Análisis Cualitativo de Enzimas

Montserrat Rafael Colín
Bioquímica 1
PRACTICA 9. Análisis cualitativo de enzimas.

 INTRODUCCIÓN.
Las enzimas son proteínas “especialistas” y controlan TODAS las reacciones
químicas de nuestro cuerpo. Hay enzimas en todo lo que está vivo. Se dice que son
catalizadores, porque cada reacción química necesita una enzima para que se
realice, es decir, todo lo que se transforma lo hace gracias a una enzima. Cada
enzima actúa sobre una sustancia concreta, como una llave y una cerradura. Son
protagonistas fundamentales en los procesos del metabolismo celular.
 MARCO TEÓRICO.
Enzima características función estructura
Catalasa ᴥ Es una enzima que Proteger a las células
se encuentra en del efecto tóxico del
organismos vivos. peróxido de
ᴥ Se usa en industria hidrógeno (agua
textil y en lentes de oxigenada) producido
contactos en distintas
esterilizados. reacciones redox.
ᴥ Su reacción química
se produce en dos
etapas.
reacción que catalizan
características función estructura

Peroxidas ᴥ Tipo de enzimas Catalizan reacciones
a muy extendidas en bisustrato de carácter
toda la escala redox, utilizando un
filogenética. peróxido como
ᴥ Hay varios tipos de oxidante y un
enzima peroxidasa en segundo sustrato de
humanos. características
reductoras que es
oxidado por el
peróxido.
Donante + H2O2 ⇌ Donante oxidado + H2O

Bioquímica 1
características función estructura

Tirosinasa ᴥ Presente en tejidos Cataliza la
de plantas y animales hidroxilación de
que cataliza la monofenoles y la
producción de oxidación de
melanina y otros odifenoles a
pigmentos de la oquinoles, reacciones
tirosina. que convierten a la
ᴥ En humanos, la enzima en clave para
tirosinasa se clasifica la síntesis de
en melanosomas. pigmentos
¿Qué es la reacción de Pirogalol?

Se usa en un medio alcalino, para eliminar el O₂ de los gases en aquellas reacciones
que lo exijan. El gas se hace burbujear en la solución de pirogalol, que fija el O₂ y
pardea rápidamente al oxígeno.
¿Que identifica la reacción alcohólica de bencidina?
La oxidación de la bencidina es utilizada como prueba presuntiva para la
identificación de sangre. Un resultado negativo excluye la presencia de sangre; si la
reacción es positiva requiere, como toda técnica de orientación del empleo de
reacciones de confirmación ya que se pueden tener falsas reacciones positivas con
otras sustancias que tengan actividad semejante a las de las peroxidasas o bien
con otros materiales oxidantes
 OBJETIVO GENERAL.
o Determinar la presencia de enzimas en productos de origen animal o

vegetal mediante reacciones químicas específicas.
o Identificar la acción de la catalasa, peroxidasa y tirosinasa.
 HIPÓTESIS.
 La presencia de catalasa en todos los elementos a utilizar, menos el rábano,
al entrar en contacto con el agua oxigenada generaría una reacción cada una
de estándares diferentes.
Bioquímica 1
 El peróxido ya sea con la bencidina o el pirogalol, al entrar en contacto con
el rábano o la papa, tendrá que haber cambio de coloración cuando se
oxidan, si no se oxidan no va a haber cambio.
 La tirosina, al entrar en contacto con la tirosinasa, y al estar en contacto con
el calor debe haber un precipitado.
 METODOLOGÍA.
Añadir 5 ml de agua oxigenada

Colocar trocitos de papa, y medir el tiempo de la
RECONOCIMIENTO DE LA zanahoria, jitomate y bistec en reacción desde el inicio hasta
CATALASA . diferentes tubos de ensayo el final de la reacción.
según corresponda. Observar las características de
cada reacción.
Extraer la peroxidasa de los

rábanos. Rallar los rábanos, en el
DETERMINACIÓN DE PEROXIDASA mortero terminar de triturarlos con Agregar 15 gotas solución
(PRUEBA DE LA BENCIDINA) 3 ml de agua destilada. La cantidad alcohólica de bencidina.
resultante colocarla en un tubo de
ensayo.
Agregar dos gotas de peróxido de

hidrógeno al 0.5% y agitar Anotar los resultados.
suavemente.
Bioquímica 1
Tomar una pequeña

Utilizando un rallador
cantidad de papa rallada
PRUEBA DEL PIROGALOL rallar la papa fresca
sin exprimir y colocarla
sobre el mortero limpio.
en un tubo de ensayo.
Añadir 1 ml de pirogalol
al 1 % y 2 gotas de Observar la aparición de
peróxido de hidrógeno al un precipitado
2 %.
Rallar la mitad de una

Colocar 1 ml del extracto
papa fresca, colocarla en
DETERMINACIÓN DE LA obtenido y añadir 3
una gasa que exprimir
TIROSINASA gotas de solución de
en un vaso de
tirosina.
precipitado.
Cada dos minutos agitar

Agitar el contenido del
el tubo de ensayo para Observar y anotar los
tubo y luego colocarlo
que el líquido tenga cambios de coloración
en baño de agua caliente
contacto con el oxígeno de la mezcla.
a 40 °C.
del aire.
 RESULTADOS.
Foto 1. Reconocimiento de catalasa.
1 2 3 4
Tubo de ensayo 1. Papa
Tubo de ensayo 2. Zanahoria
Tubo de ensayo 3. Tomate
Tubo de ensayo 4. Carne
Bioquímica 1
Foto 2, foto 3.
Reconocimiento de
catalasa.
Tubo 1. Zanahoria, tubo 2,
tomate, tubo 3, carne, tubo
4, papa.
En el reconocimiento de
catalasa con el agua
oxigenada, nuestra prueba
del tomate fue la que menos
duró burbujeando, seguido
3 4- de la papa, la zanahoria y al
final la carne que fue la que
1 2. tuvo más tiempo de
duración con
Foto 2. Foto 3. el burbujeo de la muestra y
la carne al final se tornó
totalmente de color blanco.
Foto 4. Prueba de la bencidina.

Rábano con gotas de Bencidina.
La muestra obtuvo un color café claro.
Foto 4.
Foto 5. Prueba de pirogalol.

Resultado de papa con Pirogalol y gotas de peróxido.
Foto 5.
Bioquímica 1
Foto 6. Determinación de la tirosinasa.

Jugo de papa y tirosina, antes de ponerse a baño María.
Foto 6.
Foto 7. Determinación de la tirosinasa.

Jugo de papa y tirosina después de dejarse a baño María.
Foto 7.
 DISCUCIÓN DE RESULTADOS.
La papa, el tomate, la zanahoria y la carne contienen la enzima catalasa la cual es
un poderoso antioxidante, es decir, que impide la oxidación de las sustancias
químicas. Si agregamos agua oxigenada o Peróxido de Oxigeno (H₂O₂) a uno de
estos cuando está crudo, la catalasa separará el Oxigeno del Peróxido de Oxigeno,
liberando una gran cantidad de gas (O₂), esto es lo que produce el burbujeo que
observamos en nuestro experimento.
En el experimento de bencidina, se sabe que es necesaria la presencia de un
peróxido para que este produzca la oxidación del tinte, catalizada por el hierro de la
hemoglobina de la sangre. Sin embargo la prueba de bencidina se trabajó con
pedazos de rábano, que al igual contiene peroxidasa, o sea, enzimas que catalizan
los peróxidos presentes en el organismo, oxidándolos hasta que pase a oxígeno, es
por ello que dan un cambio de coloración en la prueba a comparación de lo incolora
que es la muestra original de la bencidina.
En la prueba de pirogalol, después de añadirlo junto con el peróxido de hidrógeno,
dio un tono entre rojizo y naranja, lo cual indica una formación de nuevos aductos y
la reducción del peróxido de hidrógeno a agua.
Bioquímica 1
La prueba de tirosinasa, degrada a la tirosina que se encuentra al igual que en la
mayoría de las anteriores, en la papa. Al calentarse se vio un precipitado en el color
de la reacción, identificando la enzima en la papa.
 CONCLUSIÓN.
A partir de los diferentes tipos de experimentos para la identificación de diferentes
enzimas, pudimos dar con todas, sin embargo, en la prueba de bencidina no se
esperaba que tuviera esa tonalidad, pero pudimos confirmar que era positiva ya que
cuando se oxidaban las sustancias tenían que cambiar de color al original,
dándonos un resultado positivo.
Se pudieron identificar los diferentes tipos de enzima y en el caso del experimento
uno, por la cantidad de duración del burbujeo pudimos darnos cuenta,
experimentalmente, la cantidad de enzima que hay en cada elemento que
utilizamos.
 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.
 https://es.scribd.com/document/227441353/Practica-4de-Bioquimica-II
 https://sites.google.com/site/experimentalentos/experimentando-con-la-catalasa-5-b
 https://books.google.com.mx/books?id=pNV_CwAAQBAJ&pg=PT269&dq=Prueba+de+la+b
encidina+con+rabano&hl=es-
419&sa=X&ved=0ahUKEwiFh96Tw_7hAhVS0KwKHSL2Bn8Q6AEINDAC#v=onepage&q=Pru
eba%20de%20la%20bencidina%20con%20rabano&f=false

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PRACTICA 9. Análisis cualitativo de enzimas.

características función estructura

reacción que catalizan

Donante + H2O2 ⇌ Donante oxidado + H2O

características función estructura

reacción que catalizan

¿Qué es la reacción de Pirogalol?

o Determinar la presencia de enzimas en productos de origen animal o

Añadir 5 ml de agua oxigenada

Extraer la peroxidasa de los

Agregar dos gotas de peróxido de

Tomar una pequeña

Rallar la mitad de una

Cada dos minutos agitar

Foto 4. Prueba de la bencidina.

Foto 5. Prueba de pirogalol.

Foto 6. Determinación de la tirosinasa.

Foto 7. Determinación de la tirosinasa.

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