1. Explique qué es el poder de resolución (P.R.) de un microscopio óptico.

¿Cómo se calcula
el P.R. de un microscopio óptico?
El poder de resolución es la capacidad del instrumento para dar imágenes distintas de
dos puntos situados muy cerca uno del otro en el objeto. Depende de la longitud de
onda, y la apertura numérica del objetivo.
𝐿
𝑃. 𝑅. = 𝐾 ∗
𝑠𝑖𝑛 𝛼
(Bermejo & García, 2006)

2. Realice un esquema en donde pueda observarse la trayectoria de los rayos desde la fuente
de luz pasando a través del condensador, el portaobjetos y el lente objetivo 10X y señale
lo siguiente:

a) ¿Cuándo los rayos de luz atraviesan el portaobjetos de vidrio, que forman?

Se forma un ángulo de refracción (Gama, 2007)
b) ¿Cuál es la función del condensador?
Captar la mayor cantidad posible de rayos luminosos, que proceden de la fuente
luminosa, para dirigirlos hacia la preparación que se va a enfocar. También
proporciona iluminación hacia el objetivo que se está utilizando. (Gama, 2007)
c) ¿Cuál es la función del diafragma de apertura y del condensador?
El diafragma de abertura: controla la cantidad de luz que debe pasar por el
condensador, la cual puede regularse por medio de una palanca lateral (Gama,
2007)
d) ¿Qué aumentos pueden tener los lentes objetivos y los oculares?
 Lentes objetivos: 4x, 10x, 40x y 100x.
 Lentes oculares: 10x y 15x (Tortora, et.al., 2007).
3. Dibuje un lente objetivo de inmersión y una lámina portaobjetos con aceite. Señale la
trayectoria de los rayos de luz a través de ellos y conteste lo siguiente:
 a) ¿Cuál es el aumento de este objetivo?
 1000X
b) ¿Cuál es la función del aceite de inmersión?
 Captación de los rayos de luz y dirigirlos hacia el lente. (Gama, 2007)
c) Indique el valor del índice de refracción (n) del aire, del vidrio (portaobjetos) y aceite
de inmersión
 Tiene el mismo valor (Gama, 2007)
d) Explique que sucede con los rayos cuando atraviesan un portaobjeto sin aceite y
cuando traviesan un portaobjetos con aceite.
 Los rayos siguen su ruta normal y se dispersan, por lo que no se dirigen hacia
el lente (Gama, 2007)

4. Utilizando la siguiente ecuación, calcule el Poder de Resolución (P.R.) de un microscopio

óptico.
P.R. = 0.5 λ/ A.N objetivo
DATOS: 0.5 = Constante, λ = Longitud de onda = 0.530 μm
A.N. objetivo (Inmersión) = 1.25
Calcule: el P.R. del microscopio en micras
0.5(𝜆) 0.5(0.530𝑛𝑚) 1µ𝑛
𝑃𝑅 = = = 0.212𝑛𝑚 ∗ = 2𝑋10−4 𝜇𝜂
𝐴𝑁 𝑂𝑏𝑗𝑒𝑡𝑖𝑣𝑜 1.25 1000𝑛𝑚
5. ¿Cuáles son los factores que limitan el P.R. de los microscopios ópticos?
 Difracción
 aberraciones (de especificidad, cromáticas, astigmatismo, coma, distorsión,
curva del campo)
 corrección de las aberraciones de los objetivos
6. Sobre el uso del lente de inmersión, investigue:
a) ¿Por qué es importante emplear aceite de inmersión cuando observamos bacterias?
Es importante la utilización de éste, ya que aumenta la capacidad de una lente para
captar la luz al permitir que algunos de los rayos de luz que salen de la muestra
formando un ángulo, sean captados y vistos. (Gama, 2007)
 b) ¿Qué le puede suceder al lente de inmersión si por un olvido no se elimina el aceite
después de su uso?
 Puede producir una mala visión en el microscopio.
c) Ponga 3 recomendaciones para el correcto uso del lente de inmersión (100X) que son
imprescindibles para su mejor conservación y evitar que se deteriore.
 Limpiar cuidadosamente con papel limpia lentes antes y después de su
utilización.
 Posicionar una gota de aceite de inmersión sobre la muestra antes de la
utilización de dicho lente
 Enfocar previamente la muestra en 40x, luego regresar al objetivo más bajo, y
pasar directamente al objetivo de inmersión. (Gama, 2007)
7. Sobre el uso correcto de la fuente de iluminación investigue: (para contestar estas
preguntas puede consultarle al Profesor Auxiliar de su sección de laboratorio).
a) Para observar una preparación en fresco: ¿cómo debe ser la intensidad de la luz? ¿A
qué altura debe estar el condensador? Con el diafragma de apertura y de campo
conteste: ¿Cómo se debe manejar para obtener una buena iluminación?
 Intensidad de la luz: baja
 Colocación de condensador: Hasta abajo
 Apertura de Diafragma: cerrado
b) Para observar una preparación fija y teñida de bacterias, conteste ¿en qué posición
debe estar el condensador? ¿Cómo debe usar el diafragma de apertura? Y si el
microscopio que está usando tiene diafragma de campo, ¿cómo se usa?
 Posición del condensador: Arriba
 Diafragmar de apertura: Abierto
(Barrera & Cárdenas, 1997)
8. Elabore un cuadro con los diferentes tipos de microscopios ópticos que se consideraron
en esta unidad: campo claro, campo oscuro, contraste de fases, fluorescencia y con focal
de barrido láser. Indique las características y sus principales aplicaciones. Incluya
esquemas en donde se aprecien los accesorios que contribuyen a mejorar el P.R de cada
uno.
Microscopio Característica Aplicación
Campo claro Utiliza colorantes para teñir las células y mejora el Permite observar muestras fijas de
contraste. Los colorantes utilizados son compuestos bacterias
orgánicos, y cada uno tiene una afinidad por materiales
celulares concretos.
Campo oscuro La luz llega a la muestra únicamente desde los lados. La Método excelente para observar la
luz que recibe la lente es la dispersa por la muestra, de motilidad microbiana, ya que los
modo que aparece clara en un fondo oscuro flagelos suelen distinguirse con ésta
técnica
Contraste de fases Se basa en el principio según el cual las células tienen
un índice de refracción (luz es más lenta cuando pasa
por un material) diferente al medio que la rodea. Ésta
diferencia es amplificada colocando un anillo de fases, Diagnóstico clínico microbiológico, así
que genera una imagen oscura sobre el fondo claro. El como en como microbiana para contar
anillo consiste en una placa de fases que amplifica las
 variaciones de fase y produce una imagen de mayor bacterias en un ambiente natural o en
contraste una suspensión celular
Fluorescencia Muestras que emiten fluorescencia, (que emiten luz de
un color diferente al de la luz que ha absorbido
Focal de barrido laser Microscopio controlado por ordenador en el que se Ecología microbiana, sobretodo en
acopla un láser a un microscopio de fluorescencia. El identificación de poblaciones
láser genera una imagen tridimensional brillante y específicas de células en un hábitat
permite al observador acceder a la muestra desde microbiano, o para distinguir diferentes
diversos planes de enfoque. Tiene un límite de componentes de una comunidad
resolución de 0.2µm a 0.1 µm microbiana estructurada

9. Explique cómo funciona el microscopio electrónico. Indique las principales diferencias

entre el microscopio óptico y el microscopio electrónico.
Los microscopios electrónicos utilizan electrones en lugar de luz visible, para generar
imágenes de células y estructuras celulares. Sus lentes son electromagnéticos y todo el
equipo trabaja en un sistema de vacío, además están equipados con cámaras para poder
tomar micrografías

Microscopio óptico Microscopio electrónico

Fuente de iluminación Natural o artificial Haz de electrones
Observación de seres Si No
vivos
Aumento 1000X 300,000X
Observación de Si Se observa la ultraestructura
estructura
Lentes Convergentes Electromagnéticos
Medio Atmosfera Vacío
 Focalización Mecánica Eléctrica

10. Mencione los dos tipos de microscopios electrónicos que existen, como funcionan y su
principales aplicaciones. Ponga 2 ejemplos de microorganismos, estructuras celulares y
partículas que se pueden observar con microscopía electrónica y sus dimensiones.
Mencione la capacidad de aumento de este tipo de microscopios.
Microscopio Electrónico de transmisión Óptico de barrido
¿Cómo funciona? La muestra se cubre con una
capa fina de un metal pesado,
normalmente oro. Un haz de
Atraviesa la muestra con un electrones barre una y otra vez
haz de electrones la muestra. Los electrones son
desviados por la capa de metal
y recogidos y proyectados en
un monitor para producir una
imagen.
Aplicación Examinar células y estructuras Pueden observarse muestras
celulares a muchos aumentos bastantes grandes y la
y gran resolución. Ver profundidad de campo
estructuras a escala molecular
11. Mencione cuales son las ventajas y desventajas de la microscopía electrónica.
Esta nos permite observar e investigar diferentes modos de vida de bacterias y
microorganismos nos permite avanzar en la ciencia, las desventajas son talvez el distinto
modo de empleo de microscopios, ya que son de alto costo. (Madigan, 2009)
12. Adjunte imágenes de microcospía óptica y electrónica en donde se aprecie la diferencia
entre ambas.

Referencias
Barrera H., & Cárdenas, R. (1997). El Microscopio óptico. México: Plaza y Valdes
Bermejo J. & García, C. (2006) Centros Hospitalarios de alta resolución de Andalucía España:
MAD
Gama, A. (2007) Biología I: Enfoque constructivista. México: Pearson Education
Madigan, M. (2009) Biología de los microorganismos. México: Pearson Education
Tortora, G., Funke, B. & Case, C. (2007) Introducción a la microbiología (9na. Ed). México:
Médica Panamericana