Laboratorio Conteo y Viabilidad

Conteo y viabilidad celular
Colocar
El objetivo en 4x o 10x
Estimar
El volumen de suspensión que

se piensa evaluar
Disponer
90uL de azul tripan (0.4%) en

un microtubo PCR
Transferir
10 uL de suspensión celular
(en medio de cultivo)
Homogenizar
En el microtubo que
contiene azul de tripan y
solución celular, por
pipeteo
Tomar
10uL con una micropipeta y llene

una de las dos cámaras del
FORMULA DE LA GUIA
hemacitometro
Calcule
Colocar
La cuenta total de células
El hemacitometro en el
de los 4 cuadros debe
microscopio y localice la retícula
oscilar entre 100-200
grabada
células
Contar
La CMN azules (muertas) y las CMN Las células localizadas en las

blancas (vivas) que sean márgenes de esquinas no se
observadas en los cuadros incluyen en las cuentas
CUESTIONARIO
Hematocitometro
Colorímetro calibrado
Espectrofotómetro
Hematocitometro
Portaobjetos de microscopio que cuenta con cámaras numeradas con precisión. La cantidad de
espermatozoides se cuenta de forma manual. El Hematocitometro está compuesto por un
juego completo de los elementos necesarios para determinar la densidad de eritrocitos y
leucocitos en sangre.
La cámara de recuento Neubauer está construida a partir de una única pieza de vidrio lo que le
proporciona una gran resistencia y durabilidad. Presenta además, dos superficies reticuladas
para el recuento celular de una profundidad de 0,1 mm y está también equipada con dos
cubreobjetos especiales de 0,4 mm de grosor.
El juego incluye también una pipeta de dilución para eritrocitos y otra para leucocitos, cada
una con su correspondiente tubo de goma de aproximadamente 35 cm de longitud y su
boquilla de aspiración con un código de color para su fácil identificación.
Colorímetro calibrado
El colorímetro también es un instrumento que permite medir la absorbencia de una solución

en una específica frecuencia de luz a ser determinada. Es por eso, que hacen posible descubrir
la concentración de un soluto conocido que sea proporcional a la absorbencia.
Diferentes sustancias químicas absorben diferentes frecuencias de luz. Los colorímetros se

basan en el principio de que la absorbencia de una sustancia es proporcional a su
concentración, y es por eso que las sustancias más concentradas muestran una lectura más
elevada de absorbencia. Se usa un filtro en el colorímetro para elegir el color de luz que más
absorberá el soluto, para maximizar la precisión de la lectura. Note que el color de luz
absorbida es lo opuesto del color del espécimen, por lo tanto un filtro azul sería apropiado
para una sustancia naranja.
Los sensores miden la cantidad de luz que atravesó la solución, comparando la cantidad
entrante y la lectura de la cantidad absorbida.
Se realiza una serie de soluciones de concentraciones conocidas de la sustancia química en

estudio y se mide la absorbencia para cada concentración, así se obtiene una gráfica de
absorbencia respecto a concentración. Por extrapolación de la absorbencia en la gráfica se
puede encontrar el valor de la concentración desconocida de la muestra.
Otras aplicaciones de los colorímetros son para cualificar y corregir reacciones de color en los
monitores, o para calibrar los colores de la impresión fotográfica. Los colorímetros también se
utilizan en personas con déficit visual (ceguera o daltonismo), donde los nombres de los
colores son anunciados en medidas de parámetros de color
Espectrofotómetro
La espectrofotometría es el método de análisis óptico más usado en las investigaciones

químicas y biológicas. El espectrofotómetro es un instrumento que permite comparar la
radiación absorbida o transmitida por una solución que contiene una cantidad desconocida de
soluto, y una que contiene una cantidad conocida sustancia. De la misma es un método
preciso y rápido, que ayuda a determinar la concentración de los espermatozoides, aunque
presentan no son exactos en casos de semen contaminados o que contenga diluyentes turbios
En los últimos años se han logrado avances notables en el conocimiento de los mecanismos de
la reproducción humana, así como en los métodos de investigación y diagnóstico de los
trastornos de la fertilidad. A pesar de esto, el análisis del semen sigue siendo un examen
imprescindible en el estudio del hombre que acude a consulta por infertilidad; luego se
realizan otros exámenes según los resultados del mismo. Un análisis seminal completo nos
informa sobre las propiedades del semen en su conjunto, tanto de la producción de
espermatozoides como de la función de las glándulas sexuales accesorias, aspectos que
analizaremos a continuación.
Para llegar a conclusiones se recomienda realizar al menos 2 análisis seminales, con no menos
de 15 d ni más de 90 de separación entre ambos, además es recomendable una abstinencia
sexual de 3 a 5 días, que nunca debe ser menor de 2 días ni mayor de 7. Si cualquiera de los
indicadores es normal en uno de los exámenes se considera que ese indicador es normal, pero
si está alterado en ambos se concluye como anormal. Si los resultados de estos 2 análisis
seminales son marcadamente diferentes debe repetirse un tercer examen antes de hacer
conclusiones pues la producción de espermatozoides puede variar considerablemente, tanto
en algunos hombres normales como en ciertas circunstancias anormales.
Los espermatozoides son únicos entre las células por su forma y función. Los espermatozoides
maduros son células terminales ,el producto final de múltiples procesos de desarrollo
complejos .el método de evaluación de la fertilidad en reproductores es un examen seminal
Los indicadores o marcadores utilizados para evaluar la calidad del semen en el
espermograma "clásico, estándar o tradicional" son fundamentalmente los siguientes: conteo
de espermatozoides por mililitro (concentración o densidad), conteo total de
espermatozoides, movilidad, viabilidad y morfología normal de los espermatozoides; también
deben evaluar-se otras características físicas del semen como su apariencia, volumen de
semen eyaculado, viscosidad o consistencia y pH del semen, así como conteo de células, en
especial leucocitos
La viabilidad celular se refiere a la proporción de células que sobreviven a alguna situación

particular, colorantes que solo tiñen las células muertas y no las vivas.
Motilidad también se usa para describir el movimiento y la actividad de espermatozoide en
una muestra de semen. Estos movimientos celulares se logran gracias a un citoesqueleto
compuesto en las células eucariontes por microfilamentos o filamentos de actina, que es una
proteína contráctil y está asociada a miosina. Estos microfilamentos son la base estructural de
las microvellosidades que se encuentran por ejemplo en el epitelio del intestino. Los
microtúbulos, otro elemento del citoesqueleto, están formados por tubulina alfa y tubulina
beta, que son proteínas globulares. Los microtúbulos forman estructuras como cilios y flagelos;
cilios en el epitelio de la tráquea y bronquios, por ejemplo, y flagelos formando la cola del
espermatozoide. Los microtúbulos también forman el huso mitótico que interviene en la
separación de los cromosomas durante la meiosis y la mitosis. Los filamentos intermedios, el
último componente del citoesqueleto, otorgan resistencia; por ejemplo se encuentran en gran
cantidad en células que forman los estratos de la epidermis, por debajo de la membrana
nuclear, llamándose en ese lugar "lamina nuclear". Los hay de varios tipos y están asociados a
distintas proteínas dependiendo de su ubicación.
Morfología
Cada muestra de semen contiene algunas células espermáticas anormales.los anormalidades
morfológicas se relacionan mucho con la fertilidad la evaluación de la morfología se puede
hacer con semen puro que indica el comportamiento en su propio liquido o con semen diluido.
Las muestras son susceptibles a cambios ambientales deben protegerse muy bien antes del
análisis
El azul de tripano, azul de tripan es un colorante azoico que se utiliza en tinciones

histológicas[] para ensayos de viabilidad que permiten diferenciar células vivas de células
muertas. Las células vivas o tejidos con la membrana celular intacta no son coloreados debido
a que las células son muy selectivas a los compuestos que dejan pasar a través de la
membrana. En las células viables, el azul de tripano no es absorbido; sin embargo, atraviesa la
membrana de las células muertas. Por lo tanto, las células muertas se muestran de un
distintivo color azul bajo el microscopio o bajo una cámara Neubauer [ ]Debido a que las células
vivas son excluidas de la tinción, este método también es llamado método de tinción por
exclusión.
Bibliografía
Gordon .I.tecnologias de la reproducción animal. Editorial acribia.
Hafez.E.Hafez.B.reproducción e inseminación artificial. Mc graw Hill
Consulta virtual
http://es.wikipedia.org/wiki/(sept 2010)
http://www.bvs.sld.cu/revistas/end/vol9_1_98/end11198.htm(sept 2010)
http://www.gusgsm.com/funciona_espectrofotometro_reflectancia(sept 2010)
http://www.metas.com.mx/optica.html(sept 2010)

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90uL de azul tripan (0.4%) en

10uL con una micropipeta y llene

La CMN azules (muertas) y las CMN Las células localizadas en las

El colorímetro también es un instrumento que permite medir la absorbencia de una solución

Diferentes sustancias químicas absorben diferentes frecuencias de luz. Los colorímetros se

Se realiza una serie de soluciones de concentraciones conocidas de la sustancia química en

La espectrofotometría es el método de análisis óptico más usado en las investigaciones

La viabilidad celular se refiere a la proporción de células que sobreviven a alguna situación

El azul de tripano, azul de tripan es un colorante azoico que se utiliza en tinciones

Gordon .I.tecnologias de la reproducción animal. Editorial acribia.

Hafez.E.Hafez.B.reproducción e inseminación artificial. Mc graw Hill

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