Gentica I Gua de Problemas

(Primera Parte)

Primer Cuatrimestre de 2014

Un tpico da de trabajo en la vida de un genetista moderno (minera de datos!)

1 y 2. LEYES DE MENDEL Y EXTENSIONES DEL ANLISIS MENDELIANO I

Bibliografa: Griffiths y col. Cap. 2 y 4 Gua terica 1) Seale la importancia del concepto de segregacin, por un lado, e independencia, por el otro, de la herencia de caracteres derivada de las leyes de Mendel y qu papel juega el azar en ambos. Cul es la importancia de la diploida en todo esto? Sera lo mismo si las arvejas fueran monoploides en vez de diploides? R: El concepto de segregacin se refiere a la separacin de los alelos de un gen (A,a) que se produce en la meiosis al formarse las gametas. Cuando esto ocurre cada alelo migra a un polo distinto y el azar no interviene en este proceso. (los alumnos suelen decir que los alelos segregan al azar). El concepto de independencia se refiere a la combinacin al azar de los alelos de genes distintos (A,b) durante la meiosis I. La segregacin e independencia de la herencia de los caracteres es, valga la redundancia, independiente de si los organismos son haploides o diploides y permite la recombinacin, entendida como nuevas combinaciones de alelos de distintos genes. Como ejercicio, se puede hipotetizar qu hubiese pasado con las generaciones paternales, F1 y F2 si las arvejas fueran haploides. Ahora bien, la segregacin de alelos se ve enmascarada en los diploides por las interacciones de dominanciarecesividad. Por eso, antes de Mendel, no se le encontraba lgica a que 2 individuos de fenotipo dominante, tuvieran descendientes con fenotipo recesivo. Tuvo importancia el anlisis numrico-estadstico para establecer estas leyes que no se haba aplicado previamente. 2) Cmo recombinan los genes en la meiosis? R: Lo hacen mediante dos mecanismos que ocurren durante la meiosis: la combinacin de cromosomas no homlogos y el entrecruzamiento en cromosomas homlogos . Despus de Mendel se pudieron incorporar los conceptos derivados de los avances en citogentica (teora cromosmica de la herencia) y reformular, en su acepcin moderna que los a l e l o s d e g e n e s situados sobre cromosomas no homlogos recombinan mediante la migracin al azar de di chos cromosomas en la anafase I y los alelos de genes situados en un par de cromosomas homlogos lo hacen por medio del entrecruzamiento. 3) a) Qu es un monohbrido? Qu es un hbrido en sentido agronmico o comercial (por ej. un hbrido superrendidor para Clarn Rural)? b) Qu significa hacer un cruzamiento dihbrido o trihbrido? R:a) Monohbrido es sinnimo de heterocigota para un nico gen. Un hbrido comercial es tambin un heterocigota (pero con sobredominancia para el carcter rendimiento). No se lo debe confundir con hbridos interespecficos que son resultados de cruzamientos amplios (interespecficos) y que se vern en la gua de alteraciones. b) Hacer un cruzamiento dihbrido o trihbrido significa analizar la progenie de individuos con varios pares de alelos simultneamente, dos (Aa Bb) o 3 (Aa Bb Cc) respectivamente. 4) Qu es retrocruza? Y cruzamiento prueba? R: La retrocruza es un cruzamiento entre un integrante de la F1 o cualquiera de las siguientes generaciones y cualquiera de los padres. Un cruzamiento prueba es un cruzamiento entre un heterocigota y un h o m o c i g o t a recesivo para las caractersticas en estudio: AA x aa Aa 5) En qu consiste la prueba de complementacin? R: Cruzamiento entre dos mutantes homocigotas con fenotipo similar (por ejemplo albino) para determinar si la F1 tiene fenotipo salvaje (indicativa de que las mutaciones estn localizadas en distintos genes). Es el caso tpico de una va metablica de varios pasos. Tanto si hay una mutacin para el gen que controla el primer paso de la va, como para la segunda, la consecuencia es que no se formar el producto final (por ejemplo antocianas de color rojo, dando albinismo). Si se cruza una mutante para el gen codificante para la primera enzima de la va metablica con otro para la segunda, la F1 ser heterocigota para ambos genes. Como generalmente los alelos salvajes (enzima normal activa) son dominantes, las enzimas sintetizadas se complementarn para restaurar la va metablica, independientemente de que los alelos salvajes estn en repulsin (en trans). El 100% de la F1 es salvaje. Esta prueba se contrasta con la prueba de recombinacin (lo que confunde a los alumnos). En la prueba de recombinacin, puede ocurrir que las mutantes independientes se correspondan al mismo gen pero en nucletidos distintos, lo que posibilita que se produzca un entrecruzamiento entre las 2 posiciones mutadas generando un recombinante salvaje. En este caso, la F1 ser de fenotipo mutante en un 100% (los alelos mutados

del mismo gen no se pueden complementar, salvo algunos casos muy excepcionales llamados de complementacin intragnica). En la F2, en una proporcin muy pequea (por ejemplo 1x10-4) aparecen salvajes por recombinacin. Claramente, no son proporciones mendelianas. Este tipo de experimentos le sirvieron a Benzer para establecer las distancias mnimas o unidades de recombinacin (recn) en sus experimentos con fagos. Hoy sabemos que esta distancia o unidad es el nucletido. 6) Qu ventajas tiene el uso de caracteres, genes o marcadores codominantes (respecto a los dominantes) en un anlisis gentico de segregacin? R: Se puede distinguir los heterocigotas de los homocigotas, por lo que se dispone de mayor informacin (estadstica) en una F2, por ejemplo. R etrocruzar F1 con el doble recesivo (cruzamiento prueba), en vez de autofecundar. 7) Explique desde el punto de vista gentico las siguientes interacciones allicas: dominancia, codominancia, sobredominancia (=heterosis o vigor hbrido) y dominancia incompleta R: E n la dominancia se expresa uno solo de los alelos, en la codominancia se expresan ambos. La sobredominancia implica que la F1 supera en el carcter estudiado (usualmente rendimiento agronmico) a ambos padres. Dominancia incompleta: el heterocigota presenta rasgos intermedios entre cada tipo de homocigota, no es igual a ninguno de ellos (la cantidad de enzima en el heterocigota no alcanza para dar color rojo y la flor queda rosada, por ejemplo). 8) Normalmente, de un carcter autosmico dominante relacionado con alguna enfermedad se espera que cada individuo afectado tenga al menos un progenitor tambin afectado. Pero, puede suceder que ambos padres no manifiesten la enfermedad? R: Tiene que ver con la influencia que pueden ejercer otros genes y la influencia ambiental en la expresin del carcter: penetrancia (incompleta)

aa

Aa

Aa

9) A qu se denomina interacciones gnicas? R: Es la interaccin entre dos o ms genes de distintos loci en la que uno interfiere o modifica la expresin fenotpica de otro. Generalmente se denomina hiposttico al gen que slo se manifiesta fenotpicamente cuando otro locus (episttico) presenta determinado genotipo. Epstasis = modificaciones de las proporciones fenotpicas debidas a interaccin gnica. Las variantes de epstasis son muy numerosas en gentica, ms de las que aparecen en los textos. Sin embargo, varios tratan con detalle e incluso dan definiciones de algunos de estos ejemplos. No es de inters para esta materia que los estudiantes memoricen las variantes y mucho menos las definiciones de cada uno de ellas. Sin embargo, hay problemas que se refieren a stos, dado que, experimentalmente, e n una progenie segregante, normalmente no se sabe de antemano si el comportamiento es de tipo episttico y menos an a qu variante de epstasis se corresponde. En este contexto, resulta til disponer del cuadrito adjunto que muestra algunos ejemplos del tipo de proporciones fenotpicas posibles. Tipo de interaccin gnica 9 3 3 1 Razn A-B- A-bb aaB- aabb fenotpica Ninguna (cuatro fenotipos distintos) 9 3 3 1 9:3:3:1 Accin gnica complementaria 9 7 9:7 Supresin dominante de A sobre el alelo domi-12 3 1 13:3 nante B recesiva de aa sobre los alelos B y b Epstasis 9 3 4 9:3:4 Epstasis dominante de A sobre los alelos B y b 12 3 1 12:3:1 Genes duplicados 15 1 15:1 Problemas: 1) Si dispone de las siguientes cepas de Drosophila: i) bw/bw, e/e; ii) salvaje y iii) bwvg/bwvg y desea comprobar las leyes de Mendel, indique: a) Todos los cruzamientos que le permitiran hacerlo y la segregacin de qu carcter (o caracteres) estudiara en cada caso. b) Equivale el cruzamiento directo al recproco? c) Deben usarse hembras vrgenes en todos los casos? 2) Si 2 pares de genes A:a y B:b se transmiten independientemente y se sabe que A es dominante sobre a y B sobre b, cul es la probabilidad de obtener: a) una gameta AB a partir de un individuo AaBb? b) una gameta Ab a partir de un individuo AA Bb? c) una cigota AABB a partir de aabb X AABB? d) un fenotipo AB a partir de AaBb X AaBb? e) un fenotipo AB a partir de AABB X aabb? f) un fenotipo aB a partir de AaBb X AaBB?

3) Enumere las proporciones genotpicas y fenotpicas que puede formar el trihbrido AaBbCc cuando es autofecundado (o cruzado por uno de constitucin genotpica similar) suponiendo que A y B son dominantes y C tiene dominancia incompleta sobre c. 4) Se sabe que existe una serie de 4 alelos en una especie diploide (2n); Cuntos estaran presentes en: a) Un cromosoma?, b) un par cromosmico?, c) un individuo de la especie?, d) sobre la misma base: cuntas combinaciones diferentes de alelos se espera que ocurran en la poblacin completa? 5) En el ratn, el gen para el albinismo presenta una serie de alelos mltiples. Cuatro de estos alelos (clasificados de acuerdo con la disminucin de intensidad del color de pelo de los homocigotas) son: C = color completo (tipo salvaje); cch = chinchilla; cd = dilucin extrema; c = albino Las relaciones de dominancia son C> cch> cd> c. a) Haga un esquema de un cruzamiento entre un ratn salvaje heterocigota para dilucin extrema y un ratn chinchilla heterocigota para el albinismo. b) Otro gen que afecta el color del pelo tiene su locus en otro cromosoma, y presenta los alelos B para pelo negro (tipo salvaje) y b para castao. Ampliar el esquema anterior incluyendo el dato de que los dos ratones que se cruzan son heterocigotas para ese gen. 6) Un fitopatlogo llamado Flor que trabajaba con dos variedades de lino comprob que stas presentaban resistencia diferencial a dos razas del hongo Melampsora lini. La variedad d e l i n o 770B era resistente a la raza 24 y susceptible a la raza 22, mientras que el lino Bombay era resistente a la 22 y susceptible a la 24. Al cruzar 770B y Bombay, la F1 era resistente a ambas razas 22 y 24. L a autofecundacin de l a F 1 produjo una F2 con las siguientes proporciones fenotpicas: a) Cuntos genes hay involucrados? RAZA 22 b) Defina los genotipos parentales RAZA 24 Resistente Susceptible c) Proponga una hiptesis para explicar la base gentica de la resistencia Resistente 110 43 del lino a estas razas particulares. d) En base a su hiptesis, qu c a n t i d a d de cada una de las cuatro Susceptible 32 9 categoras aparece en F2? e) Pruebe su hiptesis usando X2 7) Si el carcter antenas largas (a) est ligado al sexo (determinacin XX-XY) en el mosquito Sinospica rascaremus, qu probabilidad hay de obtener un mosquito macho y con antenas largas en la cruza A/a x A/Y? 8) Averiguar si el modelo de herencia del rasgo definido en el pedigr, se corresponde con un tipo de herencia autosmica dominante, autosmica recesiva, dominante ligada a X, recesiva ligada a X o ligada a Y. Podra ser vlida ms de una hiptesis? Progenie Hijas Hijos Todas curvas Todos normales 1 0,5 curvas 0,5 curvas Curva Normal 2 0,5 normales 0,5 normales Curva Normal Todas curvas Todos curvas 3 Normal Normal Todas normales Todos normales 4 Curva Curva Todas curvas Todos curvas 5 0,5 curvas Curva Curva Todas curvas 6 0,5 normales genitores y de las progenies en cada uno de los cruzamientos? Cruza Progenitores Madre Padre Normal Curva

9) En el ratn hay un alelo mutante que causa encorvamiento de la cola. A partir de los resultados de los cruzamientos que se indican a continuacin deduzca el tipo de herencia de este carcter: a) Es recesivo o dominante? b) Es autosmico o ligado al sexo? c) Cules son los genotipos de los pro-

10) En Drosophila se aparearon 2 moscas cuyo fenotipo era "alas curvadas" (Curly) y "setas anormales" (Stubble). Se analiz un gran nmero de descendientes adultos y la proporcin fue la siguiente: 4 alas curvadas y setas anormales: 2 alas curvadas y setas normales: 2 alas normales y setas anormales: 1 normal para ambos caracteres. Explique estos resultados. 11) En una especie cultivada se realiz un cruzamiento entre plantas de flores rojas y plantas de flores blancas. La progenie F1 fue roja. En la F2 los resultados fueron los siguientes: 92 rojas, 30 cremas, 41 blancas. Explique. 12) El color del pelaje en los perros depende de la accin de por lo menos 2 genes. En un locus, un inhibidor episttico dominante (I) de la pigmentacin evita la expresin de los alelos del color que se ubican en otro locus de segregacin independiente y en consecuencia produce pelaje blanco. Cuando se da la condicin recesiva ii, los alelos del locus hipoststico pueden expresarse: iiN_ produce color negro, iinn produce color caf. En un cruzamiento dihbrido para ambos loci, determine:

a) Las proporciones fenotpicas esperadas en la progenie. b) La probabilidad de hallar, en la progenie de color blanco, un individuo que sea homocigota para ambos loci. 13) Se cruzaron dos cultivares de arveja con flores blancas y se obtuvo una F1 homognea con flores moradas. El cruzamiento al azar entre individuos de la F1 produjo 96 plantas hijas, de las cuales 53 presentaron flores moradas y 43 flores blancas. En este ej: a) A qu proporcin fenotpica se aproxima la F2? b) Cul es el tipo de interaccin involucrada? c) Cules seran los genotipos probables de las cepas progenitoras? 4) En la rata, dos parejas allicas A,a y R,r interactan de la siguiente forma: A_R_: pelaje gris; aaR_: pelaje negro; A_rr: pelaje amarillo; aarr: pelaje crema. Estos genotipos slo pueden expresarse en presencia de un alelo dominante de un tercer gen, D, mientras que su alelo recesivo d causa albinismo. Cuatro lneas albinas homocigotas diferentes fueron cruzadas con una lnea pura de color gris, y estos cruzamientos produjeron las correspondientes F1 grises. Estas F1 produjeron las siguientes F2: Cantidad de individuos en las distintas F2 Lneas a) Cul es el genotipo de cada lnea albina? albinas Gris Amarillo Negro Crema Albino b) Qu tipo de interaccin, si la hay, est implicada 1 174 0 65 0 80 en estos cruzamientos? 48 0 0 0 16 2 3 104 33 0 0 44 4 292 87 88 32 171 Problemas adicionales 1) En algunas especies vegetales existe variacin intraespecfica para la posicin (alta o baja) de las anteras; dicha condicin se denomina heterostilia y suele estar determinada genticamente. En Aminckia spectabilis, una especie con heterostilia, se efectuaron las siguientes polinizaciones entre plantas con anteras bajas (individuos 1 y 2) y altas (individuos 3 y 4): Parentales Progenie Representando el alelo dominante del gen para la heterostilia por H y bajas (1) X bajas (2) 37 bajas el recesivo por h: altas (3) X altas (3) 28 altas a) Determine los genotipos de las plantas 1, 2, 3 y 4. 29 altas b) Indique qu proporcin de plantas con anteras altas y bajas se espe- altas (3) X bajas (1) altas (4) X bajas (2) 19 bajas; 16 altas. raran en los siguientes cruzamientos: i) 3 X 4; ii) 3 X 2; ii) 4 X 4 2) El gen yellow (y) para el color amarillo del cuerpo de Drosophila es recesivo y ligado al sexo. Si el alelo dominante y+ determina el color comn del cuerpo, qu proporciones fenotpicas se esperan de las cruzas: a) macho amarillo x hembra amarilla; b) hembra amarilla x macho comn; c) hembra comn (homocigota) x macho amarillo; d) hembra comn (portadora) x macho amarillo? 3) Las gallinas llamadas "rastreras" presentan patas y alas recortadas y deformes, que dan al ave una apariencia peculiar debido a una condicin gentica heterocigtica. Los apareamientos entre "rastreras" produjeron 775 rastreras y 388 normales. a) Es aceptable la hiptesis de una proporcin 3:1? b) Se aproximan mejor los datos a una proporcin 2:1? c) Qu fenotipo se producira con el gen "rastrero" en estado homocigtico? 4) Las gallinas Black Langshan tienen patas con plumas, mientras que las patas de las Buff Rock no son emplumadas. De su cruzamiento se obtiene una F2 integrada por 15 individuos con patas emplumadas y slo 1 sin plumas en las patas. Diagrame los cruzamientos y explique los resultados.

3. DIVISIN CELULAR Bibliografa:

Alberts y col. Cap. 17. Secciones: La estrategia general del ciclo celular, Cap. 20 Clulas germinales y fertilizacin: Beneficios del sexo, Meiosis Griffiths y col Cap.3: Mitosis y meiosis, Comportamiento paralelo de genes autosmicos y cromosomas, Gentica mendeliana y ciclo de vida. 1) Enumere al menos 4 diferencias entre: a) mitosis y meiosis I b) mitosis y meiosis II c) meiosis I y meiosis II Considere las diferencias tanto en el mecanismo como en los productos finales.

2) El grfico representa la variacin del contenido de ADN durante el ciclo vital de una clula: Qu ocurre en el intervalo de tiempo de 2 a 3? Cmo se denomina la fase que transcurre entre 3 y 4? Este grfico corresponde a un ciclo mittico o a uno meitico? Si la cantidad de ADN no se ha modificado al final del ciclo, qu utilidad tiene este proceso? 3) Si C es la cantidad de ADN contenida en un gameto, cul ser la cantidad de ADN (C, 2C, 4C), cromosomas y cromtidas en los siguientes perodos del ciclo celular en la especie humana? Marque con H D si la clula es haploide o diploide.

valor C Ncromosomas N cromtidas

1 premittica G2 premittica Profase mittica Metafase mittica Telofase mittica (en c/ncleo) Espermatozoide Profase meitica I leptoteno Metafase meitica I Anafase meitica I Metafase meitica II Telofase meitica II (cada polo) Interfase premeitica (antes S) Interfase premeitica (despus S)

H/D

4) Una especie animal tiene 2n cromosomas:Qu proporcin de las gametas formadas tendrn los centrmeros: i) de origen paterno nicamente; ii) de origen materno nicamente; iii) de origen materno y paterno simultneamente? 5) Una cigota posee un 2n = 8; en el primer par de cromosomas homlogos uno de los miembros presenta un abultamiento ("knob") intersticial; en el segundo par uno de los miembros posee un satlite en posicin terminal, en el tercero uno de los cromosomas presenta un segmento heterocromtico terminal y el cuarto par es acrocntrico. Realice un esquema de las siguientes etapas de la mitosis y meiosis. a) metafase mittica; b) metafase de meiosis I; c) metafase de meiosis II; d) anafase de mitosis; e) anafase de meiosis I (dibuje los ordenamientos posibles en anafase I e indique qu probabilidad tiene cada uno de producirse); f) anafase de meiosis II 6) Otra cigota posee un complemento de dos pares de cromosomas homlogos A y a, B y b: a) cules de los siguientes complementos cabra esperar en las clulas somticas durante el crecimiento: AaBB, AABb, AABB o aabb? b) Podra encontrarse ms de una combinacin? Cuando este individuo llegue a adulto: c) cules de las siguientes combinaciones de cromosomas cabra esperar en las gametas?: i) Aa, AA, aa, Bb, BB, bb; ii) Aa, Bb; iii) A, a, B, b; iv) AB, Ab, aB, ab; v) Aa, Ab, aB, Bb. 7) Dibuje la configuracin de los bivalentes en Paquitene, Diplotene, Diacinesis y Metafase I de una especie con 2n= 4. Considere que uno de los pares es metacntrico y muestra regularmente durante toda la meiosis un quiasma intersticial a cada lado del centrmero y el otro par es acrocntrico con un nico quiasma intersticial en el brazo largo. Use lpices de colores para diferenciar a los dos homlogos. 8) Los conceptos de divisin reduccional y divisin ecuacional se refieren a: fenmenos citolgicos o genticos? Hay paralelismo entre dichos aspectos (citolgico y gentico)? I II A Si se tiene un par de cromosomas homlogos acrocntricos donde se ubican A los alelos A/a, como indica la figura. c) En qu estadio efecta reduccin el segmento que contiene el gen A si a ocurre entrecruzamiento en la regin I (entre el centmero y el gen)? d) Realice el mismo razonamiento si el entrecruzamiento ocurre en la rea gin II (entre el gen y el telmero). I II

4 y 5. MAPEO CROMOSMICO Bibliografa: Griffiths o cualquier otro libro de gentica. Gua Terica: 1) Cmo y cundo se encontr el fenmeno de ligamiento entre genes? Por qu contradice las leyes de Mendel? R: A principios del siglo XX se encontraron genes que no respondan a la segunda ley de Mendel. En ese momento no se conoca la base fsica (teora cromosmica de la herencia) pero el descubrimiento del ligamiento ayud mucho a postular esta hiptesis, luego comprobada. Actualmente se sabe que, en los organismos diploides, hay 2 copias homlogas de cada cromosoma que pueden llevar alelos distintos del mismo gen. Estas copias segregan en igual proporcin que las gametas, de acuerdo a la primera ley de Mendel. Si consideramos 2 genes ubicados en cromosomas diferentes, stos segregarn al azar, obtenindose proporciones similares de gametas parentales y recombinantes (primera ley de Mendel). Si, en cambio, los 2 genes se ubican en el mismo cromosoma, no segregan en forma independiente sino que tendern a segregar juntos. Se dice, entonces, que estos genes se encuentran ligados. En este caso las gametas sern nicamente parentales, no formndose recombinantes. Es como si los dos genes fueran en realidad uno slo. Sin embargo, durante la primera fase de la meiosis, se producen entrecruzamientos entre cromosomas homlogos que resultan en un intercambio fsico como lo demostraron Creighton y Mc Clintock en 1931 utilizando marcadores citolgicos combinados con marcadores genticos. Estos entrecruzamientos se visualizan como quiasmas a nivel citolgico. Si imaginamos una distribucin aleatoria de los entrecruzamientos a lo largo del cromosoma, la probabilidad de que ocurra un entrecruzamiento es aproximadamente proporcional a la distancia que separa a los genes en el cromosoma: cuanto ms separados se encuentren, ms probable es que ocurra un entrecruzamiento entre ellos. En consecuencia, determinando la frecuencia de recombinantes, podemos obtener una medida de la distancia entre los genes ligados. Esta es la base para la construccin de mapas genticos. El mapeo gentico se realiza mediante anlisis de cruzamientos planificados, pruebas de progenie y anlisis de pedigr. Es decir, mediante el anlisis comparativo de fenotipos recombinantes. El mapeo fsico se realiza mediante el anlisis de clones genmicos (mediante mapeo de contigs de los cuales se conocen, por ejemplo, sus mapas de restriccin), combinado con secuenciacin nucleotdica, por hibridacin in situ, u otros mtodos que no involucran cruzamientos y anlisis de recombinantes. En este caso, las distancias se calculan en nucletidos o mediante medicin de cromosomas. 2) Cundo se dice que 2 genes estn en acoplamiento o en repulsin? R: Alelos mutantes ubicados en el mismo cromosoma o separados en los 2 cromosomas homlogos. Acoplamiento: AB/ab; Repulsin: Ab/aB 3) Qu relacin existe entre ligamiento y mapeo? R: Establecer el ligamiento y calcular la distancia permite en base a las distancias relativas de muchos genes establecer un mapa gentico. 4) Cul es la base fsica del mapeo gentico? Qu relacin tienen los estudios de mapeo gentico con los entrecruzamientos y quiasmas que se observan en las meiosis? Qu similitutes, relaciones y diferencias existen entre el mapeo gentico y el mapeo fsico o genmico? R: Los genes son segmentos de ADN pertenecientes a una larga molcula que constituye un cromosoma. Los recombinantes para genes pertenecientes al mismo cromosoma surgen porque en la meiosis hay entrecruzamientos (que se pueden visualizar microscpicamente en la forma de quiasmas) entre cromosomas homlogos. El mapeo gentico se realiza mediante anlisis de cruzamientos planificados, pruebas de progenie y anlisis de pedigr. Es decir, mediante el anlisis comparativo de fenotipos recombinantes. El mapeo fsico se realiza mediante el anlisis de clones genmicos con mapeo de contigs (de los cuales se conocen, por ejemplo, sus mapas de restriccin), combinado con secuenciacin nucleotdica, por hibridacin in situ, u otros mtodos que no involucran cruzamientos y anlisis de recombinantes. Las distancias se calculan en nucletidos o mediante medicin de cromosomas. El orden fsico de los genes en el cromosoma coincide con el orden que surge de su mapeo gentico. Existe, adems, una correspondencia proporcional relativa entre distancia gentica y distancia calculada en nucletidos, aunque la correspondencia no es absoluta y vara en distintas partes del cromosoma. Es decir, una unidad de mapa significa un nmero distinto de nucletidos cerca del centrmero que cerca del telmero, porque las frecuencias de entrecruzamiento (formacin de quiasmas) son distintas. La vecindad de regiones heterocromticas tambin afecta la frecuencia de aparicin de quiasmas y la relacin absoluta entre distancia gentica/distancia fsica. 5) Qu es y cmo se hace una prueba de 2 puntos? Qu significa la palabra punto en prueba de 2 puntos? Implica ligamiento? R: Se estudia el ligamiento en cruzamientos de dobles heterocigotas por dobles recesivos (Ver libro para una explicacin ms completa) 6) Qu es una unidad de mapa? Es sinnimo de centiMorgan, frecuencia de recombinacin o de unidad de recombinacin? A cuntos nucletidos equivale una unidad de mapa? R: Se define como unidad de mapa a la distancia entre genes (o marcadores) para los cuales se observa un recombinante con una probabilidad de uno en 100 productos de la meiosis. Una unidad de mapa sera, entonces, equivalente a una frecuencia de recombinacin del 1%. Es decir, que se calcula mediante la frmula del % de recombinantes sobre totales y es sinnimo de unidad de recombinacin. Los cM tienen otra frmula de clculo que toma en cuenta la posible existencia de dobles entrecruzamientos y la interferencia. No siempre coinciden. Como se mencion, la unidad de mapa gentico vara (en nmero de nucletidos) segn la especie, el cromosoma y localizacin dentro del mismo cromosoma. Groseramente, 1 cM equivale a 1 megabase (un milln de pares de bases) en humanos. 7) Pueden 2 genes estar ligados a ms de 50 u.m.? Por ejemplo, pueden estar a una distancia de 200 u.m.? Qu es un grupo de ligamiento y a qu se corresponde fsicamente?

R: Primero, hay que ver de dnde sale este lmite de 50 u.m. Al momento de la meiosis, cada cromosoma del par de homlogos se halla conformado por 2 cromtides. Es decir, al momento del apareamiento en el que se produce el entrecruzamiento tenemos 4 cadenas de ADN vecinas. Sin embargo, slo 2 de las 4 hebras participa en el entrecruzamiento, por lo que, como resultado, slo la mitad de las gametas podrn ser recombinantes. O sea que entre 2 genes ubicados en el mismo cromosoma que estn lo suficientemente lejos como para que siempre exista un entrecruzamiento entre ellos, la mxima proporcin de recombinantes ser del 50%. Por lo tanto, 2 genes pueden estar ligados a ms de 50 u.m., pero no lo puedo determinar mediante una simple prueba de 2 puntos entre ambos genes analizados, porque la mxima distancia determinable por este mtodo es de 50 u.m. Necesito un gen puente (o varios) para poder integrar a los dos genes en el mismo grupo de ligamiento. Por lo tanto, un grupo de ligamiento est formado por el conjunto de genes (o marcadores genticos) que se comportan como ligados entre s en forma directa o a travs de otros genes puente. El grupo de ligamiento se corresponde a todos los genes o marcadores genticos localizados en el mismo cromosoma o molcula de ADN. Se llama desequilibrio de ligamiento al fenmeno que se da entre dos alelos de dos genes distintos que se heredan juntos con una probabilidad mayor que la dada por el azar. Esto se debe en general a que los genes estn ligados. 8) Qu es una prueba de 3 puntos? En una prueba de 2 puntos se puede establecer un orden de los genes? y en una de 3? hasta qu punto? R: Cuando se estudia el ligamiento simultneo entre 3 genes (por ej. A, B y C), se puede establecer un orden ya que (suponiendo que el orden sea ABC), la distancia (prueba de 2 puntos) entre A y C es aproximadamente igual a la suma de la distancia entre A-B + B-C. En una prueba de 2 ptos. no se puede establecer un orden, slo distancias relativas. En la de 3 s, pero no se sabe si los 2 puntos extremos (A y C) estn a la derecha o a la izquierda. 9) Porqu no hacer 2 o 3 pruebas de 2 puntos? Dan distintos resultados? Por qu? Qu es interferencia y cmo se calcula el coeficiente de coincidencia? R: Pueden dar resultados distintos por el fenmeno de subestimacin de dobles entrecruzamientos y/o de interferencia. En el ejemplo de arriba, la distancia entre A y C (medida como prueba de dos puntos) suele ser menor a la de A-B + B-C. Esto se debe a la presencia de de entrecruzamientos dobles entre A y C cuyo resultado final es la formacin de gametas parentales AC y ac para estos 2 genes que se computan como No recombinantes, cuando en realidad lo son. Si nosotros no hubiramos mapeado el gen B nunca hubiramos detectado estos dobles entrecruzamientos (ni triples, ni cudruples). Si extendemos este pensamiento, en realidad tampoco sabemos si entre A y B hubo entrecruzamientos dobles y si tambin estamos subestimando la proporcin de recombinantes entre ellos. Cuanto ms grande la distancia entre 2 marcadores, ms inexacta ser la frecuencia de recombinantes como medida de la distancia entre los genes. Adems, est el fenmeno de interferencia que se relaciona con un impedimento estrico o fsico que reduce la probabilidad de que se produzcan quiasmas muy cercanos entre s (se interfieren) por lo que el nmero de recombinantes entre genes muy ce rcanos entre s es menor al probabilsticamente esperado. Algunas funciones de mapeo ms refinadas, toman en cuenta este fenmeno. Estas funciones se derivan de la funcin de Poisson y son, fundamentalmente, dos: la de Haldane (que considera los dobles entrecruzamientos pero no considera la interferencia) y la de Kosambi (que considera ambas). Por lo general, todos los mapas que se publican se basan en la funcin de Kosambi. 10) Por qu, en una prueba de 3 puntos, realizar un cruzamiento prueba facilita el anlisis? R: Porque el cruzamiento con el homocigota recesivo permite concentrarse directamente en las gametas de la F1 permitiendo distinguir las gametas que portan alelos recesivos de dominantes mediante una sencilla relacin de 1 a 1. Esto es particularmente til para genes en los que no se puede distinguir el fenotipo heterocigota del homocigota dominante. Toda la progenie segregante ser homocigota recesiva o heterocigota (no habrn homocigotas dominantes) 11) Es sencillo aplicar los sistemas arriba mencionados para mapeo en humanos? Por qu? Es posible utilizar informacin de pedigr para hacer estudios de ligamiento? Existen otros mtodos alternativos de mapeo? En qu consiste el mtodo de mapeo con hbridos somticos (fusin interespecfica de clulas)? En qu consiste la hibridacin in situ? R: No se pueden planificar cruzamientos en humanos, obtener lneas puras (depresin por e ndocra) y las progenies son poco numerosas (estadsticamente problemticas). El mapeo preciso y fino se realiza mediante tcnicas fsicas como la utilizacin de hbridos somticos (libro). Lo que se utiliza es la informacin de pedigr con funciones de mapeo basadas en Lod score. El ndice Lod score es la medida estadstica del ligamiento. Cuando las familias son numerosas y se encuentran individuos recombinantes en ellas, el anlisis es simple. Pero esto no siempre es as. Las familias con enfermedades interesantes no suelen ser numerosas, y no sirven para realizar un anlisis estadsticamente significativo. Por lo tanto, se deben tomar los datos de varias familias. El lod score, Z, es el logaritmo de la probabilidad de que dos loci estn ligados respecto de que no lo estn. La probabilidad general de ligamiento en un grupo de familias, es el producto de las probabilidades de cada familia individual, por lo que los lods scores al ser logaritmos permiten que se sumen los datos para esas familias. 12) Qu significa ndice Lod o Lod score? En qu casos se utiliza?Por qu en los ltimos aos prcticamente todos los estudios de mapeo gentico en todas las especies se realizan con marcadores moleculares? R: Probabilidad de ligamiento (ver Griffitts). El Lod es el logaritmo en base 10 del cociente entre: Probabilidad de obtener los datos observados si los loci estuvieran ligados/ Probabilidad de obtener los datos observados si no estuviesen ligados. Por ej. un Lod = 3 para un par de genes indica que es mil veces ms probable que los genes estn ligados respecto a que no lo estn. Programas como el MapMaker tambin utiliza Lod Scores para comparar diferentes rdenes posibles entre varios genes. Al orden ms probable le asigna un 0 y a los restantes le asigna valores negativos. Porque permiten una cobertura del genoma que no permiten los caracteres morfolgicos. 13) Qu similitudes y diferencias existen entre los clculos de distancias usando las frmulas vistas arriba y los algoritmos de programas como el Mapmaker?

R: Las frmulas son un distintas porque los algoritmos del Mapmaker estn basados en Lod score (clculo de probabilidades). Estos clculos probabilsticos estn basados, sin embargo, en el mismo concepto y la misma lgica que existe atrs de las funciones de mapeo en pruebas de dos o tres puntos. Sin embargo, son ms poderosas, porque al tratarse de una prueba de muchos puntos simultneamente, permite afinar mucho ms el clculo minimizando errores debidos a dobles entrecruzamientos e interferencias. Problemas: MAPEO CROMOSMICO I 1) En el gusano de seda Bombix mori, el gen recesivo l produce color amarillo limn en la larva, mientras que el d o m i n a n t e L da color blanco. El g e n dominante B, produce bandas negras transversales, mientras que el recesivo b no las produce. Ambos loci estn ligados y su distancia gentica es de 30 unidades de recombinacin. Se cruz una hembra homocigota blanca y con bandas negras con un macho amarillo sin bandas negras. Los machos de la F1 se utilizaron para fecundar hembras amarillas y sin bandas negras. Qu segregacin fenotpica y genotpica se obtuvo? 2) Los alelos recesivos bw en homocigosis producen ojos marrones en Drosophila, en contraste con el color salvaje rojo dominante. El anlisis del polimorfismo para el largo de fragmentos de restriccin (RFLP) para una regin particular de ADN revela dos tipos de fragmentos (I y II). Moscas de ojos marrones con ADN tipo I fueron cruzadas con moscas salvajes con ADN tipo II. Las moscas de la F1 tienen ojos rojos y exhiben tanto el patrn I como el II. Se realiza un cruzamiento prueba y la progenie registrada para el color de ojos y el tipo de fragmento fue como sigue: Fenotipo frecuencia absoluta a) Indique si ambos genes estn ligados. ojos rojos, tipo I + II 184 b) En el caso de que estn ligados indique la distancia genojos rojos, tipo I 21 ojos marrones, tipo I 168 tica entre ambos marcadores. ojos marrones, tipo I + II 27 total progenie 400 3) a) En Drosophila y para caracteres autosmicos, cuando se quiere realizar un cruce de prueba se utilizan hembras heterocigotas y machos homocigotas recesivos Por qu no se hace el cruzamiento recproco? b) En esta especie se encuentra un gen letal a que produce, en homocigosis, la muerte de la larva, y est ligado con un 40% de entrecruzamiento al locus B/b. El alelo B produce un abdomen deforme y el b un abdomen normal. Indique la segregacin fenotpica y genotpica observable en los adultos de la progenie de un cruzamiento entre un macho heterocigota en fase de acoplamiento y una hembra heterocigota en fase de repulsin. 4) Una mosca de la fruta con genotipo BR/br es retrocruzada con una de genotipo br/br. En el 84% de las meiosis no ocurren quiasmas entre los pares de genes ligados; en el 16% ocurre un solo quiasma entre ellos (recuerde que quiasma y frecuencia de recombinacin no son sinnimos). Qu porcentaje de la progenie ser Bbrr? a) 50%; b) 4%; c) 84%; d) 25%; e) 16%. Explique. 5) En la descendencia de un cruzamiento prueba de un triheterocigota se obtuvieron los siguientes resultados: Se desea saber: Fenotipos Frec. obs Fenotipos Frec. obs a) la fase del genotipo parental; ABD 50 aBd 600 b) el locus central; ABd 32 abD 28 c) las distancias genticas; AbD 538 abd 62 d) el valor de la interferencia. 6) En la Tierra Media, es famoso el semielfo Elrond, seor de Rivendel. Su padre era elfo y su madre, una humana. Los elfos tienen sus orejas puntiagudas (P), ausencia de glndulas adrenales (A) y el corazn del lado derecho (R). Todos estos alelos son dominantes sobre los alelos humanos. Estos genes son autosmicos y estn ligados, tal como se muestra en el mapa de ligamiento: P/p A/a R/r _l___________l____________l__ l__15 um____l___20 um____l Si Elrond se casa con una humana y no existe interferencia (gnica), Qu proporcin de sus hijos mostrarn: a) Apariencia lfica para los tres caracteres? b) Apariencia humana para los tres caracteres? c) Orejas y corazn lficos, pero adrenales humanas? d) Orejas lficas pero corazn y adrenales humanas? 7) En una cierta planta diploide, los loci A, B y D se encuentran ligados de la siguiente manera:

10
20 um 30 um

Ud. dispone de una planta (llmela parental) con la siguiente constitucin gentica: Abd / aBD a) Asumiendo que no hay interferencia, se desea saber si ocurre autofecundacin, qu proporcin de la progenie tendr el genotipo abd/abd ? b) Asumiendo que no hay interferencia, si la planta parental es cruzada con una cuyo genotipo es abd/abd cules sern las clases genotpicas encontradas en la progenie? Cules sern sus frecuencias en una progenie de 1000 individuos? 8) Un genetista quiere mapear los genes A, B, J, D y E mediante dos cruzamientos de tres puntos. E n a m b o s u t i l i z a l n e a s p a r e n t a l e s p u r a s y l u e g o cruza los individuos de la F1 con individuos homocigotas recesivos. El fenotipo de la progenie se indica en las siguientes tablas. Por trabajos previos el investigador sabe que los genes D y E tienen segregacin independiente entre s. a) Determine el genotipo de las lneas parentales utilizadas en ambos cruzamientos. b) Elabore el mapa cruzamiento 1 cruzamiento 2 correspondiente a estos 243 62 ABJDE 316 ABJdE 31 ABJDE ABjDe 5 genes y determine, si 130 17 155 46 AbJdE AbJDE ABJDe aBJDe es posible, la distancia 237 58 abJdE 314 abJDE 39 aBjDe aBJDE entre ellos. 140 13 165 34 aBJDE aBJdE aBjDE ABjDE c) Existe interferencia?

MAPEO CROMOSMICO II

Fenotipo Sonda

9) El gen de resistencia al virus del mosaico del tabaco se ha PTG9 tratado de mapear en tomate respecto a marcadores molecu--lares que detectan RFLP. Se supone que existe un alelo que PCD3 confiere resistencia, dando un fenotipo totalmente resistente --en homocigosis, y un fenotipo parcialmente resistente en PXY heterocigosis. Existe una variedad de Lycopersicum peruvia----num (especie emparentada al tomate) totalmente resistente al Fenotipo 13 20 virus pero con otras caractersticas agronmicas indeseables; Sonda R R y otra que es totalmente susceptible al virus pero potencial- PTG9 ----mente atractiva agronmicamente. Al cruzar individuos de ambas variedades se obtuvieron plantas hbridas F1, parcial- PCD3 mente resistentes. Se presentan los resultados de RFLP, para ----tres marcadores moleculares diferentes (PTG9; PCD3; PXY), ----PXY de los individuos parentales y de 20 individuos originados --por autofecundacin de la F1 (F2), acompaados de los resultados fenotpicos observados en los ensayos biolgicos con el virus: R (totalmente resistente), P (parcialmente resistente) y S. a) Calcular el porcentaje de cosegregacin del gen de resistencia respecto de cada gen marcador e indicar cul de estas 3 sondas (pTG9, pCD3, pXY) utilizara Ud. como marcador RFLP para seguir la herencia del gen de resistencia al virus en un proceso de mejoramiento a travs de cruzamientos controlados. b) Qu ventajas tendra usar el marcador elegido para testar resistencia al virus, en lugar de hacer el ensayo biolgico correspondiente? c) Cuntas generaciones de retrocruza (contra la variedad susceptible) llevara, en promedio, tener una variedad resistente al virus pero con un 99% del genoma de la variedad agronmicamente interesante? d) Qu individuos F2 elegira para la primera retrocruza, para tratar de acortar el n de generaciones calculado en c)? 10) Para ciertas enfermedades no se cuenta an con una sonda del gen implicado, sin embargo es posible hacer el diagnstico por un mtodo indirecto. Siendo requisito contar con marcadores polimrficos ligados a la enfermedad. Indique el riesgo gentico (probabilidad de estar afectado) para los individuos en gestacin (diagnstico prenatal) en el siguiente pedigr, en el que se indican los fenotipos para el Sndrome de Marfan, enfermedad autosmica dominante, (smbolos sombreados) y un marcador situado a 10 cM del locus de la enfermedad (A1, A2). 11) Se lleva a cabo el anlisis de ADN en una familia numerosa en la que algunos miembros estn afectados por una enfermedad rara autosmica dominante de manifestacin tarda (hacia los 40 aos). Se extrae el ADN genmico de todos los miembros de la familia, se digiere con HaeIII y los fragmentos obtenidos se separan por tamao en

Padres 1 R S P ------- ----- ------------- --10 11 12 R P P --- --- ------- ----- --- ----- ----- ---

2 P ---------

3 4 5 6 7 8 R R P R R P --- --- --- --- --- ----------- --- --- --- --- --------- ----- --- --14 15 16 17 18 19 S R S R S P --- ----- --- ------- --- --- --------- ----------- --- --- --- ----- ----- ---

9 R

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un gel de agarosa. Mediante la tcnica de Southern se transfieren dichos fragmentos a una menbrana de nylon, se hibrida con una sonda radiactiva (procedente de un fragmento de ADN humano de secuencia nica clonado de un vector bacteriano) y se obtienen los resultados indicados en la autorradiografa (ver al lado del pedigr).
I1 I2 II1 II2 II3 II4 II5 II6 II7 II8 II9 II10 II11

Explique la variacin obtenida con la sonda dibujando la regin cromosmica correspondiente. a) Cmo se explica el tercer hijo? 3 kpb b) Con qu probabilidad aparecer un individuo enfermo 1 kpb con el patrn de restriccin de la madre sana? c) Tendran alguna utilidad estos resultados para aconsejar a las personas de esta familia?

4 kpb

12) Antes que aparecieran los microsatlites, los RFLP se utilizaron, en el pasado, como marcadores genticos para la identificacin de parentesco. En ciertos casos, p.ej. verificacin del vnculo abuelo-nieto en ausencia de los padres, este tipo de pruebas constituyen la nica evidencia vlida de que se dispone. El siguiente problema representa una simplificacin de su aplicacin a este tipo de cuestiones, que tomaron importancia en la restitucin de hijos de personas desaparecidas por la ltima dictadura (1976-1983) a sus legtimas familias. Existen seis nios de los cuales se sabe con seguridad que slo tres pertenecen a dos familias que no guardan ninguna relacin entre s (son de distintas ciudades). De ambas familias slo viven los abuelos probables. Utilizando una sonda para un gen con un alto polimorfismo para una enzima de restriccin (existen 4 alelos en la poblacin) se revelan los Southern blots de ADN genmico de los seis nios y de los posibles abuelos, los que se muestran en el siguiente grfico: a) Definir los haplotipos para cada individuo analizado. b) Cules nios pertenecen, con alta probabilidad, a cada familia? c) Para cules esta experiencia no es suficiente para decidir a qu familia pertenecen? d) Cules, con seguridad, no pertenecen a ninguna de las dos? e) Cree que el hecho de no considerar la existencia de eventos de recombinacin (entre cromosomas homlogos) dentro del gen marcador en las meiosis de abuelos y padres puede llevar a conclusiones errneas? 13) Una pareja afligida llega a Ud. para que le de asesoramiento gentico. Su segundo hijo falleci poco despus de nacer debido a una enfermedad gentica y la madre esta nuevamente embarazada. El hijo fallecido ha sido el segundo en la familia afectado por la enfermedad (el primer afectado ha sido un hermano de su abuela paterna). Ud. dispone, a travs de estrategias de clonado, de una sonda de la regin cromosomal donde se ubica el gen involucrado en esta enfermedad autosmica recesiva. Usando esa sonda, pudo construir un mapa de restriccin de dicha regin, y adems, obtuvo datos que muestran que, en la poblacin, existe polimorfismo para sitios reconocidos por una enzima de restriccin E (indicado como +/- en la figura). Mapa de restriccion del gen que hibrida con la sonda:

Ud. aisl DNA de linfocitos de los abuelos y de los miembros vivos de la familia y ha obtenido los correspondientes fragmentos de restriccin visualizados en el esquema del Southern. Ud. est ahora en condiciones de hacer un diagnstico prenatal a partir de clulas fetales. Qu patrn de restriccin indicara que el feto hered la enfermedad (dibjelo)?

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14) El mosquito transmisor del dengue (Aedes aegypti) es una plaga endmica de climas tropicales, aunque desde hace pocos aos est extendiendo su distribucin hacia Buenos Aires. Se encontr una variante de mosquito que no transmite el temible virus. El carcter se comport como dominante mostrando un patrn de herencia mendeliana simple. Con el objeto de introducir este carcter en la poblacin, comenzaron a realizarse cruzamientos. Como el carcter es muy difcil de evaluar porque requiere (para su anlisis) que el mosquito Pares de T NT hembra pique huspedes infectados con el virus, se analizaron en cada generacin bases los patrones de 50 microsatlites con el fin de determinar ligamiento entre alguno de ellos y el carcter de resistencia. Slo uno de los marcadores (m25) mostr liga- 258 pb miento a este carcter a una distancia de 5 cM. Los patrones microsatlites observados cuando se utiliz este marcador en los genotipos homocigotas no-transmisor 236 pb (NT) y transmisor (T), respectivamente, fueron los que se ven en la figura (ver arriba). Si se cruzan las dos variantes de mosquitos (no-transmisores x transmisores: generacin F0) se obtienen individuos heterocigotas con fenotipo no transmisor (F1). a) Qu patrones de microsatlites y fenotipos de transmisin y no-transmisin presentarn los descendientes de una F1 cruzada por la lnea parental transmisora? b) en qu proporciones? c) Como se explic ms arriba, para la determinacin de los fenotipos slo se pueden utilizar las hembras. Cmo hara si quiere evaluar a los machos de la retrocruza? Qu cruzamientos hara y qu resultados esperara? 15) Se desea hallar un marcador molecular asociado al locus que determina resistencia al barrenador del tallo en maz (Diatraea saccharalis) para utilizarlo en seleccin indirecta. Por esta razn se analiz el patrn de bandas generado por 5 RAPD utilizando una poblacin de 23 lneas recombinantes endocriados provenientes de un cruzamiento entre un padre resistente por otro sensible al ataque del insecto.

RESISTENTES
A B C D E

SENSIBLES
a) Qu marcadores son polimrficos? b) Qu marcadores estn ligados al locus y cules no? c) Calcule la distancia gentica. d) Indique el/los marcadores para los que, con estos datos, no puede afirmar que estn ligados (o no).

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 1314 15 16 17 18 19 20 21 22 23

16) Se realiz el anlisis de ADN de una familia numerosa en la cual ocurrieron casos de una enfermedad autosmica dominante letal de manifestacin tarda (alrededor de los 40 aos). El mtodo aplicado fue el del anlisis de segregacin de RFLP utilizando la sonda denominada T4. A continuacin se muestra un esquema del autorradiograma de los individuos analiza dos alineado con la genealoga correspondiente. Los individuos afectados se representan con smbolo lleno. a) Proponga los genotipos ms probables para el sndrome y el marcador molecular para cada individuo de la genealoga b) De acuerdo con estos resultados, se podra suponer ligamiento entre el marcador molecular y la enfermedad? Justifique su respuesta. c) Si un investigador demuestra que el lod score entre estos dos caracteres (bandas y enfermedad) es mayor que 3, cmo explicara la ocurrencia de un enfermo que presentara slo la banda de 5kb? d) Si otro integrante de la familia de 20 aos de edad quisiera saber el riesgo de tener la enfermedad qu estudio le hara y cmo interpretara los resultados? Ln Crom. humanos. presentes sonda T4 y los productos A, B y C. cel 2 3 4 5 6 7 8 9 A T4 B C e) Cuando se analizaron lneas celulares hbridas hombreratn se obtuvieron los siguientes resultados para la sonda 23 + + + + - - - ? - + - + 34 + + - - + + - ? + - - + T4 y tres productos metablicos A, B y C. Indique en los casos en que sea posible la ubicacin cromo- 41 + - + - + - + ? + + - + smica de la secuencia homloga a la sonda T4 y los productos A, B y C. 6.- MUTACIONES Guia de estudio 1) Qu son: - mutacin inducida,- mutacin espontnea, - clastgeno, - mutacin somtica, - mutacin germinal, mutacin letal, - mutacin condicional, - mutacin polar, - reversin?. 3) Describa un proceso selectivo para aislar microorganismos revertantes de auxtrofos. Cmo se puede demostrar que esas mutaciones revertantes son previas al momento del contacto con el agente selectivo? 4) Defina los siguientes conceptos y d ejemplos: - transicin (los 4 casos posibles) - transversin (los 8 casos posibles) - mutacin silenciosa - mutacin neutra - mutacin por corrimiento del marco del lectura (o "frame-shift") -

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mutacin por sustitucin "missense" - mutacin por sustitucin "nonsense" - mutacin supresora intragnica - mutacin supresora extragnica 5) Diferencie los siguientes mecanismos de mutacin espontnea: - errores en la replicacin del ADN. - lesiones espontneas 6) Con relacin a los errores en la replicacin del ADN, con qu base se aparean por puentes de hidrgeno los siguientes nucletidos: - la forma imino de C? - la forma enol de T? - la forma imino de A? - la forma enol de G? 7) Indique dos tipos de lesiones espontneas que, de no ser reparadas, pueden generar mutaciones. 8) Explique la causa por la cual las posiciones de 5-metilcitosina constituyen "hotspots" para transiciones C T G A. Cul es la funcin de la uracil-DNA glicosidasa? Cun especfica es la uracil-DNA glicosidasa? Por qu no sera ventajoso para una clula tener uracilo como constituyente normal en su DNA? Qu significado evolutivo tiene el hecho de que en eucariotas las zonas no codificantes tienen una mayor cantidad de A-T que las codificantes? 9) Describa un proceso selectivo para aislar microorganismos revertantes de auxtrofos. Cmo se puede demostrar que esas mutaciones revertantes son previas al momento del contacto con el agente selectivo? 11) Adems de permitir el estudio del proceso mismo de mutacin, las mutaciones pueden ser tiles en algunos casos. D ejemplos de esos casos. 12) Por qu hay que preocuparse por el agujero de ozono? Explique. 13) Qu procedimiento y sistema selectivo se le ocurren a Ud. para obtener plantas resistentes a una sustancia txica? 14) Explique el modo de accin de los siguientes mutgenos y el tipo de mutacin (a nivel molecular) que producen: - los anlogos de bases (ej., el 5-bromouracilo) - los modificadores de bases, como los agentes alquilantes (ej., etilmetanosulfato y nitrosoguanidina) - aflatoxina B1 - los agentes intercalantes (ej., proflavina, naranja de acridina, bromuro de etidio). 15) Mencione los mecanismos biolgicos de naturaleza enzimtica ms importantes en la reparacin del ADN daado. 16) Explique en qu consiste el test de Ames. Por qu se usan varias cepas mutantes de Salmonella? 17) Cules son las diferencias entre mutaciones somticas y germinales? Problemas: 1) El siguiente segmento de RNAm codifica un segmento intersticial de un polipptido (los diferentes codones aparecen subrayados): 5' ......AAU-CUA-UUC-UCU-AUU-AAA-ACC .....3' a) indique una posible mutacin en el DNA que d lugar a un RNA que no origine ninguna alteracin en la protena codificada.b) indique una posible mutacin en el DNA que d lugar a un RNA que origine un cambio de un aminocido por otro en la protena codificada.c) indique una posible mutacin en el DNA que d lugar a un RNA que origine un corrimiento del orden de lectura en la protena codificada.d) indique una posible mutacin en el DNA que d lugar a un RNA que origine la interrupcin de la sntesis de la cadena proteica. Para cada una de las respuestas utilice el cdigo gentico 2) Indica una posible mutacin en el ADN que haya podido originar los mutantes 1, 2 y 3 de la secuencia normal que se detalla a continuacin secuencia normal N------Ile-Ala-Tyr-His-Asn-Lys-Tyr------C Mutante 1 N-----Ile-Ala-Tyr-Asn-Asn-Lys-Tyr-----C Mutante 2 N---Ile-Ala-Tyr-Asn-Asn-Lys-Tyr---C Mutante 3 N---Ile.Ala- COOH 3) Un hombre (H.S.), empleado durante varios aos en la planta nuclear de Springfield, se convierte en padre de un varn hemoflico (B.S.), el primer caso en el rbol genealgico de su familia como en el de su esposa (M.S.). Otro trabajador de la misma planta, en la que ha estado durante varios aos, tiene un hijo enano acondroplsico, tambin el primer caso en su familia y en la de su esposa. Los dos compaeros de trabajo demandan a su empleador (Mr. M.B.). Como genetista, lo llaman a Ud. a declarar en el juicio. Qu dira Ud. en relacin a cada situacin? Aclaraciones: la hemofilia es recesiva ligada al cromosoma X. La acondroplasia es autosmica dominante. 4) El mutgeno etilmetano sulfonato (EMS), que se utiliza mucho en mejoramiento vegetal, induce transiciones GC / A-T. La aflatoxina B1, micotoxina que frecuentemente contamina alimentos, induce transversiones G-C / T-A. Diga si cada mutgeno es capaz de revertir codones mbar (UAG) y ocre (UAA) tipo salvaje. 5) Una mutante de E. coli defectuosa en el sistema de reparacin SOS es resistente a la mutagnesis por luz UV. Por otro lado, clulas de piel de un paciente que padece xeroderma pigmentosum (deficiencia de una de las enzimas reparadoras por escisin) son extremadamente propensas a morir (y desarrollar tumores) por exposicin al sol. Intente explicar la aparente contradiccin. 6) Ud. fue nombrado Jefe del Laboratorio de Bromatologa (Ministerio de Salud y Accin Social), encargado de otorgar permisos para la venta de nuevos productos alimenticios que se desean lanzar al mercado, luego de constatar su inocuidad. Ud. recibe, de manos de una empresa productora de alimentos, una muestra de un nuevo edulcorante artificial para analizar, junto con un proyecto de una impresionante campaa publicitaria planeada, y adems un inesperado cheque. Para realizar los anlisis, dispone de un cepario de Salmonella con 5 auxtrofos que no pueden sintetizar histidina, que se comportan frente a 3 mutgenos como se indica en la tabla:

Frecuencia de reversin his- his+ Mutantes HisEspontnea 5-Br-U aflatoxina br de etidio 1 0 0 0 0 2 10-8 10-5 10-8 10-8 3 10-8 10-8 10-5 10-8 4 10-8 10-8 10-8 10-5 5 10-5 10-5 10-5 10-5 a) Qu mutantes eligira para usar en el test de Ames con el objeto de evaluar la potencial mutagenicidad del nuevo edulcorante? b) Si la mezcla de las mutantes elegidas + muestra a analizar + extracto heptico produce crecimiento bacteriano en ausencia de histidina exgena (1 colonia de cada 10.000 bacterias plaqueadas), otorgara Ud. el permiso para la venta libre del edulcorante? 7) Una fbrica textil que trabaja con colorantes azoicos decidi evaluar si los efluentes de la produccin cumplen con los requisitos necesarios de pre-tratamiento y depuracin antes de ser descargados al ro. Para el mencionado propsito se tom una muestra ro abajo de dicho establecimiento y se utiliz el test de Allium cepa en raicillas de semillas recin germinadas. Se determinaron 4 grupos experimentales a los cuales se le administr: metil-metano sulfonato (control positivo: CP); agua (control negativo: CN) y dos concentraciones de la muestra (sin diluir=100% y diluidas al 10 %). Los resultados del anlisis de la mitosis en los pices meristemticos se presentan a continuacin: CN
ndice Mittico (IM) Nmero de Clulas con Microncleos (NM) Nmero de Clulas con Ruptura Cromosmica (NRC) Nmero de Clulas con Alteraciones (NTA) Nmero Total de Clulas Analizadas (TCA) 7.451.03 0 1 1 2871

14

CP
8,922,39 6 3 9 2865

100%
13,895,91 6 4 10 2928

10%
14,94 5,55 7 8 15 3212

a) Dado que el aumento o disminucin del IM es buen indicador para monitorear polucin ambiental analice los valores de la tabla y explique los resultados obtenidos b) Considera que las aguas residuales del establecimiento inducen alteraciones cromosmicas? c) Indique si los efluentes poseen algn efecto mutagnico o citotxico. 8)

9)

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7. MUTACIONES CROMOSMICAS
Bibliografa recomendada Griffiths y col. Captulos: 17- Chromosome mutation I: Changes in chromosome structure; 18- Chromosome mutation II: Changes in chromosome number Lacadena, J.R. Gentica General. Conceptos fundamentales. (1999) Editorial Sntesis S.A., Madrid. 13- Variaciones cromosmicas estructurales 14- Variaciones cromosmicas numricas

Gua de estudio 1) Por qu las hemoglobinas humanas constituyen un ejemplo acerca del papel evolutivo de las duplicaciones? 2) Cuando se dice que las inversiones son supresoras o reductoras de la recombinacin. Nos referimos: a) Al mecanismo citolgico o a su consecuencia gentica? b) A homocigotas o a heterocigotas estructurales? c) A la zona invertida o al cromosoma completo? d) A las inversiones paracntricas o a las pericntricas? 3) Enumere las dos caractersticas que considere ms importantes en las inversiones paracntricas y en las translocaciones recprocas. 4) En un heterocigoto estructural para translocacin recproca, podra originarse algn gameto viable a partir de los productos meiticos originados en una meiosis con orientacin adyacente? 5) Los grupos de ligamiento se mantienen constantes en cada especie? 6) El nmero diploide de un organismo es 2n= 12. Cuntos cromosomas tendr: a) un monosmico. b) un dismico.c) un tetrasmico d) un doble trismico. e) un nulismico.f) un haploide. g) un triploide.h) un autotetraploide. 7) Cul es la diferencia fundamental entre la aneuploida y la euploida? 8) Indique las diferencias entre auto y alopoliploides. 9) Debido al pequeo tamao del cromosoma IV de Drosophila melanogaster, las moscas pueden ser monosmicas o trismicas para este cromosoma y continuar siendo viables. a) Si una mosca dismica para el cromosoma 4 y homocigota para el gen recesivo eyeless de dicho cromosoma se aparea con una mosca monosmica para este cromosoma pero normal, cul ser el aspecto de la F1? b) Cules seran las proporciones fenotpicas que se obtendran al cruzar los distintos fenotipos de la F1? Problemas 1) En una seccin de cromosomas salivales de Drosophila las bandas tienen una secuencia 123.45678. El homlogo con el que este cromosoma debe aparearse tiene una secuencia: a)123.45876; b)123.445678; c)123.478; d)14.325678; e) 1234.45678; f) 124.35678. Qu clase de cambios cromosmicos han ocurrido en cada caso? 2) En el cromosoma X de D. melanogaster se observa la regin 7B constituda por 12 bandas. El carcter quetas chamuscadas se debe a la mutacin recesiva sn situada en Hembra Delecin Fenotipo de las hembras de el cromosoma X, efectiva en hemicigosis. Cruzando mala descendencia chos de quetas chamuscadas con hembras de fenotipo 1 7B1-7B8 50% con quetas chamuscadas normal, pero heterocigticas estructurales para diferentes y 50% normales deleciones que abarcan varios segmentos de la zona 7B 2 7B2-7B5 Todas con quetas normales del cromosoma X, se obtuvieron los resultados que figu- 3 7B7-7B12 Todas con quetas normales ran en la tabla: 4 7B5-7B10 50% con quetas chamuscadas Teniendo en cuenta que todas las deleciones estudiadas y 50% normales son letales en homocigosis y hemicigosis, y que las hembras utilizadas en los cruzamientos eran hijas de machos de fenotipo normal, deduzca cul es la posicin del locus sn en el mapa de cromosomas politnicos. 3) En la descendencia de un cruzamiento entre una hembra normal de Drosophila y un macho white (w)-Bar (B), Bridges observ que una hembra no haba heredado el carcter Bar del padre, pero era heterocigota para el carcter white. A esta hembra se la retrocruz con un macho w B, y las proporciones que se obtuvieron en la descendencia fueron dos hembras a un macho. a) Cul es la explicacin ms simple de estas proporciones anormales? b) Cul es el fenotipo de la descendencia? Se cruzaron las hembras heterocigotas estructurales de la descendencia con distintos machos que eran hemicigotas para los mutantes rudimentary (r), forked (f) o fused (fu), que estn cercanos a Bar (como lo muestra el siguiente mapa): En los cruzamientos con machos forked se observaron en F1 hembras forked; sin embargo, de los cruzamientos con machos r o fu no se obtuvieron hembras r ni fu, respectivamente. c) Cmo explicara estos resultados? 4) En un cromosoma de Drosophila persimilis se han reconocido citolgicamente 8 regiones denominadas a,b,c,d,e,f,g,h. Dentro de estas especies 4 razas diferentes tienen el siguiente orden cromosmico: a) a h b d c f e g. b) a e d c f b h g. c) a h b d g e f c d) a e f c d b h g. Suponiendo que cada raza evolucion por una inversin simple a partir de otra raza, muestre cmo pudo haberse originado cada una. 5) En un heterocigota estructural para una inversin paracntrica, un cromosoma tiene una ordenacin 12.3456789 y su homlogo 12.3765489. a) En un meiocito se produce un entrecruzamiento en la regin 4-5, durante paquitene qu se observara en anafase I? b) Cmo se observara la anafase I de otro meiocito en el que se produce un en-

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trecruzamiento en la regin 6-7? c) En cul de los dos meiocitos ser mayor el tamao del fragmento formado en Anafase I? 6) Una especie de araas con un x = 4, presenta un conjunto de poblaciones, donde cada una de ellas posee caractersticas citogenticas que le son propias. La poblacin del centro de la provincia de Bs. As. (BA), presenta en su meiosis 4 II con todos cromosomas acrocntricos. Otro grupo de araas provenientes de una zona rida de La Pampa (LP) mostr tambin la presencia de bivalentes pero en menor nmero que los de BA. Cuando se estudia la meiosis de la F1, producto del cruzamiento de BA x LP, se encuentra un III involucrando a un cromosoma metacntrico y 2 II de tipo acrocntrico. Por ltimo, se estudian varios ejemplares provenientes de la vera de un ro donde, una importante pastera de Misiones (M) descarga contaminantes. Los ejemplares de este grupo tienen una meiosis con II (en menor nmero que en BA). Al analizar la meiosis de la F1 del cruzamiento de LP x M se encuentran un bivalente con un rulo que involucra un brazo completo y un cuadrivalente. Ahora, tome varios colores, relea el problema lentamente, piense y responda: a) Esquematice qu se vera en la meiosis de la F1 del cruzamiento de M x BA. Qu estadio esquematiz? b) Complete el siguiente cuadro, (nx: indica BA LP M F1 BAxLP F1 BAxM F1 LPxM posibles variantes de las gametas). Alguna es 2n inviable?, justifique la respuesta en no ms de n1 tres renglones. n2 c) En la meiosis de la F1 de M x LP y de M x n3 BA se encuentran ligados genes que se comportan como no ligados en el resto de los cruzamientos a qu se debe este ligamiento? A partir de la respuesta anterior indique dnde se pueden encontrar los genes ligados. 7) En cierta especie de Drosophila, que tiene los cromosomas telocntricos, se conocen los loci A,a, que est muy prximo al centrmero, B,b situado a 30 cM del anterior y C,c a 15 cM de B,b y a 45 cM de Aa. Un macho de fenotipo normal capturado en el campo se cruz con una hembra, perteneciente a una poblacin de laboratorio, que es normal en todos los aspectos, salvo recesiva para los tres caracteres antedichos. Toda la descendencia del cruzamiento fue de fenotipo dominante. Cuando las hembras de este cruzamiento se sometieron a un cruzamiento de prueba con machos de la poblacin de laboratorio se obtuvo la siguiente descendencia: Fenotipo N de individuos a) Explique por qu aparecen slo cuatro fenotipos. ABC 4250 b) De los datos de la tabla se deduce que la fraccin de recombinacin Abc 490 entre A,a y B,b es 0,1. Cmo se puede explicar esta discrepancia con los aBC 510 datos del enunciado? abc 4480 8) En hembras de D. melanogaster heterocigotas para las siguientes 3 mutaciones: Bristle (Bl), mutacin dominante ubicada en el cromosoma 2; Dichaete (D), mutacin dominante ubicada en el cromosoma 3, y eyeless (ey), mutacin recesiva ubicada en el cromosoma 4, fueron cruzados individualmente con machos homocigotas para ey. La mayora de los cruzamientos producen las 8 clases fenotpicas esperadas: Bl D ey+; Bl D ey; Bl D+ ey+; Bl D+ ey; Bl+ D ey+; Bl+ D+ ey+; Bl+ D+ ey; Bl+ D ey. Seis hembras produjeron un nmero limitado de fenotipos que es el siguiente: a) Bl D ey+; Bl D ey; Bl+ D+ ey+; Bl+ D+ ey. b) Bl D ey; Bl D+ ey+; Bl+ D ey; Bl+ D+ ey+ c) Bl D ey; Bl D+ ey; Bl+ D ey+; Bl+ D+ ey+. d) Bl D+ ey+; Bl D+ ey; Bl+ D ey+; Bl+ D ey. e) Bl D ey+; Bl D+ ey; Bl+ D ey+; Bl+ D+ ey. f) Bl D ey+; Bl D+ ey+; Bl+ D ey; Bl+ D+ ey. Para cada una de estas hembras d la explicacin ms simple de la causa que pudo restringir el nmero de fenotipos de la descendencia (considere que los quiasmas son terminales). N indiv. 9) Una planta de centeno homocigota recesiva bb con ordenacin cromosmica Fenotipo Fenotipo semiestril 385 normal se cruza por otra que es homocigtica BB y adems homocigtica B para una translocacin recproca entre los cromosomas 3 y 6. La F1 de este b semiestril 33 cruzamiento fue semiestril y fenotipo B. Cuando una planta de la F1 se cruza B frtil 39 por otra homocigtica recesiva bb y de constitucin cromosmica normal se b frtil 395 obtiene la descendencia indicada en la tabla. Calcule la distancia a la que se encuentra el locus B/b del punto de translocacin? Qu tipo de configuracin meitica (monovalente, bivalente, trivalente, cuadrivalente, hexavalente) se observar en la metafase-I de las plantas semiestriles y frtiles? Esquematice 10) Suponga que est estudiando la citogentica de cinco especies ntimamente relacionadas de Drosophila. La figura de abajo muestra el orden de los genes (las letras indican genes que son idnticos en las cinco especies) y los grupos de cromosomas que se encuentran en cada especie.

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a) Explique de qu modo, probablemente, estas especies evolucionaron una a partir de otra, esquematizando los cambios ocurridos en cada paso. (Nota: asegrese de que comparar el orden de los genes con cuidado). b) Esquematice una celula en paquitene y otra anafase I de una hembra hbrida obtenida a partir del cruzamiento de un macho de la especie a por una hembra de la especie c. (Considere solamente los dos pares mayores, y la formacin de un solo quiasma en cada bivalente). 11) En Descendencias de las cinco F1 analizadas cierta esDismicos Monosmicos pecie vegeFenotipo A Fenotipo a Fenotipo A Fenotipo a tal con un nmero diploide de 2n=10 cromosomas, dis1 140 140 139 141 ponemos de la seria monosmica completa. Para locali- 2 97 103 93 107 zar el locus A,a (A>a) se cruzan plantas dismicas ho- 3 193 0 0 196 mocigticas AA por cada uno de los diferentes monos- 4 58 53 57 52 micos de fenotipo recesivo. Las cinco F1 obtenidas fue- 5 158 149 145 150 ron de fenotipo dominante existiendo en todos los casos plantas con 10 y con 9 cromosomas. Las plantas de la F1 que tenan 9 cromosomas (monosmicas) se cruzaron por plantas dismicas de genotipo recesivo aa, obtenindose los siguientes resultados: Los numeros 1 al 5 representan los cromosomas que estn en condicin monosmica en el primer cruzamiento. En qu cromosoma se encuentra situado el locus A,a? 12) La zarzamora europea (Rubus idaeus) tiene 14 cromosomas. Otro tipo de mora (Rubus caesius) es tetraploide con 28. Los hbridos entre estas especies son individuos F1 estriles. Algunas gametas que no han reducido sus cromosomas en la F1 son funcionales en las cruzas retrgradas. Determine el nmero de cromosomas y el nivel de ploida para cada uno de los siguientes casos: a) F1; b) Retrocruza con ambos padres. 13) Las especies de algodn del Nuevo Mundo Configuracin meitica en HIBRIDO Gossypium hirsutum tienen 2n=52. Las especies del metafase I Viejo Mundo: G. thurberi y G.herbaceum tiene cada G. hirsutum x G. thurberi 13 II pequeos + 13 I grandes una 2n=26. Los hbridos entre estas especies muestran G.hirsutum x G.herbaceum 13 II grandes + 13 I pequeos los siguientes arreglos cromosmicos durante la meioG.thurberi x G.herbaceum 13 I grandes + 13 I pequeos sis: Nota: II bivalentes, I univalentes a) Cmo podra interpretar estos resultados desde un punto de vista filogentico? b) Cmo podra probar que su interpretacin es correcta? Especie o hbrido F1 Crom. II I 14) Existen seis especies principales del gnero Brassica al que B. carinata 34 17 0 pertenece la colza (y la canola): B. carinata, B. campestris, B. nigra, B. napus 38 19 0 B. oleracea, B. juncea, B. napus. Las relaciones entre las especies B. juncea 36 18 0 pueden deducirse a partir de la tabla (Nota: crom.= cromosomas, B. juncea x B. nigra 26 8 10 II=bivalentes, I=univalentes) B.napus xB.campestris 29 10 9 a) Deduzca el nmero de cromosomas de B. campestris, B. nigra y B.carinataxB.oleracea 26 9 8 B. oleracea. B. juncea x B.oleracea 27 0 27 b) Algunas de las especies mencionadas son poliploides? Cules? 27 0 27 c) En caso afirmativo seale las especies progenitoras de cada una BcarinataxB.campestris B. napus x B. nigra 27 0 27 de las especies poliploides. d) Explique mediante cruzamientos como se originaron las especies poliploides. 15) Se dispone de cuatro cultivares diferentes de trigo Cruzamiento Configuracin en metafase I del hbrido (V1, V2, V3 y V4) que son homocigticos estructura- V1 X V5 Una asociacin de 4 cromosomas (1IV) les. El cultivar V1 posee la ordenacin cromosmica V2 X V5 Una asociacin de 6 cromosomas (1VI) normal, el V2 presenta V3 X V5 Dos asociaciones de 4 cromosomas (2IV) una translocacin recproca entre los cromosomas 1 y V4 X V5 Una asociacin de 6 cromosomas (1VI) 2, el V3 tiene una translocacin recproca entre los cromosomas 2 y 3 y el V4 tiene una translocacin recproca entre los cromosomas 2 y 4. Otro cultivar V5, homocigtico estructural para otra translocacin recproca diferente, se cruza por los anteriores, dando los siguientes resultados al observar la meiosis de los correspondientes hbridos: Cules son los cromosomas implicados en la translocacin de la variedad V5? 8. GENTICA DE POBLACIONES Gua de Estudio:

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1) a) En una poblacin en equilibrio de Hardy Weinberg: Cul es la frecuencia de heterocigotas que puede haber? Cul es la de homocigotas dominantes? Cul es la de homocigotas recesivas? b) La invariabilidad de las frecuencias gnicas de una generacin a otra, implica que est en equilibrio (de Hardy Weinberg) la poblacin parental? c) La estructura gentica de una poblacin, viene dada por sus frecuencias gnicas o por las genotpicas? d) El conocimiento de las frecuencias gnicas de una poblacin, implica conocimiento de su estructura genotpica? Y si la poblacin est en equilibrio H-W? R: a) Frecuencias heterocigotas H=2.p.q 0.50 (si hay dos alelos), H = 1 pi2 (si hay ms de dos alelos). Frecuencia homocigotas dominantes D = p 2 Frecuencia de homocigotas recesivos R = q2 b) La invariabilidad de las frecuencias gnicas de una generacin a otra no implica que la poblacin parental est en equilibrio. La generacin parental puede tener D, H, R p2, 2pq, q2, pero llega al equilibrio en una generacin de panmixia. Para que hablemos de equilibrio deben mantenerse constantes las frecuencias gnicas y genotpicas p2, 2pq, q2. c) La estructura gentica de una poblacin viene dada por sus frecuencias gnicas y genotpicas. Si (D, H, R) (p2, 2pq, q2 ) puede deberse a que no hay panmixia, o que hay seleccin, deriva, mutacin, etc., que afectan la estructura gentica. d) El conocimiento de las frecuencias gnicas de una poblacin no implica el conocimiento de su estructura genotpica, a menos que la poblacin est en equilibrio de Hardy-Weinberg. 2) En el caso de loci ligados a cromosomas sexuales, cundo se considera que una poblacin se encuentra en equilibrio? R:En estos casos, el sexo heterogamtico presenta solo dos genotipos, y el homogamtico tres. Por lo tanto podemos describir sus frecuencias genotpicas poblacionales de la siguiente manera: AA Aa aa A a P H Q R S pf = frec. del alelo A en la poblacin femenina qf = frec. del alelo a en la poblacin femenina pm = frec. del alelo A en la poblacin masculina qm = frec. del alelo a en la poblacin masculina En este caso, 2/3 de los alelos totales de la poblacin son transportados por el sexo homogamtico y 1/3 por el sexo heterogamtico. Las frecuencias gnicas en cada uno de los sexos sern diferentes si la poblacin no est en equilibrio. Siguiendo la nomenclatura asignada para cada uno de los genotipos, la frecuencia del alelo A en las hembras ser igual a: pf = P + H y en los machos pm = R En la poblacin total ser igual a: p = 2/3 pf + 1/3 pm Si las frecuencias en ambos sexos no son iguales en un comienzo, y se produce apareamiento aleatorio, las frecuencias irn oscilando en los dos sexos hasta alcanzar el equilibrio cuando: pf = pm = p Los machos obtienen sus genes ligados al sexo de la madre, por lo tanto: pm = pf de la generacin anterior (identificada con el apstrofe). Las hembras obtienen sus genes en igual proporcin de los progenitores, por lo tanto, pf = (pm + pf ) de la generacin anterior En cada generacin se reduce a la mitad la diferencia de las frecuencias gnicas entre los dos sexos, lo que se desprende de la siguiente ecuacin: pf - pm=pm+pf - pf=pm - pf= - (pm+pf) Por lo tanto, el equilibrio no se alcanza en una sola generacin de apareamiento aleatorio, sino en varias. Las frecuencias se van acercando asintticamente al valor medio poblacional, momento en el cual se alcanza el equilibrio. 3) Por qu, en teora, la consanguinidad no favorece un incremento en la frecuencia de alelos recesivos en una poblacin sino que solamente afectara la distribucin de alelos entre genotipos? R:La falta de panmixia no modifica las frecuencias gnicas sino las genotpicas. Entonces, por la consanguinidad p y q no cambian. El apareamiento entre parientes no afecta las frecuencias gnicas conjuntas, sino que aumenta la frecuencia de homocigotas. La consanguinidad har que los genes recesivos raros se presenten en homocigosis con una mayor frecuencia que si existiese apareamiento aleatorio en poblaciones de tamao grande. Problemas: 1) Una condicin anmica en el hombre llamada talasemia es determinada por un par de alelos codominantes. El genotipo homocigtico dominante TmTm produce una anemia grave (talasemia mayor) y el genotipo heterocigtico TmTn produce una anemia benigna (talasemia menor). Los individuos normales son homocigticos TnTn. Se encontr que la distribucin de esta enfermedad en una muestra de una poblacin italiana era de 4 con talasemia mayor, 400 con talasemia menor y 9596 normales. Indique si esta muestra est de acuerdo con los valores esperados segn el equilibrio de HardyWeinberg dentro de lmites estadsticos aceptables. 2) Cierta planta presenta flores azules, celestes y blancas y se sabe que esos tres colores estn determinados por un locus biallico de dominancia incompleta. Un eclogo vegetal encuentra una poblacin de esta planta y considera que pueden reconocerse dos subpoblaciones. Desea entonces averiguar si cada una de ellas se encuentra en equili-

Subpoblacin I Subpoblacin II Total

Azul Celeste 164 32 20 80 184 112

Blanco 4 100 104

Total 200 200 400

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brio de HardyWeinberg y qu sucede con la poblacin total. Si parti de los siguientes datos A qu conclusin lleg?

3) Los grupos sanguneos humanos (AB0) estn determinados por un sistema de alelos mltiples en el que existen relaciones de codominancia y dominancia (segn la interaccin). La jerarqua de dominancia de estos tres alelos es: IA = IB > i. En una muestra de una poblacin humana se encontraron 23 individuos del grupo AB, 441 del grupo 0, 371 del grupo B y 65 del grupo A. a) Calcule las frecuencias allicas de IA, IB e i. b) Calcule el porcentaje de la poblacin que se espera que sea de los grupos A, B, AB y 0 si las frecuencias gnicas fueran: IA = 0,36, IB = 0,20 e i= 0,44. 4) Al analizar, en una poblacin de mamferos, un carcter monognico con ligamiento total al cromosoma X, se encontr que la frecuencia del gen dominante en las hembras es 0,8, mientras que el 30 % de los machos son recesivos. Qu frecuencias gnicas aparecern en cada sexo en la 3ra generacin a partir de la citada? Hacia qu valor tienden dichas frecuencias al cabo de un gran nmero de generaciones? 5) 5) La enzima 6-glicerol fosfato deshidrogenasa (6-Gpd) presenta, en algunos lepidpetros (mariposas), distintas formas diferenciables en una corrida electrofortica, donde cada banda Machos Hembras depende de la presencia de un alelo diferente para el locus autosmico 6FF FS SS FF FS SS Gpd. Los alelos ms comunes son el F (fast) y el S (slow), (llamados as POBLACION 1 48 84 18 18 84 98 porque el F se aleja ms del punto de siembra y el S menos). POBLACION 2 24 24 72 24 24 72 En un laboratorio se estudian las frecuencias genotpicas de 4 poblacio- POBLACION 3 9 42 49 9 42 49 nes experimentales respecto de este locus. En la tabla se muestra el n- POBLACION 4 20 20 60 9 42 49 mero de individuos de cada genotipo para cada sexo y en cada poblacin. a) Qu poblaciones estn en equilibrio de Hardy-Weinberg? b) Cules no estn en dicho equilibrio y por qu? c) Cules son las frecuencias gnicas y genotpicas de equilibrio y cuntas generaciones tardarn en alcanzarlo las poblaciones que no estaban en equilibrio? 6) Un seor muy enfermo que estaba redactando su testamento, deseaba saber si l era verdaderamente el padre biolgico del segundo hijo de su anterior esposa que, a pesar de su duda, llevaba su apellido. Sus abogados le recomendaron que realizara las pruebas genticas de filiacin. En un prestigioso laboratorio se tomaron entonces las muestras de sangre del hijo y de ambos padres. Se extrajo ADN genmico. Mediante PCR y a partir de primers adecuados se amplificaron 8 regiones de microsatlites altamente variables del ADN (loci), con el fin de determinar el ndice de paternidad. A continuacin se muestran los esquemas de los patrones electroforticos obtenidos al correr en geles de poliacrilamida los productos de amplificacin para cada locus. P= padre, H= hijo y M= madre. A los costados se indican los alelos que difieren en el tamao del fragmento. En la tabla se indican las frecuencias poblacionales de estos alelos.

Frecuencias allicas:
Locus 2: 117= 0.18; 113= 0.16; 111= 0.1 Locus 3: 149= 0.01; 153= 0.32; 155= 0.1; 157=0.16 Locus 4: 179= 0.16; 193= 0.09; 195= 0.01 Locus 5: 156= 0.65; 166= 0.05 Locus 6: 185= 0.025; 195= 0.05; 199= 0.25; 205=0.13 Locus 7: 88= 0.58; 104= 0.28 Locus 8: 109= 0.3; 115= 0.16 Locus 9: 182= 0.13; 184= 0.29; 214= 0.01; 232= 0.01. A partir de estos datos calcule el ndice de paternidad para cada locus (razn de verosimilitud hijo/ no hijo) y el valor acumulado para todos los loci.

9. GENETICA CUANTITATIVA
Gua de Estudio: 1) Qu caractersticas particulares permiten diferenciar los caracteres de herencia cuantitativa y aquellos de herencia cualitativa? R: ver tabla Caracteres Cualitativos Caracteres Cuantitativos
Diferencias de grado Variacin continua: Clases fenotpicas que forman un espectro mtrico continuo Diferencias de clase Variacin discontinua: Clases fenotpicas discretas

Muchos genes involucrados en determinacin del carcter Efectos individuales de los genes no discernibles, por ser pequeos y afectados por el ambiente El anlisis gentico se realiza mediante estimaciones estadsticas de los parmetros de la poblacin, como media y varianza

20 Pocos genes Efectos individuales de los genes discernibles El anlisis gentico se realiza por conteo y proporciones

2) Qu es la heredabilidad de un carcter? R: Se refiere a la proporcin de la variabilidad fenotpica total de un carcter que es genticamente heredable en una poblacin (h2 (en sentido estricto) = VA/VP, VA = varianza gentica aditiva, Vp = varianza fenotpica; en otras palabras h2 es la proporcin de la varianza fenotpica que se debe a la varianza gentica aditiva). 3) Una heredabilidad h2 de 0,4, significa que para un determinado carcter, un individuo presenta el 40% de su fenotipo determinado genticamente, y un 60% determinado por el medio ambiente? R: No!!!!, es un parmetro poblacional, por lo tanto significa que en una poblacin, slo el 40% de la variabilidad fenotpica total observada para ese carcter est determinada genticamente. 4) Por qu es importante conocer el valor de este parmetro en el marco de programas de mejoramiento? R: Porque permite que el mejorador tenga un indicio de cual es la respuesta potencial a la seleccin que se est aplicando sobre el carcter. De esta manera se disean los cruzamientos adecuados para obtener la mejor respuesta (mejora del carcter) evitando la depresin endogmica y la disminucin drstica del tamao poblacional. 5) a) Por qu el mejoramiento de los toros es ms rpido que el de las vacas? Por qu es ms fcil mejorar cerdos que ovinos o bovinos?Por qu en teora la consanguinidad no favorece un incremento en la frecuencia de alelos recesivos en una poblacin sino que solamente afectara la distribucin de alelos entre genotipos? b) Cul es la razn por la que no se obtienen lneas puras en animales?Qu son las "razas" en trminos de mejoramiento animal?, c) Por qu la seleccin individual se llama fenotpica y la familiar genotpica? R: El mejoramiento en toros es conveniente pues producen mayor descendencia que las vacas. Los machos son siempre ms convenientes pues se pueden evaluar ms descendientes sin alargar el intervalo generacional (edad media de los padres cuando nacen los hijos). Adems se pueden seleccionar pocos animales con el caracter deseado sin afectar el tamao poblacional del rodeo. - Es ms fcil mejorar cerdos, por ser multparos. - Consanguinidad: p y q no se modifican. El apareamiento entre parientes no afecta las frecuencias gnicas conjuntas, sino que aumenta la frecuencia de homocigotas. La consanguinidad har que alelos recesivos raros se presenten en homocigosis con una mayor frecuencia que si existiese apareamiento aleatorio. - Lneas puras en animales no existen pues no hay autofecunfacin. Las razas en trminos de mejoramiento son poblaciones altamente endocriadas. - En la seleccin individual se elige al individuo progenitor para realizar mejoramiento por su FENOTIPO. La seleccin familiar es GENOTPICA pues se elige por el pedigree del individuo, por ejemplo, el carcter produccin de leche en toros se elige por su ta, madre o abuela. 6) A qu se denominan QTL? R: El trmino se aplica a los loci que afectan caracteres cuantitativos. Es decir que se refiere a la ubicacin de genes que afectan caracteres que pueden ser medidos en una escala lineal o cuantitativa. El mapeo de QTL es una tcnica de mapeo por recombinacin y requiere de: 1) uso de grupos de individuos que difieran marcadamente en el carcter que se quiere mapear; 2) identificacin de aquellos marcadores moleculares polimrficos que difieran entre ambas lneas; 3) anlisis de la F2 segregante entre ambos grupos (o de la retrocruza o de RIL!!!!), tanto en cuanto a los marcadores moleculares como en cuanto a los valores para el carcter cuantitativo en estudio, 4) anlisis estadstico de los datos (ANOVA simple o de regresin como primer paso crudo - el anlisis real requiere mapeo del intervalo compuesto con estadstica de mxima probabilidad para estimar valores LOD a lo largo del cromosoma). 7) Qu son las lneas recombinantes endocriadas o RIL (recombinant imbred lines)? y las lneas haploides duplicadas? R: Las RIL son lneas endocriadas con 9 o ms generaciones (14 en Drosophila) de autofecundacin o endocra (cruzamiento entre hermanos) y son, por lo tanto, prcticamente homocigotas. Suelen ser derivadas de un cruzamiento entre dos parentales altamente divergentes (contrastantes) para uno o ms rasgos cualitativos o cuantitativos representando diferentes combinaciones aleatorias de alelos que estaban fijados en las lneas parentales. Se parte de una F2 (o retrocruza de F1 por un parental). Es una alternativa al cruzamiento prueba dado que todos los segregantes sern homocigotas dominantes o recesivos. Otra ventaja es que la autofecundacin (o endocra) de las lneas mantiene el genotipo (no hay segregaciones), lo que permite su mantenimiento (inmortalizacin) y distribucin entre distintos grupos que compatibilizan mapas genticos. Los haploides duplicados tienen las mismas caractersticas, pero se obtienen por un mecanismo distinto. En muchas plantas es posible cultivar anteras (gametas) in vitro de forma de generar plantas haploides. Partiendo de una F1 se obtienen, entonces, gametas haploides que generan plantas que combinan genes de distintos loci de las dos lneas paternas. Cuando se las trata con colchicina, se pueden duplicar los cromosomas dando individuos diploides que son homocigotas porque los cromosomas homlogos representan copias idnticas del mismo cromosoma del haploide original.

Problemas:

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1) Suponga que dos pares de genes con dos alelos cada uno Aa y Bb, determinan en una poblacin la altura de las
plantas en forma aditiva. El homocigota aabb tiene una altura de 30 cm y el AABB de 50 cm. a) Cul es la altura de la F1 de un cruzamiento entre estas dos cepas homocigotas? b) Despus de un cruzamiento F1xF1, qu genotipos de la F2 presentarn una altura de 40 cm? c) Cul ser la frecuencia de estas plantas en la F2? d) Si se seleccionaran los individuos de 45 cm o ms de altura para obtener la siguiente generacin, cul sera la altura media de sta? 2) Se cruzaron dos razas diferentes de maz, cada una con una altura media de 1,72 m y se obtuvo una F 1 con una altura media tambin de 1,72 m. En la F2 haba una considerable variacin que iba de 0,91 m a 2,5 m. De las 1942 plantas consideradas, 8 alcanzaban una altura de 2,5 m y 7 una de 0,91 m. La altura del maz, sera para Ud. un carcter cualitativo o cuantitativo? Por qu? Cuntas parejas de genes estn implicadas en la determinacin del carcter segregaron en la F2? Explique estos resultados en trminos gnicos asumiendo que el ambiente fue mantenido constante en todos los casos. 3) Johannsen midi el peso de las semillas de porotos de la variedad Princesa. Los porotos son autgamos (autofertilizados) y por lo tanto esta variedad es una lnea pura. Los pesos en centigramos de una muestra pequea pero representativa se enumeran a continuacin: 19 31 18 24 27 28 25 30 29 22 29 26 23 20 24 21 25 29 a) Calcule el peso promedio y la desviacin estndar de las alubias en esta muestra. b) Calcule la varianza ambiental. c) Calcule la heredabilidad del peso de las alubias en esta variedad. d) Si el peso promedio de las alubias seleccionadas para ser progenitores es 30 cg, prediga el peso promedio de las alubias de la siguiente generacin. 4) Al medir el contenido en protenas por mg de materia seca de las plantas de una poblacin se obtuvieron los siguientes resultados: Protenas (unidades arbitrarias): 3 4 5 6 7 8 9 10 11 N de individuos 1 3 6 10 18 13 6 2 1 Al seleccionar como progenitores para formar la generacin siguiente los individuos con contenido proteico superior a 7 unidades se obtuvieron los siguientes resultados: Protenas (unidades arbitrarias): 3 4 5 6 7 8 9 10 11 N de individuos 0 3 4 10 18 9 6 2 0 A la vista de estos resultados, se desea saber: a) El valor de la heredabilidad del carcter "contenido de protena" b) De acuerdo con dicho valor de la heredabilidad, qu consecuencia se puede sacar respecto al componente gentico del carcter analizado? c) Podra darse esta interaccin en una algama? 5) Si 3 genes que segregan independientemente, con dos alelos cada uno, determinan la altura de una determinada planta, por ej.: Aa, Bb y Cc, de modo que la presencia del alelo representado por la mayscula aada 2 cm a la altura base (que es de 2 cm). a) Indique la altura que esperara en la F1 de un cruzamiento entre las cepas homocigotas AABBCC (14 cm) X aabbcc (2 cm). b) Indique la distribucin de las alturas (fenotipos y frecuencias) que se espera en un cruzamiento F1 X F1. c) Qu proporcin de esta F2 tendra la misma altura que las cepas paternas? d) Si los alelos representados por maysculas actuasen como dominantes, por ej.: A_B_C = 8 cm, cules seran las respuestas a los epgrafes a), b) y c)? e) Si los alelos representados por maysculas actuasen multiplicando la altura existente, por ej.: Aabbcc= 4 cm, AAbbcc= 8 cm, AABbcc= 16 cm, etc., cules seran las respuestas a los puntos a), b) y c)? 6) Tiempo atrs sali en los diarios el descubrimiento del gen del temor (o cobarda) en ratas de laboratorio basado en diferencias observadas en el patrn de comportamiento de ratas frente a la aplicacin de shocks elctricos poco despus de hacer sonar un sonido peculiar en un lugar de sus laberintos. Las ratas temerosas desarrollaron un reflejo condicionado de cobarda por el que huan rpidamente al escuchar el sonido o cuando eran colocadas en ese lugar del laberinto, sin necesidad de aplicar el shock elctrico. El grado de cobarda se estableci cronometrando el tiempo que tardaban las ratas en huir despus de emitirse el sonido caracterstico y al ser colocadas en el lugar prefijado. Se analiz la influencia del cromosoma 1 en este comportamiento mediante cruzamientos controlados. Se estudiaron distintas RIL para dicho cromosoma obtenidas a partir de un cruzamiento entre lneas Valor proEsquema 1 Sondas RFLP Xabg XKn XCen Xpsr medio y 601 a1 t1 121 desvo Padre valiente 10 2,8 Padre temeroso 0,9 0,3 Clase 1 1 0,5 Clase 2 9 2,5 Clase 3 10 2,6 Clase 4 9,5 2,4 Clase 5 0,8 0,4 Clase 6 1 0,6 Clase 7 8,5 2,3 Clase 8 0,9 0,6 Clase 9 1,3 0,7

temerosas y agresivas. a) Haga un esquema de los cruzamientos con los que se obtuvieron las RIL ejemplificando con el caso de este problema. En el esquema 1 se representa una regin del cromosoma 1 en las distintas familias recombinantes (negro perteneciente al padre temeroso, blanco perteneciente al padre agresivo). De cada clase recombinante esquematizada se obtuvieron al menos 50 ratas que fueron ensayadas biolgicamente mediante un diseo estadstico apropiado. Para cada clase recombinante se obtuvo un promedio y un desvo estndar. Indique cmo se hizo para ordenar los distintos marcadores en el cromosoma 1 b) Por qu se utilizaron 50 ratas de cada una de las lneas recombinantes y no solamente una? c) Qu conclusiones puede sacar acerca de la localizacin gentica del temor? Est este QTL ubicado en el cromosoma 1? Podra Ud localizar ms de un QTL en el esquema 1? Clases Recombinantes Supone que puede estar ubicada en otras partes del genoma? Por Padres T V 1 2 3 4 5 6 7 8 9 qu? d) Podra haber utilizado otro mtodo alternativo para llegar a las mismas conclusiones? e) Reflejan los datos la ocurrencia de segregacin transgresiva? Por qu? f) En el esquema siguiente se representa uno de los RFLPs obtenidos para los padres temeroso y agresivo, respectivamente, utilizando la sonda Xabg601 y la enzima Eco RI. Complete el patrn obtenido para cada una de las clases recombinantes endocriadas. 7) El enanismo es un carcter muy buscado en trigo porque est asociado a una menor susceptibilidad al vuelco y a un mayor rendimiento. Para estudiar este carcter se construyeron lneas de sustitucin cromosmica entre las variedades Mara y Cappelle-Desprez. Es decir, se obtuvieron distintas lneas de la variedad Cappelle-Desprez las cuales tienen alguno de sus cromosomas reemplazados por los de la variedad Mara. Mara es como 12 cm ms baja que C-D (cuyo promedio de altura es de 103 cm de alto, ver ordenadas del grfico). Observando el grfico adjunto: a) Qu clase de carcter es la altura? b) Qu podra decir acerca de la cantidad y de la localizacin de los genes de altura de Mara? c) Puede existir algn otro gen relacionado con altura que no est siendo detectado por este anlisis? d) Podra sospechar algn efecto episttico para el carcter altura a partir de este anlisis? e) Considera que a partir del cruzamiento se podran obtener lneas ms bajas (o ms altas) que estas variedades parentales (por segregacin transgresiva)? f) Servira este mtodo de utilizacin de lneas de sustitucin para asignar una localizacin cromosmica a marcadores moleculares?

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10. HERENCIA DE ORGANELAS

Gua de Estudio: 1) Qu es la HERENCIA materna (tambin llamada uniparental, citoplasmtica o extranuclear) y cmo se diferencia de la influencia materna? Cul es su base genmica? Mediante qu mecanismos se multiplican las organelas? 2) Explique la organizacin genmica de mitocondrias y cloroplastos, tomando como base mitocondrias de humanos, levaduras y cloroplastos de plantas superiores. Dira Ud. que su evolucin fue lenta o rpida comparada al genoma nuclear? Si dependiera del caso, ejemplifique. 3) Qu origen evolutivo tienen estas organelas? El mismo es monofiltico o polifiltico? Explique la teora de Margulis. 4) Hace unos 10 aos una noticia sacudi los titulares Eva (s, la de Adn y Eva) fue negra y vivi hace 200.000 aos. En qu se bas el periodista? Por qu ignor
Tamao delgenoma Estructura Informacin

Plantas Extremadamente variable (300kb a 2400kb en una misma familia) Variable, circular o lineal rRNA, tRNA, protenas ribosomales, protenas involucradas en respiracin

Hongos Animales Muy variable Pequeas y poco (26,7kb a 115kb en variables 16kb as- comycertes filamentosos) circular circular rRNA, tRNA, protenas ribosomales, protenas invo- lucradas en respiracin rRNA, tRNA, pro- tenas involucradas en respiracin No, pocas regiones no codificantes materna rpida

Presencia de intrones

No, pero abundantes Si regiones no codificantes Modo de heren- Variable, principal- Cualquiera de los cia mente materna dos parentales Tasa de diver- lenta gencia de secuencia comparada con nuclear media

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olmpicamente al pobre Adn? Era feminista? Problemas 1) Una enfermedad humana que produce cardiomiopatas muestra el siguiente pedigr:

a) Cmo explica el patrn de herencia de esta enfermedad? b) Si el individuo III-5 tiene hijos con una mujer sana. Cmo espera que sean sus hijos varones? Y sus hijas mujeres? c) Puede el individuo III-10 tener una hija sana? Y un hijo sano? Justifique. d) La pareja formada por los individuos II-3 y II-4 tuvo un cuarto hijo sano. Como lo explicara? Puede deducir si ese hijo es varn o mujer? Justifique. 2) La polilla de la harina Ephestia kuehniella posee ojos negros y cuerpo pigmentado debido a un precursor del pigmento (la protena kynurenina) cuyo control de expresin est dado por el gen dominante A. Cuando el genotipo de la polilla es aa el fenotipo es ojos rojos y cuerpo sin pigmentar. Si se realiza el cruzamiento de un macho heterocigota por una hembra recesiva el resultado es 1/2 de polillas pigmentadas con ojos negros y 1/2 de polillas no pigmentadas con ojos rojos. Si se realiza el cruzamiento recproco todas las larvas nacen pigmentadas. Sin embargo, al emerger los adultos presentan las proporciones fenotpicas esperadas: 1/2 de polillas pigmentadas con ojos negros y 1/2 de polillas no pigmentadas con ojos rojos. a) Explique los fenotipos observados en ambos cruzamientos. De que tipo de herencia se trata? b) Qu explicacin molecular tiene este tipo de herencia? 3) Una estrategia comercial en la produccin de maz es la generacin de hbridos con esterilidad del polen. De esta manera el productor debe comprar semillas para cada siembra, adems de evitar la autofecundacin y la consecuente prdida de valor comercial (por disminucin del vigor hbrido). Los determinantes genticos de esterilidad del polen estn localizados en las mitocondrias (en maz se conocen por lo menos 20). Para evitar la expresin de estos determinantes de esterilidad, en las plantas que actan como parentales para generar hbridos, se utiliza un gen nuclear dominante Rf (restaurador de la fertilidad). Rf restaura la fertilidad en plantas genotpicamente androestriles. Si usted tiene una semilla de maz cualquiera de origen desconocido cmo hara para saber su genotipo en cuanto al carcter Rf? 4) El enrollamiento de la caparazn de los moluscos est determinado genticamente por un locus biallico, en el que el alelo D determina el enrollamiento dextrgiro. En el cigoto de los moluscos y otros invertebrados tiene lugar un proceso de segmentacin espiral. El huso mittico est inclinado respecto al eje del vulo. Si dicha inclinacin es en una direccin el caracol estar enrollado levgiramente; si est inclinado en la otra direccin se enrollar dextrgiramente. Un caracol dextrgiro A resultante de un cruzamiento se autofecunda y produce exclusivamente descendencia levgira. Cul es el probable genotipo de A y de sus progenitores?

11 GENTICA DEL SEXO

Gua de Estudio 1. Qu se entiende por determinacin sexual y diferenciacin sexual? R: Determinacin sexual: sistemas biolgicos que determinan el desarrollo de las caractersticas sexuales de un organismo (determinacin cromosmica, gnica, por nivel de ploida o ambiental) Diferenciacin sexual: procesos necesarios para alcanzar las caractersticas sexuales previamente determinadas. 2. Qu son los cromosomas sexuales y en qu grupos taxonmicos se los encuentra? R: Son los cromosomas que determinan genticamente el sexo. Se encuentran muy distribuidos en insectos, mamferos, aves y plantas dioicas. 3. Qu se entiende por regin pseudoautosmica (PAR)? R: regin de homologa y apareamiento entre los cromosomas sexuales. 4. Los genes relacionados con la diferenciacin sexual estn ubicados exclusivamente en los cromosomas sexuales? Explique. R: Nooo!! Slo es necesario que se localicen all los genes regulatorios codificantes para los factores de transcripcin maestros que disparan el proceso que se describe en los libros. Existen muchos genes importantes para el sexo

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(incluso los que codifican para cosas tan importantes como son las hormonas sexuales) que se localizan en los autosomas y pueden verse influidos por los cromosomas sexuales. 5. A la inversa, pueden existir genes que no tienen nada que ver con el sexo localizados en los cromosomas sexuales? Explique. R: S, el gen que determina la presencia de pelos en el borde de la oreja, se encuentra en la regin diferencial del cromosoma Y. 6. Cmo se comportan, en relacin con las leyes de Mendel, los genes que se encuentran en los cromosomas sexuales? R: Su herencia difiere de la de los genes ubicados en los autosomas, ya que los alelos se heredan asociados con el sexo de la descendencia. La misma est influida, a su vez por hemicigosis (genes del cromosoma Y), heterocromatinizacin (genes del cromosoma X), etc. 7. Qu diferencia existe entre genes LIGADOS, caracteres LIMITADOS a un sexo e INFLUIDOS por el sexo? R: Los genes ligados al sexo, son aquellos que se encuentran en la regin diferencial de los cromosomas sexuales (ligados al X o Y). Los caracteres limitados a un sexo, son aquellos que se expresan solamente en un sexo aunque los genes que los determinan estn presentes en ambos (ej. distribucin facial del vello en hombres). Los caracteres influidos por el sexo, se expresan en ambos sexos pero con diferente relacin de dominancia (ej. el alelo que determina la calvicie humana, es dominante en hombres y recesivo en mujeres). 8. En qu consiste la determinacin del sexo por equilibrio gnico? R: En Drosophila melanogaster, el sexo est determinado por la relacin: cromosoma X/conjunto de autosomas. Siendo 1 la relacin que determina hembras y 0,5 la que determina machos. 9. Cul es el mecanismo de determinacin sexual en humanos? R: En humanos el sexo se determina cromosmicamente, siendo el cromosoma Y el determinante masculino (portador del gen SRY, factor determinante del desarrollo de los testculos). 10. Qu es la compensacin de dosis gnica en mamferos? Qu establece la hiptesis de Lyon? D una evidencia citolgica y una gentica de la compensacin de la dosis. R: La compensacin de la dosis es el mecanismo mediante el cual se iguala, en ambos sexos, la actividad de los genes que se encuentran en el cromosoma X. Hiptesis de Lyon: en mamferos, la compensacin de la dosis ocurre por inactivacin, al azar, de uno de los cromosomas X de las hembras (heterocromatinizacin). El corpsculo de Barr es la evidencia citolgica de esta inactivacin. Una evidencia gentica puede obtenerse analizando la expresin de Glu6P-deshidrogenasa en hembras heterocigotas. 11. Cul es el mecanismo de compensacin de dosis gnica en Drosophila? R: La compensacin de la dosis ocurre por hiperactivacin del cromosoma X de los machos. 12. En qu consiste el mecanismo de determinacin del sexo por haplodiploida? En qu grupos taxonmicos se encuentra? R: En este sistema, la determinacin del sexo depende de la dotacin cromosmica de los individuos, siendo las hembras diploides y los machos haploides. Se encuentra en los himenpteros (abejas, hormigas, termitas) 13. Qu mecanismos de reproduccin permiten perpetuar un genotipo ms all de la existencia del individuo? Conoce alguno que implique la produccin de semillas? R: Apomixis Problemas 1) En los embriones de los mamferos, la presencia del cromosoma Y determina el desarrollo de testculos y genitales externos masculinos. En 1990 se clon un fragmento de 14 kpb del cromosoma Y que contiene todo el gen determinante del sexo, al cual se lo llam Sry (Sex Reversal Y, es decir, revierte el sexo). Como era previsible para un gen regulatorio, Sry codifica para una protena (SRY) que contiene un dominio de unin al ADN, la misma acta en el conducto genital precursor de los testculos y el comienzo de la expresin es alrededor de 10 a 12 das post-coito o post-reimplantacin. Con la intencin de obtener ratones transgnicos, se inyectaron vulos fecundados con una solucin acuosa conteniendo el gen Sry clonado. Las cigotas fueron reimplantadas en madres adoptivas seudopreadas. Se obtuvo una camada de 93 cras nacidas (machos y hembras). Para determinar rpidamente qu ratones de la camada eran transgnicos, se obtuvo ADN genmico de trozos de cola de toda la camada, y se realiz un Southern-blot con 2 sondas radioactivas. Sonda A = fragmento del gen Sry clonado, revela una sola banda de 3,5 kpb. Sonda B = fragmento del gen Zfy, revela dos bandas de 11 kpb y 5 kpb. El gen Zfy es un gen del cromosoma Y, localizado lejos de Sry y por fuera del fragmento de 14 kpb. a) Dibujar las bandas que se observaran en un Southern hecho con ADN genmico de las cras e hibridado simultneamente con las sondas A y B. Considere todos los resultados posibles. b) Gracias a estudios previos con cepas de ratones con anomalas cromosmicas, se sabe que la presencia de ms de un cromosoma X en el ratn macho, siempre da por resultado esterilidad. Cules de las cras obtenidas seran frtiles y cules estriles? c) Proponga otras metodologas para la deteccin de los ratones transgnicos. 2) En un laboratorio de gentica de Drosophila melanogaster, se obtuvo por irradiacin una poblacin A con alteraciones en la gametognesis tanto de hembras como de machos, la misma consista en fallas meiticas durante anafase II. Como resultado de estas anormalidades se observ, por un lado, no disyuncin de todo el complemento cromosmico, con la consecuente produccin de gametas completamente no reducidas y, por el otro, no reduccin de cromosomas sexuales, producindose gametas parcialmente no reducidas. Este tipo de gametas se encontraba en una frecuencia elevada, pero tambin aparecieron gametas normales.

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Con el objetivo de estudiar la viabilidad y capacidad de fecundacin de estas gametas, se realizaron cruzamientos entre hembras y machos de la poblacin A, y se analizaron todos los descendientes obtenidos. Considerando que las gametas pueden fecundarse totalmente al azar, prediga el complemento cromosmico de toda la descendencia posible y su fenotipo sexual. 3) En humanos, el gen Sry (localizado en el segmento diferencial del cromosoma Y) determina masculinidad. Qu fenotipo sexual, y cuntos corpsculos de Barr presentarn los siguientes individuos: a) 46, XY b) 47, XXY c) 45, X 4) Supongamos que una determinada enzima dimrica A, cuyo locus se encuentra en el A1A1 A2A2 segmento diferencial del cromosoma X, interviene tanto en el metabolismo de Drosophila + como en el del ratn, y que en ambos casos dos variantes moleculares de dicha enzima estn codificadas por los alelos A1 y A2. El genotipo de los individuos es distinguible por electroforesis segn el siguiente esquema: Se hace el siguiente experimento, tanto en Drosophila como en ratn. A partir de un tejido adecuado de una hembra heterocigota A1A2 se obtiene un cultivo celular primario y de este 10 subcultivos unicelulares. Qu patrones electroforticos se obtendrn en los siguientes casos? a) Cultivo primario de Drosophila. b) Subcultivos de Drosophila. c) Cultivo primario de ratona. d) Subcultivos de ratona. 5) En el ratn existen dos sistemas enzimticos cuyos productos son detectables en los glbulos rojos. Los mismos estn determinados por las parejas allicas A,a y B,b, cuyos loci respectivos estn situados en el segmento diferencial del cromosoma X. Unas hembras diheterocigotas (hijas de machos que presentaban las enzimas A y b) se cruzaron con machos AB, obtenindose la siguiente descendencia masculina: AB:34; ab:26; Ab:67; aB:73. Teniendo en cuenta la hiptesis de Lyon, de los ocho tipos de hembras que se sealan en la tabla, Cules sern las hermanas de los machos antes indicados? Con qu frecuencia aparecer cada una?
Tipo de Hembra 1 2 3 4 5 6 7 8 Porcentaje de Glbulos Rojos con las Enzimas que se indican AyB Ayb ayB ayb 100 25 50 50 50

25 50

25

25 100

50 50 50 50 50

50 6) Ni el Zar Nicolas II ni su esposa la Emperatriz Alexandra tenan la enfermedad conocida como hemofilia, caracterizada por estar ligada al sexo. Su hija, la princesa Anastasia, tampoco la tena, pero el Zarevich Alexius, su hermano, s. Podria Anastasia haber sido portadora de la hemofilia? Si se hubiese casado con su primo Henry, que era hemoflico, alguno de sus hijos o hija habran sido hemoflicos?

7) Es de conocimiento popular que todo gato de 3 colores es gata (hembra). A este tipo de gatos se los llama calico. Se sabe que el pelaje blanco presente en sectores o mosaicos proviene de un gen independiente del que produce pelaje naranja o negro. Se realizaron dos cruzamientos: 1) Macho blanco y negro x Hembra blanca y naranja 50% machos blancos y naranjas, 50% hembras tricolores 2) Macho blanco y naranja x Hembra blanca y negra 50% machos blancos y negros, 50% hembras tricolores a) Cul es el indicador ms evidente de la ausencia de herencia mendeliana? b) Por qu gatos machos no tienen nunca 3 colores? c) Explique la base gentica de este comportamiento. d) Cmo sera el resultado de cruzar una hembra tricolor por un macho blanco y negro? 8) Es posible que, en los humanos, un gen mutante recesivo est localizado en el cromosoma X, si una mujer que presenta el rasgo recesivo y un hombre normal tienen un hijo varn normal? Explique. 9) En la especie humana la presencia de cierto mechn de pelo blanco es un caracter influido por el sexo, dominante en el hombre y recesivo en la mujer. La protanopia (tipo especial de ceguera al color rojo) est determinada por el alelo recesivo de un gen situado en el segmento diferencial del cromosoma X. Un hombre con mechn blanco y visin normal, cuyo padre careca de dicho mechn, tiene descendencia con una mujer sin mechn y con visin normal, cuyo padre careca del mechn y tena protanopia, y cuya madre tena el mechn. a) Qu proporcin de los descendientes sern hembras con mechn blanco y visin normal? b) Qu proporcin de la descendencia sern machos con mechn blanco y protanopia? 10) En la mariposa trbol todos los machos son amarillos, en cambio las hembras pueden ser amarillas si tienen el genotipo homocigota AA, o blancas si poseen el alelo (A'_). Sin tomar en consideracin el sexo, qu proporciones fenotpicas pueden esperarse en F1 de la cruza AA' x AA'?

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GENTICA I 2014 (1er cuatrimestre)

Turno: .. Apellido y Nombre:LU: E-mail: .TE: Materias que cursa: Zoologa TP Final CLASE MENDEL 1 MENDEL 2 DIVISIN CELULAR G. HUMANA MEIOSIS MAPEO 1 MAPEO 2 POBLACIONES MM 1 MM 2 ALT. ESTRUCTURALES ALT. NUMRICAS GENOTOXIXIDAD CUANTITATIVA QTL-MOSCAS FIN MOD. 1 DET.SEXO ORGANELAS /MUTAC. MM/POB BIOINFORMTICA BACTERIANA REGULACION ING GENTICA 1 ING GENNTICA 2 EPIG / DESARROLLO GENMICA/POSTG TRANSPOSONES FIN MOD 2 1er parcial Nota inicial Recuperatorio 2do parcial CONCEPTO Nota final Asistencia Nota / observaciones/Parcialitos Botnica Biometra Video Taln