ESTUDIO DE TRATABILIDAD PARA LA REMEDIACIN DE SUELOS

CONTAMINADOS CON HIDROCARBUROS EN UNA EMPRESA MINERA

Margarita E. GUTIRREZ R.1, Jos E. SANTOS J.2. Laura ORTIZ H3. Enrique
SNCHEZ S.3
Circuito Exterior, Ciudad Universitaria, Apto. Postal 20-850 CP 01000, Mxico,
D.F. Fax: 56224352. [email protected]. 1Laboratorio de Anlisis Fsicos y
Qumicos del Ambiente, Instituto de Geografia, UNAM, 2Consultora e
Investigacin en Medio Ambiente, S.C., 3Centro de Investigacin en Biotecnologa,
UAEM
Palabras Clave: bioremediacin, pruebas, tratabilidad, contaminacin, suelos,
hidrocarburos
RESUMEN
La contaminacin de suelos con diesel, combustleo y aceites residuales en una
empresa minera, hizo necesario evaluar las alternativas de remediacin de los
suelos. Se consider la aplicacin de un mtodo biolgico debido a su bajo costo,
a su alta eficiencia y a la flexibilidad que ofrecen. Se plante un estudio cuyo
objetivo fue evaluar la aplicacin de un mtodo de bioremediacin ex situ,
mediante una serie de pruebas a nivel laboratorio y en campo. Se realiz una
caracterizacin de los suelos que incluy la determinacin de Hidrocarburos
Totales del Petrleo (HTP) y la identificacin de bacterias nativas. Las
concentraciones de HTP en los suelos es de 4,000 a 25,000 mg/kg. En el
laboratorio se identificaron y aislaron bacterias nativas que tienen capacidad de
degradar los hidrocarburos (Flavobacterium, Pseudomonas, Vibrio y Serratia). Se
hicieron pruebas de bioestimulacin con las que se alcanz la remocin de los
contaminantes arriba del 40 % en dos meses. En las pruebas de campo, se
utilizaron lodos residuales de una planta de tratamiento, como fuente de
nutrimentos para las bacterias. Estas pruebas confirmaron la aplicabilidad del
mtodo de bioremediacin. En seis meses se alcanz una concentracin de
hidrocarburos inferior a 2,000 mg/kg en el 48.4 % de las pruebas realizadas. El
uso de lodos es una buena alternativa para promover la degradacin de los
contaminantes y constituye una solucin ambiental integral.
INTRODUCCIN
La contaminacin de suelos es uno de los problemas ambientales ms serios
causados por la actividad industrial. El derrame de hidrocarburos derivados del
petrleo es de las principales causas de la contaminacin. En la industria minera
es elevado el consumo de combustibles y aceites lubricantes en el equipo utilizado
para la extraccin del mineral. El manejo de estos hidrocarburos frecuentemente
ocasiona la afectacin del suelo, principalmente en talleres de mantenimiento y
depsitos de almacenamiento.

En la empresa minera en cuestin se ocasion la contaminacin del suelo con

diesel, combustleo y aceites residuales en cuatro reas de operacin. Despus
de haber realizado una caracterizacin del nivel de contaminacin de suelos en
estos sitios se analizaron las alternativas para llevar a cabo la remediacin de los
suelos. Se establecieron como criterios bsicos, la aplicacin de un mtodo
flexible, de bajo costo y que permitiera alcanzar los niveles aceptables en la
normatividad mexicana en ese momento. Se determin que un mtodo biolgico
de remediacin ex situ es una buena alternativo para la empresa ya que los
mtodos de bioremediacin han demostrado buenos resultados en la remocin de
hidrocarburos. Estos mtodos se basan en la capacidad que desarrollan los
microorganismos para degradar ciertos contaminantes despus de que han estado
en contacto con stos por periodos prolongados de tiempo (Cookson J. 1995). En
la literatura se reportan microorganismos que se han estudiado y que han
demostrado capacidad para degradar diversos tipos de contaminantes, como los
gneros Pseudomona, Flavobacterium, Acinetobacter y Serratia, entre otras
(Cookson J. 1995 y Baker K. y Herson D. 1994, Fletcher R. 1994).
Los lodos generados en el tratamiento de aguas residuales son ricos en materia
orgnica, macro y micro nutrimentos (Ortiz L., et al. 1995), por lo que es posible
considerarlos como una fuente alternativa de nutrimentos para mejorar la actividad
de los microorganismos en los procesos de bioremediacin en vez del uso de
fertilizantes o sales inorgnicas de nitrgeno y fsforo (Baker K. 1994). Dado que
la empresa cuenta con una planta de tratamiento de aguas residuales domsticas,
se evalu la aplicacin de los lodos generados en dicha planta en el mtodo de
remediacin.
En el caso de estudio, era necesario llevar a cabo pruebas de tratabilidad a nivel
laboratorio con el propsito de evaluar la aplicabilidad del mtodo de
bioremediacin en lo suelos contaminados de la empresa minera. Las pruebas de
tratabilidad son fundamentales ya que permiten generar informacin sobre la
degradacin de los contaminantes y sobre las posibilidades de aplicar a mayor
escala la metodologa seleccionada (Skladany G. y Baker K. 1994 y Cookson J.
1995).
De lo anterior, el objetivo del este estudio fue realizar pruebas de tratabilidad para
evaluar la aplicacin de un mtodo de bioremediacin en los suelos contaminados
con diesel, combustleo y aceites lubricantes.

METODOLOGA
El estudio se realiz en dos etapas, la primera de ellas consisti en pruebas a
nivel laboratorio, las cuales incluyeron la caracterizacin de los suelos
contaminados de los cuatro sitios afectados, la caracterizacin de los lodos de la
planta de tratamiento, la identificacin de bacterias nativas de los suelos
contaminados y pruebas de degradacin y bioestimulacin en frascos (matraces)
para probar la capacidad de degradacin de las bacterias presentes en los suelos.
2

En la segunda etapa se realizaron pruebas de campo en cajones metlicos con

mezclas de suelos y lodos en diferente proporcin.
Se hizo un muestreo inicial en los cuatro sitios (TE, P, TC, ZE) para determinar los
parmetros fsicos y qumicos del suelo, as como para hacer una caracterizacin
microbiolgica. Los parmetros que se analizaron fueron pH, conductividad
elctrica, clase textural y concentracin de HTP. La caracterizacin microbiolgica
se hizo mediante una cuenta viable de microorganismos heterotrficos. Los
anlisis para determinar la concentracin de HTP en los suelos, se realizaron por
espectroscopia de infrarrojo (FTIR), utilizando el sistema de extraccin soxleht con
hexano y teniendo como base el mtodo EPA 418.1. La determinacin del pH se
hizo con el mtodo EPA 9045C, la conductividad elctrica con el mtodo EPA
9050 y la textura con el mtodo de Hidrmetro (Bouyoucus).
Se tomaron muestras de los lodos frescos a la salida del reactor de la planta de
tratamiento de aguas residuales. Las muestras se analizaron para determinar pH,
conductividad elctrica, humedad, materia orgnica y concentracin de micro y
macronutrimentos. Tambin se realizaron anlisis microbiolgicos para determinar
cuenta viable de microorganismos heterotrficos, coliformes totales, coliformes
fecales, estreptococos fecales y presencia de parsitos (huevos de helmintos).
El aislamiento e identificacin de bacterias nativas del suelo contaminado, se hizo
en un medio mineral preparado con los nutrimentos necesarios para estimular el
crecimiento de microorganismos. Se obtuvo una mezcla de bacterias, la cual se
consider como un consorcio bacteriano. A partir del consorcio bacteriano se
purificaron las diferentes colonias en cajas Petri con agar TS (soya de
tripticaseina). Las colonias se eligieron en funcin de su morfologa y/o color, se
incubaron durante 48 horas a 25 C y el procedimiento se repiti 5 veces para
asegurar la obtencin de cepas puras. Todas las cepas se guardaron en
refrigerador sobre agar TS.
Las pruebas para evaluar la capacidad de degradacin de hidrocarburos se hizo
en algunas de las colonias aisladas, ya reportadas en la literatura, utilizando
muestras de diesel, combustleo y aceite residual, proporcionadas por la empresa.
En matraces Erlenmayer se colocaron 20 mL de medio mineral, bacterias de las
colonias aisladas y la muestra de hidrocarburo a una concentracin final de 1 %.
Los matraces se mantuvieron en agitacin continua durante dos semanas en un
agitador orbital a 120 rpm. Se tomaron muestras de 1 mL cada semana y se hizo
un anlisis cualitativo por cromatografa de gases para observar la presencia de
los compuestos originales de los hidrocarburos.
Una vez que se evalu la capacidad de las bacterias aisladas para degradar los
combustibles y el aceite residual, se plane un experimento en matraces para
probar la degradacin directamente en el suelo contaminado, estimulando el
crecimiento de las bacterias nativas mediante la adicin del medio mineral.

Para estas pruebas se tomaron muestras adicionales en los sitios y se determin

su concentracin inicial de HTP. En matraces Erlenmayer se coloc una muestra
de los suelos, se agreg peridicamente medio mineral y se mantuvo la humedad
constante. El experimento dur dos meses y de manera peridica se tomaron
muestras para analizar la concentracin de hidrocarburos totales del petrleo.
Tambin se hizo una cuenta viable de microorganismos heterotrficos al inicio y al
final de la prueba.
En la segunda etapa se hicieron pruebas en campo en las instalaciones de la
empresa. Las pruebas consistieron en mezclar el suelo contaminado con lodos de
la planta de tratamiento y colocarlo en cajones de lmina galvanizada. La adicin
de lodos y la aireacin del material se hizo en forma peridica.
Las variables consideradas para las pruebas fueron la concentracin de
hidrocarburos y la relacin suelo:lodo. Se tomaron dos muestras de suelo en cada
sitio con una concentracin de hidrocarburos diferente (C1 y C2). Se hizo una
caracterizacin de los lodos de la planta de tratamiento. Se probaron tres
relaciones diferentes suelo:lodo (1:1, 1:0.6 y 1:0.3). Se instalaron un total de 31
cajones incluyendo 8 repeticiones para el control de calidad. Las pruebas con
lodos se llevaron a cabo durante 177 das, en este tiempo se realizaron seis
muestreos, al inicio de las pruebas, a 24, 45, 67, 104 y 177 das. Las muestras
tomadas se analizaron para determinar la concentracin de HTP en los suelos y
una cuenta viable de microorganismos heterotrficos. Al final de las pruebas se
hizo un anlisis de coliformes totales, coliformes fecales, estreptococos fecales y
presencia de parsitos (huevos de helmintos).
RESULTADOS Y DISCUSIN
Los resultados de la caracterizacin de los suelos en los cuatro sitios se presentan
en la Tabla I, donde se muestran los valores promedio de los parmetros
determinados.
Tabla I. Caracterizacin general de los suelos
Sitio
TE
P
TC
ZE

pH

CE (S/cm)

HTP
(mg/kg)

7.5
7.1
7.6
6.9

1,014
14,840
586
1,078

18,354
5,972
3,934
25,762

Microorganismos
Textura
Arenas/Limos/Arcillas
Heterotrficos
(UFC/g)
1.4 x 106
Franco limoso
1.0 x 107
Franco arenoso
1.6 x 107
Franco arenoso
7.6 x 107
Franco limoso

Las concentraciones de hidrocarburos en los suelos utilizados para las pruebas se

encuentran en un intervalo entre 4,000 y 25,000 mg/kg, estas concentraciones son
aceptables para la aplicacin de un mtodo de bioremediacin. El pH est entre
6.5 y 7.8, lo cual favorece el crecimiento de microorganismos.

Los suelos contaminados presentan una poblacin de microorganismos

heterotrficos entre 1 x 105 UFC/g y 7.6 x 107 UFC/g, que comparada con la que
se reporta en la literatura de 106 a 108 UFC/g (Troy A. M.. 1994), es suficiente para
llevar a cabo la degradacin de hidrocarburos mediante un mtodo de
bioremediacin.
De las bacterias que se identificaron en los suelos contaminados (bacterias
nativas), algunas estn reportadas en la literatura como gneros con capacidad de
degradar diversos compuestos qumicos, como es el caso de la Flavobacterium
(en el sitio TE), Pseudomonas (en el TE y en los lodos), Vibrio (presente en el sitio
P) y Serratia (en los lodos) (Cookson John, 1995). La presencia de estas bacterias
en los suelos contaminados y en los lodos, permiti considerar que sera factible
un proceso de biodegradacin de los contaminantes. Algunas de estas bacterias
tambin realizan una accin de cometabolismo (Pseudomonas, Flavobacterium y
Vibrio). Este fenmeno de cometabolismo es importante en la transformacin de
algunos compuestos como hidrocarburos aromticos y alifticos, los cuales son
sujetos a biodegradacin por medio de este fenmeno (Cookson J. 1995 y Baker
K. y Herson D. 1994).
Las pruebas de degradacin realizadas en matraces con las bacterias aisladas, y
en las que se utilizaron los combustibles y aceites limpios, permitieron observar la
degradacin de los hidrocarburos, ya que con el tiempo se fue perdiendo la
coloracin oscura de los combustibles y el aceite. Los resultados del anlisis
cualitativo que se realiz por cromatografa de gases a las muestras que se
tomaron semanalmente, mostraron con claridad la degradacin o transformacin
de los compuestos originales observados en las muestras de combustible. Como
ejemplo, en la Figura 1, se presenta el cromatograma de una muestra del diesel
limpio y un cromatograma de la misma muestra de diesel despus de siete das
con la bacteria Serratia plymuthica.

(a)

(b)

Figura 1. (a) Cromatograma de una muestra de diesel limpio, (b) cromatograma de la

muestra de diesel con la bacteria Serratia plymuthica a los siete das

Estos resultados indican que las bacterias aisladas en el medio mineral tienen la
capacidad de degradar los hidrocarburos, ya que han tenido tiempo para

adaptarse a la presencia de los contaminantes y asimilan el carbono contenido en

ellos.
Las pruebas de bioestimulacin en matraces con suelo contaminado en
condiciones de temperatura y humedad controladas, confirmaron la capacidad de
las bacterias nativas para degradar los hidrocarburos. En la Tabla II se muestran
los resultados de la prueba despus de 2 meses de experimentacin.
Tabla II
Resultados pruebas de bioestimulacin en laboratorio
con suelos contaminados
CONCENTRACIN DE HTP (mg/kg)

MUESTRA

INICAL

DEGRADACIN

A 16 DAS A 32 DAS A 55 DAS

P / Lab

5,215

5,338

132

ND

100

TE / Lab

14,181

12,105

8,348

8,359

41

TC / Lab

6,016

4,889

217

212

96

ZE / Lab
8,058
7,808
4,505
4,457
N.D. Concentracin menor al lmite de deteccin (30 mg/kg)

45

La cuenta viable de microorganismos heterotrficos se hizo al inicio y al final de

las pruebas y los resultados se muestran en la Tabla III.
Tabla III
Cuenta viable de microorganismos en las pruebas de bioestimulacin
MUESTRA
P / Lab
TE / Lab
TC / Lab
ZE / Lab

UFC/g
MUESTRA INICIAL
1.6 X106
1.0 X105
5.0X104
7.6X107

UFC/g
MUESTRA FINAL
5.01 X105
5.61 X106
1.37 X107
1.85 X106

La concentracin de hidrocarburos en los suelos que se utilizaron para las pruebas

de campo se muestran en la Tabla IV. La muestra PC2 dio una concentracin baja
por lo que no se consider en el anlisis de resultados.
Los resultados obtenidos indicaron que despus de seis meses (177 das) en 15
cajones se alcanzaron concentraciones de HTP inferiores al lmite permisible
establecido (2,000 mg/kg). En relacin porcentual el 48.4 % de los cajones (15)
alcanzaron el lmite permisible; el 22.6 % (7) tuvieron una concentracin final entre
2,000 y 3,000 mg/kg; el 16.1 % (5) tuvieron una concentracin superior a los 3,000
mg/kg y el 12.9 % (4) fueron los cajones de la muestra PC2 que no se consider
para el anlisis.

Tabla IV
Concentracin de HTP en muestras de suelo
para las pruebas en campo con lodos
CLAVE
PC1
PC2
TEC1
TEC2
TCC1
TCC2
ZEC1
ZEC2

CONCENTRACIN
(mg/kg)
9,966
307
18,521
14,529
6,521
4,662
17,489
11,818

Los cajones que mostraron una cintica de degradacin regular y que alcanzaron
altos porcentajes de degradacin a los 177 das, se muestran en la Tabla V. La
Figura 2 muestra el comportamiento de la degradacin de los hidrocarburos en
algunos de los cajones.
Tabla V. Cajones con mayor porcentaje de degradacin
Concentracin
Concentracin
Inicial
Final
HTP (mg/kg)
HTP (mg/kg)
TC C2
12
1:0.6
4,662
N.D.
TC C2
11
1:1
4,662
86
ZE C2
15
1:1
11,818
314
ZE C1
13
1:1
17,489
1,202
ZE C1
23
1:0.6
17,489
1,191
TC C1
9
1:1
6,521
870
TE C1
6
1:0.6
18,521
2,497
TE C2
29
1:0.3
14,529
2,245
TE C2
8
1:0.6
14,529
2,114
TE C1
19
1:0.6
18,521
3,150
TC C1
27
1:0.3
6,521
1,683
P C1
2
1:0.6
9,966
2,880
N.D. Concentracin menor al lmite de deteccin (30 mg/kg)
Sitio

Nm.
Cajn

Relacin
Suelo/Lodo

Degradacin
(%)
100
98
97
93
93
87
87
85
85
83
72
71

La eficiencia de degradacin fue mejor en los cajones con relacin 1:0.6. En el

93 % de los cajones con relacin 1:0.6 se alcanz una degradacin superior al
70 % del hidrocarburo contenido en el suelo. De los cajones con relacin 1:1 se
alcanz esta eficiencia de degradacin en el 86 %. Y en los cajones con relacin
1:0.3 se alcanz en el 80 %.
Los lodos de la planta de tratamiento constituyen un desecho sin utilidad para la
empresa por lo que su aprovechamiento en la remediacin de suelos, representa
un ventaja econmica y ambiental. Contienen macro y micronutrimentos
esenciales para estimular el crecimiento de los microorganismos (Ortiz L., et al.,
1995), entre los que se encuentran nitrgeno, fsforo, potasio, calcio, hierro,
cobre, zinc y magnesio. Los nutrimentos no se encuentran en formas disponibles,

pero las bacterias presentes catalizan su mineralizacin. Tambin tienen una

poblacin significativa de microorganismos. Al salir del reactor contienen 3.5 x 106
UFC/mL y los depositados en la pila fresca 3.6 x 108 UFC/mL. Esta poblacin
complementa la accin de las bacterias nativas del suelo para la biodegradacin
de HTP.
La existencia de organismos patgenos en los lodos no es una limitante para
utilizarlos, ya que estos se mezclan en baja proporcin con el suelo y an despus
del tratamiento, el suelo se pueden mantener aislado durante una tiempo bajo las
condiciones climticas del lugar esperando a que estos organismos no persistan.

CINTICA DE DEGRADACIN PRUEBAS DE CAMPO CON LODOS

20000
18000
16000
(2) P C1

HTP mg/kg

14000

(19) TE C1

12000

(8) TE C2

10000

(27) TC C1

8000

(11) TC C2
(13) ZE C1

6000

(15) ZE C2

4000
2000
0
0

20

40

60

80

100

120

140

160

180

Das

Figura 2. Degradacin de los hidrocarburos durante la prueba de campo

CONCLUSIONES
Las concentraciones de Hidrocarburos Totales del Petrleo en los suelos
contaminados de los cuatro sitios evaluados son aceptables para la aplicacin de
un mtodo biolgico de remediacin. En los suelos hay una importante poblacin
de microorganismos heterotrficos que promueven el proceso de biodegradacin
de los contaminantes.
Las bacterias nativas que se identificaron en los suelos contaminados, estn
adaptadas a los contaminantes y estos constituyen su fuente de energa. Las
pruebas de biodegradacin y bioestimulacin realizadas en el laboratorio
confirmaron la aplicabilidad de un mtodo biolgico de remediacin. Las bacterias
aisladas en medio mineral, mostraron su capacidad para descomponer los
compuestos de hidrocarburos, mientras que con las pruebas de bioestimulacin en
dos meses se alcanz una remocin superior al 90 % en los suelos de dos sitios y
en los dos restantes la degradacin fue superior al 40 %.

El uso de lodos de la planta de tratamiento constituye una fuente alterna de

nutrimentos para promover la degradacin de los contaminantes, en vez del uso
del medio mineral preparado para las pruebas de laboratorio. Los lodos tienen una
poblacin de microorganismos heterotrficos significativa, adems de que
contienen los macro y micronutrimentos esenciales para estimular el crecimiento
de los microorganismos (nitrgeno, fsforo, potasio, calcio, hierro, cobre, zinc y
magnesio).
Las pruebas realizadas en campo con lodos confirmaron que es factible la
bioremediacin de los suelos. En seis meses se alcanz el nivel de hidrocarburos
establecido como lmite (2,000 mg/kg) en el 48.4 % de las pruebas realizadas. La
relacin de 1:0.6 en peso (suelos:lodos), report buenos resultados al lograrse una
remocin de los hidrocarburos superior al 70 % en el 93 % de las pruebas
realizadas con esta relacin. Esta significa que se puede estimular la accin de las
bacterias nativas con una menor cantidad de lodos.
Finalmente se concluye que resulta factible la aplicacin de un mtodo de
bioremediacin en los suelos estudiados y que es posible alcanzar altos
porcentajes de remocin del contaminante en un tiempo relativamente corto.

AGRADECIMIENTOS
Agradecemos al Consorcio Minero Benito Jurez Pea Colorada por habernos
brindado la oportunidad de realizar este trabajo y por el apoyo proporcionado.

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