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    HEMOGLOBINA GLICOSILDA HbA1C 20 P

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    Este documento describe un método para medir la concentración de glicohemoglobina en sangre total mediante cromatografía de intercambio iónico. La glicohemoglobina se separa de la hemoglobina no glicosilada y se mide la absorbancia de cada fracción para calcular el porcentaje de glicohemoglobina en la muestra, lo que proporciona una medida del control glucémico a largo plazo en pacientes diabéticos. El método tiene una buena precisión y correlación con métodos de referencia.

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    Título original

    ·HEMOGLOBINA GLICOSILDA HbA1C 20 P

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    Este documento describe un método para medir la concentración de glicohemoglobina en sangre total mediante cromatografía de intercambio iónico. La glicohemoglobina se separa de la hemoglobina no glicosilada y se mide la absorbancia de cada fracción para calcular el porcentaje de glicohemoglobina en la muestra, lo que proporciona una medida del control glucémico a largo plazo en pacientes diabéticos. El método tiene una buena precisión y correlación con métodos de referencia.

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    Materiales incluidos. Separadores de resina Materiales requeridos, pero no incluidos.

    Espectrofotmetro capaz de leer absorbancias a 415 nm (405-420nm) Pipetas serolgicas o automticas 1.0 mL, 0.02 mL (20L), 0.1mL (100L), 0.5 mL (500L) , 5.0 mL (5000L). Tubos de ensaye 13 x 100 mm Agitador de hematologa. Recoleccin y preparacin de la muestra. Es preferible la recoleccin de sangre con EDTA, pero tambin se puede utilizar heparina. Estabilidad de la muestra: La glicohemoglobina en sangre recolectada con EDTA es reportada estable por 1 semana de 275 281 K (2 8 C). Substancias de interferencia. 1. Lipemia gruesa puede causar falsos resultados altos. 2. La hemoglobina fetal (Hbf) no tiene interferencias significativas. 3. La HbS glicosilada, HbC y otras hemoglobinopatas se unen fuertemente a la resina, dando as falsos resultados bajos. 4. La anemia hemoltica tambien produce resultados bajos. 5. La fraccin inestable (aldimina) se elimina durante la mezcla de la resina y no contribuye al valor de la glicohemoglobina. Procedimiento: Preparacin del hemolizado: 1. Pipetee 0.5 mL (500L) del reactivo de lisis en tubos previamente marcados como Estndar (S), Muestra (M) y Control ( C ). 2. Pipetee 0.1 mL (100L) de la muestra de sangre mezclada en los tubos apropiados y mezcle. 3. Djelo reposar por 5 minutos a temperatura ambiente 288 298 K (15 25) para completar la hemlisis. Ensayo y separacin de la Glycohemoglobina: 1. Marcar los tubos de resina Pre-Fil como, Estndar (S), Muestra (M) y Control ( C ). 2. Pipetee 0.1 mL (100L) del preparado hemolizado dentro de los tubos de resina marcados apropiadamente. 3. Coloque el separador de resina en el tubo de manera que el manguito de plstico quede aproximadamente 1-2 cm por arriba del nivel del liquido. 4. Mezcle los tubos en un agitador hematolgico por 5 minutos. Alternativamente, se pueden mezclar los tubos manualmente si se toman por la parte superior de la resina. 5. Al final de los 5 minutos de mezcla. Empuje el separador de resina dentrol del tubo hasta que la resina este firmemente colocada en un botn en el tubo de 13 mm. 6. Vaciar cada sobrenadante dentro de cubetas separadas para leer las absorbancias. 7. Leer las absorbancias (Agly) del Estndar (S), Muestras (M), y Controles (C) contra agua, a 415 nm antes de 60 minutos. Ensayo para hemoglobina Total. 1. Pipetee 5.0 mL de agua desionizada a tubos marcados como Estndar (S) , Muestra (M) y Control ( C ). 2. Aada 0.02 mL (20 L) del hemolizado en los tubos apropiados. Mezcle bien y transferir a las cubetas para leer la absorbancia. 3. Leer la absorbancia (Atot) del Estndar , Muestra y Control contra agua a 415 nm dentro de 60 minutos. Control de Calidad. Se deben incluir controles para Glicohemoglobina determinados por este mtodo en cada serie de pruebas. Licon recomienda la utilizacin de sus controles dosniveles (Normal, Anormal) controles de 3 niveles ( Normal, Medio rango, Anormal) para este propsito. Resultados. Para cada Estndar y Muestra calcule el Rango ( R ) de absorbancia de la glicohemoglobina y de la absorbancia de la hemoglobina total como sigue: A gly R = -----------A tot Glicohemoglobina (%) R ( Muestra) =----------------------R ( Estndar) x Concentracin del Estndar de la Glicohemoglobina (%)

    Ejemplo: Un Estndar que contiene 10.0 % HbA1 dio una absorbancia (Agly) de 0.480 para la fraccin de Glicohemoglobina y 0.575 para la fraccin de la hemoglobina total (Atot). La Muestra dio un valor de absorbancia de 0.962 y 0.746. 0.480 R (Estndar) = ------------- = 0.835 0.575 0.962 R (Muestra) = ------------- = 1.290 0.746

    Stanbio Glicohemoglobina (Pre-Fil)


    Para la Determinacin Cuantitativa Colorimtrica de Glicohemoglobina HbA1c en sangre total.
    Principio y resumen. La Glicohemoglobina es formada progresivamente e irreversiblemente en los eritrocitos durante sus 120 das de vida. La concentracin de Glicohemoglobina en los glbulos rojos dependen del promedio de concentracin de glucosa durante un cierto periodo de semanas y es estable durante la vida de la clula. Por lo tanto la medicin de la Glicohemoglobina, como porciento de la hemoglobina total, brinda un mtodo de ayuda para el control del paciente diabtico, ya que los niveles de glycohemoglobina se acercan a los valores normales dependiendo de como el diabtico responda al tratamiento. 1,2,3 Abraham et. al4 report una excelente correlacin entre la concentracin de glicohemoglobina y el control diabtico. En el mtodo presentado, se mezcla un hemolizado de sangre total con una resina de intercambio catinico. La hemoglobina no glicosilada (HbA0) se une a la resina, dejando la (HbA1) libre para que se pueda remover mediante un separador de resina en el sobrenadante. El porcentaje de HbA1, se determina midiendo los valores de absorbancia a 415 nm de la fraccin HbA1 y de la fraccin de Hb total, calculando la proporcin de absorbancias (R) y comparando esta proporcin con un estndar de glicohemoglobina al que se le practic el mismo procedimiento. Los resultados son expresados como HbA1 tambin se puede convertir o reportar como HbA1c usando un factor de conversin cuando se use un valor de HbA1c para el estndar. Reactivos: Resina de intercambio inico de Glicohemoglobina (tubos) Cada tubo contiene: 3.0 mL de resina de intercambio catinico, 8 mg/dL, en un buffer de pH 6.9 Reactivo de lisis de Glicohemoglobina Contiene cianuro de potasio, 10 mmol/L y surfactantes. Estndar de Glicohemoglobina (liofilizado) 1 vial Preparado a partir de un paquete de eritrocitos humanos. Consulte la etiqueta del vial para los valores asignados cuando se reconstituye. Precauciones. Para uso de diagnstico In -vitro. Los eritrocitos humanos utilizados en la preparacin del estndar son negativos para el antgeno de la hepatitis B (HBsAg) y para HIV; sin embargo, manjese el estndar con las mismas precauciones con las que se manejan las muestras. No pipetee el reactivo de lisis con la boca. Presentacin: Equipo para 20 pruebas. Preparacin del reactivo. Para reconstituir el estndar, con mucho cuidado quite la tapa de aluminio y la goma para evitar perdida del contenido, aada 1.0 mL de agua destilada al vial utilizando una pipeta volumtrica. Coloque el tapn de goma en el vial y djelo reposar por 10 minutos a temperatura ambiente. Agite el contenido suavemente para observar la presencia de material sin disolver, hasta que se disuelva por completo. Puede acelerar la reconstitucin mediante agitacin mecnica suave del vial. Utilice el estndar exactamente igual al procedimiento que seguira con una muestra del paciente. Estabilidad y Almacenamiento. La resina de intercambio inico y el reactivo de lisis son estables a temperatura de refrigeracin de 275 281K (2-8C) hasta su fecha de caducidad. La turbidez y decoloracin de los reactivos indican un deterioro por lo que deben ser desechados. El estndar ( liofilizado) es estable 275- 281 K (2- 8 C) hasta su fecha de caducidad. El vial reconstitudo debe ser utilizado en un lapso de 30 minutos se puede almacenar en alcuotas de 0.1 mL a 253 K ( -20 C) . El estndar refrigerado de 275 281K (2-8C) es estable por 30 das.

    1.290 Por lo tanto: Glicohemoglobina (%) = ----------- x 10 = 15.4% 0.835 Los resultados pueden ser reportados como Hemoglobina A1c. Cuando se compara con el mtodo de referencia A1c, El mtodo de Stanbio tiene una correlacin del 98% con una ecuacin de regresin de: Y( valor A1c) = 0.838 x (valor Stanbio) 0.732 El valor obtenido por el mtodo de Stanbio puede convertirse al valor calculado de A1c usando esta frmula. Para calcular directamente el valor de A1c, el valor del estndar puede cambiarse a 7.6% en lugar de 10% y los resultados obtenidos sern valores de A1c. Valores esperados Glicohemoglobina A1 Rango normal: 6.0 8.0 % Diabtico: Buen control: 7.5 8.9 % Control medio: 9.0 10.0 % Control pobre: Arriba de 10.0 %
    8

    Glicohemoglobina A1c Rango normal 4.2 6.2 % Diabtico: Buen control: 5.5 6.8 % Control medio: 6.8 7.6 % Control pobre: Arriba de 7.6 %

    Caractersticas de funcionamiento:5 Precisin: Se realizaron 20 series de ensayos para cada 2 muestras de sangre que tenan valores de Glicohemoglobina de (7.8%) normal y de (13.4%) anormal. Los coeficientes de variacin (CV) intraensayo fueron de 2.7 y 1.7 % respectivamente. La precisin interensayo fue establecida probando muestras con valores de (7.6%) normal y (13.0%) elevado, para 10 corridas en un periodo de 5 das. Los Coeficientes de Variacin respectivos fueron 4.1 y 4.6 %. Correlacin: Se hizo un estudio comparativo entre el procedimiento descrito y otro mtodo de referencia ( HPLC ) y mostr un coeficiente de correlacin ( r ) de 0.982. Linearidad: El procedimiento presentado muestra una linearidad para glicohemoglobina en el rango de 4-20% (HbA1) y 2.6-16% (HbA1c). Referencias 1.- Trivelli, La et al. New Engl j Med 284: 353,1971. 2.- Gonen E, Rubenstein AH. Diabetologia 15:1, 1978 3.- Gabbay KH et al j. Clin Endocrinol 15:1, 1978 4.- Abraham EC et al Diabetes 27:931, 1978 5.- Stanbio Laboratory data.

    Fabricado en EUA por: Stanbio Laboratory 1261 North Main Street Boerne TX, 78006. Distribuido en Mxico por: Laboratorios Licon, S.A. Viveros del Roco No. 33 Col. Viveros de la Loma Tlalnepantla, Edo. de Mx. C.P. 54080 Tel.: 5-362-02-99 Fax: 5-362-17-92

    Rev. 05/09/00 IN-310

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