UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

FACULTAD DE INGENIERÍA AMBIENTAL

“EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA IN VITRO”

CUARTO LABORATORIO DEL CURSO BIOLOGÍA GENERAL

INTEGRANTES:

Arrieta Espíritu, Víctor – 20171580J

Capcha Bedoya, Carolei – 20181351D
Cántaro Lázaro, Manuel – 20182714I
Huillca Sánchez Maycol – 20181258D

DOCENTE: MSc. Blgo. ALVARO MARTÍN MARTÍNEZ VILA

Lima, Perú
2019
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Facultad de Ingeniería Ambiental

INDICE

1. RESUMEN................................................................................................................3
2. INTRODUCCIÓN.....................................................................................................4
3. OBJETIVOS.............................................................................................................5
3.1 OBJETIVO GENERAL........................................................................................5
3.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS...............................................................................5
4. MARCO TEÓRICO.................................................................................................5
5. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL...................................................................6
a) Materiales, medios de cultivo y equipos.....................................................6
b) Metodología........................................................................................................6
RESULTADOS.................................................................................................................6
6. DISCUSIÓN DE RESULTADOS...........................................................................8
7. CONCLUSIONES..................................................................................................10
8. RECOMENDACIONES........................................................................................11
9. CUESTIONARIO...................................................................................................11
10. FUENTES DE INFORMACIÓN..........................................................................12
11. ANEXOS.............................................................................................................13
12. APÉNDICE..........................................................................................................16

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1. RESUMEN
El siguiente informe de laboratorio presenta el proceso y resultados de la
actividad enzimática de algunos tejidos (animal y vegetal) con el fin de entender
la función y/o la fisiología del organismo del que proceden y establecer
diferencias y patrones al presentar situaciones similares; para ello vamos a
comprobar la reacción de la enzima catalasa (tejidos animales y vegetales) con
el indicador peróxido de oxígeno y de la enzima amilasa presente en la saliva, se
hará uso del reactivo de Lugol y Biuret para determinar la presencia de proteínas
en el tejido.

2. INTRODUCCIÓN

En el siguiente laboratorio se iniciara con la preparación de un conjunto de

mezclas de las cuales obtendremos reacciones y a través de los productos
finales identificar los cambios que se producen en la célula.

Un rasgo especial de la célula es su capacidad para realizar reacciones químicas

rápidas y a temperatura ambiente. Fuera de las células estas reacciones sólo se
pueden realizar muy lentamente.

Por ello realizaremos una serie de experimentos de donde las enzimas son
proteínas sintetizadas en la célula que catalizan (aceleran) una reacción; por lo
tanto, son necesarias miles de ellas para acelerar las diferentes reacciones que
se producen en la célula, esto es debido a su naturaleza proteica.

En el laboratorio realizado podremos reconocer la enzima llamada catalasa en

una muestra vegetal utilizando la papa, lo que requiere una serie de pasos a
seguir los que serán simplificados con los materiales a utilizar.

Las enzimas son proteínas altamente especializadas que tienen como propiedad
actuar como catalizadores en las reacciones biológica esta acción de catalizador
ayuda a incrementar la velocidad de una reacción.

Entre las enzimas se tiene la amilasa y la catalasa. La amilasa desdobla el

almidón a maltosa y glucosa. La catalasa descompone al agua oxigenada en
agua y oxigeno molecular.se localiza principalmente en el hígado.

Se hará uso de la reacción de Biuret, en esta reacción observaremos cambios de

coloración al mezclar los materiales biológicos con los reactivos.

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3. OBJETIVOS

3.1 OBJETIVO GENERAL

Conocer analizar y comprobar la actividad de ciertas enzimas.

3.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS

 Reconocer la catalasa
 Encontrar proteínas en el decantado de jamón con la solución de
Biuret

4. MARCO TEORICO

¿QUÉ ES IN VITRO? In vitro (del latín, en vidrio) designa un experimento llevado

a acabo fuera del organismo, vegetal o animal, generalmente en un recipiente de
vidrio cualquiera. En cambio, in vivo significa un experimento en un organismo
animal o vegetal vivo. Si inyectamos glucosa radioactiva (marcada con carbono
radioactivo) en la vena de una rata, y medimos la cantidad de elemento
radioactivo en los gases pulmonares y la orina animal, se tratará de un
experimento in vivo. Pero si cultivamos células musculares en una solución de
glucosa radioactiva contenida en un recipiente de vidrio, y procedemos al
análisis para establecer el metabolismo del carbono radioactivo, se tratará de un
experimento in vitro.

ENZIMAS

Una de las características más distintivas de la célula activa es su habilidad para

desarrollar reacciones complejas rápidamente y a la temperatura ambiente.

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Fuera de la célula estas reacciones se desarrollarían con demasiada lentitud. La

compleja maquinaria metabólica fundamental para la célula n podría trabajar a
velocidades tan bajas. Los principales agentes que participan en las notables
transformaciones celulares pertenecen a un grupo de proteínas denominadas
enzimas.

Una enzima es una proteína, sintetizada

por la célula viva, que cataliza, o acelera, una reacción termodinámicamente
posible. De esta manera, la velocidad de la reacción resulta compatible con el
proceso bioquímico esencial para el mantenimiento de la vida celular. La enzima
no modifica en forma alguna la constante de equilibrio o el ΔG de una reacción.
Como son proteínas, todos los agentes capaces de desnaturalizar a estos
compuestos (como el calor, los ácidos y las bases fuertes, los solventes
orgánicos y otros materiales) hacen perder a las enzimas sus propiedades
catalíticas.

La elevada especificidad de la función catalítica de las enzimas se debe a su

naturaleza proteica. La extraordinariamente compleja estructura de las proteínas
les confiere tanto los medios para un mecanismo de reacción particular, como la
capacidad de molde para identificar sólo a un limitado grupo de sustratos. La
célula puede elaborar enzimas para diferentes funciones debido a que, en
realidad, la estructura primaria dictamina la estructura compleja final (estructura
terciaria). Por ejemplo, una proteína de 500 residuos aminoácidos puede
ordenaros en tal forma que constituya una seroalbúmina, o bien 10 499 proteína
limitado de ellas que estén muy relacionadas entre sí. Debido a esta
especificidad, se necesitan literalmente miles de ellas. Por ello el estudio de la

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química y la regulación enzimática resulta un requisito previo esencial para

comprender el mecanismo de crecimiento celular, reproducción celular.

Sus propiedades de las enzimas son las siguientes:

 EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DE ENZIMA Y DE LA

CONCENTRACIÓN DE SUSTRATO: Como sucede con todos los
catalizadores, la velocidad de una reacción catalizada enzimáticamente
depende en la forma directa de la concentración de la enzima. Un
aumento de sustrato, manteniendo fija la concentración de la enzima
produce al principio un incremento considerable en la velocidad de la
reacción. Sin embargo a medida que se va aumentando la concentración
del sustrato, la aceleración de la velocidad de la reacción empieza a
decrecer, hasta que finalmente, cuando la concentración del sustrato es
elevada, no se observa cambio en la velocidad.

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 EFECTO DE LA TEMPERATURA: La temperatura afecta a las reacciones

químicas. Las reacciones enzimáticas no son una excepción y, por lo
tanto, son sensibles a los cambios de temperatura. Sin embargo, debido
a la naturaleza proteica de las enzimas, la desnaturalización térmica de
éstas, causada por la elevación de la temperatura, hará que disminuya su
concentración efectiva y por lo tanto la velocidad de la reacción. Hasta
quizás unos 45°C, el efecto predominante corresponderá a un incremento
en la velocidad de reacción (como predice la teoría cinética química).

 EFECTO
DEL PH:

Precisamente por ser proteínas, los cambios en el pH afectan de manera

notable el carácter iónico de los grupos amino y carboxílico de las
enzimas, lo que a sus vez modifica marcadamente el sitio catalítico y en
general, su conformación. Los valores bajos o altos del pH, además de
producir efectos puramente iónicos, pueden determinar una
desnaturalización considerable que también conduce a la inactivación
enzimática.

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 ESPECIFICIDAD: Como ya se ha mencionado, la especificidad del

sustrato es una característica importante de las enzimas. Estas pueden
seleccionar para su ataque sólo a un número limitado de compuestos.
Ello se debe a la conformación de la molécula compleja de la proteína, a
las características tan especiales del sitio activo y a la configuración
estructural de la molécula de sustrato.
Por la general las enzimas exhiben una especificad de grupo. Es decir,
que un grupo general de compuestos puede servir como sustratos.

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5. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

a) Materiales, medios de cultivo y equipos

MATERIALES: EQUIPOS:
 Tubos de ensayo
 Mortero con pistilo REACTIVOS:
 Frascos gotero  Biuret
 Pipeta  Solución de Lugol
 Agitador  Agua Oxigenada
 Solución de almidón al 1%
MATERIALES BIOLOGICO:
 Hígado
 Papa
 Jamón
 Saliva
 Almidón 10%
 Semillas de papaya (10 a 15)

b) Metodología
El desarrollo de dicho experimento se llevó acabo en 3 fases (A, B y C),
cada fase consta de su respectivo procedimiento y empleo de materiales.
En la Fase A se utilizó una solución de almidón al 1% conjunto con Lugol,
además de saliva para su posterior análisis y observación.
En la Fase B se trabajó con semillas de papaya (aproximadamente 10)
moler y decantar con un poco de agua, también se utilizó jamón
decantado (molido con el mortero y agua). Agregando aparte en un tubo
de ensayo el jamón conjunto con unas 4 gotas de Biuret y agua se notará
la presencia de proteínas si este cambia de color (lilácea). Por último en
otro tubo de ensayo se colocó el líquido del jamón decantado y el líquido
de las semillas de papaya pero esta vez primero se dejó reposar por 25
minutos la solución para después agregar 4 gotas de Lugol y compararlo
con el tubo anterior.
Finalizando en la Fase C trabajamos con hígado (cocido y molido), agua
oxigenada, papa (cruda y cocida). Se hará pruebas en 3 tubos
comparándolas y anotando las observaciones que se presente
FUENTES DE INFORMACION

 P.D Boyer. The Enzymes. 3era ed., varios volúmenes. Nuevo York:
Academic Press, 1970.
 M. Dixon y E. C. Webb, Enzymes. 3era ed. Nueva York: Wiley, 1968.
 H. Segel, Biochemical Calculation. Nueva York: Wiley, 1968.

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 Eric E. Conn y P. K. Stumpf. (1993). Bioquímica Fundamental. México

DF: Limusa Noriega.
 Claude A. Ville. (1981). Biología. México DF: Interamericana.
 BABRET, A. CHAVEZ, C. Biología. Editorial Prentice.
 ANÓNIMO (1988): Fehling (Germán). Enciclopedia Universal Ilustrada Europeo-
Americana, 23, 560. Madrid, Espasa-Calpe

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