20en,debido%20a%20su%20presencia%20en
 https://scielo.conicyt.cl/fbpe/img/rchog/v79n3/art10-tabla01_1.jpg
 https://scielo.conicyt.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0717-
75262014000300010#:~:text=Entre%20las%20bacterias%20involucradas
%20en,debido%20a%20su%20presencia%20en
 https://es.slideshare.net/luisandresjaimetorreblancagodinez/resumen-
escherichia-coli#:~:text=Medios%20de%20Cultivo%20En%20el,especies
%20fermentadoras%20de%20la%20lactosa.
 file:///C:/Users/lexiz/Downloads/1177_es_1%20(1).pdf
 https://www.bd.com/resource.aspx?IDX=8776#:~:text=BD%20Sabouraud
%20Glucose%20Agar%20se,a%20partir%20de%20muestras%20cl%C3%ADnicas.

36
 Actividad práctica 4. Prueba de susceptibilidad a
antimicrobianos: difusión en disco.

Introducción

Los antimicrobianos son compuestos que hemos empleado para

combatir los microorganismos causantes de infecciones. Entre estos se
encuentran los antiprotozoarios, los antivirales, los antimicóticos o
antifúngicos y los antibacterianos. Pero en este perpetuo combate,
algunos microorganismos han desarrollado adaptaciones que los hacen
resistentes a la acción de estos compuestos, mientras que otros
permanecen siendo sensibles, esta manifestación determinará el efecto
terapéutico de un antimicrobiano.

Las pruebas de susceptibilidad a antivirales, antiprotozoarios y

antihelmintos son complejas, costosas y no suelen realizarse en el
laboratorio clínico; mientras que las pruebas de susceptibilidad a
antibacterianos –denominadas también antibiogramas- son las mejores
estandarizadas y las más empleadas. Por su parte, las pruebas que se
hacen para antimicóticos aún están en estandarización.

A pesar de lo expuesto, las pruebas de susceptibilidad a antimicrobianos

tienen por objetivo tratar de predecir el efecto terapéutico de un
antimicrobiano y aunque han sido realizadas tanto in-vitro como in-vivo,
en los laboratorios clínicos se lleva a cabo la primera modalidad, bajo
recomendaciones emitidas por entidades internacionales o nacionales.
Sin embargo, estas pruebas in-vitro sólo contemplan el antimicrobiano y
el microorganismo, mas no las variables en ser humano (ej. interacción
con proteínas, variación de concentración con el tiempo, distribución del
antimicrobiano en los tejidos), que es en dónde se da la enfermedad
infecciosa.

La susceptibilidad a los antibacterianos esta categorizada en tres

grupos: sensible, intermedio, resistente. Una bacteria es sensible si
esta es inhibida por una concentración de un antimicrobiano que se
asocia a una alta probabilidad de éxito terapéutico. Por otro lado, una
bacteria es resistente si es inhibida por una concentración de un
antimicrobiano que se asocia a una alta probabilidad de fracaso
terapéutico. Mientras que, en la categoría de susceptibilidad intermedia,

37
se encuentra la bacteria que es inhibida in vitro por una concentración
de un antimicrobiano que se asocia a un efecto terapéutico incierto.

Existen diversos métodos para evaluar la susceptibilidad a

antibacterianos, pero dentro de los más usados se encuentra el método
de Kirby-Bauer o difusión en disco. Este consiste en que se siembra el
microorganismo en estudio, de manera masiva, en un agar
estandarizado y posteriormente se colocan discos de papel impregnados
con una concentración dada de antibacteriano, que corresponde a
niveles que pueden obtenerse si el antimicrobiano se administra
sistémicamente. A medida que los antibacterianos se difunden en el
medio van matando el microorganismo en estudio-si este es sensible-, y
de esta manera se van generando unas zonas sin crecimiento
microbiano, cuyo diámetro se corresponde con la categoría de
susceptibilidad del microorganismo.

Objetivos

 Conocer la prueba de susceptibilidad a antibacterianos por difusión

para microorganismos determinados.
 Interpretar la zona de inhibición para los microorganismos en
estudio.

Materiales

Materiales de la práctica de laboratorio simulado

 Acceso a internet
 Protocolo de laboratorio
 Ver vídeo Bacterias, Antibióticos y Resistencia de Medlineplus
en: https://www.youtube.com/watch?v=ODgdIVu1xac

Cuestionario y resultados

1. Ingrese a Educaplay, y realice el crucigrama Resistencia a los

antibióticos alojado en: https://es.educaplay.com/recursos-
educativos/4992454-resistencia_a_antibioticos.html de este
crucigrama, tome captura de pantalla cuando lo haya completado.

38
2. Investigue y defina los siguientes conceptos:

 Betalactámicos: Los antibióticos betalactámicos son una

ampliación clase de antibióticos incluyendo derivados de la
penicilina, cefalosporinas, monobactámicos, carbacefem,
carbapenems e inhibidores de la betalactamasa; básicamente
cualquier agente antibiótico que contenga un anillo β-lactámico en
su estructura molecular. Son el grupo más ampliamente usado
entre los antibióticos disponibles.

 Resistencia microbiana: La resistencia a los antimicrobianos

(farmacorresistencia) se produce cuando los microorganismos,
sean bacterias, virus, hongos o parásitos, sufren cambios que
hacen que los medicamentos utilizados para curar las infecciones
causadas por ellos dejen de ser eficaces.

 Antibióticos, amplio espectro.

3. Observe la siguiente fotografía y registre el resultado obtenido y su
interpretación en el siguiente cuadro.
Resultado e Interpretación
Interpretación (Describa porque es
Resultado (Sensible o Resistente a
Fotografía cada antibiótico)
sensible o resistente según lo que
puede observar)

39
 1.
2.
3.
4.

1.
2.
3.
4.

1.
2.
3.
4.

1.
2.
3.
4.

Fuente fotografías: F. Benakashani et al., (2016). Biosynthesis of silver

nanoparticles using Capparis spinosa L. leaf extract and their antibacterial
activity, Karbala International. Journal of Modern Science
http://dx.doi.org/10.1016/j.kijoms.2016.08.004

4. Usted tiene que seleccionar 4 antibacterianos para hacer la prueba de

susceptibilidad a antimicrobianos de una cepa de S. aureus (Indique
sus nombres). En la siguiente tabla mencione 3 aspectos que tendría
en cuenta para hacer esta selección, explíquelos brevemente y con
sus palabras.

40
 Aspectos Explicación

5. Registre las referencias citadas, usando norma APA

41
 Actividad práctica 5. Caracterización macroscópica y
microscópica de hongos.

Introducción

Los hongos son organismos conformados por células eucariotas y

agrupados dentro del dominio Eukarya, siendo diferentes de los
protozoos, los animales y las plantas. De estos se han identificado
aproximadamente 200.000 especies, y sólo 100 generan infección en el
humano. Las infecciones causadas por estos hongos se denominan
micosis, es la micología médica quien se encarga de estudiarlas y a los
hongos raíz de la cadena causal.

Estos organismos no hacen fotosíntesis, son heterótrofos, saprofitos y

pueden llegar a ser parásitos. Adicionalmente, habitan diferentes
entornos tales como las mucosas de mamíferos, tierra, superficies
abióticas, entre otros. Poseen una pared celular constituida de
polisacáridos, que en su mayoría son quitina, mananos y α glucanos.

De acuerdo a sus características morfológicas, los hongos pueden ser

macroscópicos (ej. Champiñones) o microscópicos. Los hongos
microscópicos pueden presentar dos estructuras fúngicas básicas: las
Hifas (filamentos) que son filas de células que crecen apicalmente y
cuyo conjunto se denomina micelio; y las levaduras (blastoconidias) que
son estructuras ovaladas o esféricas unicelulares.

Figura 4 Diferencias morfológicas y de tamaño entre hongos

filamentosos, levaduriformes y bacterias

Fuente: *Mold (Filamentos), Yeast (levadura). Tomado de Wolfe (2014).

42
De acuerdo a lo anterior, desde una perspectiva clínica, los hongos se
pueden agrupar en filamentosos y levaduriformes. Sin embargo, hay
unas especies de hongos que pueden ser filamentosos en la naturaleza
o en el laboratorio (a menos de 30 °C) y, en cambio, presentarse como
levaduriformes en los tejidos (a 37 °C). Estos son llamados hongos
dimórficos y algunos de ellos son: Candida albicans, Sporothrix schenkii,
Histoplasma capsulatum y Paracoccidioides brasiliensis.

Los cultivos de hongos pueden presentar dentro de sus características

macroscópicas, una apariencia cremosa –propia de los hongos
levaduriformes-; o apariencias: correosa, aterciopelada, algodonosa,
polvorienta y granulosa –propias de hongos filamentosos-.

Objetivo

 Identificar características macroscópicas y microscópicas de los

hongos.

Materiales

Materiales de la práctica de laboratorio simulado

 Guantes y tapabocas
 Acceso a internet
 Protocolo de laboratorio
 Explorar el Atlas Socalemi, sección de micología en
http://www.socalemi.es/index.php/atlas-de-microbiologia
 Ver vídeo Levaduras y Hongos en:
https://www.youtube.com/watch?v=rT5cFN0fOYY

Procedimiento

1. Deje a la intemperie una fruta o pan por al menos 5 días o busque en

su hogar una fruta, verdura o pan que tenga apariencia de estar
contaminada con hongos. Recuerde al tomarla y manipularla ponerse
guantes y tapabocas con anterioridad.
2. Tómele fotos, obsérvela de cerca, describa lo que observa. recuerde
durante la observación no tocarla directamente, no respirar u oler la

43
 fruta, verdura o pan seleccionado, no estornude, no sople o quite el
nada de allí.
3. Deseche cuidadosamente los guantes, tapabocas, y elementos
contaminados y posteriormente lávese las manos adecuadamente.

1. Paso 2. Paso
3. Paso
Detecte cambio en Utilice todos los
elementos de Deseche lo
apariencia contaminado
bioseguridad
Colores blanco, café Continué con el
o negro Observe y describa
cuestionario

Fuente: Construcción propia equipo de docentes (2020)

Cuestionario y resultados

1. ¿Cuáles son los agares más usados para hongos?

44
2. De acuerdo al cultivo micótico de la fruta verdura o pan complete el
siguiente cuadro.

Describa las
Investigue que tipos de
Fotografía de la Describa las Características
hongos pueden haber
Fruta, Verdura o Características microscópicas del
atacado la Fruta
Pan contaminado macroscópicas hongo que supone
verdura o pan
crece en él

3. Los hongos filamentosos pueden causar infecciones en humanos

¿Qué condiciones debe tener un ser humano para ser infectado por
estos hongos?

45
4. De las siguientes fotografías al microscopio, defina por sus
características que hongo cree ver:

A. B.

C.
Fuente: Fotografías tomadas de Pinterest e imágenes de google de
acceso libre.

5. Registre las referencias citadas, usando norma APA

46
47
 Actividad práctica 6. Parásitos de importancia en salud.

Introducción

La parasitología es la división de la biología que tiene por objeto de

estudio el parasitismo generado por protozoarios, helmintos y
artrópodos; siendo el parasitismo la relación simbiótica en la cual un
organismo (parásito) vive a expensas de otro (denominado huésped) y
le ocasiona daño.

Los protozoarios son organismos eucariotas, unicelulares, que no poseen

pared celular, heterótrofos -en su mayoría-, algunos móviles según el
aparato de locomoción que posean, con reproducción asexual y sexual.
Los helmintos son organismos eucariotas, pluricelulares que conforman
gusanos que se pueden clasificar en tres filum: platelmintos, nematodos
y acantocéfalos; sin embargo, los parásitos de importancia médica se
encuentran en los dos primeros filum mencionados.

Los platelmintos son gusanos planos de simetría bilateral, que pueden

ser de vida libre o endoparásitos, no poseen sistema circulatorio, pero si
un sistema digestivo. Estos gusanos se clasifican en tres clases, siendo
las clases Trematoda (duelas) y Cestoda (tenias) en donde se localizan
parásitos de humanos y animales. Los nematodos son gusanos
cilíndricos, no segmentados que mudan periódicamente su cutícula y se
reproducen sexualmente, depositando aproximadamente 200.000
huevos por día. Poseen sistema digestivo completo (boca-ano) y su boca
presenta estructuras particulares adaptadas a su estilo de alimentación.
Dentro de este grupo se encuentran el oxiuro (Enterobius vermicularis),
el trichuro (Trichuris trichiura), las uncinarias (Ancylostoma spp. y
Necator spp.), nematodo (Ascaris lumbricoides) y la triquina (Trichinella
spiralis).

Por otra parte, los artrópodos son animales invertebrados cuya

característica principal es la presencia de apéndices articulados. Así
mismo, poseen simetría bilateral, ojos compuestos, un exoesqueleto
conformado por quitina y segmentación variable en donde se pueden
encontrar los apéndices articulados; por ejemplo, en insectos se pueden
identificar tres segmentos: cabeza, tórax y abdomen. En su mayoría son
ovíparos, pero en algunos grupos puede darse la ovoviviparidad y la
viviparidad. Estos animales se dividen en cuatro grupos: Quelicerados

48
(arañas, ácaros), Crustáceos, Hexápodos (insectos: moscas, mosquitos,
pulgas, piojos), Miriápodos (ciempiés y milpiés).  Su importancia radica
en que estos pueden causar patologías directas (parasitosis, reacciones
alérgicas) o patologías indirectas, debido a que pueden actuar como
vectores o huéspedes intermediarios de microorganismos patógenos.

Finalmente, para que los protozoarios, helmintos y artrópodos lleguen a

ser parásitos tienen que existir ciertas condiciones tanto del parasito
como del huésped, entre ellas se encuentra la cantidad de parásitos
inoculados, factores de virulencia, fase del parásito y la susceptibilidad
del huésped.

Objetivo

 Observar parásitos causantes de enfermedades de importancia en

salud pública.

Materiales

Materiales de la práctica de laboratorio mediado

 Acceso a internet
 Protocolo de laboratorio
 Explorar el Atlas Socalemi, sección de parasitología en
http://www.socalemi.es/index.php/atlas-de-microbiologia
 Ver vídeo Parásitos en: https://www.youtube.com/watch?
v=RTI1DB42BZ4

Cuestionario y resultados

1. ¿Qué son las geohelmintiasis? Mencione 5 medidas preventivas para

estas parasitosis.

49
2. Observe las siguientes fotografías y complete la tabla:

A. B.

C. D.

Fuente: Fotografías tomadas de Pinterest, Wikipedia e imágenes de

google de acceso libre.

Tipo de parasito
Características Patología
Nombre del Nombre del (protozoario,
observadas para su con la que
organismo organismo helminto (huevo-
tipificación se relaciona
adulto), artrópodo)
A.

50
 Tipo de parasito
Características Patología
Nombre del Nombre del (protozoario,
observadas para su con la que
organismo organismo helminto (huevo-
tipificación se relaciona
adulto), artrópodo)
B.

C.

D.

3. De acuerdo a lo observado en el vídeo y lo que ha consultado ¿qué

características hacen que los parásitos sean exitosos infectando
poblaciones? Explique, brevemente, su repuesta.

4. Registre las referencias citadas, usando norma APA

51
52
 Bibliografía

Becerril,M. (2014).Parasitología médica.(4a. ed.) McGraw-Hill

Interamericana. Cápitulo 2. Recuperado de
http://bibliotecavirtual.unad.edu.co:2053/?il=416
Bonifaz,A. (2012).Micologia médica básica.(4a. ed.) McGraw-Hill
Interamericana. Página 23. Recuperado de
http://bibliotecavirtual.unad.edu.co:2053/?il=417
Brooks,G. (2011).Microbiología médica.(25a. ed.) McGraw-Hill
Interamericana. Cápitulo 5. Recuperado de
http://bibliotecavirtual.unad.edu.co:2053/?il=486

F. Benakashani et al., (2016). Biosynthesis of silver nanoparticles using

Capparis spinosa L. leaf extract and their antibacterial activity,
Karbala International. Journal of Modern Science
http://dx.doi.org/10.1016/j.kijoms.2016.08.004

Lloyd-Price, J., Abu-Ali, G., & Huttenhower, C. (2016). The healthy

human microbiome. Genome Med, 8(1), 51. doi:10.1186/s13073-
016-0307-y. Recuperado de
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4848870/
Manual de prácticas de laboratorio de microbiología I y II: diversidad y
estructura de los microorganismos. (2009). México, D.F., MX:
Universidad Autónoma de Guerrero. Recuperado de
http://bibliotecavirtual.unad.edu.co:2077/lib/unadsp/detail.action?
docID=10287166&p00=manual+pr
%C3%A1cticas+laboratorio+microbiolog%C3%ADa
Mendoza, Z. R. (2010). Antimicrobianos 2002. México, D.F., MX:
Instituto Politécnico Nacional. Recuperado de
http://bibliotecavirtual.unad.edu.co:2077/lib/unadsp/detail.action?
docID=10365809&p00=antimicrobianos+2002
Prescott, L. M., Harley, J. P., & Klein, D. A. (2004). Microbiología.
México, D.F., MX: McGraw-Hill Interamericana. Recuperado de
http://bibliotecavirtual.unad.edu.co:2077/lib/unadsp/detail.action?
docID=10515235&p00=prescott
Reynoso, M., Magnoli, C., Barros, G., Demo, M. (2015). Manual de
microbiología general (Primera). Río cuarto: UniRío. Recuperado
de https://openlibra.com/es/book/download/manual-de-
microbiologia-general

53
Rodríguez, P. E. G. (2013). Parasitología médica. México, D.F., MX:
Editorial El Manual Moderno. Recuperado de
http://bibliotecavirtual.unad.edu.co:2077/lib/unadsp/detail.action?
docID=10853474
Rojas Triviño, Alberto. (2011). Conceptos y práctica de Microbiología
general. Manual. Universidad Nacional de Colombia Sede Palmira.
Recuperado de:
http://www.bdigital.unal.edu.co/4999/1/albertorojastrivino.2011.p
df
Santiago, Axel Rodolfo. (2003). Hans Christian Joachim Gram. Revista
de la Sociedad Venezolana de Microbiología, 23(2), 200-201.
Recuperado en 22 de junio de 2017, de
http://www.scielo.org.ve/scielo.php?
script=sci_arttext&pid=S1315-
25562003000200020&lng=es&tlng=es.
Woese, C. R. (1996). Whither microbiology? Phylogenetic trees. Curr
Biol, 6(9), 1060-1063. Recuperado de
http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S096098220270
6647
Wolfe, B. (2014, Julio 24). Techniques: Using a microscope to explore
fermented foods. Recuperado de http://microbialfoods.org/using-
microscopy-to-monitor-artisan-fermentations/

54