BIOSEGURIDAD

MARCO TEORICO

La bioseguridad naci como disciplina durante la dcada de los 70, en respuesta hacia los riesgos potenciales de los agentes biolgicos. En 1983 la Organizacin Mundial De La Salud edita el manual de bioseguridad en el laboratorio para ser la publicacin de referencia internacional. El Ministerio De Salud (MINSA) del Per, a travs del instituto nacional de salud (INS) tambin cuenta con un manual de normas de bioseguridad norma tcnica N18, 1996 El concepto de bioseguridad esta referido a todas las estrategias que involucran medidas de prevencin y control , que se adoptan dentro del laboratorio para evitar incidentes :por infeccin del personal, por contaminacin de la muestra biolgica, alos instrumentos o al ambiente de trabajo. El objetivo principal de la bioseguridad es de prevenir para evitar prdidas y gastos posteriores por no tomar medidas correctas de bioseguridad. el objetivo general de la Bioseguridad es Minimizar el riesgo potencial de accidentes laborales en el manejo de los residuos patognicos. El riesgo biolgico para el equipo de salud existe desde que el primer ser humano ayuda a otro a recuperar su salud. Es importante entonces, identificar los riesgos con anterioridad para determinar el uso de barreras de proteccin adecuadas. El conjunto de medidas, normas y procedimientos destinados a minimizar y controlar dicho riesgo biolgico es la Bioseguridad, quedando claro que el riesgo cero NO EXISTE.

PROCEDIMIENTO PRCTICO 1. La docente empieza con una breve explicacin acerca de los conceptos fundamentales de la bioseguridad 2. Una vez explicados los conceptos, la docente plantea un breve examen para inspeccionar cuanto es que hemos aprendido 3. Despus del examen, la docente escoge exmenes al azahar para leer las respuestas de las diferentes preguntas realizadas, para luego ser resueltas como medio de retroalimentacin a manera de debate con aportes individuales y grupales

CUESTIONARIO 1) SI CAYERA UNA PLACA DE CULTIVO AL SUELO: QU HARA UD.?

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En caso de que una placa de cultivo cayese al suelo, primero me pondra los guantes si no los tengo puestos, seguidamente cubrira la placa con un poco de papel peridico, y con mucho cuidado empapara este con fenol al 5% y esperara por lo menos una media hora para luego proceder a limpiar la zona del accidente. 2) QU BARRERAS DE PROTECCIN USARA DURANTE LA ATENCIN DA UN PACIENTE CON VIH? Considerando que el virus de VIH se transmite por va venrea y por va sangunea, si tengo que realizar una biopsia por ejemplo, tendra que tener puesto el mandil, los guantes, el barbijo y la gorra, ya que no hay vacuna para esta enfermedad, y adems de las barreras tendra que tratar al paciente con mucho cuidado y precaucin, al igual que a todo paciente que es posible contaminado. 3) QU MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD SE DEBE APLICAR ANTES, DURANTE Y DESPUS DE TODA ACTIVIDAD? Antes de toda actividad, como requisito indispensable es tener puesto el mandil de trabajo, adems de los guantes, barbijo y gorra de ser necesarios, durante el trabajo es necesario tener los sentidos puestos en el trabajo para evitar posibles accidentes en el desarrollo de la labor, y despus de la actividad es importante asearse las manos para evitar contagios o infecciones, adems hay que quitarse la vestimenta de trabajo, vale decir el mandil para evitar contaminacin fuera del ambiente de trabajo. 4) DESCRIBA LOS PROCEDIMIENTOS A SEGUIR PARA EL DESECHO DE MUESTRAS, MATERIALES INFECTADOS Y MATERIALES PUNZOCORTANTES. Los materiales punzocortantes tales como las hojas de bistur, las agujas, etc. Y los materiales infectados como las torundas de algodn con sangre, placas de cultivos, etc. Tienen que ser desechados en recipientes adecuados: los primeros en un recipiente resiste a estos y los segundos en una bolsa de color rojo que indica que son desechos contaminados, ambos despus tienen que ser sometidos a un proceso de esterilizacin en la autoclave para as poder ser ya desechados junto con los residuos slidos inofensivos.

RESULTADO Al concluir con esta prctica nosotros hemos podido aprender los conceptos de bioseguridad, las medidas que se toman para el trabajo y el adecuado manejo de las situaciones peligrosas como los accidentes.

CONCLUSIONES

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Durante la primera prctica desarrollada en el laboratorio se llegaron a las siguientes conclusiones. La universalidad: las medidas deben involucrar a todos los pacientes de todos los servicios, independientemente de conocer su serologa. Todo personal debe seguir las precauciones estndares rutinariamente estas precauciones deben ser aplicadas para todas las personas. Uso de barreras: comprende el concepto de evitar la exposicin directa a sangre y otros fluidos orgnicos potenciales contaminantes mediante la utilizacin de materiales adecuados. Por ejemplo mascarillas, guantes, mandiles, etc. Medidas de eliminacin de material contaminado comprende el conjunto de dispositivos y procedimientos adecuados para la eliminacin de materiales utilizados durante el trabajo desarrollado. Tambin durante la prctica de identificaron los agentes de riesgo a los que el personal se somete

INTERPRETACION Para un conocimiento integral de la bioseguridad debemos saber interpretar los smbolos que en el laboratorio podemos encontrar aqu alguno de ellos.

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REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS: www.biotech.bioetica.org/inves2.htm Gua de practicas de biologa molecular de la Blga. Mercedes Maritza Quispe Flores www.definicionesmedicas.com/bioseguridad-monografias.html

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EQUIPOS DE LABORATORIO
Los equipos que frecuentemente son utilizados en el laboratorio de microbiologa son: MICROSCOPIOS Es el instrumento ms importante, necesario para un microbilogo, ya que permite la observacin de organismos que no pueden ser apreciados en detalle a simple vista, es decir de los microorganismos.

Existe una gran variedad de microscopios que, segn la fuente de iluminacin utilizada, se agrupan en: Microscopios electrnicos: La fuente de iluminacin es un chorro de electrones y las lentes son electroimanes con una fuerza electro magntica dentro del campo, este funciona al vaco y se expresa a travs de pantallas fosforescentes y placas fotografas. Tiene un poder de resolucin de 2.5nm. - De transmisin. Permiten la observacin de muestras teidas con sustancias que son resistentes al paso de electrones y cortadas dando lugar a lminas finas, denominadas cortes finos. Los electrones no son visibles directamente por lo que stos se envan a una pantalla que emite fluorescencia ms o menos intensa segn el nmero de electrones que inciden en ella. Las estructuras celulares que se tian ms intensamente impedirn el paso de electrones y por lo tanto no permitirn la emisin de fluorescencia, por lo que estas estructuras aparecern oscuras en un fondo ms brillante. Se consiguen entre 10.000 y 100.000 aumentos.

Microscopios pticos: La fuente de iluminacin es la luz.

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De contraste de fases. Gracias a la utilizacin de diafragmas y objetivos especiales, que consiguen aumentar las diferencias en el ndice de refraccin de las clulas y el medio que las rodea, permiten la observacin de clulas vivas, ya que no es necesario realizar ninguna tincin de las mismas.

De interferencia. Permiten observar clulas vivas sin teir, obtenindose una imagen en relieve de las mismas De barrido. Permiten la observacin de clulas enteras, sin necesidad de cortes finos, de modo que aparecen los relieves originales y las superficies externas. Alcanzan entre 1.000 y 10.000 aumentos. Durante las prcticas se emplear el microscopio ptico de campo claro.

De campo claro:Permiten la observacin de preparaciones, en su color natural o contrastado mediante tinciones, resaltadas sobre un fondo ms brillante De fluorescencia. La luz ultravioleta que excita ciertas molculas presentes en las clulas (bien de forma natural o aadida a la preparacin) que emiten fluorescencia en el espectro visible confocal. Permite obtener imgenes bidimensionales y tridimensionales de alta resolucin. Es un microscopio computarizado que acopla un lser a un microscopio ptico obtenindose imgenes fluorescentes. Anlisis digital por ordenador. Tiene un diafragma especial llamado pinhole que elimina la seal de las regiones que se encuentran fuera de foco.

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De campo oscuro. Permiten la observacin de formas celulares que destacan brillantes sobre un fondo oscuro. Este efecto se consigue utilizando diafragmas especiales.

La capacidad de un microscopio para observar diferentes estructuras se refleja en el nmero de aumentos y en el lmite de resolucin (LR).

El lmite de resolucin (LR) se define como la distancia mnima a la que se deben encontrar dos puntos para que puedan observarse separados. El microscopio es mejor cuanto menor sea el LR del mismo.

PARA OBSERVAR UNA MUESTRA AL MICROSCOPIO SE OPTA POR: Preparacin hmeda. Se realiza colocando una gota de la suspensin de microorganismos entre un porta y un cubreobjetos. Se observa directamente. Preparacin fijada. Se coloca una suspensin homognea de microorganismos en una gota de agua sobre el portaobjetos y se fija (mediante calor o agentes qumicos). Despus se tien mediante diferentes tcnicas. Estas preparaciones se observan sin cubreobjetos y, habitualmente, con objetivos de inmersin. MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO PTICO: Colocar el objetivo de menor aumento en posicin de empleo y bajar la platina completamente. Si el microscopio se recogi correctamente en el uso anterior, ya debera estar en esas condiciones. Colocar la preparacin sobre la platina sujetndola con las pinzas metlicas. Comenzar la observacin con el objetivo de 4x (ya est en posicin) o colocar el de 10 aumentos (10x) si la preparacin es de bacterias. PARA REALIZAR EL ENFOQUE: Acercar al mximo la lente del objetivo a la preparacin, empleando el tornillo macromtrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a travs del ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparacin pudindose daar alguno de ellos o ambos. Mirando, ahora s, a travs de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la preparacin con el macromtrico y, cuando se observe algo ntida la muestra, girar el micromtrico hasta obtener un enfoque fino. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debera estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con mover un poco el micromtrico para lograr el enfoque fino. Si al MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA 7

cambiar de objetivo se perdi por completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la operacin desde el paso 3. El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la preparacin y por ello es fcil que ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en la preparacin si se descuidan las precauciones anteriores y mancharlo con aceite de inmersin si se observa una preparacin que ya se enfoc con el objetivo de inmersin.

MICROINCINERADORES Los microincineradores calentados con gas o electricidad llevan protecciones de cristal de borosilicato o de cermica que reducen al mnimo las salpicaduras y la dispersin de material infectado cuando se esterilizan las asas. Sin embargo, pueden perturbar la corriente de aire y por consiguiente deben colocarse hacia la parte trasera de la superficie de trabajo de las CSB.

CENTRFUGAS Separan sustancias mezcladas en funcin de su densidad mediante la accin de la fuerza centrfuga. Las sustancias ms densas tienden a sentarse en el fondo del tubo. Los mayores riesgos derivan, sobre todo, de la contaminacin por los aerosoles generados durante la centrifugacin de materiales biolgicos y, en menor medida, de los traumatismos accidentales.

NEVERAS Y HABITACIONES FRIGORFICAS Un adecuado mantenimiento, limpieza y desinfeccin sistemticos de los aparatos reduce considerablemente los riesgos asociados a su utilizacin. Sin embargo, aun en estas condiciones, hay que tener en cuenta lo siguiente: No deben almacenarse cultivos de microorganismos patgenos por inhalacin en recipientes que no estn convenientemente cerrados, especialmente si la cmara tiene un sistema de circulacin de aire. No deben almacenarse reactivos que contengan compuestos voltiles inflamables (ter etlico, por ejemplo) en neveras que no posean un sistema de proteccin antideflagracin. En los aparatos de tipo domstico que se utilizan en el laboratorio debe anularse la lmpara de la luz.

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CMARAS AISLANTES DE MATERIAL FLEXIBLE Y PRESIN NEGATIVA Son dispositivos autoportantes de contencin primaria que ofrecen mxima proteccin frente a materiales biolgicos peligrosos. . Pueden colocarse sobre un soporte mvil. El banco de trabajo est totalmente encerrado en una envoltura de cloruro de polivinilo (PVC) transparente, suspendida de un marco de acero. La cmara aislante se mantiene a una presin interna inferior a la atmosfrica. El aire de entrada pasa a travs de un filtro HEPA y el de salida a travs de dos filtros HEPA, lo que hace innecesario conducir el aire evacuado hacia el exterior del edificio. El material se introduce y se extrae de la cmara aislante a travs de aberturas especiales, de modo que no se pone en peligro la seguridad microbiolgica. Las manipulaciones se realizan utilizando mangas largas con guantes desechables incorporados. La caja lleva un manmetro para vigilarla presin de la envoltura. Las cmaras aislantes de material flexible se utilizan para manipular organismos de alto riesgo (grupos de riesgo 3 4) en el trabajo de campo cuando no es posible o apropiado instalar o mantener CSB convencionales

Entre los equipos de bioseguridad

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CUESTIONARIO

1.-DIBUJA Y DESCRIBA LOS EQUIPOS OBSERVADOS EN LA PRACTICA Microscopio Se usa para visualizar seres u objetos que no son visibles a simple vista. El ms usado en laboratorios es el microscopio compuesto y el algunos el microscopio electrnico. Su poder de resolucin es variable dependiendo al tipo de microscopio. Se componen de: -sistema ptico -sistema mecnico.

Autoclave Es un dispositivo que sirve para esterilizar material mdico o de laboratorio, utilizando vapor de agua a alta presin( calor seco) y temperatura. El autoclave coagula las protenas de los microorganismos debido a la presin y temperatura entrando el vapor de agua por osmosis a travs de su membrana; recientemente se ha llegado a saber de algunos microorganismos, as como los priones, que pueden soportar las temperaturas de autoclave. Generalmente se usan para esterilizar instrumentos metlicos y medios de cultivo, tambin materiales de jebe, sabanas y ropas. Las autoclaves funcionan permitiendo la entrada o generacin de vapor de agua pero restringiendo su salida, hasta obtener una presin interna de 103 kPa, lo cual provoca que el vapor alcance una temperatura de 121 grados centgrados. Un tiempo tpico de esterilizacin a esta temperatura y presin es de 15 minutos. MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA 10

Su parmetro es de 15 libras de presin a 121C en 15 min. Utiliza el calor hmedo para medio de esterilizacin que entra por osmosis al microorganismo.

Horno Pasteur Esteriliza por medio de calor seco, se utiliza para esterilizar material de vidrio, porcelana y tambin para objetos metlicos, jaleas y aceites. El material deber introducirse en el horno una vez limpio y seco, una vez introducido hay que procurar que estos no toquen las paredes de la estufa, porque alcanza temperaturas muy altas. Una vez introducido el material, se cierra el horno y se enciende, dejndolo calentar hasta 180 , dejndolo a estas temperaturas por espacios de tiempo variables, dependiendo del tipo de material que se ha introducido. Una vez transcurrido el tiempo deseado se apagar y se dejar enfriar totalmente antes de sacar el material. Pero, generalmente el horno de Pasteur, mediante calentamiento a 160-170C durante 23 horas. Utiliza el calor seco para la esterilizacin. Sus parmetros son: 180C---1h 170C---1h30min 160c---2h

Su termmetro se encuentra fijado hasta 200C.

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Estufa o Incubadora

Se encarga de mantener los cultivos de microorganismos y hacer que proliferen. Utiliza una temperatura constante. Alcanza temperaturas de 0 a 100C. Regulada por un termostato.

2.- QUE ES EL PODER DE RESOLUCION Y EXPLIQUE? Es la capacidad del instrumento de dar imgenes bien definidas de puntos situados muy prximos entre s. Esta definicin es distinta del lmite de resolucin, que es la distancia mnima entre dos puntos para que puedan ser definidos(es decir la inversa del poder de resolucin). 3.- QUE FIFERENCIA EXISTE ENTRE EL USO DEL HORNO Y LA INCUBADORA INCUBADORA Sirve para mantener el cultivo de microorganismos. No los pone en estado de latencia ms bien ayuda en el desarrollo de estos. HORNO PASTEUR Sirve para esterilizar instrumentos de vidrio. Pone en un estado de latencia a los microorganismos patgenos, no pudiendo estos entrar en accin.

4.- EN UNA OBSERVACIN MICROSCPICA; CMO SE DETERMINA EL AUMENTO TOTAL DEL OBJETO OBSERVADO? El aumento total es igual al producto de los aumentos dados por el ocular y el objetivo. Por ejemplo: 10x del objetivo y 10x del ocular;aumento total 100x.

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5.- CITE OTROS EQUIPOS NO MENCIONADOS EN LA PRCTICA Y DESCRBALOS. CENTRFUGA: Una centrfuga es una mquina que pone en rotacin una muestra para separar por fuerza centrfuga sus componentes o fases (generalmente una slida y una lquida), en funcin de su densidad. Existen diversos tipos de estos, comnmente para objetivos especficos. Una aplicacin tpica consiste en acelerar el proceso de sedimentacin, dividiendo el plasma y el suero en un proceso de anlisis de laboratorio. Tambin se utiliza para determinar el grupo sanguneo mediante una toma de muestra capilar. En este caso la mquina utilizada se denomina microcentrfuga. Otra aplicacin de las centrfugas es la elaboracin de aceite de oliva. En ella las aceitunas una vez molidas y batidas se introducen en una centrfuga horizontal en la que se separa el aceite que es la fraccin menos pesada del resto de componentes de la aceituna; agua, hueso, pulpa etc. BAO MARA: Es un equipo empleado para conferir temperatura uniforme a una sustancia lquida o slida o para calentarla lentamente, sumergiendo el recipiente que la contiene en otro mayor con agua que se lleva a o est en ebullicin. El concepto de bao Mara implica el calentamiento indirecto, por conveccin trmica de la media agua. Para calentar al bao Mara hay que introducir un recipiente pequeo dentro de otro ms grande lleno de agua y llevarlo al fuego. De este modo, lo que se calienta en primer lugar es el agua contenida en el recipiente de mayor tamao y sta es la que poco a poco va calentando el contenido del recipiente menor, de un modo suave y constante. Es Indispensable que en todo tiempo el recipiente interior (ms pequeo), haga contacto con el agua; de otra forma no se producir la transmisin de calor. Utilizando diferentes lquidos (aceites, soluciones salinas, etctera) en el recipiente inferior obtendremos diferentes temperaturas de trabajo. Cuando se usa agua, la mxima temperatura del producto del recipiente superior no exceder los 100 C (punto de ebullicin del agua al nivel del mar). CONGELADORES Estos mantienen la viabilidad de los agentes infecciosos. Los pone en un estado de latencia cuando estn dentro de este. MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA 13

ELECTROFORESIS: La electroforsis es una tcnica para la separacin de molculas segn la movilidad de estas en un campo elctrico. La separacin puede realizarse sobre la superficie hidratada de un soporte slido, o bien a travs de una matriz porosa (gel), o bien en disolucin. Dependiendo de la tcnica que se use, la separacin obedece en distinta medida a la carga elctrica de las molculas y a su masa. Para el anlisis de mezclas de protenas o de cidos nucleicos se utiliza como soporte un gel, habitualmente de agarosa o de poliacrilamida. Los cidos nucleicos ya disponen de una carga elctrica negativa, que los dirigir al polo positivo, mientras que las protenas se cargan al unirse con sustancias como el SDS (detergente) que incorpora cargas negativas de una manera dependiente de la masa molecular de la protena. Al poner la mezcla de molculas y aplicar un campo elctrico, stas se movern y debern ir pasando por la malla del gel (una red tridimensional de fibras cruzadas), por lo que las pequeas se movern mejor, ms rpidamente. As, las ms pequeas avanzarn ms y las ms grandes quedarn cerca del lugar de partida. Se fundamenta en que la gran mayora de macromolculas estn cargadas elctricamente y, al igual que los electrolitos, se pueden clasificar en fuertes y dbiles dependiendo de la constante de ionizacin de grupos cidos y bsicos. Por ejemplo los cidos nucleicos son policidos fuertes. MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA 14

CMARA DE SEGURIDAD BIOLGICA Protege al trabajador, el ambiente y materiales de trabajo de la exposicin de salpicaduras y aerosoles infecciosos que puede generarse al manipular material infeccioso. Se dividen en: CBSI, CBSII, CBSIII dependiendo de que es lo que protegen.

MICROONDAS Frecuentemente es utilizado para calentar medios de cultivo en agar. Son muy peligrosos.

AGITADOR VRTEX Es un dispositivo simple que se usa comnmente en los laboratorios para agitar MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA 15

pequeos tubos o frascos de lquido. Se compone de un motor elctrico con el eje de transmisin orientado verticalmente y unido a un trozo de goma o caucho montado en forma de copa, ligeramente excntrico. A medida que el motor gira la pieza de caucho oscila rpidamente en un movimiento circular. Cuando un tubo de ensayo o recipiente adecuado se coloca en el soporte de goma (o toca su borde) el movimiento se transmite al lquido en su interior y se crea un vrtice. La mayora de los mezcladores de vrtice tienen una configuracin de velocidad variable y pueden ser configurado para ejecutarse de forma continua, o para que funcione slo cuando una dbil presin se aplica a la goma. Poseen unos pies de ventosa en la base para evitar desplazamientos. Los agitadores tipo vortex son bastante comunes en los laboratorios de ciencias biolgicas. En los laboratorios de cultivos celulares y de microbiologa se pueden utilizar para suspender las clulas. INTERPRETACIONES Y CONCLUSIONES: Los equipos de laboratorio ms utilizados son la estufa, el autoclave, el horno Pasteur, y el microscopio. Todos estos equipos son utilizados para mantener y desarrollar los cultivos as tambin para eliminarlos (proceso de esterilizacin). Cada equipo tiene funciones y caractersticas distintas pudindose decir que el mas utilizable es el microscopio dentro de cuyas propiedades se encuentra en poder de resolucin. Estos equipos de laboratorio mantienen el ambiente y el entorno estriles y seguros contribuyendo con las normas de bioseguridad.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS: http://es.wikipedia.org/wiki/Electroforesis http://html.rincondelvago.com/equipos-y-materiales-de-laboratorio-para-quimica-ybiologia.html http://es.wikipedia.org/wiki/Centr%C3%ADfuga http://fcm.uncu.edu.ar/joomla/downloads/OMS.pdf http://es.wikipedia.org/wiki/Agitador_v%C3%B3rtex http://www.slideshare.net/jcustodio91/guia-ii http://www.seimc.org/documentos/protocolos/microbiologia/cap10.pdf

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