TOMA DE LA MUESTRA:

RECOMENDACIONES AL PACIENTE:
No debe haber recibido ningn tratamiento local o sistmico con antimicrobianos, tres

Exudado vaginal
das antes de la toma de la muestra.

Abstinencia sexual el da anterior a la toma de la muestra.

Debe presentarse sin haberse realizado ducha vaginal. Las nias no debern haberse
baado o limpiado los genitales.

Este examen no debe realizarse durante el perodo menstrual.

TIPO DE MUESTRA:
Exudado vaginal y endocervical:
Acostar al paciente en posicin ginecolgica e introducir el espculo estril sin aplicar
ningn tipo de lubricante.

Con un hisopo estril, tomar la muestra del exudado de las paredes y el fondo del
saco de Douglas.

Hacer un frotis en el extremo de una lmina portaobjetos.(transparente).

Introducir el hisopo en un tubo de ensayo con 1mL de solucin salina al 0.85% para
examen al fresco.

Tecnologa Mdica IV ao
UCAN- Len Localizar el endocrvix e introducir un hisopo estril en el mismo.

Rotar el hisopo sobre si mismo con el objetivo de eliminar el moco

cervical.

Introducir un segundo hisopo estril y seco, a una profundidad de

1-1.5cm dentro del canal endocervical y rotarlo gentilmente.

Hacer un frotis de forma redonda

Lic. Gilda M. Cordero C. Utilizando otro hisopo estril, repita el procedimiento.

Inocule el hisopo en un plato de agar Thayer Martin.

Estrelo en la forma convencional e introdzcalo inmediatamente en una

jarra de vidrio que genere CO2 con el mtodo de la vela.
El exudado vaginal es para el diagnstico de vaginitis, una inflamacin de la vagina y vaginosis, Micoplasma hominis
una alteracin del equilibrio de la flora vaginal sin inflamacin.
Grupo 3:
La vaginosis bacteriana es la causa ms frecuente de consulta de la mujer por sntomas vaginales Son parte de la microbiota local y estn asociados a leucorrea si hay cambios en el pH,
(40 - 50 %), seguida por candidiasis (20 - 25 %), y trichomoniasis (15 - 20 %). dao local (partos, legrados, maniobras quirrgicas), o enfermedad sistmica.

La causa de vaginitis/vaginosis no puede determinarse slo sobre la base de los sntomas clnicos
o el examen fsico. Para realizar el diagnstico correcto se requiere la evaluacin microscpica del VAGINOSIS BACTERIANA
exudado vaginal. Los mtodos de cultivo son menos tiles para el diagnstico de algunas Alteracin en el equilibrio bacteriano en la vagina con perdida del predominio de
entidades vaginales. lactobacilo e incremento en el nmero de bacterias como Gardnerella vaginalis, Bacteroides,
Mobiluncus, y Mycoplasma hominis. Importante es que no hay clulas inflamatorias.
La evaluacin microscpica requiere evaluar tres caractersticas:

Aspecto de las clulas epiteliales Diagnstico

Clsicamente se establece el diagnstico de vaginosis cuando
Aspecto del germen dominante y/o morfotipos presente se cumple 3 de los siguientes criterios (Amsel):
pH 4,5 o superior.
La presencia o ausencia de leucocitos Ms del 20 % de las clulas epiteliales son clulas
clue.
Las infecciones del aparato genital femenino son causadas por una
Secrecin griscea homognea.
amplia variedad de microorganismos que incluyen:
Test de aminas positivos.
Bacterias,
hongos
virus.
El cultivo vaginal no es til para el diagnstico, el valor predictivo de un cultivo positivo
para Gardnerella vaginalis como diagnstico de vaginosis es menor del 50 %.
Algunos sntomas son ocasionados por organismos exgenos mientras que otros son causados por
miembros de la microbiota local de la paciente. As el diagnstico se logra con el Gram y consideramos existencia de vaginosis si no
aparecen leucocitos y cualquiera de estos criterios:
El tipo de infeccin y el agente causal es influenciado por un sinnmero de factores que incluyen:
Actividad sexual Aparecen clulas "clue
uso de dispositivos intrauterinos
Instrumentacin del aparato genital Presencia de abundantes bacilos gram negativos pequeos, curvados y ausencia o
Administracin de antimicrobianos escasos Lactobacillus.
Enfermedades sistmicas.

Los microorganismos que causan este tipo de infecciones se pueden clasificar en tres grupos.

Grupo 1:
Microorganismos que no son parte de la microbiota local. Si se aslan se reportan
siempre:
Neisseria gonorrhoeae
Trichomonas vaginalis
Chlamidia trachomatis

Grupo 2: Flora microbiana normal

Son parte de la microbiota local, pero en condiciones especiales, en asociacin con La vagina representa un ecosistema dinamico que permanece en equilibrio gracias a una fina
anaerobios son causa de leucorrea. Se identifican y se reportan si rene un conjunto de criterios
interaccion de factores tales como la flora normal bacteriana.
diagnsticos.
Gardnerella vaginalis La flora normal vaginal esta constituida en un 96% por especies de Lactobacillus y
Candida albicans unicamente el 4% por bacterias aerobias potencialmente patogenas ( Staphylococcus aureus,
Mobiluncus spp
Streptocous grupo B y Escherichia coli) y micoplasma.
Ureaplasma urealyticum
Se encuentran algunos hongos, incluyendo Cndida, que puede proliferar para causar candidiasis Olfatear la muestra para determinar si ocurre desprendimiento de un olor a pescado
si el pH vaginal aumenta y disminuyen las bacterias competidoras. caracterstico que indica la presencia de aminas.

La secrecin normal de la vagina es clara, blanca, floculada, altamente viscosa, sin olor, con pH < Gardnerella vaginalis al ponerse en contacto con KOH al 10% libera
4,5 y microscpicamente libre de micelios, Trichomonas vaginalis, esporas, y clulas guas. un olor a pescado caracterstico que indica la presencia de aminas.

Gardnerella vaginalis produce el succinato necesario para la proliferacin de anaerobios, los

cuales producen aminopeptidasas que liberan aminocidos que a su vez son descarboxilados para
producir diaminas. Las diaminas ms comunes son la putresina, la cadaverina, la trimetilamina y
las poliamidas. Se ha sugerido que la trimetilamina es la principal responsable del olor a pescado.
El examen al fresco consiste en determinar visualmente la presencia Trichomonas vaginalis,
Levaduras, leucocitos, bacterias.

Procedimiento:

Centrifugar la muestra entre 3,000 a 5,000 rpm durante tres minutos.

Tincin de Gram
Eliminar el sobrenadante. Tincin de Gram
La tincin de Gram es la prueba ms simple utilizada en el laboratorio de microbiologa. Es el
Con una pipeta de Pasteur, tomar una gota del sedimento y colocarla en una lmina procedimiento diferencial ms comnmente usado para el examen directo de gran variedad de
portaobjetos. gneros bacterianos.
Divide a las bacterias en dos grupos:
Colocar encima un cubreobjetos.
Microorganismos grampositivos que retienen el colorante primario cristal violeta y se observan
Observar al microscpico con objetivo de 40X. de color azul oscuro o prpura
microorganismos gramnegativos que pueden ser decolorados, esto es que pierden el colorante
Trichomonas vaginalis es un protozoario flagelado en forma de pera, que se evidencia primario. Subsecuentemente toman el colorante de contraste safranina y aparecen de color rojo
principalmente por su movimiento rotatorio y ondulatorio. o rosa.
Este espectro de coloracin incluye a casi todas las bacterias y a otros gneros que incluyen
hongos y parsitos.

PRUEBA DE AMINAS:

Fundamento:

Al poner en contacto una gota de la muestra de exudado vaginal o vulvar con una gota de KOH al
10%, se desprende un olor a pescado caracterstico que indica la presencia de aminas.

Procedimiento:

Colocar una gota de la muestra en un portaobjeto y agregar a sta, una gota de KOH al
10%.
 Racimos: forma tpica de Staphylococcus sp, como S. aureus Diplococos: forma usual de Neiseria sp, como N. meningitidis
Tambin Moraxella sp y Acinetobacter sp aparecen con morfologa de
diplococos.
Acinetobacter puede ser pleomrfico, y a veces aparece como coco Gram-
positivo

Cadenas: forma tpica de Streptococcus sp, como S. pneumoniae,

Streptococcus grupo B.

Cocobacilos: forma usual de Acinetobacter sp, que puede ser Gram-positivo o

Gram-negativo, y, a menudo, Gram-variable.
Tetradas: forma tpica de Micrococcus sp

Bacilos Gram-negativos
Bacilos finos: forma usual de enterobacteriaceae, como E. Coli.
Bacilos Gram-positivos
Gruesos: forma tpica de Clostridium sp, como C. perfringens, C. septicum

Cocobacilos: forma usual de Haemophilus sp, como H. influenzae

La trichomoniasis es una enfermedad de transmisin sexual causada por Trichomonas vaginalis,
un protozoario flagelado. Morfolgicamente tiene forma de pera, con una membrana ondulante
que se extiende desde la parte media a la posterior. Adems, en la parte anterior posee cuatro
flagelos con los cuales se desplaza con movimientos rotatorios y vacilantes. Dado a su tamao
(longitud de 15-20 mm) es fcilmente visible con un objetivo de 40X. De las tres especies de
tricomonas que infectan al hombre, solamente Trichomonas vaginalis es patgeno.

Es una levadura oval gemante que produce seudihifas en cultivo, tejidos y exudados. El gnero
Candida es miembro de la microbiota local de las mucosas del aparato respiratorio, digestivo y
genital femenino encontrndose en este ltimo caso en aproximadamente el 20% de las mujeres
sanas. El 85-90% de stas son Candida albicans, por lo tanto, lo que interesa demostrar es si es la
causa de la infeccin. Para ello es bsico conocer que el criterio de virulencia aceptado es la
produccin de seudohifas.

Gardnerella vaginalis es un bacilo aerobio Gram variable, con similitud a la pared de los
grampositivos a excepcin que es mas delgada, es inmvil, y forma parte de la microbiota normal
de la vagina y el ano de adultos de ambos sexos. Tambin se encuentra en el ano de los nios. En
ciertas circunstancias se torna virulento y causa una vaginitis no especfica (vaginosis). Los frotis
hmedos de vaginitis inespecfica dan lugar a las clulas pista, las cuales son clulas epiteliales
de la vagina recubiertas con muchos bacilos gramnegativos muy pequeos, principalmente en la
periferia de estas clulas.

Los miembros del gnero Neisseria, son microorganismos gramnegativos cocoides, que
suelen estar agrupados predominantemente en pares, aunque pueden observarse
cadenas cortas. Los diplococos tienen sus caras adyacentes aplanadas, lo que le confiere
el aspecto de granos de caf.

Neisseria gonorrhoeae se observa como un diplococo gramnegativo intra y extracelular.

En los casos de uretritis crnica es comn observar las formas extracelulares.

Es un bacilo gramnegativo anaerobio estricto y de difcil crecimiento en medios

de cultivo. El diagnstico se realiza por medio del Gram. En el frotis se observan
predominantemente bacilos grampositivos cortos y curvos en la superficie de
las clulas epiteliales o fuera de ellas. Es frecuente el pleomorfismo.
 Edad de la bacteria.

II: Errores del operador.

III: Uso de antibiticos

A pesar de la gran utilidad del la tincin de Gram, este mtodo debe ser valorado con
precaucin, ya que la reaccin puede variar segn la edad de las clulas y la tcnica
empleada, por ella junto a la muestra deben teirse controles con grampositivas y
gramnegativas.

UTILIDAD

En el anlisis de muestras clnicas suele ser un estudio fundamental por cumplir varias
funciones:

Identificacin preliminar de la bacteria causal de la infeccin

Utilidad como control calidad del aislamiento bacteriano.

Los morfo tipos bacterianos identificados en la tincin de Gram se deben de

corresponder con aislamientos bacterianos realizados en los cultivos.

Si se observan mayor nmero de formas bacterianas que las aisladas hay que
reconsiderar los medios de cultivos empleados as como la atmsfera de incubacin.

A partir de la tincin de Gram pueden distinguirse varios morfo tipos distintos:

Los cocos son de forma esfrica. Pueden aparecer aislados despus de la divisin celular
(Micrococos, aparecer por pares (Diplococos), formar cadenas (Estreptococos), o
agruparse de manera irregular Estafilococos).

Los bacilos poseen forma alargada. En general suelen agruparse en forma de cadena
Estreptobacilos) o en empalizada.

los espirales que se clasifican en espirilos si son de forma rgida o espiroquetas si son
blandas y onduladas. Si por el contrario, poseen forma de "coma", o curvados, entonces
se los designa vibrios