Metodologías Adicionales

DETERMINACIÓN DE FIBRA, EQUIVALENCIAS DE ACTIVIDAD
ENZIMÁTICA
DETERMINACIÓN DE FIBRA DIETETICA TOTAL.

USO DE PANCREATINA COMERCIAL
(Pankreoflat, A. proteasa 62 USP/mg gragea, A. amilasa 168
USP/mg gragea)
PROCEDIMIENTO MODIFICADO:
1 Correr 2 matraces blanco a lo largo de toda la determinación.

1) Pesar por duplicado 1g de muestra (exactitud de 0.1g) en matraces
de 500 mL. El peso de las muestras no debe diferir en más de 20 mg.
2) Adicionar 50 mL de buffer de fosfatos 0.08M pH 8 0, Medir pH y
ajustar a pH 8±0.2 si es necesario.
3) Cubrir el matraz con papel aluminio, colocarlo en un baño a ebullición
durante 15 min. Agitar suavemente cada 5 minutos. Verificar con
termómetro que la temperatura se mantenga entre 95 y 100°C
durante 15 minutos. Enfriar a 60ºC.
4) Adicionar 0.5 mL de una solución de PANCREATINA (Pankreoflat),
conteniendo 5mg/0.1mL (disolver 50 mg de gragea molida en 1mL de
buffer de fosfatos).
5) Cubrir el matraz con papel aluminio y colocarlo en un baño a 60°C por
30 minutos con agitación continua.
6) Adicionar 50 mL de etanol 95% precalentado a 60°C (medir el
volumen antes de calentar). Dejar en reposo hasta la siguiente
clase cubriendo el matraz con papel aluminio.
En la segunda sesión
7) Filtrar a vacío en un papel filtro a peso constante
8) Lavar el material insoluble con 50 mL de etanol al 78%.
9) Lavar el material insoluble con 20 mL de etanol al 95%.
10) Lavar el material insoluble con 20 mL de acetona.
11) Secar el papel filtro con el residuo a 70°C, hasta peso
constante.
12) En una de las muestras determinar proteínas por Kjeldhal y en
la otra cuantificar cenizas a 550°C
13) Calcinar en la parrilla la muestra que corresponde a cenizas
14) Digerir la muestra que corresponde a proteína
15) En la tercera sesión calcinar en la mufla la muestra
correspondiente a cenizas y destilar y titular la muestra que
corresponde a proteína
16) Prepare al mismo tiempo un blanco para la determinación.
DETERIORO DE LÍPIDOS, COMPUESTOS POLARES
(AOCS Método Oficial Cd 20-91, con una modificación por Schulte en 2004)
1. Se toman 0.5g del extracto lipídico obtenido y se colocan en un

matraz aforado, aforándose este con Tolueno (se hace por triplicado).
Se agita perfectamente la muestra preparada.
2. Se adiciona un gramo de sílica gel hidratada al 5% (24hrs previo a
usarla) en una columna, a la cual se le coloca en la parte interior
inferior un “tapón” de algodón de aproximadamente 1cm.
Posteriormente se le agrega el gramo de sílica y se coloca otra capa
de algodón de 0.5cm. Las columnas se montan de manera vertical y
se coloca debajo de cada una un pesafiltro a peso constante.
3. A continuación se adiciona a cada una de las columnas 1ml de la
muestra preparada (mezcla lípidos-tolueno) y 3.5ml de éter de
petróleo- éter etílico (85:15). Se deja que se lleve a cabo la elución
por completo y se colocan los pesafiltros con el filtrado recibido en
una estufa a 80°C hasta que se evapore el disolvente.
4. Se dejan enfriar y se pesan. La fracción recibida en los pesa filtros
conforma la cantidad de compuestos no polares. A partir de estos se
calcula la cantidad de compuestos polares.
Referencias
 Official Methods and Recommended Practices of the American Oil
Chemists’ Society, 4th edn., edited by D. Firestone, American Oil
Chemists’ Society, Champaign, 1997, Method Cd 20-91.
 Schulte, E. (2004). Economical micromethod for determination of polar
components in frying fats, European Journal of Lipid Science Technology
106 772–776
DETERMINACIÓN DE ÁCIDOS URONICOS.
PECTINAS
Sensibilidad del método: 4 – 40 g/mL
Basado en la cuantificación de los ácidos urónicos por medio de una

reacción con carbazol, formando complejos coloridos entre las pentosas y el
reactivo.
Útil para cuantificar, ácido galacturonico, glucuronico y otros.
Puede presentar interferencias por iones cloruro y diversas sustancias
orgánicas que dan un color inespecífico.
REACTIVOS.
 Tetraborato de sodio 0.025M en ácido sulfúrico concentrado.

 Carbazol 0.125% en etanol absoluto (almacenar 4ºC)

PROCEDIMIENTO
 Colocar en tubo de ensaye:
 5 mL de la solución de tetraborato de sodio en H2SO4

conc.
 1 mL de la solución problema
 Mezclar y calentar en baño de agua hirviente por 10 min.

 Añadir 0.2 mL de carbazol, agitar y dejar en el baño durante 5 min
más.
 Dejar enfriar y leer en el espectrofotómetro a 530 nm.
 Ajustar previamente con un blanco.
 Ac. Galacturónico en solución saturada de ácido benzoico (0.2g ac
benzoico en 50 mL de agua) y de ac galacturónico se pesaron 0.001g
en 25 mL de ácido benzoico.

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DETERMINACIÓN DE FIBRA, EQUIVALENCIAS DE ACTIVIDAD

DETERMINACIÓN DE FIBRA DIETETICA TOTAL.

1 Correr 2 matraces blanco a lo largo de toda la determinación.

1. Se toman 0.5g del extracto lipídico obtenido y se colocan en un

Sensibilidad del método: 4 – 40 g/mL

Basado en la cuantificación de los ácidos urónicos por medio de una

 Tetraborato de sodio 0.025M en ácido sulfúrico concentrado.

 Colocar en tubo de ensaye:

 5 mL de la solución de tetraborato de sodio en H2SO4

 Mezclar y calentar en baño de agua hirviente por 10 min.

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