Micropropagación de Mammillaria Luethyi PDF

Propagación in vitro de Mammillaria luethyi G.S.
Hinton
In vitro propagation of Mammillaria luethyi G.S. Hinton
Leticia Escobedo Bocardo1, Hermila Trinidad García Osuna2, Rubén Rojas

Meléndez3, Francisca Ramírez Godina1
Resumen
El género Mammillaria es uno de los más diversos de la familia Cactaceae,

dentro de él se ubica Mammillaria luethyi, especie endémica conocida solamente
en su localidad tipo, en el Norte de Coahuila, de la que se desconoce su
distribución y dinámica poblacional, lo que la hace muy apreciada por
coleccionistas. Actualmente se propaga por esquejes, pero su crecimiento es muy
lento, razón por la cual es de suma importancia propagarla in vitro de manera
eficiente y rápida, lo que permitiría satisfacer las demandas del mercado y
asegurar su conservación. Por lo anterior el objetivo del presente trabajo fue la
propagación in vitro de M. luethyi. Primero se llevó a cabo el establecimiento del
cultivo aséptico y la formación de callo, utilizando para ello tubérculos obtenidos
de la planta madre que se colocaron en medio nutritivo de Murashige y Skoog
(MS) con 3 mgL-1 de ácido 2,4-diclorofenoxiacético (2,4-D); el callo creció a las 4
semanas y fue subcultivado por 3 ocasiones. Enseguida se procedió a la
formación de brotes a partir de callo, probando para ello dos medios nutritivos con
diferentes concentraciones de reguladores de crecimiento (auxinas y citocininas).
Se establecieron un total de 48 tratamientos, procedentes de la combinación de
tres factores. El factor A, correspondió a medios nutritivos, Murashige and Skoog
(MS) y PCL2; el segundo, Factor B, a tipos y concentraciones de citocininas,
bencilaminopurina (BAP) y kinetina (K) a concentraciones de 0.0, 1, 3 y 10 mgL -1
y el tercero, Factor C, a concentraciones de ácido naftalenacético (ANA) (0.0, 0.1 y
1.0 mgL-1 ). El número de brotes por tratamiento se registró a las doce semanas.
Los resultados mostraron que la presencia de citocininas BAP y K solas, favoreció
la expresión morfogenética generando brotes. La escasa respuesta del callo a la
adición de auxina indicó que la cantidad requerida para que se conformaran los
brotes la sintetizó el explante en forma endógena, por lo que no fue necesaria su
presencia. En lo que respecta a los medios nutritivos, no se encontró diferencia
entre ellos en cuanto a número de brotes, pero el medio PCL2 resultó ser
cualitativamente mejor. Concluyendo que los tratamientos que produjeron la mayor
cantidad de brotes por explante, 2.16, 1.83 y 1.58, correspondieron a PCL2 con 1
mg/l BAP, PCL2 con 3 mgL-1 de BAP y PCL2 con 1 mgL-1 Kinetina.
Palabras clave: Mammillaria luethyi, Cactaceae, micropropagación.
_____________________
1 Universidad Autónoma Agraria Antonio Narro, Buenavista, Saltillo, Coah.
27
2 Calli Productores del Desierto SPR de RL. Saltillo, Coah.,
3 Museo del Desierto. Prol. Pérez Treviño # 3745, Saltillo, Coah.
Abstract
Mammillaria gender is one of the most diverse from the Cactacea family,
Mammillaria luethyi is part of this group, an endemic species, just known in its own
community, in northern Coahuila; this species´ distribution and population dynamic
is unknown, which makes this plants highly valued by collectors. Today it is
propagated by cutting, but its growing is quite slow, reason that makes in vitro
technology a very profitable method, cause its faster and more efficient, making it
possible to satisfy the market demands, and also ensure its conservation. Because
of this, the objective of this work was precisely, to propagate the in vitro
technology, M. luethyi individuals. First, aseptic cultivation and callus formation
was established by using tubercles from the mother plant, that were located in
Murishage and Skoog (MS) nutritious media, with 3 mgL-1 of 2,4-
dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D); the callus grew in four weeks and was
subcultivated in three occasions. After that, the formation of buds was done
starting with the callus, testing with two different nutritious mediums, with different
concentrations of growing regulators (auxines and citocinines). A total of 48
treatments were done, proceeding from three different factors. A factor
corresponded to nutritious medias Murashige and Skoog (MS) and PCL2; the
second one: B factor, corresponded to kinds and concentrations of citocinines,
bencilaminopurine (BAP), and kinetin (K), with 0.0, 1, 3, and 10 mgL-1; and the
third: C factor, consisted in the naftalenacetic acid variation of concentration (in
0.0, 0.1, and 1.0 mgL-1).The number of buds per treatment was registered twelve
weeks later. Results suggested that citocinines BAP and K (alone), helped
morfogenetic expression, generating buds. The low callus response to the adding
of auxines indicated that the required amount of them to “build” buds was
synthesized by the explant in an endogenous way, so its presence wasn’t
necessary after all. In the respective topic of nutritious media, a difference between
the numbers of buds was not found, but PCL2 media, resulted to be qualitatively
better. The conclusion is that the best treatments were those that had a best
amount of buds per each explant:, 2.16, 1.83, 1.58, corresponding to PCL2 with 1
mgL-1 BAP, PCL2 with 3 mgL-1 of BAP, and PCL2 with 1 mgL-1 of K.
Key words: Mammillaria luethyi, Cactaceae, micropropagation.
Introducción
México es el país que alberga el mayor número de especies de cactáceas

en el mundo. Están presentes en las actividades de comunidades aisladas como
parte de su alimentación, forraje para ganado, remedios caseros, combustible,
ornamentación y cercado de viviendas. En las últimas décadas la amenaza de
extinción sobre algunas cactáceas se ha incrementado debido a su recolección
excesiva con fines ornamentales, demanda en el uso del suelo, crecimiento en el
área urbana y a las condiciones climáticas adversas propias de las zonas áridas y
semiáridas donde se desarrollan.
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El género Mammillaria es uno de los más diversos de la familia Cactaceae,
dentro de él se ubica Mammillaria luethyi, especie endémica conocida solamente
en su localidad tipo, en el Norte de Coahuila, de la que se desconoce su
distribución y dinámica poblacional, lo que la hace muy apreciada por
coleccionistas. Actualmente se propaga por esquejes, pero su crecimiento es muy
lento, razón por la cual es de suma importancia propagarla in vitro de manera
eficiente y rápida, lo que permitiría satisfacer las demandas del mercado y
asegurar su conservación. Clayton et al. (1990); Rublo et al. (1993) y Smith et al.
(1991), mencionan que el cultivo in vitro es un método potencial para la
conservación de especies raras o en peligro de extinción, por su parte Malda, et al.
(1999) indican que las cactáceas poseen un metabolismo ácido crasuláceo
(plantas MAC), que tienen capacidad reproductiva limitada y tasas de crecimiento
muy lento. Al comparar tasas de crecimiento de cultivo in vitro y ex vitro es
evidente que in vitro se acelera notablemente su velocidad de crecimiento,
además permite su multiplicación, generando una gran cantidad de individuos a
partir de la planta madre. Por lo anterior el objetivo del presente trabajo fue la
propagación in vitro de M. luethyi, probando para ello el efecto de dos medios
nutritivos con diferentes concentraciones de reguladores de crecimiento (auxinas
y citocininas), para inducir la formación de brotes a partir de callo.
Metodología experimental
El trabajo se llevó a cabo en el Laboratorio de Cultivo de Tejidos Vegetales

del Departamento de Fitomejoramiento de la Universidad Autónoma Agraria
Antonio Narro y en el invernadero del Museo del Desierto cuyo procedimiento
experimental se describe a continuación:
Establecimiento del cultivo aséptico y formación de callo de Mammillaria

luethyi
Las plantas madres fueron establecidas en el invernadero y tratadas cada
quince días con tectol (1 mgL-1) durante 3 meses, luego fueron trasladadas al
laboratorio, donde bajo condiciones de asepsia absoluta, se tomaron de su base
20 tubérculos, que constituyeron los explantes primarios. El proceso para lograr
su desinfección consistió en sumergir los tubérculos en kanamicina (50 mgL -1) y
tectol (100 mgL-1 ) durante 5 minutos. Posteriormente se enjuagaron por un minuto
tres veces con agua destilada estéril. Los explantes primarios se colocaron en
frascos gerber con medio nutritivo de Murashige y Skoog (MS) y se llevaron al
cuarto de incubación. A las cuatro semanas se transfirieron a medio nuevo.
Finalmente los explantes fueron colocados, para la producción de callo, en medio
MS suplementado con 85 mgL-1 NaH2PO4, 250 mgL-1 de myo-inositol, 1 mgL-1 de
tiamina-HCL, 1 mgL-1 de piridoxina-HCL, 30 gL-1 de sacarosa, 3 mgL-1 de 2,4-D y 9
gL-1 de agar; ajustado a un pH de 5.8. El callo que creció a las 4 semanas fue
subcultivado por 3 ocasiones en el mismo medio y mantenido en el cuarto de
incubación con temperatura de 24  1C y fotoperíodo de 16 horas.
Micropropagación de brotes a partir de callos de Mammillaria luethyi
29
Para la formación de brotes se partió de callos, que bajo condiciones de
esterilidad total, se seccionaron en piezas de aproximadamente 3 mm 3 y fueron
sembrados en frascos con medio nutritivo. Se estableció cada tratamiento con
cuatro repeticiones, cada repetición constó de un frasco gerber con cuatro piezas
de callo, que conformaron un total de 48 tratamientos procedentes de la
combinación de tres factores, el primero de ellos, Factor A, correspondió a medios
nutritivos, Murashige and Skoog (MS) y PCL2; el segundo, Factor B, a tipos de
citocininas, bencilaminopurina (BAP) y kinetina (K) a concentraciones de 0.0, 1, 3
y 10 mgL-1 y el tercero, Factor C, a concentraciones de ácido naftalenacético
(ANA) (0.0, 0.1 y 1.0 mgL-1). Todos los medios nutritivos fueron suplementados
con 100 mgL-1 de myo-inositol, 1 mgL-1 de tiamina-HCL, 1 mgL-1 de piridoxina-
HCL, 20 gL-1 de sacarosa y 9 gL-1 de agar; ajustado a un pH de 5.8. Los frascos
finalmente fueron trasladados al cuarto de incubación con fotoperíodo de 16 horas
luz, a temperatura de 24  1C. El número de brotes conformados en cada
tratamiento se registró a las doce semanas de desarrollo. El experimento se
estableció bajo un diseño completamente al azar con arreglo factorial y se
realizaron pruebas de rango múltiple de Duncan para encontrar la diferencia entre
tratamientos con un nivel de significancia del 5%.
Resultados y discusión
Los resultados obtenidos indicaron que de los factores evaluados, el único

que logró la producción de brotes de M. luethyi fue el Factor C, que corresponde a
tipos y concentraciones de citocininas, encontrándose que los tratamientos que
produjeron la mayor cantidad de brotes por explante 2.16, 1.83 y 1.58
correspondieron a los tratamientos que contenían 1 mg/l BAP, 3 mgL -1 BAP y 1
mgL-1 K respectivamente, mientras que los tratamientos que contenían altas
concentraciones de citocininas produjeron callo friable. El efecto de BAP y K solos,
favoreció la expresión morfogenética para la producción de brotes. La escasa
respuesta por parte de las secciones de callo a la adición de 3 concentraciones de
auxina, en este caso ANA (0.0, 0.1 y 1.0 mgL-1), Factor C, indicó que la cantidad
requerida para que se conformaran los brotes la sintetizó el explante en forma
endógena, por lo que no fue necesaria su presencia. Los resultados no
concuerdan con lo reportado por Clayton et al. (1990) al micropropagar 11
especies de cactáceas, entre ellas una del género Mammillaria, por Martínez y
Rublo (1989) que lograron la propagación in vitro de Mammillaria san-angelensis y
por Rodríguez y Rublo (1992) que micropropagaron Aztekium ritteri quienes
requirieron la adición de citocininas y auxinas a diferentes concentraciones en los
medios nutritivos que utilizaron para la proliferación de brotes.
En lo que respecta al Factor A, medios nutritivos, no se encontró diferencia
entre ellos en cuanto a número de brotes, pero el medio PCL2 resultó ser
cualitativamente mejor. Resultados similares se reportan en otros trabajos
realizados como el de Clayton et al. (1990) con cactáceas y Phillips y Collins
(1979) en otras especies de plantas, en donde se reporta como mejor medio el
medio PCL2, que difiere del medio MS por contar con concentraciones mayores
de Magnesio, Calcio y Sodio. En la Figura 1 se muestra una plántula de M.luethyi
desarrollándose en un medio nutritivo PCL2 con 1 mgL-1de BAP.
30
Figura 1.- Plántula de Mammillaria luethyi en medio
-1
de cultivo PCL2 con 1 mgL de BAP
Conclusiones
La regeneración de brotes se logró a partir de callo, encontrándose la

mayor cantidad de brotes a concentraciones de 1 mg/l BAP, 3 mgL -1 BAP y 1
mgL-1 de K. No se requirió la presencia de auxina en la producción de brotes. Los
medios nutritivos MS y PCL2 produjeron el mismo número de brotes pero de mejor
calidad en PCL2.
Literatura citada
Clayton, W.P., J.F. Hubstenberg, and G.C. Phillips. 1990. Micropropagation of members of the
Cactacea subtribe Cactinae. J. Am. Soc. Hort. Sci. 115(2): 337-343.
Malda, G., H. Suzan, and R. Backhaus.1999. In vitro culture as a potential

method for the conservation of endangered plants possessing
crassulacean acid metabolism. Scientia Horticulturae. 81:71-87.
Martínez-Vázquez, O., and A. Rubluo. 1989. In vitro mass propagation of the near-extinct
Mamillaria san-angelensis Sánchez–Mejorada. J. Hort. Sci. 64(1): 99-105.
Phillips, C.G., and G.B. Collins. 1979. In vitro tissue culture of selected legumes and plant
regeneration of red clover. Crop Science. 19:59-64.
Rodriguez-Garay, B., and A. Rubluo.1992.In vitro morphogenetic responses of the endange-red
cactus Aztekium ritteri (Boedeker). Cactus and Suculent J. 64:116-119.
Rubluo, A., V. Chavéz, A. Martínez, and O. Martínez-Vázquez. 1993. Strategies for the recovery of
endangered orchids and cacti through in vitro culture. Biol. Conserv. 63:163-169.
Smith, R.H., P.J. Burdick, J. Anthony, and A. Reilley. 1991. In vitro propagation of Coryphanta
macromeris. HortScience 26:(3):315.
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Micropropagación de brotes a partir de callos de Mammillaria luethyi

Los resultados obtenidos indicaron que de los factores evaluados, el único

La regeneración de brotes se logró a partir de callo, encontrándose la

Malda, G., H. Suzan, and R. Backhaus.1999. In vitro culture as a potential

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