Laboratorio 4 Microbiologia Sanitaria 1

LAB N2:MICROSCOPIO Y COLORACIN
GRAM
MICROSCOPIO Y
COLORACION GRAM
Presentado por:
PAREJA MENDOZA WILLIAM
PROFESOR:
TELLO CEBRELLOS, JORGE
GILBERTO
CURSO: MICROBIOLOIA SANITARIA 1

LABORATORIO NO 2
2016

GRAM

GRAM
1. OBJETIVO
Identificar el GRAM, forma y agrupacin al que pertenecen las muestras que se analizaran en laboratorio
utilizando el microscopio compuesto.
Reconocimiento de las partes del microscopio, as como utilizarlo para observar muestras con la lente de
10X.
2. FUNDAMENTO TEORICO
Microscopio compuesto
Es un microscopio ptico que tiene ms de una lente de objetivo. Los microscopios compuestos se utilizan especialmente para
examinar objetos transparentes. El microscopio ptico comn est conformado por tres sistemas:
El sistema ptico comprende las partes del microscopio permiten un aumento de los objetos que se
pretenden observar mediante filtros llamados "de antigel subsecuente".
El sistema mecnico est constituido por una palanca que sirve para sostener, elevar y detener los
instrumentos a observar.
El sistema de iluminacin comprende un conjunto de instrumentos, dispuestas de tal manera que
producen las ranuras de luz.
A. RECONOCIMIENTO DEL MICROSCOPIO

PARTE PTICA:
Ocular: Se encuentra situado en la parte superior del tubo.

Su nombre se debe a la cercana de la pieza con el ojo del
observador.
Objetivos: 10X, 43X y 97X: se disponen en una pieza
giratoria denominada revlver y producen el aumento de
B. ENFOQUE
a. Primero buscar el objetivo de menor aumento
10X y colocarlo en el tubo del revlver, el
objetivo har su ruido caracterstico al estar
en posicin correcta.
PARTE MECNICA:
El pie y soporte: Constituye la base sobre la que se

apoya el microscopio y tiene por lo general forma de
Y
La columna o brazo: llamada tambin asa, es una
pieza en forma de C, unida a la base por su parte
inferior mediante una charnela.
El tuvo portal ente: tiene forma cilndrica y est
ennegrecido internamente para evitar los reflejos de
la luz.
El tornillo macro mtrico: girando este tornillo,
asciende o desciende el tubo del microscopio.
El tornillo micromtrico: mediante el ajuste fino con
movimiento casi imperceptible que produce al
b. Acomode la cara del espejo (plana para la luz natural y cncava para la luz artificial) a fin de iluminar todo el
campo que se observa por el ocular.
c. Prepare el objetivo que va a observar, en nuestro caso es el portaobjetos con muestra de bacterias.
d. Poner el portaobjetos en la abertura de la platina y centrar el objeto a observar.

GRAM
e. Mirando por el costado bajar el objetivo utilizando el tornillo micromtrico hasta que est muy cerca de la
lmina.
f.
Observar por el ocular del microscopio y levantar el objetivo utilizando el tornillo macro mtrico hasta ver la
imagen.
g. Usar el tornillo micromtrico para enfocar con mayor nitidez.

h. Abrir o cerrar el diafragma para mejorar la calidad de imagen.
Recomendaciones para el cuidado del microscopio.

Al sacar el microscopio de su compartimiento para trasladarlo de un lugar a otro.
Coloque el microscopio suavemente sobre la mesa que se desajuste la parte ptica.
Antes de usar el microscopio observe si todas sus partes se encuentran limpias y en buen estado.
Limpie suavemente la parte ptica con el papel de seda especial (papel de lente).
Mientras no est observando una preparacin mantenga apagada la fuente luminosa.
Cuide que sus objetivos no se humedezcan cuando se observan preparaciones liquidas.
Coloque el objetivo de menor aumento en su sitio cuando vaya a guardar el microscopio.
Coloracin de bacterias
Identificacin de Bacterias por Tincin GRAM: Morfologa Bacteriana
Ya hemos visto que la tincin de GRAM aporta dos ideas bsicas para la deficinin "taxonmica" de las bacterias: el color que
adquieren tras la tincin y la forma que presentan las clulas bacterianas.
Cocos
Micrococos, aparecen aislados y dispersos tras la divisin celular.
Diplococos, aparecen por pares. Estreptococos, tienden a unirse formando
cadenas. Estafilococos, aparecen en grupos irregulares, a veces de gran
tamao
Bacilos
Grandes variaciones morfolgicas: fusiformes, estreptobacilos, cocobacilos

GRAM
Espirales
Utilizamos el trmino Pleomorfismo para referirnos a la adopcin de
diferentes formas en una misma especie.
Bacterias gramnegativos
En microbiologa, se denominan bacterias gramnegativos aquellas que no se tien de azul oscuro o de violeta por la tincin de
Gram, y lo hacen de un color rosado tenue: de ah el nombre de "gramnegativos" o tambin "gramnegativos".
Bacterias Gram positivas

En microbiologa, se denominan bacterias Gram positivas, o bacterias Gram-positivas, aquellas bacterias que se tien de
azul oscuro o violeta por la tincin de Gram.
3. PROCEDIMIENTO
1.
Usar laminas limpias y pasarlas varias veces cortando la llama del mechero bunsen.
2.
Dejar enfriar la lmina y colocar sobre ella una gotita de suero fisiolgico con el inoculador.
3.
4.
5.
6.
7.
Con el inoculador estril, tocar ligeramente el cultivo que ha de ser examinado y transferir un poquito del sobre la gotita
de suero fisiolgico.
Esterilizar el inoculador y dejarlo enfriar.
Frotar el cultivo con el inoculador hasta extenderlo sobre la parte central del porta-objeto, dejando que se forme una
pelcula muy delgada.
Dejar que la pelcula seque al aire.
Fijar la preparacin sobre pota-objeto pasndola por la llama del mechero tres veces, manteniendo la pelcula hacia
arriba de la llama. Dejar enfriar.
8.
Lavar el colorante de la lmina con la solucin lugol (Gram 2) durante un minuto.
9.
Lavar la lmina con agua.
10.
Decolorarla con alcohol-acetona (Gram 3) hasta que quede incolora.
11.
12.
Contra colorear con safranina (Gram 4) y dejar que se tia por 1 minuto.

GRAM
13.
14.

Dejar de secar y examinar el microscopio la preparacin. Un organismo gram positivo retendr el color cristal violeta y
aparecer teido de azul y un oragnismo gram negativo tendr el color rojo del a safranina.
El mtodo de Observacin con microscopio:

1.
Primero buscar el objetivo de menor aumento 10X y colocarlo en el tubo del revlver, el objetivo har su ruido
caracterstico al estar en posicin correcta.
2.
Acomode la cara del espejo (plana para la luz natural y cncava para la luz artificial) a fin de iluminar todo el campo que
se observa por el ocular.
3.
Prepare el objetivo que va a observar, en nuestro caso es l portaobjetos con muestra de bacterias.
4.
Poner el portaobjetos en la abertura de la platina y centrar el objeto a observar.
5.
Mirando por el costado bajar el objetivo utilizando el tornillo micromtrico hasta que este muy cerca de la lamina.
6.
Observar por el ocular del microscopio y levantar el objetivo utilizando el tornillo macrometrico hasta ver la imagen.
7.
Usar el tornillo micromtrico para enfocar con mayor nitidez.
8.
Abrir o cerrar el diafragma para mejorar la calidad de imagen.
4. RESULTADOS
GRUPO
AMBIENTE
Huella digital
N 1
Inoculador
No estril
Jardn FIA
N 2
Laboratorio de
microbiologa
Huella digital
coloracin de bacterias
CARCTERES DE LAS COLONIAS
Borde: lobular
Elevacin: convexo
Car. ptico: Opaco
Pigmentacin: Crema
Borde: Liso
Elevacin: convexa
Caract. pticos: Opaco
Pigmentacin: Crema
Borde: liso
Elevacin: Convexa
Pigmentacin: anaranjado
Borde: Liso
Elevacin: Convexa
pigmentacin: blanca
Borde: puntiforme
Elevacin: convexa
FORMA
AGRUPACION
GRAM
Bacilos
Estreptobacilos
Negativo
Estreptococos
Negativo
Diplococos
Estreptococos
Ttradas
Negativo
Bacilos
Cocos
Negativo
Cocos
Estafilococos
estreptococos
Diplococos
Cocos
Negativo

GRAM
N 3
Laboratorio de
Microbiologa
Carac. pticos: Opaco

Pigmentacin: blanca
Borde: Liso
Elevacin: convexa con botn.
Pigmentacin: blanca
Negativo
Cocos
Estreptococos
Estafilococos
5. DISCUSIONES
6. CONCLUSIONES
Coloracin Gram
La razn de descoloracin de las Gram negativas se debe a que la membrana exterior es soluble en solventes
orgnicos. Y como su capa es demasiado delgada para retener el complejo de cristal violeta, este se escapa; perdiendo la
coloracin.
Se lleg a la conclusin que en el inoculador hay bacterias de estreptococo.
En la huella digital hay bacterias de tipo estreptococos de Gram positivo
En el jardn FIA hay diplococos
En laboratorio de microbiologa hay estafilococos, y no estreptotocos
Microscopio
La ubicacin de la luz en la parte inferior del microscopio ayuda a la resolucin del mismo, como la abertura. Gracias a
estos se pudieron observar las muestras con gran nitidez.
Se reconoci adecuadamente las partes del microscopio y pudo utilizarse para la observacin y reconocimiento de las
bacterias en cada muestra analizada.
7. RECOMENDACIONES
Microscopio
Sostener de manera adecuada el microscopio. Y seguir las instrucciones de las hojas sobre el manejo del mismo.
Tratar, en lo posible, que el cultivo no sea viejo; pues eso podra ocasionar que al hacer la coloracin, las Gram positivas
se decoloren.
Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesin prctica y, al acabar el curso, encargar a
un tcnico un ajuste y revisin general de los mismos.
Coloracin Gram
Seleccionar la colonia menos viscosa.

Alejar del mechero sustancias orgnicas que se utilizaran en la tincin ya que son combustibles.
8. BIBLIOGRAFA

GRAM
http://www.unavarra.es/genmic/microgral/Tema%2002.%20Cultivo%20de%20microorganismos.pdf
PELCZAR. Microbiologa. 4ta edicin
BACTERIAShttp://es.scribd.com/doc/17102236/4-LABORATORIO-DE-MICROBIOLOGIA-I
http://imaging.arl.arizona.edu
http://www.arrakis.es/lluengo/biologa1.html

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A. RECONOCIMIENTO DEL MICROSCOPIO

Ocular: Se encuentra situado en la parte superior del tubo.

El pie y soporte: Constituye la base sobre la que se

LAB N2:MICROSCOPIO Y COLORACIN

g. Usar el tornillo micromtrico para enfocar con mayor nitidez.

Recomendaciones para el cuidado del microscopio.

LAB N2:MICROSCOPIO Y COLORACIN

Bacterias Gram positivas

Lavar el colorante de la lmina con la solucin lugol (Gram 2) durante un minuto.

Lavar la lmina con agua.

Decolorarla con alcohol-acetona (Gram 3) hasta que quede incolora.

Lavar la lmina con agua.

LAB N2:MICROSCOPIO Y COLORACIN

Lavar la lmina con agua.

El mtodo de Observacin con microscopio:

Poner el portaobjetos en la abertura de la platina y centrar el objeto a observar.

Usar el tornillo micromtrico para enfocar con mayor nitidez.

Abrir o cerrar el diafragma para mejorar la calidad de imagen.

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Carac. pticos: Opaco

Seleccionar la colonia menos viscosa.

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