UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO

FACULTADO DE CIENCIAS DE LA SALUD

CARRERA DE LABORATORIO CLÍNICO E HISTOPATOLÓGICO

CATEDRA
TÉCNICAS HISTOLÓGICAS

TERCER SEMESTRE

TEMA:
TINCION DE RUTINA EN HISTOQUIMICA
TINCIONES ESPECIALES
PRINCIPIOS FUNDAMENTOS Y TECNICAS

ELABORADO POR:
FERNANDO BARAHONA CUMBA

DOCENTE: Mgs. IVÁN PEÑAFIEL MÉNDEZ

FECHA DE ENTREGA: 01/02/2018
PERÍODO ACADÉMICO: OCTUBRE 2017-MARZO 2018

RIOBAMBA – ECUADOR

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 TINCION DE RUTINA EN HISTOQUIMICA
TINCIONES ESPECIALES
PRINCIPIOS FUNDAMENTOS Y TECNICAS

El procedimiento de coloración o tinción consiste en que una estructura celular o tisular

adquiere específicamente un color bajo la acción de una sustancia colorante. Se
considera que una estructura se ha coloreado o teñido cuando al ser lavada con el
líquido que disuelve al colorante, no se decolora (Megías Pacheco & Molist García ).

El proporcionar color a las estructuras que constituyen un tejido o un órgano se hace

con la finalidad de distinguirlas entre sí y facilitar su observación. Si se examina al
microscopio una sección de tejido sin colorear, ya adherida al portaobjetos, se podrá
constatar que no es fácil discernir sus componentes, pues lo delgado de los cortes y la
diafanización producida en los tejidos igualan sus índices de refracción. La coloración
proporciona diferencias evidentes entre las estructuras y al observar los cortes será fácil
reconocerlas (Megías Pacheco & Molist García ).

TINCIÓN GENERAL.

Una de las tinciones más comúnmente usada en histología es la hematoxilina-eosina

sobre cortes de parafina. Como vemos se usa un colorante básico (hematoxilina) y otro
ácido (eosina) para teñir de diferente color a las estructuras ácidas y básicas de la célula.
Antes de proceder a la tinción, si partimos de cortes de parafina, tenemos que llevar a
cabo unos tratamientos previos sobre las secciones como es el desaparafinado y la
hidratación, puesto que estos colorantes son hidrosolubles. Si partimos de cortes de
criostato esto no se lleva a cabo (Megías Pacheco & Molist García ).

HEMATOXILINA-EOSINA

Existen múltiples variantes, según se emplee un tipo u otro de eosina y de hematoxilina

(generalmente se emplea la de Harris, aunque también se emplean la de Mayer y la de
Ehrlich). Por lo común, este método siempre consta de una etapa inicial, en la que se
colorean los núcleos celulares con la hematoxilina, y una fase ulterior de contraste
citoplasmático y de los componentes extracelulares con la eosina (Tecnica Histologica
Hematoxilina y Eosina, 2005).

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Procedimiento Técnico:

Soluciones:

 Xilol
 Alcohol isopropílico al 95 %
 Agua corriente
 Hematoxilina
 Eosina
 Xilol/Alcohol

Protocolo:

 Después del desparafinaje, 3 baños en alcohol isopropílico al 95 % (3 recipientes

distintos), el último baño debe ser el más prolongado (5 minutos).
 Baño en agua corriente durante 2-3 minutos, agitar suavemente.
 Baño en hematoxilina por 5 minutos
 Baño en agua corriente por 5 minutos.
 Baño en eosina, sumergir la lámina porta-objetos y sacarla inmediatamente.
 3 baños rápidos en alcohol isopropílico al 95 %.
 1 baño rápido en la solución de xilol/alcohol.
 2 baños rápidos en xilol.

TINCIÓN DE SEMIFINOS

Cuando se procesa material para microscopía electrónica es necesario a veces hacerse

una idea de qué zona del tejido vamos a cortar. Téngase en cuenta que el área de una
sección para observar con el microscopio electrónico es muy pequeña. Además, el
proceso de osmificación que ha de llevarse a cabo previamente a la inclusión acarrea el
oscurecimiento del tejido, con lo que dificulta aún más la orientación de la muestra. Por
ello es frecuente hacer secciones de 0,5 a 1 µm de grosor, denominadas secciones
semifinas, con el ultramicrotomo para orientarnos en la muestra y seleccionar la zona a
partir de la cual haremos las secciones ultrafinas. Los semifinos suelen tener áreas más
grandes que las que posteriormente vamos a usar para la obtención de las secciones
ultrafinas. El colorante usado para teñir secciones semifinas es normalmente el azul de
toluidina, el cual puede infiltrase en la resina calentada en una plancha y llegar hasta el
tejido (Megías Pacheco & Molist García ).

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 Tomada de Atlas de histología vegetal y animal.

CONTRASTE DE ULTRAFINOS

Aunque las secciones para microscopía electrónica se pueden observar directamente con
el microscopio electrónico se suelen tratar previamente con metales pesados en un
proceso denominado contraste, obteniendo así una imagen óptima de la ultraestructura
celular. El contraste no es una tinción, puesto que no aporta color a la muestra, pero sí
es un proceso habitual para poder observar los componentes ultraestructurales de la
célula. Por ese motivo lo incluimos en este apartado. Téngase en cuenta que en la
microscopía electrónica lo importante no es añadir sustancias coloreadas sino moléculas
que puedan interferir con el camino de los electrones emitidos por el microscopio y que
chocan contra la muestra. Los metales pesados unidos al tejido impedirán que pasen los
electrones y por tanto se verá una zona negra en la pantalla fosforescente, mientras que
en aquellas zonas de la célula donde no estén estos metales dejarán pasar los electrones
y provocarán áreas luminosas en dicha pantalla. Por ello todas las imágenes originales
de microscopía electrónica son en blanco y negro, aunque se puedan colorear
posteriormente con un ordenador.

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 Tomada de Atlas de histología vegetal y animal.

TRICROMICO DE MASSON

Es una técnica para la coloración de fibras colágenas y elásticas. Se observan tres

colores distintos; tejido conjuntivo de verde, tejido muscular de verde pardo, eritrocitos
de rojizo, núcleos azul negro y citoplasma y fibras musculares rosa.

Técnica:
1º-Desparafinado. 5º- Lavar con agua corriente 10
Estufa durante 30 min. a 60º. min.
Sumergimos en xilol durante 6º- Fucsina de Ponceau 5 min.
10 o 15 min. 7º- Ácido fosfomolíbdico 5 min.
2º- Hidratación. 8º- Ácido fosfomolíbdico 5 min.
Alcohol absoluto-5min. 9º- Verde luz – 5-7 min.
Alcohol 96º-5min. 10º-Deshidratar.
Alcohol 70º-5min. Alcohol de 70º
3º- Lavar en H2O destilada. Alcohol de 96º.
4º- Hematoxilina de Weigert 5 Xilol.
min.

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 RETICULINA (GOMORI MODIFICADO)

La reticulina consiste en una red de fibras finas que dan soporte a los tejidos. El kit de
reticulina sirve para visualizar su existencia a través de una impregnación con una sal de
plata. El tejido es primero oxidado, sensibilizado con alumbre de hierro, que es
reemplazado por una sal de plata. La plata es posteriormente reducida con una solución
de formol que pone de manifiesto la plata metálica. Finalmente, una solución de sodio
tiosulfato disuelve el exceso de plata no reducido. Si el proceso se ha realizado
correctamente, el fondo de la preparación será casi incoloro y las fibras de reticulina
estarán teñidas de negro-marronoso y el colágeno de amarillo El Kit de Reticulina se
compone de todos los reactivos que intervienen en esta tinción.

TECNICA

1º-Desparafinado. 10º- Reactivo de Wilder 2 min.

Estufa durante 30 min. a 60º. 11º- Lavar con agua destilada –
Sumergimos en xilol durante 1-2 pases.
10 o 15 min. 12º- Formol al 10 %-- 5 min.
2º- Hidratación. 13º- Lavar con agua destilada 1-
Alcohol absoluto-5min. 2 pases.
Alcohol 96º-5min. 14º- Cloruro de oro al 0.2% 2
Alcohol 70º-5min. min.
3º- Lavar en H2O destilada. 15º Lavar con agua destilad 1-2
4º- Permanganato potásico al pases.
1%-- 1 min. 16º Metabisulfito potásico al
5º- Lavar con agua destilada – 1- 2%--- 2 min.
2 pases 17º- Tiosulfato sódico al 2% 1
6º- Metabisulfito potásico al 2% min.
- 1 min. 18º- Lavar con agua corriente 5
7º- Lavar con agua destilada – 1- min.
2 pases 19º-Deshidratar.
8º - Alumbre férrico al 2% 2 Alcohol de 70º
min. Alcohol de 96º.
9º- Lavar con agua destilada - Alcohol absoluto.
1-2 pases. Xilol.
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 PAS
Se usa como técnica de rutina para observar las membranas basales que separan
el tejido epitelial del corión. Tiñe los núcleos de color azul, el glucógeno de
color púrpura y el material PAS + (polisacáridos simples, mucopolisacáridos
neutros, mucoproteínas, glucoproteínas y glucolípidos) rojo rosa.

SOLUCIONES:
1.- Ácido periódico al 0.5 %
2.- Hematoxilina de Mayer
3.- Ácido sulfuroso:
- Metabisulfito sódico al 10 % ------------------ 6 ml.
- Ácido hidroclórico 1N al 10 % ---------------- 5 ml
-Agua destilada -------------------------------- 100 ml
4.- Reactivo de Shiff
- Fucsina básica ----------------------------------- 1 gr.
- Metabisulfito sódico anhidro ------------------ 1 gr.
- Agua destilada ----------------------------------- 200 ml
- Ácido hidroclórico 1 N ------------------------- 20 ml
Hervir el agua destilada, añadir la fucsina básica, agitar y enfriar a 50ºC.
Filtrar y añadir ácido hidroclórico, enfriar a 25ºC
Añadir metabisulfito sódico.
Ésta solución está lista para usarse cuando se torna casi incolora, lo cual puede
llevar hasta 2 días, en un lugar oscuro.

TÉCNICA:
1.- Desparafinar e hidratar.
2.- Ácido periódico al 5 % ------------------------------ 5 min.
3.- Lavar en agua corriente ------------------------------ 5 min.
4.- Reactivo de Shiff ------------------------------------- 15 min.
5.- Bisulfito sódico al 2 % ------------------------------ 5 min.

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 6.- Lavar en agua corriente ----------------------------- 5 min.
7.- Hematoxilina de Mayer ----------------------------- 10 min.
8.- Lavar con agua corriente --------------------------- 5 min.

ELÁSTICA DE VAN GIESON

Es una técnica para la coloración de fibras colágenas y elásticas. El colágeno parece que
capta un colorante ácido. Tiñe el colágeno de rojo, núcleos y fibras elásticas de negro y
citoplasma de amarillo.

SOLUCIONES

1.- Hematoxilina de Verhoeff:

- Hematoxilina alcohólica:

Hematoxilina ------------------------------------ 10 gr.

Alcohol 96º ------------------------------------- 100 ml

- Cloruro férrico al 10 %:

Cloruro férrico ---------------------------------- 10 gr.

Agua destilada ---------------------------------- 100 ml

- Yoduro potásico al 10 %:

Yoduro potásico -------------------------------- 10 gr.

Agua destilada --------------------------------- 100 ml

- Alcohol 50º

2.- Solución de Picrofucsina:

- Fucsina ácida al 1 % ---------------------------- 1.3 ml

- Ácido pícrico a saturación --------------------- 9.7 ml

TÉCNICA:

1.- Desparafinar e hidratar

2.- Hematoxilina de Verhoeff --------------------- 30 min.

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 3.- Lavar --------------------------------------------- 1 pase

4.- Cloruro férrico al 1 % ------------------------- 1 pase

5.- Lavado en agua corriente --------------------- 1 pase

6.- Picrofucsina ------------------------------------ 1 pase

7.- Deshidratar

8.- Aclara con xilol

BIBLIOGRAFÍA

1. Megías Pacheco, M., & Molist García , P. (s.f.). Atlas de histología vegetal y
animal. España.
2. Tecnica Histologica Hematoxilina y Eosina. (2005). Mexico.