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    Practica de Uro 07

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    PetronilaChantaCruz
    La tinción de Gram permite clasificar bacterias como Gram positivas o Gram negativas dependiendo de si retienen o no el colorante cristal violeta después de la decoloración. El objetivo es realizar correctamente la tinción de Gram en muestras de orina para identificar bacterias causantes de infecciones del tracto urinario, como algunas bacterias Gram positivas.

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    La tinción de Gram permite clasificar bacterias como Gram positivas o Gram negativas dependiendo de si retienen o no el colorante cristal violeta después de la decoloración. El objetivo es realizar correctamente la tinción de Gram en muestras de orina para identificar bacterias causantes de infecciones del tracto urinario, como algunas bacterias Gram positivas.

    Descripción original:

    tincion Gram en orina

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    La tinción de Gram permite clasificar bacterias como Gram positivas o Gram negativas dependiendo de si retienen o no el colorante cristal violeta después de la decoloración. El objetivo es realizar correctamente la tinción de Gram en muestras de orina para identificar bacterias causantes de infecciones del tracto urinario, como algunas bacterias Gram positivas.

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    La tinción de Gram permite clasificar bacterias como Gram positivas o Gram negativas dependiendo de si retienen o no el colorante cristal violeta después de la decoloración. El objetivo es realizar correctamente la tinción de Gram en muestras de orina para identificar bacterias causantes de infecciones del tracto urinario, como algunas bacterias Gram positivas.

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    PRACTICA N° 07

    Tinción Gram e identificación de bacterias Gram positivas y Gram negativas


    Introducción
    La coloración de Gram, descrita desde 1884 por el médico danés Christian Gram
    es una coloración diferencial de uso común en Bacteriología. Las preparaciones
    sobre portaobjetos que contienen bacterias tratadas con esta coloración se pueden
    clasificar en Gram positivas y Gram negativas, según retengan o no el colorante de
    cristal violeta después de agregar una solución decolorante, bien sea alcohol al
    100% o alcohol-acetona. (1) La captación del colorante de Gram depende en gran
    parte de la composición de la pared bacteriana, donde eventos físicos como
    solubilidad, difusión, permeabilidad y adsorción y químicos como cargas eléctricas
    y pH están involucrados. La compleja composición de la pared de las diversas
    especies bacterianas como ácidos teicoicos, proteínas, lípidos y aminoácidos,
    establece las diferencias de las reacciones observadas al Gram. (2)

    Esta coloración permite visualizar la morfología y el tipo de agrupación de las


    bacterias como cocos en cadena o en racimo, bacilos Gram negativos o Gram
    positivos. Algunos de ellos, producen enfermedades localizadas o sistémicas y
    dentro de estas destacaremos en este manuscrito las relacionadas con las vías
    urinarias. (3)

    Objetivos

     determinar la exactitud diagnóstica del parcial de orina y la tinción de Gram


    en el diagnóstico de infección del tracto urinario.

     Realizar adecuadamente el frotis de bacterias sobre el porta objetos para


    llevar a cabo la tinción con los colorantes que componen la tinción de Gram,
    e identificar si se tratan de bacterias Gram positivas o Gram negativas al
    momento de observarla en el microscopio.
    Muestra requerida
     15 ml de orina
    Materiales
     Tubos cónicos de 15 ml
     Laminas portaobjetos
     Laminillas portaobjetos
     Marcador para vidrio
     Gradillas para tubos
     Guantes descartables
     Mechero
     Puente para tinción
    Equipos
     Centrifuga
     Microscopio
    Reactivos
     Cristal violeta
     Alcohol acetona
     Lugol
     Safranina
     Agua destilada
     Aceite de inmersión

    Procedimiento
     Centrifugar durante 5 minutos a 2500 rpm
     Descartar el líquido sobrenadante

     Suspender el sedimento urinario golpeando ligeramente en la mano

     Colocar una gota de sedimento en un portaobjetos

     Se flamean en el mechero 4 veces

     Se procede a realizar el tinción de Gram, preparándose el puente para tinción


    y colocando el portaobjetos
     Se bañan con el colorante Cristal violeta y se deja reposar por 1 minuto,
    posteriormente se lavan

     El mismo procedimiento con Lugol, por 1 minuto y se lavan

     Una vez lavado se coloca el alcohol solo por 30 segundos para quitar el
    exceso de los demás colorantes y se lavan
     Por último se les agrega el colorante Safranina por 1 minuto

     Se deja secar y se observan en el microscopio agregándole aceite de


    inmersión a un objetivo 100X para identificar de qué tipo de bacterias se
    tratan
    Resultados (anexo 3)

    Bacterias Gram positivas

    Bibliografía

    1 Arambula AL. La Coloracion de Gram en el Diagnóstico. [Online]. [cited 2019


    . noviembre 17. Available from: file:///C:/Users/Downloads/631-
    Texto%20del%20art%C3%ADculo-1982-1-10-20100513.pdf.

    2 Fernandez CB. tincion gram. [Online].; 2014 [cited 2019 noviembre 17.
    . Available from:
    C:/Users/Downloads/GUIA%20DE%20LABORATORIO%20DE%20MICROBIOL
    OGÍA%20(1).pdf.

    3 Valencia IK. evaluacion de la eficacia de la tincion gram. [Online].; 2005 [cited


    . 2019 noviembre 17. Available from:
    https://repositorio.umsa.bo/bitstream/handle/123456789/473/TN-
    912.pdf?sequence=1.
    UNIVERSIDAD NACIONAL DE JAEN
    Creada por ley N° 29304
    Autorizada por Resolución N°647 - 2011 - CONAFU

    ANEXO 3
    PACIENTE:

    Orina completa
    Color: incoloro Cetonas: (-)
    Aspecto: turbia Sangre: (-)
    Densidad: 1030 Bilirrubina: (+)
    PH: 6 Urobirrinogeno: (-)
    Proteínas: 15 Nitritos: (-)
    Glucosa: (-) Ac. Ascórbico: (+++)

    Examen de sedimento
    Leucocitos: 5- 6 por campo
    Hematíes: 3-4
    Células epiteliales: moderadas
    Cristales: oxalato de calcio
    Bacterias: presentes
    Otros………………………………………………………………….
    Tinción Gram: se observó bacterias Gram positivas

    Fecha: 15/11/19

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