PREPARACIN DE UN FROTIS BACTERIANO

Se denomina frotis a la extensin que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo con objeto de separar lo ms posible los microorganismos, ya que si aparecen agrupados en la preparacin es muy difcil obtener una imagen clara y ntida. Este frotis debe ser posteriormente fijado al vidrio del portaobjetos para poder aplicar los m todos !abituales de tincin que permiten la observacin al microscopio de las bacterias sin que la muestra sea arrastrada en los sucesivos lavados. "a fijacin de una extensin bacteriana !ace que las bacterias queden inactivadas y ad!eridas al vidrio alterando lo menos posible la morfologa y bacteriana y las posibles agrupaciones de c lulas que pudiera !aber. REALIZACIN DEL FROTIS #. $olocar una peque%a gota de agua en el centro de un portaobjetos limpio. Es necesaria muy poca cantidad de agua, por lo que se puede usar el asa de siembra, ya que en el extremo curvo de su filamento queda retenida una mnima gota de agua, que resulta suficiente. &. 'lamear el asa de siembra, tomar, en condiciones as pticas, una peque%a cantidad del cultivo bacteriano en medio slido y transferirlo a la gota de agua. (emover la mezcla con el asa de siembra !asta formar una suspensin !omog nea que quede bastante extendida para facilitar su secado. Si la muestra se toma de un cultivo en medio lquido, no es necesario realizar los dos primeros pasos ya que basta con colocar y extender una gota de la suspensin bacteriana, que se toma con el asa de siembra, directamente sobre el portaobjetos. ). Esperar !asta que el lquido se evapore o acelerar su evaporacin acercando el porta a la llama del mec!ero. En este caso !ay que tener muc!a precaucin de no calentar demasiado el porta pues las c lulas pueden deformarse o romperse. FIJACIN DE LAS BACTERIAS AL PORTAOBJETOS *. +or calor, +asar cinco veces el portaobjetos por la llama durante unos segundos. -ejar enfriar el porta entre los pases. .na vez realizado el frotis y fijadas las bacterias, las preparaciones pueden ser observadas al microscopio, aunque carecen de contraste. "o normal es continuar con el proceso de tincin. TINCIN DEL FROTIS BACTERIANO /. $ubrir el frotis con abundante colorante y dejarlos actuar durante el tiempo que indique el protocolo de cada tincin concreta. Suele oscilar entre # y / minutos. En ocasiones el colorante ti%e slo en caliente, por lo que el tiempo que dure su actuacin se deber sostener el portaobjetos con unas pinzas sobre la llama del mec!ero para que !umee el colorante, pero teniendo muc!o cuidado de que no llegue a !ervir ya que se producira la destruccin de las c lulas. 0. "avar la preparacin con agua para eliminar el colorante. Esta operacin se realiza inclinando el portaobjetos y aplicando el c!orro de agua en su parte superior de manera que resbale sobre el frotis, pero sin que vaya dirigido directamente sobre l, pues podra arrastrar parte del frotis

consigo. Eliminar la mxima cantidad de agua de los portaobjetos golpendolos por su canto con cuidado contra la superficie de la mesa de trabajo. 1. Secar el porta, en ning2n caso se debe frotar el porta. 3. 4bservar la preparacin al microscopio llegando !asta el mximo aumento. Si se quiere montar de forma definitiva no se debe usar a!ora el aceite de inmersin. MONTAJE DEFINITIVO DE LA PREPARACIN "a t cnica siguiente es de aplicacin para cualquier preparacin microscpica que se desee montar de forma definitiva. Se anotar en un extremo del portaobjetos el contenido de la preparacin, la fec!a y, en su caso, el nombre del alumno. 5. +asar sucesivamente los portaobjetos por las siguientes soluciones manteni ndolos un mnimo de / minutos en cada ba%o. "a serie de alco!oles puede modificarse en funcin de la disponibilidad de los reactivos, pero el objetivo es que la preparacin quede totalmente des!idratada. Escurrir bien el reactivo antes de introducirlo en el siguiente ba%o. a b c d e 6lco!ol de 178 6lco!ol de 5/8 6cetona pura 6cetona9xilol :#,#; <ilol

#7. =ontar la preparacin. Emplear blsamo de $anad, euparal o alg2n medio de montaje sint tico. .tilizar preferiblemente cubreobjetos de &&x&& mm.