Bio Lab Informe

«Año de la lucha contra la corrupción e impunidad»
Universidad Nacional José Faustino Sánchez Carrión
Facultad:
Ingeniería Química y Metalúrgica
Escuela:
Ingeniería Química
Alumno:
Peña Silva, Julia Alexandra
Ciclo:
V
Curso:
Biotecnología para Ingenieros Químico
Docente:
Ing. Robert W. Ocrospoma Dueñas
Practica N° 01:
Manejo de microscopio, tinción gram y siembra en agar nutritivo
AÑO:
2019
Índice
1. OBJETIVO
2. MARCO TEORICO
3. DEFINICION DE TERMINOS
. Cristal Violeta
. Lugol
. Alcohol
. Safranina
4. Materiales y Equipos
5. Procedimiento Experimental
6. ANEXOS
7. CONCLUSIONES
1. OBJETIVO
Realizar una correcta utilización del microscopio óptico, tinción de Gram de Bacillus
thuringiensis y los tipos de siembra en agar nutritivo.
2. MARCO TEORICO
TINCIÓN
Es una técnica auxiliar utilizada en microscopía para mejorar el contraste en la imagen vista
al microscopio los diferentes colorantes pueden ser utilizados para aumentar la definición y
examinar grandes cortes de tejido, poblaciones celulares o incluso para resaltar organelas
dentro de células individuales
GRAM POSITIVAS
La pared de la célula gram positiva es gruesa y consiste en varias capas interconectadas de
peptidoglicano así como algo de ácido teicoico. Generalmente, 80% - 90% de la pared de la
célula gram positiva es peptidoglicano.
GRAM NEGATIVAS
La pared de la célula gram7negativa, por otro lado, contiene una capa mucho más delgada,
únicamente de peptidoglicano y está rodeada por una membrana exterior compuesta de
fosfolípidos, lipopolisacáridos, y lipoproteínas.
SEMBRAR
Es el acto de colocar el material bacteriológico en el medio de cultivo para promover su
crecimiento y desarrollo, y subsiguiente multiplicación. El resultado de una siembra se
llama: Cultivo
3. DEFINICION DE TERMINOS
1. Cristal Violeta
El violeta de metilo, comúnmente denominado cristal violeta o violeta de genciana,

es el nombre dado a un grupo de compuestos químicos empleados como indicadores
de pH y colorantes.
Los violetas de metilo son mezclas de: N-tetra, N-penta y N-hexametil p-

rosanilinas. Por la mezcla de diferentes versiones, el fabricante puede crear
diferentes tonos de violeta en el colorante final. Cuanto más metilado esté el
colorante, su color será de un violeta más oscuro
2. Lugol
El lugol o disolución de Lugol es una disolución de yodo molecular I2 y yoduro

potásico KI en agua destilada. Se preparó por primera vez en 1829 y recibe su
nombre en honor al médico francés Jean Guillaume Auguste Lugol.
Este producto se emplea frecuentemente como desinfectante y antiséptico, para la

desinfección de agua en emergencias y como un reactivo para la prueba del yodo en
análisis médicos y de laboratorio.
3. Alcohol
El alcohol es un líquido incoloro, de olor característico, soluble tanto en agua como

en grasas; se caracteriza por ser una sustancia psicoactiva, depresora del sistema
nervioso central, y con capacidad de causar dependencia.
Se calcula que 1 gramo de alcohol aporta al organismo 7,1 Kcal.; este aporte
energético no se acompaña de un aporte nutritivo como minerales, proteínas o
vitaminas.
4. Safranina
La safranina (también llamada Safranina O o rojo básico 2), es un colorante

biológico, de contraste que se utiliza en la Tinción de Gram para proporcionar un
color violeta más intenso a las bacterias Gram+ y tiñe de rosa a las bacterias G- ;
en histología y en citología. La safranina se usa como líquido de contraste en algunos
protocolos de tinción, coloreando el núcleo celular de rojo.
4. MATERIALES Y EQUIPO
PORTAOBJETO:
Lamina de vidrio rectangular de color transparente utilizada para almacenar muestras y

objetos con el fin de observarlas bajo el miscroscopio. Las dimensiones tipicas de un
portaobjeto son de 75mm x 25mm, sin embargo estan pueden variar dependiendo del tipo
de objeto o muestra (en geologia suelen utilizarse portaobjetos de 75 x 50 mm).
PLACA PETRI:
La caja o placa de Petri es un recipiente redondo, de cristal o plástico, con una cubierta
de la misma forma que la placa, pero algo más grande de diámetro, para que se pueda
colocar encima y cerrar el recipiente, aunque no de forma hermética. Es parte de la
colección conocida como «material de vidrio». Se utiliza en Microbiología para cultivar
células, observar la germinación de las semillas o examinar el comportamiento de
microorganismos.
MECHERO:
Mechero de uso habitual en laboratorios de química o biología ideal para el

calentamiento de instrumentos de vidrio (tubos de ensayo, matraces, etc) o la
esterilización de material metálico. Es una fuente de calor de baja intensidad que
funciona con alcohol metílico (alcohol de quemar).
5. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Preparación de muestra y tinción Gram

a) PRIMER PASO
Se tiene un portaobjetos en la cual se hecha una gota de cristal violeta (colorante
inicial) por 1 minuto.
b) SEGUNDO PASO
Se lavara con agua destilada.
c) TERCER PASO
Luego en este mismo portaobjetos se hecha una gota de lugol (mordiente) por 1
minuto.
d) CUARTO PASO
Luego se decolora con alcohol de 95° (decolorante).
e) QUINTO PASO
Se lavara con agua destilada.
f) SEXTO PASO
Luego en este mismo portaobjetos se hecha una gota de safranina (colorante
contraste) por 1 minuto.
g) SEPTIMO PASO
Se lavara con agua corriente, y luego se secara suavemente.
Siembra de agar nutritivo

1. PRIMER PASO
En las placas Petri con A. nutritivo se toma una muestra
2. SEGUNDO PASO
Luego se procede a colocar la muestra tomada en otra placa petri vacía
3. TERCER PASO
Se procede a marcar con un plumón indeleble cuatro cuadrantes por la placa.
ANEXOS
RESULTADOS
CONCLUSIONES
- La tinción de gram es una prueba potente y rápida que nos permite diferenciar dos
clases de bacterias: Grampositivas y las Gramnegativas.
- Las grampositivas se tiñen de morado ya que el colorante se queda atrapado en la

capa gruesa de peptidoglucanos que rodea a la celula.
- Las gramnegativas tienen una capa de peptidoglucano mucho mas delgado es por
ello que no retiene el violeta cristal y por esto las células se tiñen con safranina y las
observamos rojas.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
 https://www.academia.edu/18829021/Marco_teorico_tincion_gram
 https://www.academia.edu/.../INFORME_7_CULTIVO_DE_MICROORGANISMOS
 https://es.wikipedia.org/wiki/Lugol
 https://www.infodrogas.org/drogas/alcohol
 https://www.tplaboratorioquimico.com/laboratorio-quimico/...e.../portaobjetos.html
 https://es.wikipedia.org/wiki/Placa_de_Petri
 https://bioquimica.cl/material-de.../mecheros/mechero-de-alcohol-de-vidrio-detail.html

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