Gua de interpretacin

Placas Petrifilm Staph Express

para Recuento de Staphylococcus aureus

Esta gua lo familiarizar con los resultados de las Placas Petrifilm Staph Express de 3M para Recuento de Staphylococcus aureus. Para mayor informacin, contacte al representante autorizado de productos de 3M Microbiologa ms cercano.

Las Placas Petrifilm Staph Express para Recuento de Staphylococcus aureus son un medio de cultivo listo para ser empleado, que contiene un agente gelificante soluble en agua fra. El medio modificado cromognico Baird-Parker en la Placa es selectivo y diferencial para el Staphylococcus aureus. Las colonias rojo-violeta en la Placa son S. aureus. Cuando solamente se aprecien colonias rojo-violeta, cuente las colonias y la prueba se habr completado. Si encuentra flora de acompaamiento en el fondo de su prueba de Staphylococcus aureus, el Disco Staph Express Petrifilm de 3M se debe utilizar para diferenciar el S. aureus del resto de las colonias sospechosas. El Disco Staph Express Petrifilm se debe utilizar cuando la placa presente colonias que no sean color rojo-violeta; por ejemplo, colonias negras o azul-verdosas. El Disco Staph Express Petrifilm contiene un indicador y cido desoxirrebonucleico (DNA). El S. aureus produce desoxirribonucleasa (DNasa) y la DNasa reacciona con el indicador para formar zonas rosadas. Cuando el Disco se inserta en la placa, el S. aureus (y ocasionalmente el Staphylococcus hyicus y el Staphylococcus intermedius) produce una zona rosada. Otros tipos de bacteria no producen zonas rosadas. El S. aureus, el S. hyicus y el S. intermedius integran la mayora del grupo de los organismos comnmente conocidos como Staphylococcus coagulasa positiva.

Recuento de S. aureus = 11 Considere todas las colonias rojo-violeta como S. aureus. Cuando slo se encuentren presentes colonias rojo-violeta, la prueba se habr completado.

3M Placa Petrifilm Staph Express para Recuento de S. aureus

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Recuento de S. aureus = 0 Esta Placa Petrifilm no tuvo colonias despus de 24 horas de incubacin. La prueba se ha terminado.

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Recuento de S. aureus = 24 Las colonias de S. aureus pueden variar en tamao. Independientemente del tamao, cuente todas las colonias rojo-violeta. Utilice una lupa con luz para poder ver las colonias con mayor facilidad. La prueba se considera terminada.

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Recuento de S. aureus = 122 El lmite de recuento recomendado de una Placa Petrifilm Staph Express es de 150 colonias. La placa de la figura 4 se est acercando al lmite del recuento. La prueba se ha terminado.

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Recuento de S. aureus ~ estimado 850 Cuando el nmero de colonias de S. aureus excede de 150, las colonias se tornan Muy Numerosas Para Contar (MNPC). Haga un estimado del recuento o diluya an ms su muestra. Para hacer la estimacin, cuente las colonias en un cuadro representativo y multiplique ese nmero por 30.

3M Placa Petrifilm Disco Staph Express

El Disco Staph Express Petrifilm se debe utilizar cuando la Placa presente colonias que no sean color rojovioleta; por ejemplo, colonias negras o azul-verdosas, puesto que stas pueden oscurecer el S. aureus. Las colonias negras pueden ser o no ser S. aureus. Las colonias azul-verdosas no son S. aureus. Cuando el Disco se inserta en la Placa y se incuba por una hora adicional, se forman zonas rosadas de DNasa. Las zonas rosadas son S. aureus la mayora de las veces, aunque ocasionalmente pueden ser S. hyicus o S. intermedius. El grupo de organismos comnmente conocido como coagulasa positiva de Staphylococci abarca principalmente S. aureus, S. hyicus y S. intermedius.

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Recuento de S. aureus = 17 Cuente las zonas rosadas como S. aureus, independientemente del tamao de la zona. Las flechas de la figura 6 muestran un desprendimiento del gel. Esto no afecta el desempeo de la Placa junto con el Disco.

7 7
Recuento de S. aureus = 7 En la figura 7 se ven partculas de alimentos con forma irregular. Es ms fcil contar las colonias de S. aureus una vez que se ha insertado el Disco, ya que las zonas rosadas se distinguen con mayor claridad que el alimento.

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Recuento de S. aureus = 3 Es difcil ver las colonias individuales debido al alimento y/o al gran nmero de bacterias del fondo, como lo muestra la decoloracin de la placa de la figura 8. Inserte el Disco y cuente las zonas rosadas como S. aureus.

3M Placas Petrifilm Staph Express para Recuento de Staphylococcus aureus Recomendaciones de uso
Para informacin detallada sobre Advertencias, Precauciones, Compensaciones por Garanta / Garanta Limitada, Limitaciones por Responsabilidad de 3M, Almacenamiento y Eliminacin, e Instrucciones de Uso, remtase al inserto de producto en el paquete.

Almacenamiento

Petrifilm

Petrifilm

Petrifilm

Petrifilm
Petrifilm

Almacene los paquetes cerrados a una temperatura <8 C (<46 F). Las placas deben usarse antes de su fecha de caducidad. En reas de alta humedad, donde la condensacin puede ser un inconveniente, es recomendable que los paquetes se atemperen al ambiente del lugar de trabajo antes de abrirlos. Las Placas Petrifilm tienen un tiempo de vida til de 18 meses desde su fecha de fabricacin. Observe la fecha de caducidad en la parte superior de la Placa.

Para cerrar un paquete abierto, doble el extremo y sllelo con cinta adhesiva para evitar el ingreso de humedad y, por lo tanto, la alteracin de las Placas.

Placas y Discos: para prevenir la exposicin a la humedad, no refrigere las bolsas abiertas. Guarde las bolsas selladas en un lugar fresco y seco. Utilice las placas en un plazo de un mes despus de abrirse. Utilice los discos en un plazo de seis meses despus de abrirse. Evite la exposicin de placas y de discos a temperatura 25 C (77 F) y/o a humedad relativa 50%.

Preparacin de la muestra

Prepare una dilucin de la muestra de alimento. Pese o pipete la muestra en un recipiente adecuado, como una bolsa Stomacher, una botella de dilucin o cualquier otro contenedor estril apropiado.

Adicione la cantidad apropiada de uno de los siguientes diluyentes estriles: tampn Butterfield (tampn IDF fosfato, 0.0425 g/L de KH2PO4 y con pH ajustado a 7.2); agua de peptona al 0.1%; diluyente de sal peptonada (mtodo ISO 6887), buffer de agua peptonada (mtodo ISO 6579); solucin salina (0.85 a 0.90X); caldo Letheen libre de bisulfato o agua destilada.

Mezcle u homogenice la muestra mediante los mtodos usuales.

No utilice buffers que contengan citrato, bisulfito o tiosulfato de sodio, porque pueden inhibir el crecimiento.

Para una recuperacin y crecimiento ptimo de los microorganismos, ajuste el pH de la muestra diluida entre 6.5 y 7.5: Para productos cidos: use solucin 1N de NaOH. Para productos bsicos: use solucin 1N de HCL.

Inoculacin

Coloque la Placa Petrifilm en una superficie plana y nivelada. Levante la pelcula superior. Con la Pipeta Electrnica 3M o una pipeta equivalente perpendicular a la Placa Petrifilm, coloque 1 mL de la muestra en el centro de la Placa.

Deslice cuidadosamente la pelcula superior hacia abajo para evitar atrapar burbujas de aire. No deje caer la pelcula superior.

Aplique suavemente presin con el esparcidor para distribuir el inculo sobre el rea circular antes de que se forme el gel. Levante el esparcidor sin doblarlo o deslizarlo. Espere por lo menos un minuto para que se solidifique el gel. Nota: Esparza la muestra en cada Placa individual antes de inocular la siguiente. Esto es muy importante, puesto que en la Placa Petrifilm Staph Express el gel se forma rpidamente.

Incubacin
C

Interpretacin

10

Incube las Placas cara arriba en grupos de no ms de 20 piezas. Puede ser necesario humectar el ambiente de la incubadora con un pequeo recipiente con agua estril, para minimizar la prdida de humedad.

11

Si no hay colonias presentes despus de 24 2 horas de incubacin, el recuento es de cero y la prueba se considera terminada.

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Cuente las colonias rojo-violeta como S. aureus. Las Placas Petrifilm pueden ser contadas en un contador de colonias estndar u otro tipo de lupa con luz. Consulte la gua de interpretacin para leer los resultados.

El tiempo de incubacin y la temperatura varan segn el mtodo. Los mtodos aprobados ms conocidos son: Mtodos ms comunes utilizados en los Estados Unidos: AOAC Mtodo Oficial 2003.07 para el recuento de Staphylococcus aureus en Alimentos Procesados Preparados. AOAC Mtodo Oficial 2003.08 para el recuento de Staphylococcus aureus en Productos Lcteos. AOAC Mtodo Oficial 2003.11 para el recuento de Staphylococcus aureus en crnicos, mariscos y aves. Incubar 24 h 2 h a 35 C 1 C 37 C 1 C - Si no hay colonias presentes o slo hay colonias rojo-violeta, la prueba est terminada; no es necesario el uso de Disco. Cuente todas las colonias rojo-violeta como S. aureus. - Si adems de colonias rojo-violeta aparecen colonias de otro color, inserte el Disco y vuelva a incubar de 1 a 3 horas a 35 C 1 C 37 C 1 C. Cuente las zonas rosas como S. aureus. Mtodos ms comunes utilizados en Europa: Sistema Nrdico para la validacin de mtodos microbiolgicos alternativos (Nordic System for validation of alternative microbiological methods), Validacin Nordval (Ref. No.: 200320540800019) para todos los alimentos. Referirse a los detalles del mtodo de la validacin Nordval para la Placa Petrifilm Staph Express. AFNOR Mtodo Validado (3M-01/1904/03). Utilice los detalles siguientes cuando implemente las instrucciones de uso: Preparacin de la muestra Slo utilice diluyentes enlistados por ISO 68871:1999 (diluyente de sal de peptonada y agua peptonada buferada). Incubacin Incubacin de la prueba: 37 C 1 C por 24 h 2 h. Incubacin del Disco: 37 C 1 C por 3 h. Interpretacin El rango de conteo es: Colonias rojo-violeta = <150 y/o colonias totales = <300 Zona rosa = <150 Leer las Placas dentro de las tres horas siguientes al trmino de la incubacin.

Utilizacin del Disco

Si se encuentran presentes otras colonias de colores diferentes adems del rojo-violeta, utilice un Disco Staph Express Petrifilm (ver figuras 13 - 16).

13

Remueva el Disco de su empaque individual tomndolo de la pestaa. Levante la pelcula superior de la Placa Petrifilm y coloque el Disco en la cavidad de la Placa. Baje la pelcula superior.

14

Aplique presin gentilmente al rea del Disco, incluyendo sus bordes, deslizando un dedo firmemente a lo largo de la pelcula superior. Esto garantizar un contacto uniforme del Disco con el gel y eliminar cualquier burbuja de aire.

Identificacin adicional
C

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Incube las Placas con los Discos insertados cara arriba, en grupos de no ms de 20 piezas, por 1 a 3 horas a 35 C 1 C 37 C 1 C.

16

Cuente todas las zonas rosadas aunque no se encuentre presente una colonia.

17

Las colonias pueden ser aisladas para su posterior identificacin. Levante la pelcula superior y tome la colonia del gel.

Comentarios adicionales
Nota: Recuerde inocular y poner el Disco antes de pasar a la siguiente Placa. Para contactar localmente a 3M Microbiologa en Latinoamrica, vistenos en nuestra pgina de internet: www.3M.com/microbiology Para servicio tcnico en Latinoamrica, contacte la direccin [email protected] o llame al (55-52)5270-2223.

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Recycle, Neg

Petrifilm es una marca registrada de 3M. Impreso en Mxico. Revisin: 2007 -01. Referencia: 70-2009-4312-7