29.

PRUEBAS INMUNES :

INCLUYEN :

1. PRECIPITADOS : las reacciones de precipitación son las más simples de realizar y

visualizar, al hacer reaccionar un antígeno soluble con un anticuerpo correspondiente
en un tubo de ensayo o difusión de agar . Al antígeno en cuestión se le llama
precipitógeno, es multivalente (posee varias copias del mismo determinante
antigénico) y pueden ser de naturaleza protéica , toxinas u otros productos de
bacterias , hongos , virus , etc.
Al anticuerpo se le llama precipitina y por lo general pertenecen a las IgG.

Alfa feto- proteina (AFP ) y EMBARAZO

se eleva en el suero de las mujeres embarazadas con feto que tienen defecto del tubo neural –
espina bífida ; SE DETECTA CON LA PRECIPITACION POR DIFUSION EN CONTRA DEL ANTICUERPO
ANTI-AFP

Los niveles de AFP pueden ser ligeramente menores con el síndrome de Down, y frecuentemente
son mayores en fetos con defectos del tubo neural como la espina bífida.

Defectos del tubo neural

Onfalocele.

Gastrosquisis.

Teratoma sacrococcígeo.

Atresias intestinales.

Insuficiencia placentaria

Un embarazo múltiple, como gemelos o trillizos, también puede ser causa de un incremento de los
niveles de AFP. Embarazo gemelar.

Alfa feto- proteina (AFP ) EN EL ADULTO : Es un marcador tumoral

Los dos casos más importantes que provocan un incremento de la AFP en un adulto son el cáncer
de testículo y el carcinoma de células hepáticas (hepatocarcinoma o HCC, un tipo de cáncer de
hígado). El carcinoma de células hepáticas a menudo eleva los niveles de AFP de forma
espectacular. También es la teratoma. Aparte de esos, la cirrosis hepática, y la hepatitis activa
también elevan los niveles de alfa-fetoproteína. Determinadas substancias tóxicas (drogas)
también producen la elevación de los niveles de AFP. La AFP se encuentra normalmente elevada
en pacientes afectados por ataxia telangiectasia, en los que la concentración de AFP se eleva
normalmente con la edad si bien no suele superar los 400 ng/ml.
LAS PRUEBAS DE PRECIPITACION SE FACILITAN SEPARANDO LAS PROTEINAS DEL SUERO DEL
PACIENTE POR ELECTROFORESIS .

La electroforesis es una técnica para la separación de moléculas según la movilidad de éstas en un

campo eléctrico .

La inmunonefelometría es una técnica automatizada para cuantificar proteínas del suero y otros
líquidos biológicos con mayor sensibilidad y precisión que las técnicas tradicionales de
inmunodifusión radial y turbidimetría USANDO LA DISPERSION DE LA LUZ (cuantificación de IgG,
IgA, IgM, IgAsecretora, C3, C4, alfa-1 antitripsina, haptoglobina, albúmina y otras proteínas del
suero, líquido céfaloraquídeo, orina y saliva total)

2. PRUEBAS DE AGLUTINACION :

La aglutinación es un agregado de células o partículas debido a una formación entrelazada.

El fundamento de la aglutinación es una reacción inmunoquímica que produce la agregación de

partículas o células recubiertas de antígeno o anticuerpo.

La reacción de la aglutinación se divide en dos fases, la primera en la que se produce el contacto

antígeno-anticuerpo sobre la superficie de la partícula (o célula) empleada, y la segunda en la que
las partículas se agregan y se puede visualizar la aglutinación.

También es un fenómeno natural referente a los glóbulos rojos pero igualmente a los glóbulos
blancos y a las plaquetas, que se produce cuando los anticuerpos presentes en el plasma se unen a
antígenos transportados por estas células sanguíneas (la aglutinación puede también producirse con
bacteria sometidas a la acción de anticuerpos). Se trata, pues, de un proceso a la vez inmunológico
(reacción antígeno-anticuerpo) y físico (modificación del medio). Se puede observar generalmente
a simple vista cuando se trata de la aglutinación de glóbulos rojos

FLOCULACION es una variante de la aglutinación , en el cual el agregado es visible pero más pequeño
, suspendido en moteado o forma coloide .

 Pruebas para el tipo de sangre ( antígenos A – B para globulos rojos) : se observa

aglutinación al mezclar los glóbulos rojos del paciente con antisuero anti – A o anti
–B
 Proteína C reactiva : ( PCR - CPR ) , se eleva en la fase aguda de la inflamación , y en
algunos tipo de cáncer . Para su análisis se requiere de suero o plasma heparinizado
Se detecta uniendo los anticuerpos anti – PCR con partículas del latex .
Las partículas se aglutinaran al exponerlas al suero del paciente que contiene
proteína C reactiva .
Prueba positiva confirma la presencia de la inflamación .
Prueba negativa confirma la remisión de la inflamación .
La PCR se usa como marcador de inflamación. La medición de los valores de la PCR
puede servir para determinar el progreso de una enfermedad o la efectividad del
tratamiento .
 La PCR es miembro de la clase de reactivos de fase aguda o proteína de fase aguda
y su nivel aumenta dramáticamente durante los procesos inflamatorios que ocurren
en el cuerpo. Este incremento se debe a un aumento en la concentración plasmática
de IL-6 , que es producida por macrófagos, células endoteliales y linfocitos T, como
también lo hacen los adipocitos
La proteína C reactiva (PCR o CRP por sus siglas en inglés) es una proteína
plasmática circulante, que aumenta sus niveles en respuesta a la inflamación
(proteína de fase aguda). El rol fisiológico de esta proteína consiste en unirse a la
fosfocolina expresada en la superficie de las células moribundas o muertas, y a
algunos tipos de bacterias, con el fin de activar el sistema del complemento, por la
vía del complejo C1Q.
Es sintetizada por el hígado en respuesta a factores liberadores y por los adipocitos

 Prueba de Anticuerpos Heterofilos :

TEST PARA MONONUCLEOSIS ; UNA MUESTRA DEL SUERO DEL PACIENTE SE MEZCLA CON LOS
GLOBULOS ROJOS DE SANGRE DE OVEJA , SE AGLUTINAN LAS CELULAS ROJAS POR ACCION DE LOS
ANTICUERPOS HETEROFILOS DE LA MONONUCLEOSIS ( ENFERMEDAD POR VIRUS EPSTEIN BARR )
PRESENTES EN EL SUERO DEL PACIENTE ENFERMO .

EN EL MONO TEST ; UNA PRUEBA VARIANTE MAS RAPIDA , SE UTILIZA SANGRE DE CABALLO

 PRUEBAS PARA SIFILIS :

VDRL (por su siglas en inglés, Venereal Disease Research Laboratory) es una prueba serológica
realizada en medicina con sensibilidad y especificidad para complementar el diagnóstico de sífilis

EN LA PRUEBA DEL VDRL ; SE AGREGA CARDIOLIPINA (ANTIGENO LIBERADO POR EL TREPONEMA )

A UNA MUESTRA DEL SUERO DEL PACIENTE

Debido a que la prueba del VDRL emplea marcadores indirectos de infección, se le conoce como
una prueba para sífilis no-treponemica

Un VDRL positivo (reactivo), es un parámetro altamente sugestivo de sífilis, pero nunca sinónimo de
ésta, por lo que debe evaluarse en combinación con la historia clínica del sujeto y sus antecedentes
epidemiológicos. Cuando el resultado de la prueba confirmatoria resulta negativo, se considera que
el resultado reactivo del VDRL es un verdadero negativo y que el sujeto no se encuentra infectado.
Si el resultado de una prueba confirmatoria es positivo, se considera confirmado el diagnóstico de
sífilis en el paciente y este debe ser referido para tratamiento.

Cualquier enfermedad por espiroquetas causa un VDRL positivo: sífilis, frambesia, pinta, bejel,
fiebre recurrente, leptospirosis, enfermedad de Lyme y otras borreliosis. Resultados reactivos
también resultan con otras enfermedades infecciosas, como tuberculosis, lepra, neumococo,
endocarditis infecciosa, mononucleosis infecciosa, neumonías virales, sarampión, varicela,
paludismo y tripanosomiasis.

Algunas enfermedades no infecciosas que pueden producir un VDRL reactivo incluyen las anemias
hemolíticas autoinmunes, enfermedades del colágeno, síndrome antifosfolipídico primario, ciertas
inmunizaciones y el embarazo.

Los falsos positivos, por lo general, no superan los títulos de dilución de 1/8; y pueden ser
transitorios o permanentes, según persistan, o no, más de 6 meses.

El resultado no reactivo (negativo) tampoco descarta sífilis, porque durante el período de incubación
de la enfermedad y hasta 15 días después de la aparición del chancro sifilítico, aún no se han
producido anticuerpos. Adicionalmente, en pacientes con títulos muy altos de anticuerpos
anticardiolipina (1 ó 2 % de los pacientes con sífilis) se observa una reacción prozónica que causa
falsos negativos.

Durante el embarazo, especialmente en el último trimestre, se produce paso de la inmunoglobulina

G a través de la placenta, de manera que una serología positiva en el recién nacido no permite
diferenciar entre el traspaso pasivo de anticuerpos maternos y la infección verdadera del recién
nacido

Examen de reagina plasmática rápida (RPR)

Es una prueba de detección para sífilis, que busca anticuerpos presentes en la sangre de personas
que pueden tener la enfermedad.

La prueba es similar al examen de laboratorio de investigación de enfermedades venéreas (VDRL).

 PRUEBAS ESPECIFICAS PARA SIFILIS FTA – ABS / TPI ; DEBIDO A QUE USAN
ANTIGENOS ESPECIFICOS PARA TREPONEMA

Examen FTA-ABS ( FLUORESCENT TREPONEMAL ANTIBODY ABSORPTION )

Es un examen de sangre utilizado para detectar anticuerpos contra la bacteria Treponema pallidum
que causa la sífilis.

Se toma el suero del paciente y se coloca sobre una laminilla que contiene treponema pallidum seco
, si el anticuerpo esta presente , se une al treponema y se detecta agregándole a la laminilla gamma
globulina anti humana con marcado fluorescente .

Este examen se utiliza cuando una prueba de detección para sífilis es positiva para confirmar
que hay una infección verdadera

Este examen se utiliza de manera rutinaria para confirmar si una prueba de detección positiva para
sífilis (ya sea el VDRL o RPR) significa que usted tiene una infección de sífilis activa.

También se puede realizar cuando otros exámenes para sífilis sean negativos, con el fin de descartar
un posible resultado falso negativo.

Un FTA-ABS positivo por lo general es una señal de una infección por sífilis. El resultado de este
examen seguirá siendo positivo de por vida aun si esta enfermedad ha sido tratada en forma
apropiada. Por lo tanto, no se puede utilizar para vigilar el tratamiento de la sífilis o determinar si
usted tiene sífilis activa.

Otras enfermedades como el Pian y la Pinta también pueden producir resultados para FTA-ABS
positivos. Ocasionalmente, puede haber un resultado falso positivo, con mayor frecuencia en las
mujeres con lupus.

TPI ( TREPONEMA PALLIDUM INMMOBILIZATION ) :

Este examen prueba a los anticuerpos para sífilis en el suero del paciente , mediante la
inmovilización de los treponemas vivos móviles , mezclando el suero del paciente con el
complemento .

 PRUEBA DE AGLUTINACION EN LATEX :

Es un método de laboratorio para examinar ciertos anticuerpos o antígenos en una variedad de

fluidos corporales, como la saliva, la orina, el líquido cefalorraquídeo o la sangre

El factor reumatoide (FR) es una prueba que mide la presencia y nivel de la IgM específica contra
las inmunoglobulinas IgG anormales, producidas por los linfocitos de la membrana sinovial, de las
articulaciones de personas afectadas por la Artritis Reumatoide

EXAMEN DEL FACTOR REUMATOIDEO PARA LA ARTRITIS REUMATOIDE . EL FACTOR

REUMATOIDEO ES UN IgM Y QUE ES ANTI- IgG .

EN LA PRUEBA LA IgG SE FIJA A PEQUEÑAS PARTICULAS DE LATEX , LAS CUALES SE AGLUTINAN AL

AGREGAR SUERO DEL PACIENTE QUE CONTIENE FACTOR REUMATOIDEO.

La Artritis Reumatoide es una enfermedad crónica, que produce la inflamación de las

articulaciones principalmente de manos y pies.

VALORES NORMALES DE FACTOR REUMATOIDE (FR) Valores normales o NEGATIVOS: •Menor de

60 U/ ml (por nefelometría). •Título menor de 1:80 (método de aglutinación)

 ANTICUERPOS ANTINUCLEARES ( ANA )

Los Anticuerpos antinucleares (ANA) son autoanticuerpos que tienen como blanco el contenido
del núcleo celular. La concentración de anticuerpos antinucleares está significativamente
aumentada en aquellos pacientes con enfermedades autoinmunes.

El test de ANA, mide el patrón y la cantidad de autoanticuerpos, resultando positivo en el caso de

que los títulos se encuentren aumentados. En general, los ANA se encuentran presentes en bajas
concentraciones en la mayor parte de la población, pero existe alrededor de un 5% de la población
(principalmente en mujeres), en que su concentración se encuentra significativamente aumentada
y la mitad de éstos llegan a desarrollar alguna enfermedad autoinmune.
Existen dos métodos para medir los ANA :

 Inmunofluorescencia indirecta: Resulta más sensible, permite determinar patrones de

tinción asociados a diferentes enfermedades, pero es de mayor costo y requiere personal
altamente capacitado para interpretar las imágenes obtenidas.

 ELISA: Menos sensible, no resulta posible determinar en un solo ensayo diferentes

perfiles, pero ha comenzado a ganar popularidad debido a su bajo costo y facilidad de
implementación.

El título de referencia para los ANA es de 1:40 para adultos y 1:20 para niños. Títulos mayores
suelen ser indicativos de una enfermedad autoinmune.

Los ANAs son indicativos de lupus eritematoso sistémico (en el cual se encuentran presentes en el
80-90% de los pacientes clínicamente diagnosticados); aunque también pueden aparecer en otras
patologías autoinmunes tales como el síndrome de Sjögren (60% de los casos), espondilitis
anquilosante, artritis reumatoide, hepatitis autoinmune, esclerodermia, polimiositis y
dermatomiositis (30%), y también en otras condiciones no reumatoideas asociadas a daños en los
tejidos tales como la enfermedad de Addison, Púrpura trombocitopénica idiopática (PTI),
Enfermedad de Hashimoto, Anemia hemolítica autoinmune, diabetes mellitus tipo I, y la
Enfermedad mixta de tejido conectivo.

En el caso del Lupus ; partículas de Latex se cubren con desoxyribonucleoproteina , la prueba da

positiva para ANA , si la aglutinación ocurre al agregar el plasma del paciente .

Una reacción negativa sugiere que el lupus no está presente ; pero una reacción positiva puede
ocurrir en caso de otras enfermedades como la Artritis Reumatoide .

El LE prep test , detecta anticuerpos anti – nucleares por la aparición de la característica

histológica de los neutrófilos que han fagocitado complejos ANA /NUCLEOPROTEINAS

Clasificación de los ANA

Luego de la detección de un título alto de ANAs en el suero de un paciente (P. ej 1:160), se

procede a determinar cuales son los subtipos implicados.4 Esto por lo general se realiza en celulas
de la línea HEp-2. Un ejemplo típico incluiria:

 Anti-ENA (Antígenos nucleares extraíbles(Extractable Nuclear Antigen))

o Anti-Ro (SS-A)

o Anti-La (SS-B)

o Anti-Sm (antígeno Smith)

o Anti-nRNP (Riboproteína nuclear)

o Anti Scl-70 (topoisomerasa I)

o Anti-Jo
  Anti-gp-210 (glicoproteína de poro nuclear gp-210)

 Anti-p62 (Nucleoporina 62)

 Anti-dsDNA (ADN doble cadena)

 Anticuerpos anticentrómeros

 HCG ( GONADOTROPINA CORIONICA HUMANA )

La gonadotropina coriónica humana, gonadotrofina coriónica humana, o hCG (del inglés: human
chorionic gonadotropin) es una hormona glicoproteica producida durante el embarazo por el
embrión en desarrollo después de la fecundación y posteriormente por el sincitiotrofoblasto (parte
de la placenta).

La hCG también es producida en la hipófisis de los hombres y mujeres de todas las edades

Los niveles de hCG pueden ser medidos en la sangre o en la orina. Esto es comúnmente hecho en
las pruebas de embarazo, con la intención de indicar la presencia o ausencia de un embrión
implantado.

La mayoría de los exámenes emplean un anticuerpo monoclonal, que es específico a la subunidad-

β de la hCG (β-hCG). Este procedimiento se emplea para asegurar que las pruebas no den falsos
positivos al confundir la hCG con la LH y FSH. (Las dos últimas están siempre presentes en el cuerpo,
mientras que la presencia de la hCG casi siempre indica un embarazo.)

PARTICULAS DE LATEX SE CUBREN CON HCG .SE MEZCLA LA ORINA DE LA PACIENTE CON ANTI – HCG
,SI LA ORINA CONTIENE HCG , SE NEUTRALIZA LA ANTI – HCG Y CUANDO SE LE AGREGAN LAS
PARTICULAS DE LATEX , NO SE AGLUTINARAN ( INHIBICION DE LA AGLUTINACION ). LA AUSENCIA
DE AGLUTINACION DURANTE LA PRUEBA , LA HACEN POSITIVA PARA EMBARAZO.

Como pruebas de embarazo, las pruebas cuantitativas de sangre y las más sensibles pruebas de
orina usualmente detectan la hCG entre 6 a 12 días después de la ovulación. Sin embargo, se tiene
que tomar en cuenta que los niveles totales de hCG podrían variar ampliamente durante las
primeras 4 semanas de gestación, llevando a resultados falsos durante este período de tiempo .

Las enfermedades trofoblásticas gestacionales como las molas hidatiformes ("embarazo molar") o
coriocarcinomas pueden producir altos niveles de βhCG (debido a la presencia de
sincitiotrofoblastos, parte de las vellosidades que componen la placenta) a pesar de la ausencia de
un embrión. Este, como también otras condiciones, puede conducir a resultados elevados de hCG
en ausencia de un embarazo.

Los niveles de hCG son también un componente del test tripe, una prueba de detección de ciertas
anomalías cromosómicas del feto/defectos de nacimiento

También se podrían hacer pruebas de hCG cuando se diagnostica o monitorea tumores de células
germinales y la enfermedad trofoblástica gestacional.
  El análisis de orina podría ser un inmunoensayo cromatográfico o cualquiera de varios otros
formatos de análisis, en casa, en el consultorio médico, o en un laboratorio. Los umbrales
de detección publicados van desde 20 a 100 mIU/ml, dependiendo de la marca de la prueba.
A principios del embarazo, se podría obtener resultados más precisos al usar la primera
orina de la mañana (cuando los niveles de hCG son los más altos). Cuando la orina está
diluida (gravedad específica menor a 1,015), las concentraciones de hCG podrían no ser
representativas de las concentraciones en la sangre, y la prueba podría resultar en un falso
negativo.

 El análisis sérico, usando 2-4 mL de sangre venosa, es típicamente un inmunoensayo

quimioluminiscente o fluorimétrico que puede detectar niveles de βhCG tan bajos como 5
mIU/ml y permite la cuantificación de la concentración de βhCG. La posibilidad de
cuantificar los niveles de βhCG es útil en el monitoreo de células germinales y tumores
trofoblásticos, seguimiento después de un aborto involuntario, y en el diagnóstico de y
seguimiento después del tratamiento para un embarazo ectópico. La falta de un feto visible
en una ecografía vaginal después de que los niveles de βhCG hallan llegado a 1500 mIU/ml
es un fuerte indicador de un embarazo ectópico.

La gonadotropina coriónica humana puede ser usada como un marcador tumoral, ya que su
subunidad β es secretada por algunos cánceres incluyendo, el seminoma, coriocarcinoma, tumores
de células germinales, la formación de molas hidatiformes, teratoma con elementos de
coriocarcinoma, y tumor de células islotes. Por esta razón, un resultado positivo en hombres podría
ser una señal de un cáncer testicular El rango normal para un hombre es 0-5 MIU/ml.

Lo siguiente es una lista de los niveles séricos de hCG. (UPM significa último período menstrual). Los
niveles crecen de forma exponencial después de la concepción e implantación.

semanas desde el UPM mIU/mL

3 5 – 50

4 5 – 426

5 18 – 7.340

6 1.080 – 56.500

7–8 7.650 – 229.000

9 – 12 25.700 – 288.000

13 – 16 13.300 – 254.000

17 – 24 4.060 – 165.400

25 – 40 3.640 – 117.000

Mujeres no embarazadas <5.0

Mujeres posmenopáusicas <9.5

 LA PRUEBA DE WIDAL ( WIDAL TEST ) : DETECTA ANTICUERPOS CONTRA

SALMONELLA THYFOSA , QUE SE AGLUTINAN AL EXPONER EL LATEX CON EL SUERO
DEL PACIENTE .
La reacción de Widal demuestra la presencia de anticuerpos aglutinantes
(aglutininas) contra los antígenos H (flagelar) u O (somático) de la Salmonella typhi
en el suero de los pacientes con fiebre tifoidea.
Los anticuerpos contra el antígeno O aparecen luego de 6 a 8 días de iniciada la
enfermedad y desaparecen posteriormente entre 3 y 6 meses.
Los anticuerpos contra el antígeno H aparecen a los 8 a 12 días, alcanzando títulos
más elevados con respecto a los anti-O y pueden persistir por más de 1 año. Los
anticuerpos contra el antígeno Vi aparecen más tardíamente, a la tercera semana,
sin embargo lo hacen en títulos bajos 1:10-1:20 con respecto a los previos

Un diagnóstico de fiebre tifoidea puede considerarse si los títulos iniciales se

cuadruplican entre una y cuatro semanas. Sin embargo, el clínico no puede esperar
este tiempo para establecer un tratamiento, por lo cual se debe considerar la
posibilidad de esta entidad con un título aislado determinado.
Este punto de corte depende de la prevalencia de salmonelosis en la comunidad
estudiada, siendo así, se han establecido protocolos diagnósticos en varios países,
teniendo en cuenta los estudios realizados en sus regiones.
En general, hay que tener en cuenta la fiebre tifoidea con títulos:
Anti-O≥1:160-200 y/o H ≥160-200 en zonas endémicas;
Anti-O ≥1:50-100 en zonas no endémicas, se debe pensar con títulos más bajos
.
Además, una reacción negativa no excluye el diagnóstico de fiebre tifoidea en el
contexto de un cuadro clínico compatible.

PRUEBAS SIMILARES SE USAN PARA LA DETECCION DE ANTICUERPOS PARA BRUCELOSIS Y

TULAREMIA

 WEIL – FELIX TEST : ES UNA PRUEBA PARA ENFERMEDAD POR RICKETSIA .

DILUCIONES DEL SUERO DEL PACIENTE SE EXPONEN AL PROTEUS OX – 19 ( UNA
BACTERIA QUE TIENE EL ANTIGENO EN COMUN CON LA RICKETSIA )
LA AGLUTINACION ES CONSISTENTE PARA RICKETSIA Y PARA PROTEUS .
 TEST DE AGLUTININA FRIA (crioaglutininas) : DETECTA ANTICUERPOS CONTRA
MYCOPLASMA PNEUMONIAE EN EL SUERO DEL PACIENTE .

Las aglutininas frías (crioaglutininas) son activas a temperaturas frías pueden

presentarse con:
•Infecciones, especialmente mononucleosis y neumonía por micoplasma.
•Varicela.
•Infección por citomegalovirus.
•Cáncer, lo que incluye linfoma y mieloma múltiple.
•Listeria monocytogenes.
•Lupus eritematoso sistémico.
•Macrogolulinemia de Waldenstrom
Por su parte, la prueba de aglutininas frías permite diagnosticar:
•Neumonía por micoplasma. Infección de los pulmones atípica causada por la
bacteria Mycoplasma pneumoniae. Ocasiona dolor torácico, tos seca, sudoración
excesiva, fiebre, escalofrío y dolor de cabeza y garganta.
•Infección por estafilococos. Aunque este tipo de bacterias no suele ocasionar
problemas al ser humano, puede afectar a recién nacidos, mujeres en período de
lactancia y personas con enfermedades crónicas o sistema inmunológico debilitado.
Los estafilococos pueden atacar cualquier parte del organismo y los síntomas
dependen de la localización de la infección.
•Malaria. También llamada paludismo, es enfermedad parasitaria transmitida por
la picadura del mosquito anófeles infectado; involucra fiebres altas, escalofríos,
síntomas seudogripales y anemia.

El estudio de crioaglutininas también hace posible la detección de algunos tipos de

cáncer, como linfoma y mieloma múltiple (se presenta en células plasmáticas de la
médula ósea, las cuales ayudan al sistema inmunológico a combatir enfermedades
mediante la producción de anticuerpos). También permite diagnosticar lupus
eritematoso sistémico.

 TEST DE AGLUTININA CALIENTES O FEBRILES son activas a las temperaturas

normales del cuerpo

Las aglutininas calientes pueden presentarse con: Los médicos saben que la
presencia de aglutininas calientes es indicador de infecciones como:

•Brucelosis. Ocasiona sudoración, escalofríos, fiebre, agotamiento y dolor de

cabeza, espalda y articular, y es generada por la bacteria Brucella, que se encuentra
en leche, queso o crema no pasteurizados.
•Infecciones por rickettsias. Causan fiebre, erupción cutánea y malestar general, y
son transmitidas por ciertos microorganismos que están en agua contaminada y
animales, así como por la picadura de ácaros, garrapatas, pulgas y piojos.
 •Salmonelosis. Es uno de los tipos más comunes de intoxicación alimentaria, y
ocurre cuando se consumen comida o agua contaminados con la bacteria
salmonela. Se caracteriza por ocasionar fiebre, escalofrío, dolor abdominal,
náuseas, vómito y diarrea.
•Tularemia. Es infección común en roedores salvajes, causada por la bacteria
Francisella tularensis, que se transmite a los humanos por contacto con tejidos
animales infectados o por garrapatas, picadura de moscas y mosquitos. Sus
síntomas son: rigidez articular, fiebre, escalofrío, dolor de cabeza y muscular,
dificultad respiratoria y formación de una llaga en la piel en el sitio de la picadura.

Este análisis sanguíneo también permite revelar la presencia de linfoma (cáncer de

cierta parte del sistema inmunológico, llamado sistema linfático), así como lupus
eritematoso sistémico. No obstante, es importante señalar que el uso de ciertos
medicamentos, como metildopa, penicilina y quinidina, puede alterar los
resultados.

Resultados
Se considera que los valores son normales en las siguientes circunstancias:
 Aglutininas febriles o calientes: sin aglutinación en títulos A o por debajo de 1:80.
 Aglutininas frías o crioaglutininas: sin aglutinación en títulos A o por debajo de 1:16.

3. NEUTRALIZACION :

SE PUEDE DETECTAR EL ANTICUERPO O EL ANTIGENO , AL NEUTRALIZAR LA ACTIVIDAD DE UNO DE

LOS INGREDIENTES DE LA REACCION ANTIGENO – ANTICUERPO.

 TITULOS DE ANTIESTREPTOLISINA O :

El título de ASLO (por anti-streptolysin O, en español «antiestreptolisina O») o ASO es la medición

de anticuerpos anti-estreptococo betahemolíticos del tipo A. Esta bacteria (estreptococo) produce
una enzima llamada estreptolisina O, que puede destruir los hematíes por lo que el cuerpo
reacciona contra ella produciendo anticuerpos específicos antiestreptolisina O.

La anti-estreptolisina O es el conjunto de anticuerpos específicos frente a la estreptolisina O, un

enzima extracelular producido por estreptococos del grupo A de Lancefield β-hemolítico
(Streptococcus pyogenes). La anti-estreptolisina puede detectarse desde una semana a un mes
después de la infección del estreptococo. Streptococcus pyogenes causa una amplia variedad de
infecciones en las vías respiratorias altas tales como la faringitis aguda. Otras manifestaciones de
infección por Streptococcus pyogenes incluyen glomerulonefritis, fiebre reumática, endocarditis
bacteriana y fiebre escarlata.
La determinación se efectúa ensayando una suspensión de partículas de látex recubiertos con
estreptolisina frente a los sueros problema y sangre humana. La presencia o ausencia de
aglutinación visible es indicativa de la presencia o ausencia de ASLO en las muestras ENSAYADAS.

La hemolisis será inhibida por el suero del paciente ; EN LA PRUEBA SE NEUTRALIZA LA

ESTREPTOLISINA O .

Niveles normales de antiestreptolisinas O (ASLO):

en adultos: Menores de 160 Unidades/ml

en niños menores de 2 años: Menores de 50 Unidades/ml

en niños entre 2 y 4 años: Menores de 160 Unidades/ml

en niños entre 4 y 12 años: Entre 160 y 300 Unidades/ml

Los niveles aumentados de antiestreptolisinas O (ASLO) pueden indicar:

Infección por Estreptococo betahemolíticos del tipo A

Glomerulonefritis

Fiebre reumática

Endocarditis bacteriana

Escarlatina

 PRUEBAS DIAGNOSTICAS PARA VIRUS ESPECIFICOS , IDENTIFICANDO SUS

ANTICUERPOS :

VIRUS INFLUENZA : CONTIENE HEMAGLUTININA ( HA ) ,QUE AGLUTINAN GLOBULOS

ROJOS . LA PRUEBA DE INHIBICION DE LA HEMOGLUTININA ( HA ) ; EXAMINA LA
PRESENCIA DE ANTICUERPOS HA EN EL SUERO DEL PACIENTE . SE MEZCLA EL SUERO
DEL PACIENTE CON VIRUS QUE CONTIENEN HA . SI LOS ANTI – HA ESTAN PRESENTES ,
SE NEUTRALIZAN LOS HA , Y LA HEMOAGLUTINACION NO OCURRIRA SI SE AGREGAN
GLOBULOS ROJOS A LA MUESTRA. ES EL VIRUS EL QUE SE NEUTRALIZA EN LA PRUEBA.

 PRUEBAS PARA ANTICUERPOS EN CONTRA DE LOS FACTORES DE COAGULACION:

COMO CAUSAS DE TRASTORNOS DE LA COAGULACION . EN UN PACIENTE AL QUE SE LE

SOSPECHE ANTICUERPOS EN CONTRA DE UN FACTOR DE LA COAGULACION SE PUEDE
PROBAR EXPONIENDO PLASMA NORMAL CON EL SUERO DEL PACIENTE , LA
COAGULACION SERA INHIBIDA POR EL ANTICUERPO INHIBITORIO DEL SUERO DEL
PACIENTE. SE NEUTRALIZA EL FACTOR DE COAGULACION.
  PRUEBAS PARA ANTICUERPOS EN CONTRA ESPARMATOZOIDES

COMO CAUSAS DE INFERTILIDAD . EL SUERO DE HOMBRE O MUJER SE UTILIZAN COMO

ANTICUERPOS ANTI ESPERMA , EXAMINANDO LA INMOBILIZACION DE LOS ESPERMA AL
SER MEZCLADO CON LAS MUESTRAS DE SUERO. EN ESTA PRUEBA SE NEUTRALIZA AL
ESPERMATOZOIDE

 PRUEBAS DE FIJACION AL COMPLEMENTO :

SE USAN EN LA DETECCION DE UNA AMPLIA GAMA DE ANTICUERPOS VIRALES , LA IDEA

ES QUE LOS ANTICUERPOS HEMOLISINA , PRODUCEN LISIS DE LOS GLOBULOS ROJOS
QUE CONTENGAN COMPLEMENTO . LA LISIS PUEDE SER INHIBIDA CON LA PRESENCIA
DE INMUNOCOMPLEJOS , LOS CUALES SE COMBINAN CON EL COMPLEMENTO , DE ESTE
MODO PREVIENE AL COMPLEMENTO LA FACILIDAD DE LISIS .

SE USA EN LA PRUEBA , GLOBULOS ROJOS DE OVEJA CUBIERTOS CON HEMOLISINA Y SE

MEZCLA CON COMPLEMENTO DE CERDO GUINEO , EL SUERO DEL PACIENTE Y EL
ANTIGENO VIRAL DE INTERES. SI EL SUERO DEL PACIENTE CONTIENE ANTICUERPOS
PARA EL ANTIGENO VIRAL , SE COMBINARAN FORMANDO UN COMPLEJO INMUNE EL
CUAL AL NEUTRALIZAR EL COMPLEMENTO SE INHIBIRA LA HEMOLISIS .

4. ROTULACION :

EL ANTICUERPO O ANTIGENO DEL LABORATORIO QUE SE LE AGREGA AL SUERO O TEJIDO

DEL PACIENTE , PARA DETERMINAR LA PRESENCIA DEL ANTIGENO O ANTICUERPO
CORRESPONDIENTE , SE PUEDE ROTULAR CON ALGO QUE SEA FACILMENTE DETECTABLE (
FLUORESCEINA , MARCADORES RADIOACTIVOS , ENZIMAS QUE SE DETECTEN POR
REACCIONES QUIMICAS PARTICULARES )

ELISA (acrónimo del inglés Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay: ‘ensayo por

inmunoadsorción ligado a enzimas’)

Es una técnica de inmunoensayo en la cual un antígeno inmovilizado se detecta mediante

un anticuerpo enlazado a una enzima capaz de generar un producto detectable, como
cambio de color o algún otro tipo; en ocasiones, con el fin de reducir los costos del ensayo,
nos encontramos con que existe un anticuerpo primario que reconoce al antígeno y que a
su vez es reconocido por un anticuerpo secundario que lleva enlazado la enzima
anteriormente mencionada. La aparición de colorantes permite medir indirectamente
mediante espectrofotometría el antígeno en la muestra.

Se usa en muchos laboratorios para determinar si un anticuerpo particular está presente en

la muestra de sangre de un paciente. Aunque el procedimiento es rutinario y sencillo,
involucra a un gran número de variables, tales como selección de reactivo, temperatura,
medición de volumen y tiempo, que si no se ajustan correctamente, puede afectar los pasos
sucesivos y el resultado de la prueba.

Se han desarrollado múltiples variantes de ensayos ELISA que permiten la cuantificación de

un antígeno en solución, la detección de un anticuerpo en una solución (por ejemplo en el
clonaje de anticuerpos monoclonales) o la determinación de la subclase (idiotipo) de un
anticuerpo. A continuación se describen los más comunes.

ELISA directo (ensayo ELISA simple de dos capas). Las placas ELISA se preparan recubriendo
los pocillos con las soluciones en las que se sospecha se encuentra el antígeno. Se incuban
con anticuerpos marcados. Indican la presencia de antígeno en la solución analizada. Es
necesario incluir controles negativos que serán muestras del mismo tipo que las analizadas
(sangre, orina...), pero en las que se tenga la certeza de la ausencia del antígeno buscado.
Asimismo se incluyen controles positivos (soluciones donde se encuentra el antígeno
buscado).

ELISA indirecto. Las placas ELISA se preparan de la misma forma a la anterior. Los controles
positivos y negativos son los mismos. El sistema de detección emplea dos anticuerpos: uno
primario contra el antígeno y uno secundario marcado contra el primario. La detección tiene
mayor sensibilidad por presentar una amplificación de señal debida a la unión de dos o más
anticuerpos secundarios por cada primario. Es el ensayo más popular, como lo es la
inmunofluorescencia indirecta, pues un mismo secundario marcado y un mismo sistema
enzimático permiten cuantificar una gran variedad de antígenos; por eso es un método más
polivalente y barato, aunque se pierda algo de precisión por tener un eslabón más con
respecto al método directo. La dilución de la solución que contiene el anticuerpo primario
—por ejemplo, suero sanguíneo— es un factor muy importante a tener en cuenta para
evitar la aparición de falsos negativos, ya que si la muestra está muy diluida, no saldrá
positiva si la titulación de anticuerpos es muy baja. (Es decir, aunque los anticuerpos están
presentes, la prueba no da positivo porque la concentración de anticuerpos específicos
contra el antígeno que está pegado en el fondo del pocillo no es suficiente como para dar
una señal detectable.).

El ELISA indirecto es el método de elección para detectar la presencia de anticuerpos séricos

contra el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), agente causante del síndrome de
inmunodeficiencia adquirida (SIDA). Según esta técnica, proteínas recombinantes de la
envoltura y el núcleo del VIH se absorben como antígenos en fase sólida a los pocillos. Las
personas afectadas de VIH producen anticuerpos séricos contra epítopos en estas proteínas
víricas. En general, el ELISA indirecto permite detectar anticuepos séricos contra VIH desde
las primeras seis semanas de una infección.ELISA «sándwich» (Ensayo de captura de
antígeno y detección mediante inmunocomplejos). Se trata de un ensayo muy empleado en
el que se recubre el pocillo con un primer anticuerpo anti-antígeno. Después de lavar el
exceso de anticuerpo, se aplica la muestra problema en la que se encuentra el antígeno,
que será retenido en el pocillo al ser reconocido por el primer anticuerpo. Después de un
segundo lavado que elimina el material no retenido, se aplica una solución con un segundo
anticuerpo anti-antígeno marcado. Así, pues, cada molécula de antígeno estará unida a un
anticuerpo en la base que lo retiene y un segundo anticuerpo, al menos, que lo marca. Este
ensayo tiene una gran especificidad y sensibilidad debido a la amplificación de señal que
permite el segundo anticuerpo
 ELISPOT, una prueba variante de ELISA , es capaz de detectar cuantitativamente el número
de células en una población productora de anticuerpos específicos contra un antígeno
determinado o un antígeno contra el que se dispone de un anticuerpo específico. Aquí,
dichas placas se recubren con el antígeno reconocido por el anticuerpo de interés o con el
anticuerpo específico para el antígeno cuya producción se valora. Seguidamente, se añade
a las placas recubiertas una suspensión de la población celular que se investiga e incuba. Las
células se disponen en la superficie de la placa, y las moléculas secretadas reactivas a las
moléculas de captura son unidas en la cercanía de las células secretoras, produciéndose un
anillo de complejos antígeno-anticuerpo alrededor de cada célula que sintetiza la molécula
de interés. Después, la placa se lava y un anticuerpo unido a enzima específico para el
antígeno secretado, o para la especie de anticuerpo secretado, se añade y deja que se unan.
El posterior revelado del ensayo mediante adición de un sustrato cromógeno o emisor de
luz adecuado indica la posición de cada célula productora de anticuerpo (o de antígeno)
como un punto de color o luz.

Las cuatro fases de un ensayo ELISA son las siguientes:

1. Conjugación del anticuerpo o del antígeno con una enzima (peroxidasa, fosfatasa
alcalina...). El anticuerpo conjugado a la enzima se emplea en los ensayos directos e
indirectos, sandwich, etc. El antígeno marcado se emplea en ensayos de competición de
antígeno. Dicha unión anticuerpo-enzima o antígeno-enzima ha de producirse durante un
determinado período de tiempo en aras de producir una solución coloreada y que pueda
ser valorada visualmente o cuantificada por medio de un espectrofotómetro (normalmente
a una longitud de onda de 414 nm). Si no transcurre el tiempo adecuado para que se dé la
reacción, no se evidenciará ningún color, interpretándose este resultado como un falso
negativo y disminuyendo la sensibilidad de la técnica.

2. Unión del antígeno (o del anticuerpo) a los pocillos. La unión de anticuerpos o antígenos
se realiza con facilidad a la superficie de plásticos tratados que tienen gran afinidad por
proteínas. Así, el procedimiento de recubrimiento de los pocillos debe realizarse
cuidadosamente. Si se usa mucho antígeno, se pueden obtener falsos positivos. Por el
contrario, si se usa poco antígeno, el exceso dará lugar a una reacción falsa negativa.

3. Formación de una o más capas de inmunocomplejos. En el caso del antígeno unido a la

placa, se puede detectar mediante un anticuerpo anti-antígeno marcado (ELISA directo) o
empleando un anticuerpo primario anti-antígeno y un secundario anti-primario marcado
(ELISA indirecto). Este segundo método permite la amplificación de la señal al poderse unir
uno o más anticuerpos secundarios a cada anticuerpo primario. En el caso del anticuerpo
unido a la placa, se incuba con una mezcla de antígeno y antígeno marcado. Se ensayan
diferentes relaciones de antígeno frío frente a una cantidad fija de antígeno marcado. Es el
ensayo de competición del antígeno. En esta etapa es muy importante controlar los factores
tiempo y temperatura de incubación para evitar la aparición de falsos negativos. En el caso
del tiempo, si es inferior a 15 minutos, no ocurrirá la interacción antígeno-anticuerpo y el
color no será evidente al final del ensayo, dando un falso negativo. Por su parte, si la
temperatura de incubación es muy baja, la formación del complejo antígeno-anticuerpo
 tampoco se completará en el tiempo establecido, mientras que si es muy alta, las proteínas
(antígeno y anticuerpo) se desnaturalizan y, por tanto, disminuyen su capacidad para
interaccionar, dando igualmente falsos negativos.

4. Revelado de la reacción enzimática. Después de un lavado para eliminar todas las

moléculas marcadas no fijadas en forma de inmunocomplejos, se añade el sustrato
enzimático en solución. Se deja reaccionar y se lee la densidad óptica mediante
espectrofotometría.

 Western blot, inmunoblot o electrotransferencia

Es una técnica analítica usada para detectar proteínas específicas en una muestra determinada (una
mezcla compleja de proteínas, como un extracto tisular). Mediante una electroforesis en gel se
separan las proteínas atendiendo al criterio que se desee: peso molecular, estructura,
hidrofobicidad, etc. Hay casi tantas posibilidades como tipos de electroforesis existen. Luego son
transferidas a una membrana adsorbente (típicamente de nitrocelulosa o de PVDF) para poder
buscar la proteína de interés con anticuerpos específicos contra ella.1 2 Finalmente, se detecta la
unión antígeno-anticuerpo por actividad enzimática o fluorescencia, entre otros métodos. De esta
misma forma se puede estudiar la presencia de la proteína en el extracto y analizar su cantidad
relativa respecto a las otras proteínas

Se usa para el diagnóstico de :

 Prueba de VIH: Aunque el VIH suele detectarse mediante la técnica ELISA, el Western Blot
se usa como prueba confirmatoria cuando el ELISA da un resultado positivo en un grupo que
no es de riesgo o en una población donde la prevalencia del virus es muy baja. Mediante el
Western blot se buscan los anticuerpos anti-VIH en una muestra de suero humano. Se
transfieren a una membrana las proteínas de células que, se sabe, están infectadas por el
VIH. Entonces, se incuba el suero que hay que probar con esta membrana. Este paso es
equivalente a la incubación con el anticuerpo primario; si hay anticuerpos anti-VIH en el
suero, serán estos los que realicen el papel de anticuerpo primario. Se lava, para eliminar
los anticuerpos no unidos, y la membrana se vuelve a incubar con un anticuerpo secundario
anti-humano unido a una enzima-señal. La aparición de bandas indica la presencia de
proteínas contra las cuales el suero del paciente contiene anticuerpos, es decir, el paciente
es seropositivo.

 Se emplea como prueba definitiva de la encefalopatía espongiforme bovina, comúnmente

llamada "enfermedad de las vacas locas".

 Algunas clases de la prueba para la enfermedad de Lyme usan el Western blot.

 En la práctica clínica, el Western Blot se utiliza para diagnosticar enfermedades infecciosas,

más frecuentemente famoso, el VIH. Algunos laboratorios clínicos inmunofluorescencia
emplean técnicas de Western Blot como confirmación así como pruebas (tales como la
detección de anticuerpos circulantes anti-colágeno VI anticuerpos en la epidermólisis
ampolla adquirida o varios anti-proteínas propias en pénfigo paraneoplásico). A menudo,
Sin embargo, estas aplicaciones clínicas son suplantados por más productivos ELISA con
costo reducido y el rendimiento acelerado.